RU2648845C2 - Способ экспресс-диагностики оспы овец и коз - Google Patents
Способ экспресс-диагностики оспы овец и коз Download PDFInfo
- Publication number
- RU2648845C2 RU2648845C2 RU2016132747A RU2016132747A RU2648845C2 RU 2648845 C2 RU2648845 C2 RU 2648845C2 RU 2016132747 A RU2016132747 A RU 2016132747A RU 2016132747 A RU2016132747 A RU 2016132747A RU 2648845 C2 RU2648845 C2 RU 2648845C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sheep
- smallpox
- samples
- pathological material
- infectious disease
- Prior art date
Links
- 241001494479 Pecora Species 0.000 title claims abstract description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 241000283707 Capra Species 0.000 title claims abstract description 17
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 claims abstract description 28
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims abstract description 20
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 18
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 18
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims abstract description 6
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 claims abstract description 4
- 241000894007 species Species 0.000 claims abstract description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 3
- 241001112691 Goatpox virus Species 0.000 abstract description 3
- 241000700665 Sheeppox virus Species 0.000 abstract description 3
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 abstract 1
- 201000005332 contagious pustular dermatitis Diseases 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 9
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 1
- 206010006500 Brucellosis Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010033733 Papule Diseases 0.000 description 1
- 206010037888 Rash pustular Diseases 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052787 antimony Inorganic materials 0.000 description 1
- WATWJIUSRGPENY-UHFFFAOYSA-N antimony atom Chemical compound [Sb] WATWJIUSRGPENY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 244000144980 herd Species 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229910052573 porcelain Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 208000029561 pustule Diseases 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000006163 transport media Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к способу диагностики оспы овец и коз. Способ экспресс-диагностики вируса оспы коз и овец включает отбор проб патологического материала из очага инфекционного заболевания, экстракцию ДНК бактерий инфекционного заболевания из полученных проб, идентификацию видовой принадлежности возбудителя болезни методом полимеразной цепной реакции с флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени с применением термоциклера типа RotorGene на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией. В качестве патологического материала используют пробы из очага инфекционного заболевания оспы, при этом отбор проб патологического материала осуществляют от всех животных, находящихся в очаге инфекционного заболевания, и проводят экспресс-диагностику полученного патологического материала в течение суток для выявления животных-носителей вируса оспы на начальной стадии инфицирования. Учет результатов полимеразной цепной реакции проводят по наличию или отсутствию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией, если наблюдают рост специфического сигнала, то образец считают положительным - вирус оспы овец и коз присутствует, при этом значения контрольных образцов находятся в пределах нормы, если не наблюдают рост специфического сигнала, то образец считают отрицательным - вирус оспы овец и коз отсутствует и значения контрольных образцов также находятся в пределах нормы. Способ позволяет расширить функциональные возможности способа диагностики оспы овец и коз. 3 табл., 1 ил.
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к способу диагностики вируса оспы коз и овец.
Известен способ обнаружения специфических антител к вирусам оспы овец и коз методом ингибирования твердофазного иммуноферментного анализа, предусматривающий взаимодействие исследуемой сыворотки крови с антигеном вируса оспы овец и последующую детекцию иммобилизированного на твердой фазе комплекса антитело - специфический антиген поликлональным пероксидазным конъюгатом, где на первом этапе реакции происходит взаимодействие исследуемой сыворотки с культуральным антигеном вируса оспы овец, на втором этапе не вступивший в реакцию антиген взаимодействует с иммобилизированными на твердой фазе моноклональными антителами клона 08.3, обладающими специфичностью к антигенной детерминанте полипептида молекулярной массы 36-40 кД вируса оспы овец штамма "НИСХИ", а образовавшийся комплекс моноклональное антитело - антиген выявляют специфическим пероксидазным конъюгатом поликлональных антител, выделенных из гипериммунной сыворотки животных-реконвалесцентов (патент РФ №2202112, кл. А61К 39/275, G12Q 1/68).
