RU2652889C1 - Method of manufacturing the vaccine inactivated emulsion against murrain and emulsion inactivated vaccine against murrain - Google Patents
Method of manufacturing the vaccine inactivated emulsion against murrain and emulsion inactivated vaccine against murrain Download PDFInfo
- Publication number
- RU2652889C1 RU2652889C1 RU2017119734A RU2017119734A RU2652889C1 RU 2652889 C1 RU2652889 C1 RU 2652889C1 RU 2017119734 A RU2017119734 A RU 2017119734A RU 2017119734 A RU2017119734 A RU 2017119734A RU 2652889 C1 RU2652889 C1 RU 2652889C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mouth disease
- foot
- antigenic material
- vaccine
- virus
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 104
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 37
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 title claims description 43
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 title 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 68
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 claims abstract description 63
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 claims abstract description 46
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 43
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 42
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 40
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 38
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 37
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 37
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 37
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 27
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims abstract description 18
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 13
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 9
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 241000710202 Foot-and-mouth disease virus - type A Species 0.000 claims description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 5
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims description 2
- 241000710194 Foot-and-mouth disease virus - type O Species 0.000 claims 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 abstract description 11
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 abstract 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 abstract 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 abstract 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 24
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 9
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 7
- 230000000680 avirulence Effects 0.000 description 7
- FDKRWZJDFCVMQQ-UHFFFAOYSA-N 6-[2-aminoethyl(ethyl)amino]-2,3-dihydrophthalazine-1,4-dione Chemical compound O=C1NNC(=O)C=2C1=CC(N(CCN)CC)=CC=2 FDKRWZJDFCVMQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 6
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 239000012223 aqueous fraction Substances 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 description 2
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 241000144531 Foot-and-mouth disease virus - type Asia 1 Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 239000002156 adsorbate Substances 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940059904 light mineral oil Drugs 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- -1 polyhexamethylene guanidine hydrochloride Polymers 0.000 description 1
- 229940050271 potassium alum Drugs 0.000 description 1
- GRLPQNLYRHEGIJ-UHFFFAOYSA-J potassium aluminium sulfate Chemical compound [Al+3].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O GRLPQNLYRHEGIJ-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 1
- 239000011265 semifinished product Substances 0.000 description 1
- 229910052814 silicon oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 230000003319 supportive effect Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/125—Picornaviridae, e.g. calicivirus
- A61K39/135—Foot- and mouth-disease virus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии, ветеринарной вирусологии и микробиологии.The invention relates to biotechnology, veterinary virology and microbiology.
Иммуногенность и эффективность вакцин в значительной степени увеличивается с использованием в технологии их изготовления неспецифических стимуляторов иммунитета - адъювантов.The immunogenicity and effectiveness of vaccines is significantly increased with the use of non-specific immunity stimulants, adjuvants, in the technology for their manufacture.
Известно, что при изготовлении средств специфической профилактики инфекционных болезней животных нашли применение, главным образом, два типа адъювантов: сорбционные (гидроксид алюминия, оксид кремния, алюмокалиевые квасцы) и масляные - для получения эмульсионных вакцин (адъювант Фрейнда и многочисленные его разновидности).It is known that in the manufacture of means for the specific prophylaxis of infectious diseases of animals, mainly two types of adjuvants were used: sorption (aluminum hydroxide, silicon oxide, alum-potassium alum) and oil - to obtain emulsion vaccines (Freund's adjuvant and its many varieties).
Преимущества эмульсионных вакцин перед сорбционными заключаются в пролонгировании действия антигена, лучшей его сохранности, возможности введения менее концентрированной антигенной части, позволяет не проводить дополнительную вакцинацию животных за счет адъювантных свойств.The advantages of emulsion vaccines over sorption ones are in prolonging the action of the antigen, its better preservation, the possibility of introducing a less concentrated antigenic part, which allows not additional vaccination of animals due to adjuvant properties.
Свойства масляных эмульсионных вакцин описываются положениями коллоидной химии и в соответствии с ними классифицируются по типу получаемой эмульсии: «вода в масле» или обратные эмульсии (антиген находится внутри мицелл и закрыт эмульгатором и маслом; «вода в масле в воде» или сложные эмульсии (антиген находится как внутри мицелл, так и в водной фазе), «масло в воде» или прямые эмульсии (антиген находится в водной фазе) [1, 2].The properties of oil emulsion vaccines are described by the provisions of colloid chemistry and are classified according to the type of emulsion obtained: “water in oil” or inverse emulsions (the antigen is inside the micelles and is closed by emulsifier and oil; “water in oil in water” or complex emulsions (antigen located both inside micelles and in the aqueous phase), “oil in water” or direct emulsions (the antigen is in the aqueous phase) [1, 2].
Процесс изготовления вакцины инактивированной эмульсионной против ящура состоит из следующих этапов:The manufacturing process of an inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease vaccine consists of the following steps:
- культивирование вирусного антигена в суспензионной культуре, преимущественно в культуре клеток ВНК-21,- cultivation of viral antigen in suspension culture, mainly in the cell culture of BHK-21,
- очистка вирусной суспензии от балластных примесей,- purification of the viral suspension from ballast impurities,
- инактивация вирусной суспензии,- inactivation of the viral suspension,
- концентрирование полученного антигена вируса ящура,- concentration of the obtained FMD antigen,
- соединение концентрата антигена с масляным адъювантом (эмульгирование).- connection of antigen concentrate with oil adjuvant (emulsification).
Известен способ изготовления вакцины против ящура и вакцина против ящура типа А [3], который заключается в том, что изготовление вакцины против ящура типа А включает репродукцию вирусного антигена в суспензионной культуре клеток ВНК-21, инактивацию вирусного антигена, очистку от балластных примесей и концентрирование антигена при помощи проточной ультрафильтрации или полиэтиленгликоля. Для изготовления эмульсионной вакцины используют антигенный материал с содержанием иммуногенных (146S+75S) компонентов вируса ящура, по меньшей мере, 2,0 мкг/см3.A known method of manufacturing a vaccine against foot and mouth disease and a vaccine against foot and mouth disease type A [3], which consists in the fact that the manufacture of a vaccine against foot and mouth disease type A involves the reproduction of viral antigen in a suspension cell culture of BHK-21, inactivation of viral antigen, purification from ballast impurities and concentration antigen by flow ultrafiltration or polyethylene glycol. For the manufacture of emulsion vaccines use antigenic material with the content of immunogenic (146S + 75S) components of the virus of foot and mouth disease, at least 2.0 μg / cm 3 .
Недостатком указанного способа является то, что предлагаемое количество иммуногенных компонентов не обеспечивает образования высокого уровня гуморального иммунитета. Количество иммуногенных компонентов повышают за счет увеличения прививной дозы для КРС.The disadvantage of this method is that the proposed number of immunogenic components does not provide the formation of a high level of humoral immunity. The number of immunogenic components is increased due to an increase in the vaccination dose for cattle.
