RU2657431C1 - Способ получения биологически активных веществ из грибов - Google Patents

Способ получения биологически активных веществ из грибов Download PDF

Info

Publication number
RU2657431C1
RU2657431C1 RU2017102078A RU2017102078A RU2657431C1 RU 2657431 C1 RU2657431 C1 RU 2657431C1 RU 2017102078 A RU2017102078 A RU 2017102078A RU 2017102078 A RU2017102078 A RU 2017102078A RU 2657431 C1 RU2657431 C1 RU 2657431C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
biologically active
active substances
raw materials
raw material
fungi
Prior art date
Application number
RU2017102078A
Other languages
English (en)
Inventor
Тамара Владимировна Теплякова
Григорий Григорьевич Ананько
Павел Николаевич Мирошников
Андрей Владимирович Артамонов
Андрей Александрович Бекарев
Павел Геннадьевич Мадонов
Original Assignee
Общество с ограниченной ответственностью "Микопро" (ООО "Микопро")
Общество с ограниченной ответственностью "Саентифик Фьючер Менеджмент" (ООО "СФМ")
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество с ограниченной ответственностью "Микопро" (ООО "Микопро"), Общество с ограниченной ответственностью "Саентифик Фьючер Менеджмент" (ООО "СФМ") filed Critical Общество с ограниченной ответственностью "Микопро" (ООО "Микопро")
Priority to RU2017102078A priority Critical patent/RU2657431C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2657431C1 publication Critical patent/RU2657431C1/ru

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06Fungi, e.g. yeasts
    • BPERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01DSEPARATION
    • B01D11/00Solvent extraction
    • B01D11/02Solvent extraction of solids
    • BPERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01JCHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J19/00Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J19/08Processes employing the direct application of electric or wave energy, or particle radiation; Apparatus therefor
    • B01J19/10Processes employing the direct application of electric or wave energy, or particle radiation; Apparatus therefor employing sonic or ultrasonic vibrations

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения биологически активных веществ из грибов. Способ получения биологически активных веществ из грибов включает измельчение грибного сырья до частиц размером не более 0,2 мм, далее измельченное сырье замораживают при температуре 15-20˚С в течение не менее 2-х часов, замороженное сырье облучают потоком ускоренных электронов с энергией 2,5-5 МэВ и дозе 16-20 Мрад, полученных в импульсном линейном ускорителе, после смешивают обработанное грибное сырье с жидким экстрагентом и выдерживают смеси в течение времени, при температуре и давлении, достаточных для наибольшего выхода целевых биологически активных веществ из сырья и растворения их в жидком экстрагенте с последующим отделением целевого продукта от экстрагента. Вышеописанный способ позволяет увеличить выход целевых биологически активных веществ из грибного сырья. 1 з.п. ф-лы, 5 табл., 4 пр.