Известен метод диагностики оспы коз и овец (Орлова Е.С. Совершенствование методов диагностики оспы овец и оспы коз: автореф. дис. канд. биол. наук / Е.С. Орлова. - Владимир, 2007 г. - 25 с.), включающий проведение ПЦР в реакционной смеси следующего состава: 2,5 мкл 10× буфера для Taq-полимеразы, 3 мМ Mg2+ 0,2 мМ dNTPs, 1,0 ед. Taq-полимеразы, по 10 пмоль праймеров, 3 мкл раствора вирусной ДНК и вода до конечного объема 25 мкл на ДНК-амплификаторе РТС-100 (MJ Research, США) при следующем температурном режиме: 2 мин предварительной денатурации при 94°C, 35 циклов амплификации (30 с денатурации при 94°C, 30 с отжига праймеров при 55°C, 30 с элонгации при 72°C) и 2 мин заключительной элонгации, с возможным (при необходимости) проведением второго этапа амплификации с внутренними праймерами в смеси аналогичного состава в течение 20-25 циклов, далее продукты реакции анализировали с помощью электорофореза в 2,0% агарозном геле, содержащем 0,001% бромистого этидия, при силе тока 50 мА.
Недостаток данного способа - он дает только качественный результат.
Известно техническое решение (Касьян Ж.А. и др. «Разработка тест-системы для дифференциации видов бруцелл методом ПЦР с учетом результатов в режиме реального времени. Проблемы особо опасных инфекций. 2016, вып. 3, с. 47-51. http://journal.microbe.ru/jour - прототип) отбор проб патологического материала из очага инфекционного заболевания, экстракцию ДНК бактерий инфекционного заболевания из полученных проб, идентификацию видовой принадлежности возбудителя болезни методом полимеразной цепной реакции с флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени с применением термоциклера типа RotorGene на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией.
Недостатком данного метода является ограниченная применимость только к возбудителю бруцеллеза и отсутствие возможности диагностирования раннего развития заболевания с целью предотвращения массового распространения заболевания и перехода его в тяжелую запущенную форму.
Техническим результатом является расширение функциональных возможностей способа, предотвращение массового распространения заболевания и перехода его в тяжелую запущенную форму.
Технический результат достигается тем, что в способе экспресс-диагностики вируса оспы коз и овец, включающем отбор проб патологического материала из очага инфекционного заболевания, экстракцию ДНК бактерий инфекционного заболевания из полученных проб, идентификацию видовой принадлежности возбудителя болезни методом полимеразной цепной реакции с флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени с применением термоциклера типа RotorGene на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией, согласно изобретению в качестве патологического материала используют пробы из очага инфекционного заболевания оспы, при этом отбор проб патологического материала осуществляют от всех животных, находящихся в очаге инфекционного заболевания, и проводят экспресс-диагностику полученного патологического материала в течение суток для выявления животных-носителей вируса оспы на начальной стадии инфицирования, при этом учет результатов полимеразной цепной реакции проводят по наличию или отсутствию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией, если наблюдают рост специфического сигнала, то образец считают положительным - вирус оспы овец и коз присутствует, при этом значения контрольных образцов находятся в пределах нормы, если не наблюдают рост специфического сигнала, то образец считают отрицательным - вирус оспы овец и коз отсутствует и значения контрольных образцов также находятся в пределах нормы.
Новизна заявляемого способа экспресс-диагностики вируса оспы коз и овец состоит в идентификации вируса оспы в пробах патологического материала с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени, что в свою очередь позволяет выявить животных-носителей вируса оспы на начальной стадии инфицирования животных.
Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа, направлены на достижение технического результата и не выявлены при изучении данной и смежной областей науки и техники и, следовательно, соответствуют критерию «изобретательский уровень».
Заявляемый способ экспресс-диагностики вируса оспы коз и овец рекомендовано использовать в специализированных ветеринарных, санитарно-эпидемиологических, животноводческих, сельскохозяйственных предприятиях, что соответствует критерию «промышленная применимость».