Известен способ изготовления вакцины против ящура и вакцина против ящура типа О [4], который заключается в том, что изготовление вакцины против ящура типа О включает репродукцию вирусного антигена в суспензионной культуре клеток ВНК-21, инактивацию вирусного антигена, очистку от балластных примесей и концентрирование антигена при помощи проточной ультрафильтрации или полиэтиленгликоля. Для изготовления адсорбат и эмульсионной вакцины используют антигенный материал с содержанием иммуногенных (146S+75S) компонентов вируса ящура, по меньшей мере, 4,0 мкг/см3.A known method of manufacturing a vaccine against foot and mouth disease and a vaccine against foot and mouth disease type O [4], which consists in the fact that the manufacture of a vaccine against foot and mouth disease type O includes reproduction of viral antigen in a suspension culture of BHK-21 cells, inactivation of viral antigen, purification from ballast impurities and concentration antigen by flow ultrafiltration or polyethylene glycol. For the manufacture of adsorbate and emulsion vaccines use antigenic material with the content of immunogenic (146S + 75S) components of the virus of foot and mouth disease, at least 4.0 μg / cm 3 .
Недостатком указанного способа является то, что вакцина обладает выраженной иммуногенной активностью для КРС в дозе 5 см3.The disadvantage of this method is that the vaccine has a pronounced immunogenic activity for cattle in a dose of 5 cm 3 .
Известна вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа А [5]. Вакцина содержит авирулентный и очищенный антигенный материал, полученный в перевиваемой культуре клеток ВНК-21.Known vaccine inactivated emulsion against foot and mouth disease type A [5]. The vaccine contains avirulent and purified antigenic material obtained in the transplanted cell culture of BHK-21.
Антигенный материал представляет собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура. Кроме того, вакцина содержит поддерживающую среду и масляный адъювант в эффективных соотношениях. В качестве поддерживающей среды используют раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при рН 7,4-7,6. Из масляных адъювантов вакцина содержит масляный адъювант ВНИИЗЖ или масляный адъювант марок Montanide ISA-70 или Montanide ISA-206 производства фирмы «Seppic» (Франция).Antigenic material is a suspension containing predominantly 146S and 75S immunogenic components of foot and mouth disease virus. In addition, the vaccine contains a supportive environment and an oil adjuvant in effective proportions. Serum without serum is used as the supporting medium with the addition of FGMS, GBKS and antibiotics at a pH of 7.4-7.6. Of the oil adjuvants, the vaccine contains an oil adjuvant ARRIAH or an oil adjuvant of the brands Montanide ISA-70 or Montanide ISA-206 manufactured by Seppic (France).
Недостатком указанного способа является то, что вакцина обладает иммуногенной активностью для КРС в дозе 5,0 см3.The disadvantage of this method is that the vaccine has immunogenic activity for cattle in a dose of 5.0 cm 3 .
Наиболее близким аналогом является способ изготовления и вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа А [5].The closest analogue is the manufacturing method and the inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease type A [5].
Проблема, на решение которой направлено настоящее изобретение - получить препарат, обладающий высокими иммуностимулирующими свойствами при использовании различных антигенных материалов вируса ящура разных типов.The problem to which the present invention is directed is to obtain a preparation having high immunostimulating properties when using various antigenic materials of foot and mouth disease virus of different types.
Для этого был разработан новый способ изготовления вакцины инактивированной эмульсионной против ящура.For this, a new method was developed for the manufacture of an inactivated emulsion FMD vaccine.
Решение проблемы в части способа, включающем культивирование вирусного антигена в суспензионной культуре клеток ВНК-21, очистку вирусной суспензии от балластных примесей, инактивацию, концентрирование полученного антигена вируса ящура и соединение концентрата антигена с масляным адъювантом, заключается в результате использования в качестве адъюванта масляного адъюванта Montanide ISA-61 VG (Seppic, Франция), разработки режимов, определения соотношения водной и масляной фаз и параметров производства противоящурной вакцины.The solution to the problem in terms of the method, including cultivating a viral antigen in a suspension culture of BHK-21 cells, purifying the virus suspension from ballast impurities, inactivating, concentrating the obtained FMD antigen and combining the antigen concentrate with an oil adjuvant, consists of using Montanide oil adjuvant as an adjuvant ISA-61 VG (Seppic, France), development of modes, determination of the ratio of water and oil phases and production parameters of FMD vaccine.
Montanide ISA-61 VG - адъювант на основе минерального масла, который был разработан для производства эмульсий вода в масле (В/М). Он содержит особое обогащенное светлое минеральное масло и высокоочищенное ПАВ, полученное из маннитола и очищенной олеиновой кислоты растительного происхождения. Montanide ISA-61 VG не содержит компонентов животного происхождения.Montanide ISA-61 VG is a mineral oil based adjuvant that has been developed for the production of water in oil (W / M) emulsions. It contains a special enriched light mineral oil and highly purified surfactant obtained from mannitol and purified vegetable oleic acid. Montanide ISA-61 VG does not contain animal components.
В результате разработки нами было установлено, что рецептуры вакцин против ящура с Montanide ISA 61 VG вызывают напряженный и продолжительный иммунный ответ. По сравнению с традиционными масляными эмульсиями, эмульсия с Montanide ISA 61 VG является более стабильной и обладает низкой вязкостью. Обеспечивая высокую и долговременную защиту, вакцина с этим адъювантом может содержать антиген вируса ящура в низких концентрациях.As a result of the development, we found that the foot and mouth vaccine formulations with Montanide ISA 61 VG cause a tense and prolonged immune response. Compared to traditional oil emulsions, the emulsion with Montanide ISA 61 VG is more stable and has a lower viscosity. Providing high and long-term protection, a vaccine with this adjuvant may contain FMD virus antigen in low concentrations.
Вирус ящура культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 в течение 10-18 ч при температуре 36-37°С. При достижении количества мертвых клеток 90-95% прекращают культивирование. Вируссодержащую суспензию контролируют на стерильность и содержание 146S иммуногенных компонентов. Сразу по окончании цикла репродукции вируса, не прекращая термостатирования, в вируссодержащую суспензию добавляют 15-20% раствор АЭЭИ, подкисленный ледяной уксусной кислотой до рН 8,0-8,5. Инактивацию инфекционности вируса проводят в течение 12-24 часов при 36-37°С и рН 7,2-7,6 с перемешиванием через 5-6 часов в течение 3-5 минут. Остаток АЭЭИ нейтрализуют добавлением тиосульфата натрия.The foot and mouth disease virus is cultured in a suspension culture of BHK-21 cells for 10-18 hours at a temperature of 36-37 ° C. When the number of dead cells reaches 90-95%, cultivation is stopped. The virus-containing suspension is monitored for sterility and 146S immunogenic components. Immediately after the end of the virus reproduction cycle, without stopping thermostating, a 15–20% AEEI solution acidified with glacial acetic acid to pH 8.0–8.5 is added to the virus-containing suspension. Inactivation of the infectiousness of the virus is carried out for 12-24 hours at 36-37 ° C and a pH of 7.2-7.6 with stirring after 5-6 hours for 3-5 minutes. The remainder of the AEEI is neutralized by the addition of sodium thiosulfate.
При температуре суспензии 36-37°С добавляют 10% раствор ПГМГ до концентрации 0,005-0,007% для флокуляции балластных примесей и инактивации возможных контаминантов. Флокулированные балластные примеси подвергают седиментации с последующей декантацией.At a suspension temperature of 36-37 ° C, a 10% PHMG solution is added to a concentration of 0.005-0.007% for flocculation of ballast impurities and inactivation of possible contaminants. Flocculated ballast impurities are subjected to sedimentation followed by decantation.
