RU2616246C1 - Method of predicting risk of development of myomatous nodes of large sizes in patients with myoma - Google Patents

Method of predicting risk of development of myomatous nodes of large sizes in patients with myoma Download PDF

Info

Publication number
RU2616246C1
RU2616246C1 RU2016103160A RU2016103160A RU2616246C1 RU 2616246 C1 RU2616246 C1 RU 2616246C1 RU 2016103160 A RU2016103160 A RU 2016103160A RU 2016103160 A RU2016103160 A RU 2016103160A RU 2616246 C1 RU2616246 C1 RU 2616246C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
myomatous nodes
rantes
patients
development
risk
Prior art date
Application number
RU2016103160A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Михаил Иванович Чурносов
Оксана Борисовна Алтухова
Светлана Сергеевна Сиротина
Вероника Сергеевна Овчарова
Original Assignee
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ")
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") filed Critical Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ")
Priority to RU2016103160A priority Critical patent/RU2616246C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2616246C1 publication Critical patent/RU2616246C1/en

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6804—Nucleic acid analysis using immunogens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
    • C12Q1/683—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism involving restriction enzymes, e.g. restriction fragment length polymorphism [RFLP]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6858—Allele-specific amplification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2531/00—Reactions of nucleic acids characterised by
    • C12Q2531/10—Reactions of nucleic acids characterised by the purpose being amplify/increase the copy number of target nucleic acid
    • C12Q2531/113—PCR
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2561/00—Nucleic acid detection characterised by assay method
    • C12Q2561/101—Taqman
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2561/00—Nucleic acid detection characterised by assay method
    • C12Q2561/113—Real time assay
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2565/00—Nucleic acid analysis characterised by mode or means of detection
    • C12Q2565/10—Detection mode being characterised by the assay principle
    • C12Q2565/125—Electrophoretic separation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/118—Prognosis of disease development
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: invention relates to field of medical diagnostics and is intended for prediction of risk of development of myomatous nodes of large sizes in patients with myoma. Separation of DNA from peripheral venous blood and analysis of polymorphous versions of genes rs2107538 RANTES, rs1801157 SDF1 and rs16944 IL-1β is performed from women born in Central Chernozem region of Russia of Russian nationality by method of polymerase chain reaction. In case of determination of combination of genotypes GG SDF1, CC IL-1β and AA RANTES increased risk of development of myomatous nodes of large sizes is predicted.
EFFECT: invention ensures obtaining novel criteria of evaluating risk of development of myomatous nodes of large sizes over 4 cm on the base of data about genotypes.
4 dwg, 2 ex

Description

Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для прогнозирования риска развития миоматозных узлов больших размеров у пациенток с миомой матки, уроженок Центрального Черноземья России русской национальности.The invention relates to the field of medical diagnostics, can be used to predict the risk of developing large myomatous nodes in patients with uterine myoma, a native of the Central Black Earth Region of Russia of Russian nationality.

Миома матки представляет собой доброкачественную и, как правило, множественную опухоль, растущую из незрелых миоцитов сосудистой стенки матки [Киселев В.И., Сидорова И.С., Унанян А.Л. и др. Гиперпластические процессы органов женской репродуктивной системы: теория и практика. Москва: Медпрактика-М, 2011, 467 с.]. К факторам, которые способствуют возникновению заболевания, относятся: позднее менархе, обильные менструации, высокая частота медицинских абортов, наличие экстрагенитальной патологии (особенно сердечно-сосудистой) и гинекологических заболеваний, длительная антибиотикотерапия, использование различных гормональных препаратов, изменение иммунитета, наличие инфекций, передаваемых половым путем [Вихляева Е.М. Постменопаузальная терапия: влияние на связанные с менопаузой симптомы, течение хронических заболеваний и качество жизни. Москва: МЕДпресс-информ, 2008, 448 с.].Uterine fibroids is a benign and, as a rule, multiple tumor growing from immature myocytes of the uterine vascular wall [Kiselev V.I., Sidorova I.S., Unanyan A.L. et al. Hyperplastic processes of the organs of the female reproductive system: theory and practice. Moscow: Medpraktika-M, 2011, 467 pp.]. Factors that contribute to the onset of the disease include: later menarche, heavy menstruation, a high frequency of medical abortions, the presence of extragenital pathology (especially cardiovascular) and gynecological diseases, prolonged antibiotic therapy, the use of various hormonal drugs, a change in immunity, the presence of sexually transmitted infections by [Vikhlyaeva EM Postmenopausal therapy: effects on menopausal symptoms, the course of chronic diseases, and quality of life. Moscow: MEDpress-inform, 2008, 448 p.].