Способ экспресс-диагностики вируса оспы коз и овец осуществляют следующим образом.
В стаде овец или коз осуществляют отбор проб патологического материала от каждого животного из очага инфекционного заболевания оспы.
При отборе проб и их подготовке для исследования соблюдают меры, предупреждающие обсеменение объектов внешней среды. Материал от каждого животного отбирают отдельными инструментами.
Для исследования используют содержимое везикул, пустул, после предварительной очистки их поверхности спиртом; папулы, соскобленные скальпелем, и оспенные корки, собранные пинцетом; фрагменты измененных органов (лимфатические узлы, селезенка, легкие); для получения сыворотки собирают кровь в пробирку без антикоагулянта.
Взятие клинического материала производят в пробирку с транспортной средой.
Перед проведением анализа исследуемый материал подготавливают:
- исследуемые пробы тканей, органов гомогенизируют с использованием стерильных фарфоровых ступок и пестиков, затем готовят 10% суспензию на стерильном физиологическом растворе. Суспензию переносят а пробирку объемом 1,5 мл и отстаивают в течение 5-7 минут. Аликвоту надосадочной жидкости используют для экстракции ДНК;
- для получения сыворотки пробирки с кровью отстаивают при комнатной температуре в течение 30 мин до полного образования сгустка. Затем центрифугируют при 800-1000 g в течение 10 минут при комнатной температуре. Сыворотку переносят одноразовыми наконечниками с фильтром в одноразовые пробирки объемом 1,5 мл.
После подготовки исследуемого материала приступают к проведению анализа, состоящего из 3 этапов:
- экстракция ДНК;
- проведение полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени;
- учет результатов анализа.
ПЦР с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени имеет ряд значительных преимуществ:
- объединение этапов амплификации и детекции результатов. Появляется возможность оценить кинетику процесса, которая зависит от начального количества исследуемого материала;
- существенное снижение риска контаминации и ошибок при анализе результатов;
- высокая специфичность реакции за счет использования высокоспецифичных флуоресцентных зондов;
- высокая производительность;
- упрощение требований к организации ПЦР-лаборатории;
- возможность количественной оценки исходной ДНК матрицы;
- регистрация и учет данных в электронном формате.
ПЦР в реальном времени характеризуется возможностью проведения качественного и количественного анализа. Регистрируемое в процессе амплификации нарастание сигнала от отделенного флуорофора прямо пропорционально увеличению концентрации синтезированных специфических продуктов и отражает концентрацию ДНК в исходной матрице.
Экстракция ДНК.
Перед выделением ДНК осуществляют подготовку исследуемых проб с помощью набора реагентов «ПЦР-ОСПА-ФАКТОР», состоящего из 2 комплектов (таблица 1 и 2).
В отдельной пробирке смешивают компоненты набора из расчета на каждую реакцию 10 мкл ПЦР СМЕСЬ РОХ, 5 мкл смеси ПЦР БУФЕР РОХ, 0,5 мкл TAQ POLYMERASE. Перемешивают смесь на вортексе и сбрасываю капли кратковременным центрифугированием. Затем отбирают необходимое количество пробирок для амплификации ДНК исследуемых и контрольных проб, вносят по 15 мкл приготовленной реакционной смеси. Используя наконечники с фильтром в подготовленные пробирки добавляют:
1) отрицательный контроль ПЦР (К-) - вносят в пробирку по 10 мкл ОКО;
2) по 10 мкл ДНК из исследуемых образцов в соответствующие пробирки;
3) положительный контроль ПЦР (К+) - вносят в пробирку 10 мкл ПКО.
При этом не наносят маркировку на крышку пробирок, т.к. это затрудняет процесс считывания амплификатором.
Проведение полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени.