Description

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается способа получения биологически активных веществ (БАВ) из мицелия и плодовых тел грибов. На протяжении столетий человечество ценило грибы в качестве источника пищи и лекарственных препаратов. В последнее десятилетие наблюдается усиление интереса к лекарственным веществам, получаемым из базидиальных грибов, направленных на лечение и профилактику ряда тяжелых и трудноизлечимых заболеваний. Фармакологическое действие высших грибов, базидиомицетов, отличается большим разнообразием при низкой токсичности для человека. Во многих видах грибов было идентифицировано множество биоактивных молекул, включая противоопухолевые вещества. Известно около 200 видов грибов (Auricularia polytrichia, Cordiceps sinensis, Flammulina velutipes, Grifola frondosa, Ganoderma lucidum, Hipzigus marmoreus, Hericium erinaceus, Inonotus obliquus, Lentinus edodes, Poria cocos, Pleurotus ostreatus, Polyporus umbellatus, Trametes versicolor и др.), компоненты которых оказывают иммуномодулирующее, противоопухолевое, противовирусное, антидиабетическое воздействие на организм человека (Stames P. Fungi perfecti. The best in gourment and medicinal mushrooms. Olympia: Olympiapress, 1999. - 38 p.).
Полисахариды - наиболее хорошо изученные сильнодействующие вещества, извлеченные из грибов, обладающих противоопухолевыми и иммуномодулирующими свойствами. В частности, показано, что полисахаридные фракции, выделенные из клеточных стенок плодовых тел вешенки Pleurotus ostreatus, ингибируют рост саркомы-180 у мышей, а также активны в отношении вируса иммунодефицита человека и вируса гриппа (Теплякова Т.В., Косогова Т.А. Высшие грибы Западной Сибири - перспективные объекты для биотехнологии лекарственных препаратов. Новосибирск, 2014. - 298 с.).
Известен способ получения фракции полисахаридов, обладающей иммуномодулирующими свойствами, из сухого порошка плодовых тел Pleurotus ostreatus (патент РФ 2189825, МПК А61К 36/06, опубл. 27.09.2002). Полисахаридную фракцию выделяли посредством двукратной обработки 100 г порошка в 350 мл кипящей дистиллированной воды в течение 3-х часов с последующей очисткой диализом и гель-фильтрацией. Выход целевого продукта, биологически активных полисахаридов, составил 5,8% от массы исходного сырья.
Недостатком данной технологии является низкий выход полисахаридов, обусловленный неполным извлечением целевого продукта.
Наиболее близким аналогом (прототипом) является способ выделения полифенолкарбонового комплекса (ПФК) из склероциев чаги (патент РФ №2502516, МПК А61К 36/06, опубл. 27.12.2013), в котором измельченную чагу заливают водой в массовом соотношении (0,5-1,5)-(3,5-4,5), замораживают при температуре минус 16±3°C в течение 1-4 часов, настаивают 1-2 часа при температуре 65-75°C, фильтруют, фильтрат подкисляют 25% хлористоводородной кислотой до pH 1,0-2,0, перемешивают, отстаивают 12-15 часов и фильтруют. Максимальный выход ПФК, полученного данным способом, составил 35% от сухого веса сырья.
Однако способ-прототип обеспечивает неполное извлечение ПФК из сырья.
Техническим результатом предлагаемого изобретения является увеличение выхода целевых биологически активных веществ из грибного сырья.
Указанный технический результат достигается тем, что в способе получения биологически активных веществ из грибов, включающем измельчение грибного сырья до размера частиц не более 0,2 мм, смешивание измельченного грибного сырья с жидким экстрагентом и выдерживание смеси в течение времени, температуре и давлении, достаточными для наибольшего выхода целевых биологически активных веществ из сырья и растворения их в жидком экстрагенте с последующим отделением целевого продукта от экстрагента, согласно изобретению после измельчения грибное сырье замораживают, а перед смешиванием с жидким экстрагентом измельченное и замороженное грибное сырье облучают дозой 16-20 Мрад потоком ускоренных электронов, полученных в импульсном линейном ускорителе электронов с энергией ускоренных электронов 2,5-5 МэВ.
В качестве импульсного линейного ускорителя электронов используют ускоритель электронов ИЛУ-10, который имеет среднюю мощность пучка 50 кВт, средний ток пучка 15 мА и потребляемую мощность 150 кВт.
Техническое решение направлено на более эффективное использование лекарственного грибного сырья, способствуя более полному извлечению биологически активных веществ из грибов. Отличительной особенностью способа является его универсальность, позволяющая облегчить экстракцию биологически активных веществ из любого грибного сырья. Поток электронов легче разрушает супрамолекулярные комплексы, образующие каркас грибных тканей в замороженном состоянии, и, тем самым, способствует существенному облегчению диффузии экстрактивных веществ в растворитель (экстрагент). Предварительное замораживание измельченного сырья и обработка его в ускорителе позволяет ускорить процессы экстракции целевых продуктов и обеспечить более полное их извлечение без потерь биологической активности полезных веществ.