Одной из характеристик миоматозного узла, определяющей тактику лечения, является его размер. Миома матки больших размеров сопровождается такими клиническими признаками, как болевой синдром, обильные и длительные маточные кровотечения, сдавление смежных органов, бесплодие, снижая качество жизни женщины. Наиболее рациональным методом лечения миомы матки больших размеров (размер доминантного узла более 4 см), как правило, является метод консервативной миоэктомии [Тихомиров А.Л. Миома матки. М.: МИА, 2006, 174 c.]. Таким образом, разработка способа прогнозирования риска развития миоматозных узлов больших размеров у пациенток с миомой матки является актуальной для гинекологии.One of the characteristics of the myomatous node, which determines the tactics of treatment, is its size. Large uterine fibroids are accompanied by such clinical signs as pain, heavy and prolonged uterine bleeding, compression of adjacent organs, infertility, reducing the quality of life of a woman. The most rational method of treating uterine fibroids of large sizes (the size of the dominant node is more than 4 cm), as a rule, is the method of conservative myoectomy [Tikhomirov A.L. Uterine fibroids. M .: MIA, 2006, 174 p.]. Thus, the development of a method for predicting the risk of developing large myomatous nodes in patients with uterine myoma is relevant for gynecology.

Анализ литературных данных по патогенезу миомы матки позволяет заключить, что до настоящего времени имеются разные взгляды на природу этого заболевания и в основе развития миомы матки лежат сложные многоэтапные иммунопатологические механизмы. Одним из ключевых звеньев в реализации каскада этих механизмов являются процессы взаимодействия цитокинов [Кадагидзе З.Г. Цитокины //Практическая онкология. – 2003. Т. 4, №3. С. 131-139]. При этом центральное место в данных взаимодействиях занимает фактор стромальных клеток (rs1801157) (далее SDF), регулятор активности нормальной экспрессии и секреции Т-клеток (rs2107538) (далее RANTES) и интерлейкин 1β (rs16944) (далее IL-1β).An analysis of the literature on the pathogenesis of uterine fibroids allows us to conclude that so far there are different views on the nature of this disease and the development of uterine fibroids is based on complex multi-stage immunopathological mechanisms. One of the key links in the implementation of the cascade of these mechanisms is the interaction of cytokines [Kadagidze Z. G. Cytokines // Practical Oncology. - 2003.Vol. 4, No. 3. S. 131-139]. The central place in these interactions is occupied by the stromal cell factor (rs1801157) (hereinafter SDF), the regulator of the activity of normal expression and secretion of T cells (rs2107538) (hereinafter RANTES) and interleukin 1β (rs16944) (hereinafter IL-1β).