Устанавливают пробирки в реакционный модуль прибора «Rotor-Gene 3000/6000» (Q), в котором осуществляют полимеразную цепную реакцию с флуоресцентным детектором в режиме реального времени. В соответствии с протоколом анализа прибор программируют, устанавливают параметры температурно-временного режима амплификации, детекцию флуоресцентного сигнала назначают после стации отжига праймеров, после чего начинают процесс амплификации с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. В его основе лежит принцип флуоресцентной детекции продуктов полимеразной цепной реакции непосредственно в ходе амплификации. Детекция продуктов амплификации проводится прямо в реакционной среде через стенки или крышку закрытой пробирки.
Учет результатов полимеразной цепной реакции проводят по наличию или отсутствию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией (см. чертеж). Образец считают положительным (вирус оспы овец и коз присутствует), если наблюдают рост специфического сигнала, при этом значения контрольных образцов находятся в пределах нормы (таблица 3). Образец считают отрицательным (вирус оспы овец и коз отсутствует), если не наблюдают рост специфического сигнала, при этом значения контрольных образцов находятся в пределах нормы.
Claims (1)
- Способ экспресс-диагностики вируса оспы коз и овец, включающий отбор проб патологического материала из очага инфекционного заболевания, экстракцию ДНК бактерий инфекционного заболевания из полученных проб, идентификацию видовой принадлежности возбудителя болезни методом полимеразной цепной реакции с флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени с применением термоциклера типа RotorGene на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией, отличающийся тем, что в качестве патологического материала используют пробы из очага инфекционного заболевания оспы, при этом отбор проб патологического материала осуществляют от всех животных, находящихся в очаге инфекционного заболевания, и проводят экспресс-диагностику полученного патологического материала в течение суток для выявления животных-носителей вируса оспы на начальной стадии инфицирования, при этом учет результатов полимеразной цепной реакции проводят по наличию или отсутствию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией, если наблюдают рост специфического сигнала, то образец считают положительным - вирус оспы овец и коз присутствует, при этом значения контрольных образцов находятся в пределах нормы, если не наблюдают рост специфического сигнала, то образец считают отрицательным - вирус оспы овец и коз отсутствует и значения контрольных образцов также находятся в пределах нормы.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016132747A RU2648845C2 (ru) | 2016-08-08 | 2016-08-08 | Способ экспресс-диагностики оспы овец и коз |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016132747A RU2648845C2 (ru) | 2016-08-08 | 2016-08-08 | Способ экспресс-диагностики оспы овец и коз |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2016132747A RU2016132747A (ru) | 2018-02-16 |
| RU2648845C2 true RU2648845C2 (ru) | 2018-03-28 |
Family
ID=61227542
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016132747A RU2648845C2 (ru) | 2016-08-08 | 2016-08-08 | Способ экспресс-диагностики оспы овец и коз |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2648845C2 (ru) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2238565C1 (ru) * | 2003-03-13 | 2004-10-20 | ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии | Способ диагностики оспы овец и оспы коз гистохимическим иммуноферментным анализом на основе моноклональных антител |
-
2016
- 2016-08-08 RU RU2016132747A patent/RU2648845C2/ru active IP Right Revival
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2238565C1 (ru) * | 2003-03-13 | 2004-10-20 | ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии | Способ диагностики оспы овец и оспы коз гистохимическим иммуноферментным анализом на основе моноклональных антител |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| GULBAHARA M.Y. et al. Immunohistochemical detection of antigen in lamb tissues naturally infected with sheep-pox virus // J. Vet. Med. B. 2000. V. 47. N3. P.173-181. * |