Полученный антиген контролируют на авирулентность в первично-трипсинизированной культуре клеток свиной почки, содержание вирусспецифического белка, 146S иммуногенных компонентов вируса и стерильность.The resulting antigen is monitored for avirulence in the primary trypsinized culture of porcine kidney cells, the content of the virus-specific protein, 146S immunogenic components of the virus and sterility.
После контроля на авирулентность и стерильность вируссодержащую суспензию фильтруют через фильтр с порами 1,2 и 0,6 мкм для удаления оставшихся частиц с помощью фильтровальной установки.After checking for avirulence and sterility, the virus-containing suspension is filtered through a filter with pores of 1.2 and 0.6 μm to remove remaining particles using a filter unit.
Необходимое количество 146S иммуногенных компонентов в 1 см3 концентрата достигают с помощью проточной ультрафильтрации. Ультрафильтрацию проводят под давлением 1,5 атм.The required amount of 146S immunogenic components in 1 cm 3 of the concentrate is achieved by flow ultrafiltration. Ultrafiltration is carried out under a pressure of 1.5 atm.
В полученном концентрате проверяют количество растворимого балластного белка и прозрачность. При показании прозрачности ниже 90% или наличие растворимого балластного белка выше 10 мг/см3, полученный концентрат дополнительно фильтруют через фильтры с порами 0,45 мкм.In the resulting concentrate, the amount of soluble ballast protein and transparency are checked. When the transparency is shown below 90% or the presence of soluble ballast protein above 10 mg / cm 3 , the resulting concentrate is additionally filtered through filters with pores of 0.45 μm.
Адъювант Montanide ISA-61 VG стерилизуют через фильтр с порами 0,20 мкм при давлении 1,1-1,2 атм.Montanide ISA-61 VG adjuvant is sterilized through a 0.20 μm filter with a pressure of 1.1-1.2 atm.
Эмульгирование (соединение концентрата антигена с адъювантом Montanide ISA-61 VG) проводят при помощи проточного смесителя в соотношении от 40÷60 до 50÷:50 по весу, при температуре 18-25°С.Emulsification (connection of antigen concentrate with adjuvant Montanide ISA-61 VG) is carried out using a flow mixer in a ratio of 40 ÷ 60 to 50 ÷: 50 by weight, at a temperature of 18-25 ° C.
При разработке способа изготовления особое внимание было уделено, способам концентрирования, очистки инактивированной суспензии и концентрата, определению наиболее оптимального соотношения масляной и водной фазы. Масляные адъюванты, предназначенные для получения эмульсии вода в масле, обычно используют в соотношении 70:30.In developing the manufacturing method, special attention was paid to the methods of concentration, purification of the inactivated suspension and concentrate, and the determination of the most optimal ratio of the oil and water phases. Oily adjuvants designed to produce a water in oil emulsion are typically used at a ratio of 70:30.
Обычно при изготовлении эмульсионной вакцины против ящура с типом эмульсии «вода в масле в воде» получают путем смешивания концентрата антигена и масляного адъюванта при температуре 30-33°С в соотношении 50:50 по весу.Typically, in the manufacture of an emulsion vaccine against foot and mouth disease with a water-in-oil-in-water emulsion type, it is prepared by mixing an antigen concentrate and an oil adjuvant at a temperature of 30-33 ° C. in a ratio of 50:50 by weight.
При изготовлении эмульсионной вакцины с адъювантом Montanide ISA-61 VG антиген и масляный адъювант смешивают в соотношении от 40÷60 до 50÷:50 как по весу, так и по объему, что дает возможность увеличения количества 146S иммуногенных компонентов в прививном объеме препарата. Увеличение количества 146S иммуногенных компонентов позволяет повысить иммунный статус животных. Смешивание антигена и масляного адъюванта в равных пропорциях дает возможность концентрировать полуфабрикат примерно в 2 раза меньше.In the manufacture of the emulsion vaccine with Montanide ISA-61 VG adjuvant, the antigen and oil adjuvant are mixed in a ratio of 40 ÷ 60 to 50 ÷: 50 both by weight and volume, which makes it possible to increase the amount of 146S immunogenic components in the graft volume of the drug. The increase in the number of 146S immunogenic components can improve the immune status of animals. Mixing antigen and oil adjuvant in equal proportions makes it possible to concentrate the semi-finished product about 2 times less.
При использовании адъюванта Montanide ISA-61 VG удалось избежать потерь вирусной суспензии вследствие щадящей очистки.Using the Montanide ISA-61 VG adjuvant, the loss of viral suspension due to gentle cleaning was avoided.
Соединение концентрата с масляным адъювантом Montanide ISA-61 VG проводят без предварительного подогрева вирусной суспензии и адъюванта. Подогрев антигена вируса ящура отрицательно влияет на иммуногенные компоненты. За счет этого еще дополнительно удалось увеличить количество 146S иммуногенных компонентов в прививном объеме препарата, что позволяет эффективно применять прививную дозу 2,0 см3 для КРС.The combination of the concentrate with Montanide ISA-61 VG oil adjuvant is carried out without preheating the viral suspension and adjuvant. Heating of FMD virus antigen negatively affects immunogenic components. Due to this, it was still possible to increase the number of 146S immunogenic components in the inoculated volume of the drug, which allows the effective use of the inoculated dose of 2.0 cm 3 for cattle.
Способ изготовления вакцины интактивированной эмульсионной против ящура состоит из следующих этапов:A method of manufacturing a vaccine inactivated emulsion against foot and mouth disease consists of the following steps:
- в качестве вирусного антигена используют вирус ящура типа А и/или вирус ящура типа О, и/или вирус ящура типа Азия-1;- as a viral antigen, FMD virus type A and / or FMD virus type O and / or FMD virus type Asia-1 are used;
- для изготовления вакцины в качестве чувствительной биологической системы используют предпочтительно суспензионную культуру клеток ВНК-21, а в качестве поддерживающей среды раствор Эрла без сыворотки с добавлением ферментативных гидролизатов мышц сухого (ФГМС), гидролизатов белков крови сухого (ГБКС) и антибиотиков при рН 7,4-7,6;- for the manufacture of a vaccine, a suspension culture of BHK-21 cells is preferably used as a sensitive biological system, and Serum without serum with the addition of enzymatic dry muscle hydrolysates (FSMS), dry blood protein hydrolysates (GBKS) and antibiotics at pH 7 is used as a supporting medium; 4-7.6;
- культивирование проводят в течение 10-18 ч при температуре 36-37°С;- cultivation is carried out for 10-18 hours at a temperature of 36-37 ° C;
- после окончания процесса культивирования вирусного антигена к нему добавляют хлороформ до конечной концентрации 0,2%;- after the process of cultivation of the viral antigen is completed, chloroform is added to it to a final concentration of 0.2%;
- для инактивации вируса используют АЭЭИ, который добавляют в вируссодержащую суспензию до концентрации 0,025-0,05%. По окончании инактивации АЭЭИ нейтрализуют внесением в суспензию тиосульфата натрия [6].- for inactivation of the virus using AAAI, which is added to the virus-containing suspension to a concentration of 0.025-0.05%. At the end of inactivation, AEEI is neutralized by adding sodium thiosulfate to the suspension [6].