Способ получения биологически активных веществ (БАВ) из грибов реализован в примере 1 (получение БАВ из плодовых тел вешенки) и примере 2 (получение БАВ из склероции чаги Inonotus obliquus).
Результаты экспериментов, приведенные в таблицах, обработаны с помощью программы «Statistica 6.0» при доверительной вероятности Р=0,95, n=4 (n - количество экспериментов).
Пример 1. В работе использовали высушенные плодовые тела вешенки обыкновенной (Pleurotus ostreatus КТ-3). Плодовые тела измельчали на мельнице MF-10 basic IKA с диаметром сита до 0,25 мм.
Одну часть использовали в качестве контроля, а другие части замораживали слоями при температуре минус 15-20°C в течение не менее 2-х часов и облучали различными дозами (измеренными в Мрад) в потоке ускоренных электронов в импульсном линейном ускорителе электронов ИЛУ-10 (табл. 1).
Figure 00000001
После обработки в ускорителе из образцов были получены суммарные полисахариды по следующей методике: 5,0 г измельченного плодового тела суспендировали в 50 мл дистиллированной воды, выдержали в термостате в течение 3 часов при температуре 80-95°C и 9 часов при температуре 96-98°C; после остывания центрифугировали при 4000 об/мин в течение 20 мин. Затем производили очистку полисахаридной фракции переосаждением этиловым спиртом и диализом.
Результаты
Выход суммарных полисахаридов в процентах от исходного сырья представлен в таблице 2. Выход суммарных полисахаридов растет прямо пропорционально дозе облучения. При максимальной дозе 20 Мрад выход полисахаридов в 3,1 раза выше, чем в контроле, не подвергавшемся облучению.
Figure 00000002
Таким образом, предварительное облучение образцов в ускорителе способствует более полному извлечению фракции полисахаридов из грибного сырья.
Пример 2. В работе использовали высушенные склероции чаги (Inonotus obliquus). Склероции измельчили на мельнице MF-10 basic IKA с диаметром пор сита до 0,25 мм. Одну часть использовали в качестве контроля, а другие части замораживали слоями при температуре минус 15-20°C в течение не менее 2-х часов и облучали различными дозами (измеренными в Мрад) в потоке ускоренных электронов в импульсном линейном ускорителе электронов ИЛУ-10. После обработки в ускорителе из образцов был выделен полифенолкарбоновый комплекс (ПФК) по следующей методике: образцы заливали раствором 2% NaOH (1:10) и прогревали на водяной бане в течение 5 часов; осадок отделяли центрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 минут; затем промывали водой (1:10) и снова центрифугировали. Объединенный экстракт ПФК осаждали путем закисления водного экстракта соляной кислотой до pH 2,0-2,2 с последующим центрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 минут. Очистку ПФК проводили посредством трехкратного переосаждения по следующей схеме: осадок растворяли в 0,1% NaOH (1:50) и снова осаждали соляной кислотой. Результаты, выход ПФК в процентах от исходного сырья (по сухому веществу), представлены в таблице 3.
Figure 00000003
Выход меланинов растет прямо пропорционально дозе облучения. При максимальной дозе 20 Мрад выход меланинов в 1,4 раза выше, чем в контрольном образце, не подвергавшемся облучению.
Далее в примерах 3 и 4 приведены экспериментальные данные, подтверждающие сохранение антивирусной активности БАВ из грибов после облучения ускоренными электронами.
Пример 3. Подготовленные образцы полисахаридов вешенки (как описано в примере 1) тестировали в отношении вируса гриппа A/H1N1/California/2009 в культуре клеток MDCK (клетки почки собаки). Результаты представлены в таблице 4.
Figure 00000004
Примечания: ТС50 - токсическая концентрация образцов, при которой погибает 50% неинфицированных клеток MDCK; IC50 - концентрация сухих веществ в образцах, подавляющая развитие 50% вируса гриппа; IS - индекс селективности, определяется как отношение ТС50/IC50.
Сравнительное тестирование антивирусной активности образцов полисахаридов показало, что облучение, в данном диапазоне, не оказывает существенного влияния на антивирусную активность. Даже при максимальной поглощенной дозе (20 Мрад) образец сохраняет активность, сравнимую с контролем.
Пример 4. Подготовленные образцы ПФК чаги (как описано в примере 2) тестировали в отношении вируса гриппа A/H1N1/California/2009 в культуре клеток MDCK (клетки почки собаки). Результаты представлены в таблице 5.
Figure 00000005
Примечания: ТС50 - токсическая концентрация образцов, при которой погибает 50% неинфицированных клеток MDCK; IC50 - концентрация сухих веществ в образцах, подавляющая развитие 50% вируса гриппа; IS - индекс селективности, определяется как отношение ТС50/ IC50.
Сравнительное тестирование антивирусной активности образцов меланинов показало, что облучение не оказывает существенного влияния на антивирусную активность. Среднее значение индекса селективности для облученных образцов составляет 27,6, что близко к значению индекса селективности контроля (29,5).