Согласно данным литературы, в группе цитокинов, относящихся к семейству α-хемокинов, ключевую роль в обеспечении иммунного ответа играет фактор стимулятора роста предшественников β–клеток (фактор стромальных клеток - SDF-1). Фактор стромальных клеток является хемоаттрактантом для лейкоцитов, под его влиянием происходит перестройка их цитоскелета. Ген SDF-1 находится на 10 хромосоме. [Structure and chromosomal localization of the human stromal cell-derived factor 1 (SDF1) gene [Text] /M. Shirozu, T. Nakano, J. Inazawa [et al.] //Genomics. – 1995. – Vol.28, №3. – P. 495-500]. Данный хемокин обеспечивает стимуляцию хоумина CXCR4+стволовых клеток в поврежденные органы, ингибирует апоптоз, стимулирует пролиферацию, усиливает адгезию и подвижность клеток. Так, в исследованиях Li X.P. и др. [The correlation between monocyte chemoattractant protein-1 and the arthritis of systemic lupus erythematosus among Chinese [Text] /D. Q. Ye, Y. S. Hu, X. P. Li [et al.] //Arch. Dermatol. Res. – 2005. – Vol.296, №8. – P. 366-371] при иммуногистохимическом исследовании выявлено статистически значимое различие в экспрессии SDF-1 в ткани нормального эндометрия и миометрия и при карциноме эндометрия. Установлено, что содержание SDF-1 в ткани нормального эндометрия было достоверно ниже аналогичного показателя при карциноме.According to the literature, in the group of cytokines belonging to the family of α-chemokines, a key role in providing the immune response is played by the factor of growth stimulator of β-cell precursors (stromal cell factor - SDF-1). The stromal cell factor is a chemoattractant for leukocytes; under its influence, their cytoskeleton is rearranged. The SDF-1 gene is located on chromosome 10. [Structure and chromosomal localization of the human stromal cell-derived factor 1 (SDF1) gene [Text] / M. Shirozu, T. Nakano, J. Inazawa [et al.] // Genomics. - 1995. - Vol. 28, No. 3. - P. 495-500]. This chemokine stimulates the hoxmin CXCR4 + stem cells into damaged organs, inhibits apoptosis, stimulates proliferation, and enhances cell adhesion and motility. So, in Li XP research. et al. [The correlation between monocyte chemoattractant protein-1 and the arthritis of systemic lupus erythematosus among Chinese [Text] / DQ Ye, YS Hu, XP Li [et al.] // Arch. Dermatol. Res. - 2005. - Vol.296, No. 8. - P. 366-371] during immunohistochemical studies revealed a statistically significant difference in the expression of SDF-1 in normal tissue of the endometrium and myometrium and endometrial carcinoma. It was found that the content of SDF-1 in normal endometrial tissue was significantly lower than that in carcinoma.

Наряду с SDF-1 важное значение в прогрессировании патологий женской репродуктивной системы играет хемокин - RANTES. Он является низкомолекулярным протеином с молекулярным весом около 10 kDa, ген RANTES у человека расположен на 17 хромосоме. RANTES играет важную роль в регуляции движения лимфоцитов, в частности миграции различных популяций лейкоцитов в место повреждения или внедрения инфекционного агента. Синтез RANTES осуществляется, главным образом, циркулирующими Т-клетками, активированными IL-1 и TNFα [Mehrad, B. Chemokines as mediators of angiogenesis [Text] /B. Mehrad, M. P. Keane, R. M. Strieter //Thromb. Haemost. – 2007. – Vol.97, №5. – P. 755-762]. В исследованиях in vivo и in vitro показано, что RANTES синтезируется непосредственно в стромальном компоненте нормального миометрия, при этом интерлейкин-1β (IL-1β) индуцирует экспрессию этих молекул через активацию транскрипционного ядерного фактора каппа-В (NF-κB). Также существуют данные, что рассматриваемый хемокин может регулировать снижение антипролиферативного потенциала в эндометриоидных имплантах, что обеспечивает их жизнеспособность и распространение патологического процесса [Содержание хемокинов и провоспалительных цитокинов в перитонеальной жидкости больных наружным генитальным эндометриозом [Текст] /П. Г. Кондратьева, Д. И. Соколов, А. В. Селютин [и др.] //Медицинская иммунология. – 2006. – Т. 8, №2-3. – С. 311].Along with SDF-1, chemokine - RANTES - plays an important role in the progression of pathologies of the female reproductive system. It is a low molecular weight protein with a molecular weight of about 10 kDa; the human RANTES gene is located on chromosome 17. RANTES plays an important role in regulating the movement of lymphocytes, in particular the migration of various leukocyte populations to the site of damage or the introduction of an infectious agent. RANTES synthesis is mainly carried out by circulating T cells activated by IL-1 and TNFα [Mehrad, B. Chemokines as mediators of angiogenesis [Text] / B. Mehrad, M. P. Keane, R. M. Strieter // Thromb. Haemost. - 2007. - Vol. 97, No. 5. - P. 755-762]. In vivo and in vitro studies have shown that RANTES is synthesized directly in the stromal component of normal myometrium, while interleukin-1β (IL-1β) induces the expression of these molecules through the activation of transcription nuclear factor Kappa-B (NF-κB). There is also evidence that the chemokine in question can regulate the decrease in antiproliferative potential in endometrioid implants, which ensures their viability and the spread of the pathological process [The content of chemokines and pro-inflammatory cytokines in the peritoneal fluid of patients with external genital endometriosis [Text] / P. G. Kondratiev, D. I. Sokolov, A. V. Selyutin [et al.] // Medical Immunology. - 2006. - T. 8, No. 2-3. - S. 311].

