RU2639557C1 - ШТАММ БАКТЕРИИ Xanthomonas campestris - ПРОДУЦЕНТ КСАНТАНА - Google Patents

ШТАММ БАКТЕРИИ Xanthomonas campestris - ПРОДУЦЕНТ КСАНТАНА Download PDF

Info

Publication number
RU2639557C1
RU2639557C1 RU2017133633A RU2017133633A RU2639557C1 RU 2639557 C1 RU2639557 C1 RU 2639557C1 RU 2017133633 A RU2017133633 A RU 2017133633A RU 2017133633 A RU2017133633 A RU 2017133633A RU 2639557 C1 RU2639557 C1 RU 2639557C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
xanthan
xanthomonas campestris
strain
medium
producer
Prior art date
Application number
RU2017133633A
Other languages
English (en)
Inventor
Анастасия Вячеславовна Шилова
Original Assignee
Общество С Ограниченной Ответственностью Научно-Технический Центр "Биотех"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество С Ограниченной Ответственностью Научно-Технический Центр "Биотех" filed Critical Общество С Ограниченной Ответственностью Научно-Технический Центр "Биотех"
Priority to RU2017133633A priority Critical patent/RU2639557C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2639557C1 publication Critical patent/RU2639557C1/ru

Links

Images

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
    • C12P19/06Xanthan, i.e. Xanthomonas-type heteropolysaccharides
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/64Xanthomonas

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Xanthomonas campestris 2017, обладающий способностью продуцировать ксантан, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ В-12968. Штамм может быть использован в медицине, пищевой, косметической и фармацевтической промышленности. Изобретение позволяет повысить выход ксантана. 1 ил., 6 пр.