Claims (2)

1. Способ получения биологически активных веществ из грибов, включающий измельчение грибного сырья, смешивание измельченного грибного сырья с жидким экстрагентом и выдерживание смеси в течение времени, при температуре и давлении, достаточных для наибольшего выхода целевых биологически активных веществ из сырья и растворения их в жидком экстрагенте с последующим отделением целевого продукта от экстрагента, отличающийся тем, что измельчение сухого грибного сырья проводят до размера частиц не более 0,2 мм, измельченное сухое грибное сырье замораживают слоями при температуре минус 15-20°С в течение не менее 2-х часов, а перед смешиванием с жидким экстрагентом измельченное и замороженное грибное сырье облучают потоком ускоренных электронов с энергией 2,5-5 МэВ и дозой 16-20 Мрад, полученных в импульсном линейном ускорителе электронов.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве импульсного линейного ускорителя электронов используют ускоритель электронов ИЛУ-10, который имеет среднюю мощность пучка 50 кВт, средний ток пучка 15 мА и потребляемую мощность 150 кВт.
RU2017102078A 2017-01-23 2017-01-23 Способ получения биологически активных веществ из грибов RU2657431C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017102078A RU2657431C1 (ru) 2017-01-23 2017-01-23 Способ получения биологически активных веществ из грибов

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017102078A RU2657431C1 (ru) 2017-01-23 2017-01-23 Способ получения биологически активных веществ из грибов

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2657431C1 true RU2657431C1 (ru) 2018-06-13

Family

ID=62619949

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017102078A RU2657431C1 (ru) 2017-01-23 2017-01-23 Способ получения биологически активных веществ из грибов

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2657431C1 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113150871A (zh) * 2021-04-28 2021-07-23 湖北科技学院 一种桂花浸膏的提取方法
RU2782263C1 (ru) * 2022-02-10 2022-10-25 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Казанский национальный исследовательский технологический университет" (ФГБОУ ВО "КНИТУ") Способ экстрагирования чаги

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2189825C1 (ru) * 2001-09-19 2002-09-27 Шамцян Марк Маркович Иммуностимулирующий препарат и способ его получения
CN101392031A (zh) * 2008-11-10 2009-03-25 马宏达 一种桦褐孔菌多糖的提取分离方法
RU2502516C1 (ru) * 2012-11-08 2013-12-27 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанский национальный исследовательский технологический университет" (ФГБОУ ВПО "КНИТУ") Способ получения хромогенного комплекса чаги