| ОРЛОВА Е. С. Совершенствование методов диагностики оспы овец и оспы коз. Автореф. дисс. к.б.н. Владимир, 2007. Application of fluorescent antibody test in the diagnosis of sheep pox, and study of sheep pox virus multiplication in cell-culture / P. Sarkar, S.P. Singh, A.K. Pandey et al. J // Indian J.Anim.Sci. 1980. V.50. * |
| ОРЛОВА Е. С. Совершенствование методов диагностики оспы овец и оспы коз. Автореф. дисс. к.б.н. Владимир, 2007. Application of fluorescent antibody test in the diagnosis of sheep pox, and study of sheep pox virus multiplication in cell-culture / P. Sarkar, S.P. Singh, A.K. Pandey et al. J // Indian J.Anim.Sci. 1980. V.50. GULBAHARA M.Y. et al. Immunohistochemical detection of antigen in lamb tissues naturally infected with sheep-pox virus // J. Vet. Med. B. 2000. V. 47. N3. P.173-181. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2016132747A (ru) | 2018-02-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sarasquete et al. | Minimal residual disease monitoring in multiple myeloma: a comparison between allelic-specific oligonucleotide real-time quantitative polymerase chain reaction and flow cytometry | |
| Thapa et al. | Direct detection of Mycobacterium tuberculosis in clinical samples by a dry methyl green loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method | |
| Çiftci et al. | Evaluation of PCR methods for detection of Brucella strains from culture and tissues | |
| Moeini-Zanjani et al. | Comparison of loop-mediated isothermal amplification and conventional PCR tests for diagnosis of common Brucella species | |
| CN110564880A (zh) | 检测布鲁氏菌减毒活疫苗株和野毒株的方法及应用 | |
| RU2648773C2 (ru) | Способ экспресс-диагностики нодулярного дерматита КРС | |
| Sabour et al. | Evaluating the efficiency of TaqMan real-time PCR and serological methods in the detection of Brucella spp. in clinical specimens collected from suspected patients in Ardabil, Iran | |
| RU2648845C2 (ru) | Способ экспресс-диагностики оспы овец и коз | |
| CN111647690B (zh) | 用于检测covid-19病毒的rt-raa引物对和诊断试剂盒 | |
| El Sanousi et al. | Comparison of real-time PCR versus ELISA in the diagnosis of cytomegalovirus infection in pregnant women | |
| RU2586527C1 (ru) | Олигонуклеотидные праймеры, флюоресцентный зонд и способ для выявления генома вируса эпизоотической диареи свиней методом обратной транскрипции - полимеразной цепной реакции | |
| Carmina et al. | Indirect Immunoperoxidase Test (IPT) for Detection of Antibodies Against African Swine Fever Virus (ASFV) on African Green Monkey Cell Lines (Vero, MS) | |
| CN113755614A (zh) | 布鲁氏菌病疫苗株与野毒株快速高灵敏鉴别诊断试剂盒及其使用方法 | |
| Patel et al. | Polymerase chain reaction in the diagnosis of spontaneous leptospirosis in bovines | |
| CN113624977A (zh) | SARS-CoV-2感染诊断方法 | |
| de Araújo Teixeira et al. | Risk factors and detection of brucella ovis in naturally infected rams and ewes | |
| Peeridogaheh et al. | Evaluation of three DNA extraction methods for detection of brucella DNA in human serum samples | |
| RU2728660C1 (ru) | Способ определения ДНК вируса нодулярного дерматита (LSDV) в биологическом материале животных методом ПЦР с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле | |
| RU2533238C1 (ru) | Способ выявления днк mycoplasma hominis из образцов крови | |
| RU2702011C1 (ru) | Способ диагностики инфекционных, аллергических, аутоиммунных и онкологических заболеваний | |
| RU2820832C1 (ru) | Способ выявления ДНК возбудителя пастереллеза (Pasteurella multocida) в биологическом материале животных и кормах с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени | |
| CN109406776B (zh) | 用于特异性检测结核分枝杆菌感染的蛋白Rv2818c | |
| Nematollahi et al. | Survey on ovine toxoplasmosis by IFAT and double-tube nested-PCR in Tabriz, Iran | |
| RU2372098C1 (ru) | Способ получения анаплазменного антигена для серологической диагностики у животных | |
| Romanova et al. | LABORATORY METHODS FOR DETERMINING NEW COVID-19 INFECTION |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180809 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20191108 |