Description

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в медицине, пищевой, косметической и фармацевтической промышленности.
Ксантан представляет собой экзополисахарид микробного происхождения, полученный при использовании встречающейся в природе бактерии Xanthomonas campestris. Это биополимер, широко используемый в пищевой и фармацевтической отраслях промышленности. Его также используют и во многих других сферах, таких как добыча нефти, чистка линий трубопроводов, добыча нефти вторичными способами, печатание на текстильных материалах и их окрашивание, работа с глазурями, суспензионными взрывчатыми веществами и сфера косметики. Его используют для целей загущения, суспендирования, стабилизации и гелеобразования (RU 2324711, МПК C08L 5/00, опубл. 20.05.2008).
Известен штамм Xanthomonas campestris NRRL В-1459 (ВКПМ В-6720), широко используемый в промышленности в качестве активного продуцента ксантана (RU 2252033, МПК A61K 47/36, C12P 19/06, опубл. 2004; RU 2323005, МПК A61K 47/00, C12P 19/06, опубл. 27.04.2008; RU 2559553, МПК C12N 1/20, C12P 19/06, C12R 1/64, опубл. 10.08.2015).
Известный штамм Xanthomonas campestris NRRL В 1459 (ВКПМ В-6720) согласно паспорту ВКПМ синтезирует ксантан в количестве 6,1 г/л. Недостатком известного штамма является низкая продуктивность.
Технический результат заключается в создании нового мутантного штамма бактерии Xanthomonas campestris, используемого для получения ксантана, обеспечивающего высокий выход полисахарида.
Для достижения указанного технического результата предложено использовать штамм бактерии Xanthomonas campestris 2017 (ВКПМ В-12968) - продуцент ксантана.
Заявляемый штамм получен на основе известного промышленного штамма бактерии Xanthomonas campestris NRRL В 1459 (ВКПМ В-6720) - продуцента ксантана путем многоступенчатой селекции с использованием эффективных методов мутагенеза.
Штамм бактерии Xanthomonas campestris 2017 продуцирует экзополисахарид - ксантан и депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером штамм Xanthomonas campestris 2017 ВКПМ В-12968.
Штамм бактерии Xanthomonas campestris 2017 идентифицирован по культурально-морфологическим и физиолого-биохимическим свойствам и генетическим характеристикам и имеет следующие признаки.
Культурально-морфологические свойства. Клетки одиночные грамотрицательные подвижные палочки с закругленными концами. Спор не образуют. На агаризованной среде следующего состава (г/л): сахароза - 20,0; дрожжевой экстракт - 10,0; пептон - 10,0; агар - 17,0; вода дистиллированная - 1,0 л, образуют круглые, с ровным краем, однородной маслянистой консистенции, блестящие колонии выпуклой формы желтого цвета.
Физиолого-биохимические свойства. Культура каталазоположительная и оксидазоотрицательная, разжижает желатин, пептонизирует молоко, не восстанавливает нитраты, гидролизует крахмал. Продуцирует кислоту из глюкозы, галактозы, мальтозы, сахарозы, раффинозы. Аэроб. Оптимальная температура роста 28°C. Оптимальное значение рН среды 6,0.
Генетические характеристики. Штамм идентифицирован до вида с помощью анализа 16S РНК. При секвенировании вариабельных участков генов, кодирующих 16S рРНК, получена собранная нуклеотидная последовательность для штамма. Последовательности были выровнены с соответствующими последовательностями ближайших видов бактерий, доступными из базы данных GenBank. По данным анализа генов, кодирующих 16S рРНК, построено филогенетическое дерево Xanthomonas campestris 2017 с гомологичными штаммами, представленное на фигуре. По результатам проведенного анализа секвенсов вариабельных участков генов, кодирующих 16S рРНК, штамм наиболее близок к виду Xanthomonas campestris.
Штамм бактерии Xanthomonas campestris 2017 предназначен для получения ксантана путем глубинного культивирования на ферментационных средах.
При глубинном культивировании штамма бактерии Xanthomonas campestris 2017 в динамических условиях на качалке при 200 об/мин и температуре 28°C на среде следующего состава (г/л): сахароза - 20,0, дрожжевой экстракт - 3,0, K2HPO4 - 2,0, KH2PO4 - 2,0, MgSO4×7H2O - 0,1, количество ксантана, образующегося на третьи сутки, составляет 9,5 г/л. На среде с мелассой образуется 12,2 г/л ксантана. На среде с кукурузным крахмалом - 13,2 г/л ксантана.
При глубинном культивировании штамма бактерии Xanthomonas campestris 2017 в динамических условиях на качалке при 200 об/мин и температуре 28°C на среде следующего состава (г/л): сахароза - 20, MgSO4×7H2O - 0,2, (NH4)2SO4 - 3,0, Н3ВО3 - 0,006, FeCl3 - 0,0024, KH2PO4 - 2,0, CaCO3 - 0,002, ZnO - 0,006, лимонная кислота - 2,0, количество ксантана, образующегося на третьи сутки, составляет 3,6 г/л. На среде с мелассой образуется 9,5 г/л ксантана. На среде с кукурузным крахмалом - 15,6 г/л ксантана.
Изобретение характеризуется следующими примерами.
Пример 1. Штамм бактерии Xanthomonas campestris 2017 культивируют в течение 72 часов в динамических условиях на шейкере-инкубаторе при 200 об/мин и температуре 28°C в колбах на 250 мл, содержащих 50 мл среды следующего состава (г/л): сахароза - 20,0, дрожжевой экстракт - 3,0, K2HPO4 - 2,0, KH2PO4 - 2,0, MgSO4×7H2O - 0,1, рН среды 6,0. Режим стерилизации 121°C в течение 20 минут. Ферментационную питательную среду засевают посевным материалом культуры в количестве 5%, выращенным при 28°C в течение 48 часов. Полученную культуральную жидкость центрифугируют в течение 30 минут при 8000 об/мин 4°C. Для осаждения ксантана в супернатант добавляют этиловый спирт в соотношении 1:2, затем смесь выдерживают в холодильнике при 4°C в течение 24 часов. Далее осажденный ксантан высушивают при 80°C до постоянной массы. Количество ксантана определяют весовым методом. Выход сухого ксантана составляет 9,5 г/л.