- очистку вирусной суспензии осуществляют путем добавления полигексаметиленгуанидина гидрохлорида (ПГМГ), который вносят в суспензию до концентрации 0,005-0,007% [7];- purification of the viral suspension is carried out by adding polyhexamethylene guanidine hydrochloride (PHMG), which is added to the suspension to a concentration of 0.005-0.007% [7];
- дополнительную очистку вируссодержащей суспензии проводят путем пропускания через фильтры с порами 1,2 и 0,6 мкм под давлением 1,5 атм;- additional purification of the virus-containing suspension is carried out by passing through filters with pores of 1.2 and 0.6 μm under a pressure of 1.5 atm;
- для изготовления эмульсионной вакцины антиген концентрируют проточной ультрафильтрацией под давлением 1,5 атм;- for the manufacture of emulsion vaccines, the antigen is concentrated by flow ultrafiltration under a pressure of 1.5 atm;
- при показании прозрачности ниже 90% или наличии растворимого балластного белка выше 10 мг/см3, полученный концентрат дополнительно очищают через фильтры с порами 0,45 мкм;- when showing transparency below 90% or the presence of a soluble ballast protein above 10 mg / cm 3 , the resulting concentrate is further purified through filters with pores of 0.45 μm;
- для изготовления эмульсионной вакцины используют авирулентный и очищенный антигенный материал с содержанием иммуногенных (146S) компонентов вируса ящура не менее 6 мкг по каждому типу в 1 см3;- for the manufacture of emulsion vaccines using avirulent and purified antigenic material with the content of immunogenic (146S) components of the virus of foot and mouth disease at least 6 μg for each type in 1 cm 3 ;
- масляный адъювант Montanide ISA-61 VG стерилизуют при помощи фильтровальной установки, пропуская масляный адъювант через фильтр с размером пор 0,2 мкм при давлении 1,1-1,2 атмосферы;- the oil adjuvant Montanide ISA-61 VG is sterilized using a filter unit, passing the oil adjuvant through a filter with a pore size of 0.2 μm at a pressure of 1.1-1.2 atmospheres;
- эмульсионную вакцину получают путем диспергирования при помощи проточного смесителя концентрата ящурного антигена и масляного адъюванта Montanide ISA-61 VG в соотношении от 40÷60 до 50÷50 по массе при температуре 18-25°С.- an emulsion vaccine is obtained by dispersing with the help of a flow mixer a concentrate of FMD antigen and oil adjuvant Montanide ISA-61 VG in a ratio of 40 ÷ 60 to 50 ÷ 50 by weight at a temperature of 18-25 ° C.
При этом в части вакцины, полученной заявленным способом, содержащей авирулентный и очищенный антигенный материал вируса ящура типа А и/или вируса ящура типа О, и/или вируса ящура типа Азия-1 в эффективном количестве, содержащий преимущественно 146S иммуногенные компоненты и масляный адъювант Montanide ISA-61 VG названная проблема решается тем, что:Moreover, in the part of the vaccine obtained by the claimed method, containing the avirulent and purified antigenic material of FMD virus type A and / or FMD virus type O and / or FMD virus type Asia-1 in an effective amount containing predominantly 146S immunogenic components and Montanide oil adjuvant ISA-61 VG named problem is solved by the fact that:
1. в качестве авирулентного очищенного антигенного материала вируса ящура типа А вакцина содержит авирулентный очищенный антигенный материал штамма вируса ящура типа А в количестве не менее 3,0 мкг 146S иммуногенных компонентов в 1 см3 готового препарата;1. as an avirulent purified antigenic material of foot and mouth disease virus type A, the vaccine contains avirulent purified antigenic material of a strain of foot and mouth disease type A in an amount of not less than 3.0 μg of 146S immunogenic components in 1 cm 3 of the finished product;
2. в качестве авирулентного очищенного антигенного материала вируса ящура типа А вакцина содержит авирулентный очищенный антигенный материал штамма А №2155/Забайкальский/2013 [8] в количестве не менее 3,0 мкг 146S иммуногенных компонентов в 1 см3 готового препарата;2. as an avirulent purified antigenic material of FMD virus type A, the vaccine contains avirulent purified antigenic material of strain A No. 2155 / Zabaykalsky / 2013 [8] in an amount of not less than 3.0 μg of 146S immunogenic components in 1 cm 3 of the finished preparation;
3. в качестве авирулентного очищенного антигенного материала вируса ящура типа О вакцина содержит авирулентный очищенный антигенный материал штамма вируса ящура типа О в количестве не менее 3,0 мкг 146S иммуногенных компонентов в 1 см3 готового препарата;3. as an avirulent purified antigenic material of FMD virus type O, the vaccine contains avirulent purified antigenic material of a strain of FMD virus type O in an amount of not less than 3.0 μg of 146S immunogenic components in 1 cm 3 of the finished preparation;
4. в качестве авирулентного очищенного антигенного материала вируса ящура типа О вакцина содержит авирулентный очищенный антигенный материал штамма О №2123/Южная Осетия/2011 [9] в количестве не менее 3 мкг 146S иммуногенного компонента в 1 см3 готового препарата;4. as an avirulent purified antigenic material of foot and mouth disease virus of type O, the vaccine contains avirulent purified antigenic material of strain O No. 2123 / South Ossetia / 2011 [9] in an amount of not less than 3 μg of 146S immunogenic component in 1 cm 3 of the finished preparation;
5. в качестве авирулентного очищенного антигенного материала вируса ящура типа Азия-1 вакцина содержит авирулентный очищенный антигенный материал штамма вируса ящура типа Азия-1 в количестве не менее 3,0 мкг 146S иммуногенных компонентов в 1 см3 готового препарата;5. as an avirulent purified antigenic material of a foot and mouth disease virus of type Asia-1, the vaccine contains avirulent purified antigenic material of a strain of foot and mouth disease of type Asia-1 in an amount of not less than 3.0 μg of 146S immunogenic components in 1 cm 3 of the finished preparation;
6. в качестве авирулентного очищенного антигенного материала вируса ящура типа Азия-1 вакцина содержит авирулентный очищенный антигенный материал штамма Азия-1 №1946/Шамир 3/89 [9] в количестве не менее 3 мкг 146S иммуногенного компонента в 1 см3 готового препарата;6. as an avirulent purified antigenic material of foot and mouth disease virus of type Asia-1, the vaccine contains avirulent purified antigenic material of strain Asia-1 No. 1946 / Shamir 3/89 [9] in an amount of at least 3 μg of 146S immunogenic component in 1 cm 3 of the finished preparation;
7. вакцина содержит авирулентный очищенный антигенный материал вируса ящура и масляный адъювант Montanide ISA-61 VG в соотношении от 40÷60 до 50÷50 при следующем количестве, мкг в 1 см3 готового препарата:7. the vaccine contains avirulent purified antigenic material of foot and mouth disease virus and oil adjuvant Montanide ISA-61 VG in a ratio of 40 ÷ 60 to 50 ÷ 50 with the following amount, μg in 1 cm 3 of the finished product:
Технический результат группы изобретений заключается в повышении уровня гуморального иммунитета, изготовлении эмульсионной вакцины в разных пропорциях водной и масляной фазы, увеличении содержания иммуногенных компонентов в меньшем прививном объеме, уменьшении потерь компонентов при изготовлении эмульсионной вакцины в соотношении от 40÷60 до 50÷50, уменьшении кратности концентрирования для получения более эффективных, безопасных и экономически целесообразных противоящурных препаратов, повышении напряженности и продолжительности иммуногенной активности вакцин против ящура, снижении реактогенности, улучшении стабильности.The technical result of the group of inventions is to increase the level of humoral immunity, manufacture emulsion vaccines in different proportions of the water and oil phases, increase the content of immunogenic components in a smaller graft volume, reduce component losses in the manufacture of emulsion vaccines in the ratio from 40 ÷ 60 to 50 ÷ 50, decrease multiplicity of concentration to obtain more effective, safe and economically feasible anti-FMD drugs, increasing tension and their duration munogenic activity of vaccines against foot and mouth disease, decreased reactogenicity, improved stability.