Интерлейкин 1β - цитокин с широким диапазоном биологических и физиологических эффектов. Этот цитокин полифункционален и выполняет не менее 50 различных функций, мишенями которых служат клетки практически всех органов и тканей [Интерлейкин 1β-зависимый механизм развития неспецифического реактивного гепатита при стрессе /О.Б. Цейликман, В.Э. Цейликман, А.И. Синицкий [и др.] //Цитокины и воспаление. – 2011. – Т. 10, №1. – С. 24-26]. Ген, кодирующий L-1β, картирован на длинном плече хромосомы 2 в области q14. Интерлейкин 1β участвует в формировании местной воспалительной реакции, острофазного ответа при инфекционном поражении. Индуцирует синтез IL-2, IL-4, осуществляет стимуляцию продукции ИЛ-6, фактора некроза опухоли. Установлена ассоциация носительства отдельных аллелей генов семейства IL-1 с рядом опухолевых, аутоиммунных, инфекционных и воспалительных заболеваний [IL-1B gene promoter haplotype pairs predict clinical levels of interleukin-1beta and C-reactive protein /J. Rogus, J. D. Beck, S. Offenbacher [et al.] //Hum. Genet. – 2008. – Vol.123, №4. – Р. 387-398].Interleukin 1β is a cytokine with a wide range of biological and physiological effects. This cytokine is multifunctional and performs at least 50 different functions, the targets of which are cells of almost all organs and tissues [Interleukin 1β-dependent mechanism for the development of non-specific reactive hepatitis under stress / O.B. Zeilikman, V.E. Zeylikman, A.I. Sinitsky [et al.] // Cytokines and inflammation. - 2011. - T. 10, No. 1. - S. 24-26]. The gene encoding L-1β is mapped on the long arm of chromosome 2 in the q14 region. Interleukin 1β is involved in the formation of a local inflammatory reaction, an acute phase response in infectious lesions. It induces the synthesis of IL-2, IL-4, stimulates the production of IL-6, tumor necrosis factor. The association of carriage of individual alleles of genes of the IL-1 family with a number of tumor, autoimmune, infectious and inflammatory diseases has been established [IL-1B gene promoter haplotype pairs predict clinical levels of interleukin-1beta and C-reactive protein / J. Rogus, J. D. Beck, S. Offenbacher [et al.] // Hum. Genet. - 2008. - Vol. 123, No. 4. - R. 387-398].

Для оценки сложившейся патентной ситуации был выполнен поиск по базе данных рефератов Российских патентных документов (RUPATABRU) на сайте Федерального института промышленной собственности за период с 1994 по 2014 гг. Анализ документов производился по направлению: способ прогнозирования риска развития миоматозных узлов больших размеров у пациенток с миомой матки на основе молекулярно-генетических данных в зависимости от полиморфных маркеров генов цитокинов.To assess the current patent situation, a search was performed on the database of abstracts of Russian patent documents (RUPATABRU) on the website of the Federal Institute of Industrial Property for the period from 1994 to 2014. The analysis of documents was carried out in the direction: a method for predicting the risk of developing large myomatous nodes in patients with uterine myoma based on molecular genetic data depending on polymorphic markers of cytokine genes.

В патенте РФ №1236684 (дата публикации 20.09.2004) предложен «Способ прогнозирования роста лейомиомы матки», заключающийся в исследовании периферической крови, отличающийся тем, что определяют относительное содержание CD38+лимфоцитов и при их значениях, равных или больших 23%, прогнозируют быстрый рост миомы матки в течение года.In the patent of the Russian Federation No. 1236684 (publication date September 20, 2004), a “Method for predicting the growth of uterine leiomyoma” is proposed, consisting in the study of peripheral blood, characterized in that the relative content of CD38 + lymphocytes is determined and, when their values are equal to or greater than 23%, they predict a fast growth of uterine fibroids throughout the year.