Пример 2. Штамм бактерии Xanthomonas campestris 2017 культивируют в течение 72 часов в динамических условиях на шейкере-инкубаторе при 200 об/мин и температуре 28°C в колбах на 250 мл, содержащих 50 мл среды следующего состава (г/л): меласса - 45,0, дрожжевой экстракт - 3,0, K2HPO4 - 2,0, KH2PO4 - 2,0, MgSO4×7H2O - 0,1, рН среды 6,0. Режим стерилизации 121°C в течение 20 минут. Ферментационную питательную среду засевают посевным материалом культуры в количестве 5%, выращенным при 28°C в течение 48 часов. Полученную культуральную жидкость центрифугируют в течение 30 минут при 8000 об/мин 4°C. Для осаждения ксантана в супернатант добавляют этиловый спирт в соотношении 1:2, затем смесь выдерживают в холодильнике при 4°C в течение 24 часов. Далее осажденный ксантан высушивают при 80°C до постоянной массы. Количество ксантана определяют весовым методом. Выход сухого ксантана составляет 12,2 г/л.
Пример 3. Штамм бактерии Xanthomonas campestris 2017 культивируют в течение 72 часов в динамических условиях на шейкере-инкубаторе при 200 об/мин и температуре 28°C в колбах на 250 мл, содержащих 50 мл среды следующего состава (г/л): кукурузный крахмал - 20,0, дрожжевой экстракт - 3,0, K2HPO4 - 2,0, KH2PO4 - 2,0, MgSO4×7H2O - 0,1, рН среды 6,0. Режим стерилизации 121°C в течение 20 минут. Ферментационную питательную среду засевают посевным материалом культуры в количестве 5%, выращенным при 28°C в течение 48 часов. Полученную культуральную жидкость центрифугируют в течение 30 минут при 8000 об/мин 4°C. Для осаждения ксантана в супернатант добавляют этиловый (или изопропиловый) спирт в соотношении 1:2, затем смесь выдерживают в холодильнике при 4°C в течение 24 часов. Далее осажденный ксантан высушивают при 80°C до постоянной массы. Количество ксантана определяют весовым методом. Выход сухого ксантана составил 13,2 г/л.
Пример 4. Штамм бактерии Xanthomonas campestris 2017 культивируют в течение 72 часов в динамических условиях на шейкере-инкубаторе при 200 об/мин и температуре 28°C в колбах на 250 мл, содержащих 50 мл среды следующего состава (г/л): сахароза - 20, MgSO4×7H2O - 0,2, (NH4)2SO4 - 3,0, Н3ВО3 - 0,006, FeCl3 - 0,0024, KH2PO4 - 2,0, CaCO3 - 0,002, ZnO - 0,006, лимонная кислота - 2,0, рН среды 6,0. Режим стерилизации 121°C в течение 20 минут. Ферментационную питательную среду засевают посевным материалом культуры в количестве 5%, выращенным при 28°C в течение 48 часов. Полученную культуральную жидкость центрифугируют в течение 30 минут при 8000 об/мин 4°C. Для осаждения ксантана в супернатант добавляют этиловый спирт в соотношении 1:2, затем смесь выдерживают в холодильнике при 4°C в течение 24 часов. Далее осажденный ксантан высушивают при 80°C до постоянной массы. Количество ксантана определяют весовым методом. Выход сухого ксантана составляет 3,6 г/л.
Пример 5. Штамм бактерии Xanthomonas campestris 2017 культивируют в течение 72 часов в динамических условиях на шейкере-инкубаторе при 200 об/мин и температуре 28°C в колбах на 250 мл, содержащих 50 мл среды следующего состава (г/л): меласса - 45,0, MgSO4×7H2O - 0,2, (NH4)2SO4 - 3,0, Н3ВО3 - 0,006, FeCl3 - 0,0024, KH2PO4 - 2,0, CaCO3 - 0,002, ZnO - 0,006, лимонная кислота - 2,0, рН среды 6,0. Режим стерилизации 121°C в течение 20 минут. Ферментационную питательную среду засевают посевным материалом культуры в количестве 5%, выращенным при 28°C в течение 48 часов. Полученную культуральную жидкость центрифугируют в течение 30 минут при 8000 об/мин 4°C. Для осаждения ксантана в супернатант добавляют этиловый спирт в соотношении 1:2, затем смесь выдерживают в холодильнике при 4°C в течение 24 часов. Далее осажденный ксантан высушивают при 80°C до постоянной массы. Количество ксантана определяют весовым методом. Выход сухого ксантана составляет 9,5 г/л.
Пример 6. Штамм бактерии Xanthomonas campestris 2017 культивируют в течение 72 часов в динамических условиях на шейкере-инкубаторе при 200 об/мин и температуре 28°C в колбах на 250 мл, содержащих 50 мл среды следующего состава (г/л): кукурузный крахмал - 20, MgSO4×7H2O - 0,2, (NH4)2SO4 - 3,0, Н3ВО3 - 0,006, FeCl3 - 0,0024, KH2PO4 - 2,0, CaCO3 - 0,002, ZnO - 0,006, лимонная кислота - 2,0, рН среды 6,0. Режим стерилизации 121°C в течение 20 минут. Ферментационную питательную среду засевают посевным материалом культуры в количестве 5%, выращенным при 28°C в течение 48 часов. Полученную культуральную жидкость центрифугируют в течение 30 минут при 8000 об/мин 4°C. Для осаждения ксантана в супернатант добавляют этиловый спирт в соотношении 1:2, затем смесь выдерживают в холодильнике при 4°C в течение 24 часов. Далее осажденный ксантан высушивают при 80°C до постоянной массы. Количество ксантана определяют весовым методом. Выход сухого ксантана составляет 15,6 г/л.
По сравнению с известным решением предлагаемое обеспечивает высокий выход полисахарида (на среде с мелассой образуется 9,5 г/л ксантана, на среде с кукурузным крахмалом - 15,6 г/л) за счет использования штамма бактерии Xanthomonas campestris 2017 (ВКПМ В-12968)