Технический результат от изобретения в части вакцины заключается в повышении напряженности и продолжительности иммуногенной активности вакцин против ящура, снижении реактогенности, улучшении стабильности препарата, а также в расширении арсенала имеющихся средств специфической профилактики ящура.The technical result of the invention in terms of vaccines is to increase the tension and duration of the immunogenic activity of FMD vaccines, reduce reactogenicity, improve the stability of the drug, and also expand the arsenal of available means of specific prevention of foot and mouth disease.
Основной технический результат заключается в уменьшении содержания антигенов в прививной дозе, за счет значительного снижения содержания иммуногенных компонентов в вирусной суспензии, которая используется для получения вакцины.The main technical result is to reduce the content of antigens in the vaccination dose, due to a significant decrease in the content of immunogenic components in the viral suspension, which is used to obtain the vaccine.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают его объем.The essence of the invention is illustrated by examples of its use, which do not limit its scope.
Пример 1. Для изготовления вакцины используют вирус ящура А №2155/Забайкальский/2013, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36-37°С. Через 6-7 часов инкубирования проводят подсчет живых и мертвых клеток при окраске трипановым синим. При достижении количества мертвых клеток 90-95% культивирование прекращают и вируссодержащую суспензию контролируют на стерильность и содержание 146S компонентов. Количество 146S компонентов в суспензии не менее 0,5 мкг/см3. Сразу по окончании цикла репродукции вируса, не прекращая термостатирования, в вируссодержащую суспензию добавляют 15-20% раствор АЭЭИ, подкисленный ледяной уксусной кислотой до рН 8,0-8,5. Конечная концентрация АЭЭИ в вируссодержащей суспензии должна быть равной 0,025-0,05%. Инактивацию инфекционности вируса проводят в течение 12-24 часов при 36-37°С и рН 7,2-7,6 с перемешиванием через 5-6 часов в течение 3-5 минут. Остаток АЭЭИ нейтрализуют добавлением тиосульфата натрия.Example 1. For the manufacture of a vaccine, foot and mouth disease virus A No. 2155 / Zabaykalsky / 2013 is used, which is cultured in a suspension culture of BHK-21 cells at a temperature of 36-37 ° C. After 6-7 hours of incubation, living and dead cells are counted with trypan blue staining. When the number of dead cells reaches 90-95%, the cultivation is stopped and the virus-containing suspension is monitored for sterility and the content of 146S components. The amount of 146S components in the suspension is at least 0.5 μg / cm 3 . Immediately after the end of the virus reproduction cycle, without stopping thermostating, a 15–20% AEEI solution acidified with glacial acetic acid to pH 8.0–8.5 is added to the virus-containing suspension. The final concentration of AEEI in the virus-containing suspension should be equal to 0.025-0.05%. Inactivation of the infectiousness of the virus is carried out for 12-24 hours at 36-37 ° C and a pH of 7.2-7.6 with stirring after 5-6 hours for 3-5 minutes. The remainder of the AEEI is neutralized by the addition of sodium thiosulfate.
При температуре суспензии 36-37°С добавляют 10% раствор ПГМГ до концентрации 0,005-0,007% для флокуляции балластных примесей и инактивации возможных контаминантов. Флокулированные балластные примеси подвергают седиментации с последующей декантацией.At a suspension temperature of 36-37 ° C, a 10% PHMG solution is added to a concentration of 0.005-0.007% for flocculation of ballast impurities and inactivation of possible contaminants. Flocculated ballast impurities are subjected to sedimentation followed by decantation.
Необходимое количество иммуногенных компонентов 146S достигают при помощи ультрафильтрации. Конечная концентрация 146S компонентов вируса ящура должна быть, не менее 3,0 мкг в 1 см3 готового препарата. Адъювант Montanide ISA-61 VG стерилизуют через фильтр с порами 0,2 мкм. Затем антиген смешивают с масляным адъювантом Montanide ISA-61 VG при температуре 18-25°С.The required amount of 146S immunogenic components is achieved by ultrafiltration. The final concentration of 146S components of foot and mouth disease virus should be at least 3.0 μg in 1 cm 3 of the finished product. Montanide ISA-61 VG adjuvant is sterilized through a 0.2 μm filter. Then the antigen is mixed with oil adjuvant Montanide ISA-61 VG at a temperature of 18-25 ° C.
Приготовленную вакцину расфасовывают во флаконы и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенность и стабильность.The prepared vaccine is packaged in vials and checked for sterility, avirulence, safety, immunogenicity and stability.
Пример 2. Для изготовления вакцины использовали вирус ящура О №2123/Южная Осетия/2011. Вакцину готовили так, как описано в примере 1.Example 2. For the manufacture of the vaccine used foot and mouth disease About No. 2123 / South Ossetia / 2011. The vaccine was prepared as described in example 1.
Приготовленную вакцину расфасовывают во флаконы и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенность и стабильность.The prepared vaccine is packaged in vials and checked for sterility, avirulence, safety, immunogenicity and stability.
Пример 3. Для изготовления вакцины используют вирус ящура Азия-1 №1946/Шамир 3/89. Вакцина изготавливалась так, как описано в примере 1.Example 3. For the manufacture of the vaccine using the foot and mouth disease virus Asia-1 No. 1946 / Shamir 3/89. The vaccine was prepared as described in example 1.
Приготовленную вакцину расфасовывают во флаконы и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенность и стабильность.The prepared vaccine is packaged in vials and checked for sterility, avirulence, safety, immunogenicity and stability.
Пример 4. Инактивированную эмульсионную вакцину против ящура типов А и О изготавливают из штаммов вируса ящура А №2155/Забайкальский/2013 и О №2123/Южная Осетия/2011. Штаммы вируса ящура культивируют в отдельных биореакторах. После этого штаммы концентрируют либо по отдельности и затем смешивают в зависимости от содержания иммуногенных компонентов, либо после смешивания также проводят концентрирование. После этого добавляют масляный адъювант Montanide ISA-61 VG.Example 4. An inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease types A and O is made from strains of foot and mouth disease virus A No. 2155 / Zabaykalsky / 2013 and O No. 2123 / South Ossetia / 2011. FMD strains are cultured in separate bioreactors. After that, the strains are concentrated either individually and then mixed depending on the content of immunogenic components, or after mixing, concentration is also carried out. After that, Montanide ISA-61 VG oil adjuvant is added.
Приготовленную вакцину расфасовывают во флаконы и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенность и стабильность.The prepared vaccine is packaged in vials and checked for sterility, avirulence, safety, immunogenicity and stability.