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2189825C1 (ru) * 2001-09-19 2002-09-27 Шамцян Марк Маркович Иммуностимулирующий препарат и способ его получения
CN101392031A (zh) * 2008-11-10 2009-03-25 马宏达 一种桦褐孔菌多糖的提取分离方法
RU2502516C1 (ru) * 2012-11-08 2013-12-27 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанский национальный исследовательский технологический университет" (ФГБОУ ВПО "КНИТУ") Способ получения хромогенного комплекса чаги

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PAULIK S. et al. The immunomodulatory effect of the soluble fungal glucan (Pleurotus ostreatus) on delayed hypersensitivity and phagocytic ability of blood leucocytes in mice // Zentralbl Veterinarmed. - l996, May, 43(3), p.129-135. *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113150871A (zh) * 2021-04-28 2021-07-23 湖北科技学院 一种桂花浸膏的提取方法
RU2782263C1 (ru) * 2022-02-10 2022-10-25 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Казанский национальный исследовательский технологический университет" (ФГБОУ ВО "КНИТУ") Способ экстрагирования чаги
RU2815049C1 (ru) * 2022-10-31 2024-03-11 Общество с ограниченной ответственностью "МИКОФЕРМ" Способ получения молокосвертывающего фермента из биомассы плодовых тел высших грибов
RU2807468C1 (ru) * 2023-04-04 2023-11-15 Общество С Ограниченной Ответственностью "Нпо "Биолюкс" Способ получения сухого противопаразитарного препарата на основе базидиального гриба Cantharellus cibarius

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Sun et al. Efficient physical extraction of active constituents from edible fungi and their potential bioactivities: A review
Zhou et al. A review on mushroom-derived bioactive peptides: Preparation and biological activities
Lindequist et al. The pharmacological potential of mushrooms
Gu et al. Cytotoxic effect of oyster mushroom Pleurotus ostreatus on human androgen-independent prostate cancer PC-3 cells
Badalyan Potential of mushroom bioactive molecules to develop healthcare biotech products.
Shibnev et al. Antiviral activity of Inonotus obliquus fungus extract towards infection caused by hepatitis C virus in cell cultures
CN109276576B (zh) 白肉灵芝多糖在制备抗肿瘤药物中的用途
CN103073651B (zh) 一种灵芝多糖的提取方法及应用
Bhatt et al. Healing mushrooms of Uttarakhand Himalaya, India
Seow et al. Tiger's milk medicinal mushroom, Lignosus rhinocerotis (Agaricomycetes) sclerotium inhibits nitric oxide production in LPS-stimulated BV2 microglia
RU2657431C1 (ru) Способ получения биологически активных веществ из грибов
Badalyan et al. Perspectives of biomedical application of macrofungi
Hamza et al. An insight into the nutritional and medicinal value of edible mushrooms: A natural treasury for human health
JP2011236183A (ja) きのこ類由来エルゴステロールペルオキシドの抽出方法
Kour et al. Bioprospecting of industrially important mushrooms
JP2003183176A (ja) 免疫賦活組成物
Gregori Medicinal mushrooms native to Slovenia
Ramos-Ligonio et al. In vitro expression of toll-like receptors and proinflammatory molecules induced by ergosta-7, 22-dien-3-one isolated from a wild mexican strain of Ganoderma oerstedii (Agaricomycetes)
Safin et al. Water vacuum-oscillating extraction of chaga
Sonawane et al. Pharmaceutical metabolites with potent bioactivity from mushrooms
Shamtsyan et al. Antiradical and antidiabetic activity of Pleurotus ostreatus extracts
KR102122586B1 (ko) 괭생이모자반 추출박을 포함하는 면역증강용 사료첨가제 조성물 및 그 제조방법
Al-Faqeeh et al. Review on anticancer and antimicrobial activities of mushrooms
Khan et al. Biotechnological potential of secondary metabolites: Current status and future challenges
Nieto-Mosquera et al. Immunomodulatory Fungi: An Alternative for the Treatment of Cancer