Claims (1)

  1. Штамм бактерии Xanthomonas campestris ВКПМ В-12968 - продуцент ксантана.
RU2017133633A 2017-09-27 2017-09-27 ШТАММ БАКТЕРИИ Xanthomonas campestris - ПРОДУЦЕНТ КСАНТАНА RU2639557C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017133633A RU2639557C1 (ru) 2017-09-27 2017-09-27 ШТАММ БАКТЕРИИ Xanthomonas campestris - ПРОДУЦЕНТ КСАНТАНА

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017133633A RU2639557C1 (ru) 2017-09-27 2017-09-27 ШТАММ БАКТЕРИИ Xanthomonas campestris - ПРОДУЦЕНТ КСАНТАНА

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2639557C1 true RU2639557C1 (ru) 2017-12-21

Family

ID=63857500

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017133633A RU2639557C1 (ru) 2017-09-27 2017-09-27 ШТАММ БАКТЕРИИ Xanthomonas campestris - ПРОДУЦЕНТ КСАНТАНА

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2639557C1 (ru)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2714638C1 (ru) * 2019-10-09 2020-02-18 Виктор Васильевич Ревин Штамм бактерии Xanthomonas theicola - продуцент ксантана
RU2746229C1 (ru) * 2020-07-24 2021-04-09 Общество с ограниченной ответственностью «Газпромнефть Научно-Технический Центр» (ООО «Газпромнефть НТЦ») Способ получения ксантановой камеди
RU2748947C1 (ru) * 2020-09-15 2021-06-02 Общество С Ограниченной Ответственностью Научно-Технический Центр "Биотех" Способ получения полисахаридной добавки на основе пищевой ксантановой камеди

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2252033C1 (ru) * 2004-04-19 2005-05-20 Научно-производственный реабилитационный центр "Ресхил" Способ получения ксантанового загустителя "сараксан" или "сараксан-т"
RU2323005C1 (ru) * 2006-12-12 2008-04-27 ООО "РесурсМетод" Способ получения ксантанового загустителя "сараксан" или "сараксан-т"
RU2559553C1 (ru) * 2014-07-22 2015-08-10 Маргарита Анатольевна Иванова Способ получения ксантана