Пример 5. Инактивированную эмульсионную вакцину против ящура типов А, О, Азия-1 изготавливают из штаммов вируса ящура А №2155/Забайкальский/2013, О №2123/Южная Осетия/2011 и Азия-1 №1946/Шамир 3/89. Штаммы вируса ящура культивируют в отдельных биореакторах. После этого штаммы концентрируют по отдельности и затем смешивают в зависимости от содержания иммуногенных компонентов. После этого добавляют масляный адъювант Montanide ISA-61 VG.Example 5. Inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease types A, O, Asia-1 is made from strains of foot and mouth disease virus A No. 2155 / Zabaykalsky / 2013, O No. 2123 / South Ossetia / 2011 and Asia-1 No. 1946 / Shamir 3/89. FMD strains are cultured in separate bioreactors. After that, the strains are concentrated separately and then mixed depending on the content of immunogenic components. After that, Montanide ISA-61 VG oil adjuvant is added.
Приготовленную вакцину расфасовывают во флаконы и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенность и стабильность.The prepared vaccine is packaged in vials and checked for sterility, avirulence, safety, immunogenicity and stability.
Пример 6. Проведены испытания иммуногенной активности инактивированной эмульсионной вакцины против ящура типа А №2155/Забайкальский/2013 на подсвинках с масляными адъювантами Montanide ISA-206 и Montanide ISA-61 VG, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мкг в 2,0 см3:Example 6. The tests of the immunogenic activity of inactivated emulsion vaccine against FMD type A No. 2155 / Zabaykalsky / 2013 on gilts with oil adjuvants Montanide ISA-206 and Montanide ISA-61 VG, manufactured as described in example 1, and containing, mcg 2.0 cm 3 :
Животных прививали внутримышечно в дозе 2,0 см3.Animals were vaccinated intramuscularly at a dose of 2.0 cm 3 .
Результаты испытаний представлены в таблице 2. Из результатов, представленных в таблице видно, что титр антител на 21 сутки после иммунизации у животных привитых вакциной на основе масляного адъюванта Montanide ISA-61 VG был в 2 раза выше, чем у животных инокулированных вакциной с адъювантом Montanide ISA-206.The test results are presented in table 2. From the results presented in the table it is seen that the antibody titer on the 21st day after immunization in animals vaccinated with Montanide oil-based adjuvant vaccine ISA-61 VG was 2 times higher than in animals inoculated with Montanide adjuvanted vaccine ISA-206.
Пример 7. Проведены испытания иммуногенной активности инактивированной эмульсионной вакцины против ящура типа О №2123/Южная Осетия/2011 на КРС с масляными адъювантами Montanide ISA-206 и Montanide ISA-61 VG, изготовленной так, как описано в примере 2, и содержащей, мкг в 2,0 см3:Example 7. The tests of the immunogenic activity of an inactivated emulsion vaccine against FMD type O No. 2123 / South Ossetia / 2011 on cattle with oil adjuvants Montanide ISA-206 and Montanide ISA-61 VG, manufactured as described in example 2, and containing, mcg in 2.0 cm 3 :
Животных вакцинировали внутримышечно в дозе 2,0 см3.Animals were vaccinated intramuscularly at a dose of 2.0 cm 3 .
Результаты опыта отображены в таблице 3. Эмульсионная вакцина с Montanide ISA-61 VG стимулировала выработку вируснейтрализующих антител в 2 раза больше, чем с Montanide ISA-206.The experimental results are shown in table 3. The emulsion vaccine with Montanide ISA-61 VG stimulated the production of virus-neutralizing antibodies 2 times more than with Montanide ISA-206.
Пример 8. Проведены испытания иммуногенной активности инактивированной эмульсионной вакцины против ящура типа Азия-1 №1946/Шамир 3/89 на КРС с масляными адъювантами Montanide ISA-70 и Montanide ISA-61 VG, изготовленной так, как описано в примере 3, и содержащей, мкг в 2,0 см3:Example 8. The tests of the immunogenic activity of the inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease type Asia-1 No. 1946 / Shamir 3/89 on cattle with oil adjuvants Montanide ISA-70 and Montanide ISA-61 VG, manufactured as described in example 3, and containing , mcg in 2.0 cm 3 :
Животных вакцинировали внутримышечно в дозе 2,0 см3.Animals were vaccinated intramuscularly at a dose of 2.0 cm 3 .
Результаты опыта показаны в таблице 4. Данные представленные в таблице показывают, что вакцина с Montanide ISA-61 VG индуцировала на 21 сутки титр антител на уровне 5,90±0,27 log2, вакцина с Montanide ISA-70 - 4,95±0,18 log2.The results of the experiment are shown in table 4. The data presented in the table show that the vaccine with Montanide ISA-61 VG induced on the 21st day an antibody titer of 5.90 ± 0.27 log 2 , the vaccine with Montanide ISA-70 - 4.95 ± 0.18 log 2 .
Пример 9. Проведены испытания иммуногенной активности инактивированных эмульсионных вакцин против ящура типов А №2155/Забайкальский/2013 и О №2123/Южная Осетия/2011 на КРС с масляными адъювантами Montanide ISA-206 и Montanide ISA-61 VG, изготовленных так, как описано в примере 4, и содержащей, мкг в 2,0 см3: 
Животных вакцинировали внутримышечно в дозе 2,0 см3.Animals were vaccinated intramuscularly at a dose of 2.0 cm 3 .
Результаты опыта отображены в таблице 5. Из таблицы следует, что индукция антител против вируса ящура после инокуляции вакциной с масляным адъювантом Montanide ISA-61 VG по типу А была в 2,1 раза выше, а по типу О в 3,5 раза выше, чем у вакцины с масляным адъювантом Montanide ISA-206.The results of the experiment are shown in table 5. From the table it follows that the induction of antibodies against foot and mouth disease virus after inoculation with the vaccine with oil adjuvant Montanide ISA-61 VG type A was 2.1 times higher and type O 3.5 times higher than the Montanide ISA-206 oil adjuvanted vaccine.
Пример 10. Проведены испытания иммуногенной активности инактивированной эмульсионной вакцины против ящура типов А №2155/Забайкальский/2013, О №2123/Южная Осетия/2011 и Азия-1 №1946/Шамир 3/89, изготовленной так, как описано в примере 5, и содержащей, мкг в 2,0 см3:Example 10. The tests of the immunogenic activity of an inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease type A No. 2155 / Zabaykalsky / 2013, About No. 2123 / South Ossetia / 2011 and Asia-1 No. 1946 / Shamir 3/89, manufactured as described in example 5, and containing, mcg in 2.0 cm 3 :
Животных вакцинировали внутримышечно в дозе 2,0 см3.Animals were vaccinated intramuscularly at a dose of 2.0 cm 3 .