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2252033C1 (ru) * 2004-04-19 2005-05-20 Научно-производственный реабилитационный центр "Ресхил" Способ получения ксантанового загустителя "сараксан" или "сараксан-т"
RU2323005C1 (ru) * 2006-12-12 2008-04-27 ООО "РесурсМетод" Способ получения ксантанового загустителя "сараксан" или "сараксан-т"
RU2559553C1 (ru) * 2014-07-22 2015-08-10 Маргарита Анатольевна Иванова Способ получения ксантана

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2714638C1 (ru) * 2019-10-09 2020-02-18 Виктор Васильевич Ревин Штамм бактерии Xanthomonas theicola - продуцент ксантана
RU2746229C1 (ru) * 2020-07-24 2021-04-09 Общество с ограниченной ответственностью «Газпромнефть Научно-Технический Центр» (ООО «Газпромнефть НТЦ») Способ получения ксантановой камеди
WO2022019807A1 (ru) * 2020-07-24 2022-01-27 Общество с ограниченной ответственностью "Газпромнефть Научно-Технический Центр" (ООО "Газпромнефть НТЦ") Способ получения ксантановой камеди
RU2748947C1 (ru) * 2020-09-15 2021-06-02 Общество С Ограниченной Ответственностью Научно-Технический Центр "Биотех" Способ получения полисахаридной добавки на основе пищевой ксантановой камеди

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2639557C1 (ru) ШТАММ БАКТЕРИИ Xanthomonas campestris - ПРОДУЦЕНТ КСАНТАНА
CN106399199B (zh) 一种土壤类芽孢杆菌及其应用
RU2464307C1 (ru) Штамм бактерии cluconacetobacter hansenii gh-1/2008 - продуцент бактериальной целлюлозы
CN108048373B (zh) 一株枯草芽孢杆菌ah1005及其应用
KR101778436B1 (ko) 우수한 초산 생성능을 가지는 신규한 아세토박터속 slv-7 균주 및 이의 용도
CN1932007A (zh) γ-聚谷氨酸产生菌及利用该菌株制备γ-聚谷氨酸的方法
CN105670964B (zh) 萎缩芽孢杆菌BsR05菌株及其应用
WO2021012959A1 (zh) 一种褐藻胶裂解酶及其应用
RU2714638C1 (ru) Штамм бактерии Xanthomonas theicola - продуцент ксантана
Gomashe et al. Optimization and production of xanthan gum by Xanthomonas campestris NRRL-B-1449 from sugar beet molasses
CN112410261B (zh) 一株暹罗芽孢杆菌mc2-1及其应用
CN103911315A (zh) 一株产褐藻胶裂解酶的菌株及其应用
CN111621435B (zh) 一株粘细菌及其应用
RU2523606C1 (ru) ШТАММ Gluconacetobacter sucrofermentans -ПРОДУЦЕНТ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ЦЕЛЛЮЛОЗЫ
CN110964676A (zh) 一种侧孢短芽孢杆菌的高菌量发酵液的培养方法
Song et al. Optimal production of exopolysaccharide by Bacillus licheniformis KS-17 isolated from kimchi
RU2744107C1 (ru) Штамм бактерий Xanthomonas fuscans - продуцент ксантановой камеди
CN112195137B (zh) 拮抗稻瘟病菌和产γ-聚谷氨酸的贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN111534471B (zh) 一种粘细菌培养基及培养方法
JP6611715B2 (ja) オーランチオキトリウム(Aurantiochytrium)属藻類の低塩分濃度条件順化方法
CN114015612A (zh) 一株无色素黄单胞菌及其在发酵生产无色素黄原胶中的应用
CN113337403A (zh) 一种球毛壳菌hjf 13菌株及其应用
RU2748947C1 (ru) Способ получения полисахаридной добавки на основе пищевой ксантановой камеди
RU2675503C1 (ru) Способ получения биологического препарата для стимуляции роста и защиты растений от заболеваний
KR20110107076A (ko) 엔테로박터 속 sd 255 균주 및 이로부터 세포외다당류를 생산하는 방법

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20190928