Результаты опыта показаны в таблице 6. По результатам испытаний можно сделать вывод, что уровень гуморального иммунитета у животных привитых вакциной с масляным адъювантом Montanide ISA-61 VG на 70 сутки превышал гуморальный иммунитет животных инокулированных вакцинами с масляным адъювантом Montanide ISA-70 и масляным адъювантом Montanide ISA-206 по типу А в 3,5 и в 1,5 раза, соответственно. Индуцирование вируснейтрализующих антител у животных привитых вакцинами с масляным адъювантом Montanide ISA-61 VG и масляным адъювантом Montanide ISA-206 по типу О не отличался. Выработка антител по типу О у животных иммунизированных вакциной с масляным адъювантом Montanide ISA-61 VG была в 3,4 раза выше, чем у животных привитых вакциной с масляным адъювантом Montanide ISA-70. По типу Азия-1 индуцирование гуморального иммунитета у животных привитых вакциной с масляным адъювантом Montanide ISA-61 VG в 2,5 раза и в 3,4 раза выше, чем у животных инокулированных вакцинами с масляным адъювантом Montanide ISA-206 и с масляным адъювантом Montanide ISA-70, соответственно.The experimental results are shown in table 6. According to the test results, it can be concluded that the level of humoral immunity in animals vaccinated with a vaccine with Montanide ISA-61 VG oil adjuvant was 70 days higher than the humoral immunity of animals inoculated with vaccines with Montanide ISA-70 oil adjuvant and Montanide oil adjuvant ISA-206 type A 3.5 and 1.5 times, respectively. Induction of virus-neutralizing antibodies in animals vaccinated with Montanide ISA-61 VG oil adjuvant and Montanide ISA-206 oil adjuvant in type O was not different. The production of type O antibodies in animals immunized with the Montanide ISA-61 VG oil adjuvant vaccine was 3.4 times higher than in animals vaccinated with the Montanide ISA-70 oil adjuvant vaccine. In Asia-1 type, the induction of humoral immunity in animals vaccinated with Montanide ISA-61 VG oil adjuvant vaccine is 2.5 times and 3.4 times higher than in animals inoculated with vaccines with Montanide ISA-206 oil adjuvant and with Montanide oil adjuvant ISA-70, respectively.
Пример 11. Проведены испытания реактогенности инактивированной эмульсионной вакцины против ящура типов А №2155/Забайкальский/2013, О №2123/Южная Осетия/2011, Азия-1 №1946/Шамир 3/89. Результаты исследований представлены в таблице 7.Example 11. Tests of the reactogenicity of the inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease type A No. 2155 / Zabaykalsky / 2013, About No. 2123 / South Ossetia / 2011, Asia-1 No. 1946 / Shamir 3/89. The research results are presented in table 7.
Исследования показали, что при введении эмульсионной вакцины с адъювантом Montanide ISA-61 VG гранулема на 7 сутки была только у одного животного, объем которой составил 0,006 см3 при внутримышечном введении, а при подкожном введении на 7 сутки гранулемы были объемом 39,9 и 177,4 см3. Тогда как после введения вакцины с адъювантом Montanide ISA-206 гранулемы на 7 сутки наблюдались у всех животных размером 0,5-3 см3 при внутримышечном введении. При подкожном введении объем гранулем составил 52 и 180,5 см3. При внутримышечном введении вакцины с адъювантом Montanide ISA-70 на 7 сутки гранулема наблюдалась у одного животного размером 0,05 см3, а при подкожном введении объем гранулем составил 54,81 и 1618,75 см3. На 14 сутки гранулемы не наблюдались ни у одного животного. Животные, привитые подкожно вакцинами с адъювантом Montanide ISA-61 VG и адъювантом Montanide ISA-206 на 35 сутки имели незначительные гранулемы объемом 1,00 и 1,04 см3. Тогда как животные, иммунизированные вакциной с адъювантом Montanide ISA-70, имели гранулемы 1,12 и 8,7 см3.Studies have shown that when administering an emulsion vaccine with Montanide ISA-61 VG adjuvant, granuloma on day 7 was present in only one animal, the volume of which was 0.006 cm 3 when administered intramuscularly, and when administered subcutaneously on day 7, granulomas were 39.9 and 177 4 cm 3 . Whereas after administration of the vaccine with Montanide ISA-206 adjuvant, granulomas on day 7 were observed in all animals 0.5-3 cm 3 in size with intramuscular injection. With subcutaneous administration, the volume of granulomas was 52 and 180.5 cm 3 . With intramuscular administration of the vaccine with Montanide ISA-70 adjuvant on the 7th day, granuloma was observed in one animal 0.05 cm 3 in size, and with subcutaneous administration, the granuloma volume was 54.81 and 1618.75 cm 3 . On day 14, granulomas were not observed in any animal. Animals vaccinated subcutaneously with vaccines with Montanide ISA-61 VG adjuvant and Montanide ISA-206 adjuvant for 35 days had minor granulomas of 1.00 and 1.04 cm 3 . Whereas animals immunized with the Montanide ISA-70 adjuvant vaccine had 1.12 and 8.7 cm 3 granulomas.
Пример 12. Проведены испытания стабильности инактивированной эмульсионной вакцины против ящура типов А, О, Азия-1. Результаты исследований отображены в таблицах 8, 9, 10.Example 12. Tests of stability of the inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease types A, O, Asia-1. The research results are shown in tables 8, 9, 10.
Как видно из таблиц, вакцина, приготовленная на основе масляного адъюванта Montanide ISA-61 VG более стабильна при равных условиях испытаний.As can be seen from the tables, the vaccine prepared on the basis of the Montanide ISA-61 VG oil adjuvant is more stable under equal test conditions.
Источники информацииInformation sources
1. Пат. РФ 2510845, МПК A61K 39/39, A61K 39/113, Адъювант, опубл. 10.04.2014 г.1. Pat. RF 2510845, IPC A61K 39/39, A61K 39/113, Adjuvant, publ. 04/10/2014
2. Сумм Б.Д. Основы коллоидной химии. - 2007, М., 240 с.2. Amount B.D. The basics of colloid chemistry. - 2007, M., 240 p.
3. Пат. РФ 2143921, МПК A61K 39/135, C07K 14/09, C12N 7/04, Вакцина против ящура типа А и способ ее изготовления, опубл. 10.01.2000 г.3. Pat. RF 2143921, IPC A61K 39/135, C07K 14/09, C12N 7/04, Type A foot and mouth disease vaccine and method for its manufacture, publ. 01/10/2000
4. Пат. РФ 2212895, МПК A61K 39/135, C12N 7/04, Вакцина против ящура типа О и способ ее изготовления, опубл. 27.09.2003 г.4. Pat. RF 2212895, IPC A61K 39/135, C12N 7/04, Type O foot and mouth disease vaccine and method for its manufacture, publ. 09/27/2003
5 Пат. РФ 2294759 A61K 39/135, А61Р 31/12, Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа А, опубл. 10.03.2007 г.5 Pat. RF 2294759 A61K 39/135, A61P 31/12, Inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease type A, publ. 03/10/2007
6. А.С. 594771, А61K 39/12, C12N 7/04, Средство для инактивации вирусов при изготовлении противовирусных препаратов, опубл. 07.07.1993 г.6. A.S. 594771, A61K 39/12, C12N 7/04, Tool for inactivation of viruses in the manufacture of antiviral drugs, publ. 07/07/1993
7. Пат. РФ 2054039, C12N 7/02, А61K 39/135, Способ очистки и стерилизации культурального вируса ящура, опубл. 10.02.1996 г.7. Pat. RF 2054039, C12N 7/02, A61K 39/135, Method for cleaning and sterilizing a culture of foot and mouth disease virus, publ. 02/10/1996
8. Пат. РФ 2603255, A61K 39/135, C12N 7/04, Штамм А №2155/Забайкальский/2013 вируса ящура Aphtae epizooticae типа А для контроля антигенной и иммуногенной активности и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа А, опубл. 27.11.2016 г.8. Pat. RF 2603255, A61K 39/135, C12N 7/04, Strain A No. 2155 / Transbaikal / 2013 of foot and mouth disease virus Aphtae epizooticae type A for monitoring antigenic and immunogenic activity and for the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of foot and mouth disease type A, publ. 11/27/2016
9. Пат. РФ 2593718, A61K 39/135, C12N 7/04, Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типов А, О, Азия-1, опубл. 10.08.2016 г.9. Pat. RF 2593718, A61K 39/135, C12N 7/04, Inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease types A, O, Asia-1, publ. 08/10/2016
Примечание: п/к - подкожно, в/м - внутримышечноNote: s / c - subcutaneously, intramuscularly -
Примечание: А - прозрачное масло в верхней фракции; В - опалесцирующее масло; С - нормальное масло; D - плотная эмульсия (коалесцент); Е - водная фракция на дне пробирки.Note: A - clear oil in the upper fraction; B - opalescent oil; C is normal oil; D - dense emulsion (coalescent); E is the aqueous fraction at the bottom of the tube.
Примечание: А - прозрачное масло в верхней фракции; В - опалесцирующее масло; С - нормальное масло; D - плотная эмульсия (коалесцент); Е - водная фракция на дне пробирки.Note: A - clear oil in the upper fraction; B - opalescent oil; C is normal oil; D - dense emulsion (coalescent); E is the aqueous fraction at the bottom of the tube.
Примечание: А - прозрачное масло в верхней фракции; В - опалесцирующее масло; С - нормальное масло; D - плотная эмульсия (коалесцент); Е - водная фракция на дне пробирки.Note: A - clear oil in the upper fraction; B - opalescent oil; C is normal oil; D - dense emulsion (coalescent); E is the aqueous fraction at the bottom of the tube.
Claims (12)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017119734A RU2652889C1 (en) | 2017-06-06 | 2017-06-06 | Method of manufacturing the vaccine inactivated emulsion against murrain and emulsion inactivated vaccine against murrain |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017119734A RU2652889C1 (en) | 2017-06-06 | 2017-06-06 | Method of manufacturing the vaccine inactivated emulsion against murrain and emulsion inactivated vaccine against murrain |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2652889C1 true RU2652889C1 (en) | 2018-05-03 |
Family
ID=62105653
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017119734A RU2652889C1 (en) | 2017-06-06 | 2017-06-06 | Method of manufacturing the vaccine inactivated emulsion against murrain and emulsion inactivated vaccine against murrain |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2652889C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2785113C1 (en) * | 2021-12-21 | 2022-12-02 | Федеральное Казенное Предприятие "Щелковский Биокомбинат" | Fmd vaccine (options) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2212895C2 (en) * | 2001-11-01 | 2003-09-27 | Федеральное государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Vaccine against o-type foot-and-mouth disease and method for its preparing |
| RU2220744C1 (en) * | 2002-07-01 | 2004-01-10 | Федеральное государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Vaccine against foot-and-mouth asia-1 type and method for it preparing |
| RU2294759C2 (en) * | 2005-05-23 | 2007-03-10 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ ВНИИЗЖ) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease of type a |
| US9145548B2 (en) * | 2010-09-08 | 2015-09-29 | The Pirbright Institute | Foot and mouth disease virus with increased stability and its use as vaccine |
| RU2603003C1 (en) * | 2015-04-28 | 2016-11-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Inactivated sorptive vaccine to fmd types a, o, asia-1 |
-
2017
- 2017-06-06 RU RU2017119734A patent/RU2652889C1/en active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2212895C2 (en) * | 2001-11-01 | 2003-09-27 | Федеральное государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Vaccine against o-type foot-and-mouth disease and method for its preparing |
| RU2220744C1 (en) * | 2002-07-01 | 2004-01-10 | Федеральное государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Vaccine against foot-and-mouth asia-1 type and method for it preparing |
| RU2294759C2 (en) * | 2005-05-23 | 2007-03-10 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ ВНИИЗЖ) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease of type a |
| US9145548B2 (en) * | 2010-09-08 | 2015-09-29 | The Pirbright Institute | Foot and mouth disease virus with increased stability and its use as vaccine |
| RU2603003C1 (en) * | 2015-04-28 | 2016-11-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Inactivated sorptive vaccine to fmd types a, o, asia-1 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| RU 2294759 C2, 20.11,2006. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2785113C1 (en) * | 2021-12-21 | 2022-12-02 | Федеральное Казенное Предприятие "Щелковский Биокомбинат" | Fmd vaccine (options) |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4718778B2 (en) | West Nile vaccine | |
| JPH02250835A (en) | Tocol as adjuvant in vaccine | |
| RU2710239C1 (en) | Method of producing antigen or antigens for production of influenza vaccine and a vaccine based on it | |
| ES2950822T3 (en) | Vaccine against foot and mouth disease | |
| CN103263666A (en) | Duplex inactivated vaccine of porcine circovirus type 2 and porcine mycoplasma hyopneumoniae and preparation method of duplex inactivated vaccine | |
| RU2593718C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease types a, o, asia-1 | |
| FI100946B (en) | Method for preparing an adjuvant-containing antigen solution | |
| CN104258389B (en) | A kind of vaccine combination and its preparation method and application | |
| CN103830724B (en) | Muscovy duck parvovirus inactivation vaccine and application thereof | |
| RU2652889C1 (en) | Method of manufacturing the vaccine inactivated emulsion against murrain and emulsion inactivated vaccine against murrain | |
| US20120107354A1 (en) | Viral vaccine and process for preparing the same | |
| CN103789272B (en) | H9 subtype avian influenza virus separation strain and the vaccine combination prepared by it | |
| RU2143921C1 (en) | Vaccine against foot and mouth of type a and method of its preparing | |
| RU2545717C1 (en) | Method of producing adjuvant for vaccine | |
| CN114366810A (en) | Natural microorganism and plant source composite double adjuvant capable of efficiently inducing humoral and cellular immunity and preparation method and application thereof | |
| RU2212895C2 (en) | Vaccine against o-type foot-and-mouth disease and method for its preparing | |
| JP7288270B2 (en) | Inactivated whole-particle influenza vaccine and its preparation | |
| RU2545714C1 (en) | Method of production of adjuvant for viral vaccines | |
| RU2220744C1 (en) | Vaccine against foot-and-mouth asia-1 type and method for it preparing | |
| RU2294760C2 (en) | Sorbed inactivated vaccine against foot-and-mouth disease of type a | |
| RU2457859C1 (en) | Cattle viral diarrhoeia vaccine | |
| RU2504400C1 (en) | Inactivated emulsion associated vaccine for cattle parainfluenza-3, infectious rhinotracheitis and viral diarrhoea | |
| RU2804948C2 (en) | Pentavalent subunit vaccine against respiratory infections and method of its preparation | |
| Savina et al. | The effect of synthetic adjuvant on the formation of the immune response | |
| RU2740751C1 (en) | Method of producing tetravalent subunit influenza vaccine |