В патенте РФ №2332167 (дата публикации заявки 27.08.2008) предложен «Способ диагностики быстрорастущей миомы матки», который основан на определении объема матки, рассчитанный по формуле V=V0+Vi. При этом V0 - объема матки, определяемый по формуле вытянутого эллипсоида, Vi=0,5236 (Di) 3 - объем конкретных исследуемых миоматозных узлов различной локализации, Di - их диаметр и значение малонового диальдегида в супернатанте смыва из полости матки или менструальной крови. При нарастании объема матки более 465 см3 и значения малонового диальдегида более 1,21 нмоль судят о быстром росте миомы матки.In the patent of the Russian Federation No. 2332167 (the date of publication of the application August 27, 2008), a "Method for the diagnosis of rapidly growing uterine fibroids" is proposed, which is based on determining the volume of the uterus, calculated by the formula V = V0 + Vi. Moreover, V0 is the volume of the uterus, determined by the formula of an elongated ellipsoid, Vi = 0.5236 (Di) 3 is the volume of the specific myomatous nodes under study of different localization, Di is their diameter and the value of malondialdehyde in the supernatant of the uterus or menstrual blood. With an increase in uterine volume of more than 465 cm 3 and malondialdehyde values of more than 1.21 nmol, rapid growth of uterine fibroids is judged.

Общий недостаток указанных способов заключается в том, что не рассматриваются генетические полиморфизмы и их сочетания с риском развития миоматозных узлов больших размеров у пациенток с миомой матки. A common drawback of these methods is that they do not consider genetic polymorphisms and their combinations with the risk of developing large myomatous nodes in patients with uterine myoma.

В патенте РФ №2453850 (дата публикации заявки 20.06.2012) предложен «Способ прогнозирования характера поражения матки миоматозными узлами», согласно которому прогнозируют характер поражения матки миоматозными узлами у больной миомой матки, включающий выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ генотипов локуса+36 A/G рецептора фактора некроза опухоли 1 типа TNFR1 и анализ миоматозных узлов, а также размер матки. При выявлении генотипов+36 GG и+36 AG TNFR1 прогнозируют наименьшую степень поражения матки. При выявлении генотипа+36 АА TNFR1 прогнозируют наибольшую степень поражения матки.In RF patent No. 2453850 (application publication date 06/20/2012 ) a “Method for predicting the nature of uterine lesions by myomatous nodes” is proposed, according to which the nature of uterine lesions by myomatous nodes in a patient with uterine myoma is predicted, including DNA extraction from peripheral venous blood, analysis of locus genotypes + 36 A / G receptor for tumor necrosis factor 1 type TNFR1 and analysis of myomatous nodes, as well as uterine size. When genotypes + 36 GG and + 36 AG TNFR1 are detected, the smallest degree of uterine damage is predicted. If genotype + 36 AA is detected, TNFR1 predicts the highest degree of uterine damage.

Недостаток метода заключается в том, что он позволяет прогнозировать характер поражения матки миоматозными узлами на ранних стадиях развития, но не дает возможности прогноза развития миоматозных узлов больших размеров.The disadvantage of this method is that it allows us to predict the nature of uterine lesions by myomatous nodes in the early stages of development, but it does not make it possible to predict the development of large myomatous nodes.

За прототип выбран патент РФ №2475740 по заявке РФ №2011139007/15, 26.09.2011 «Способ выявления наследственной предрасположенности к быстрому росту миомы матки», сущность которого заключается в выделении из лимфоцитов ДНК, из которой амплифицируют фрагменты генов глутатион-S-трансферазы GSTM1 и метионин-синтазы-редуктазы MTRR, и при выявлении генотипа GSTM1 del/del в сочетании с генотипом MTRR 66G/G или MTRR 66A/G делают вывод о наличии у женщины генетической предрасположенности к быстрому росту миоматозных узлов в течение 5 лет с момента их появления.For the prototype, RF patent No. 2475740 was selected according to RF application No. 20111139007/15, September 26, 2011 “A method for identifying a hereditary predisposition to the rapid growth of uterine fibroids”, the essence of which is to isolate DNA from lymphocytes from which the glutathione S-transferase GSTM1 gene fragments are amplified and methionine synthase reductase MTRR, and when the GSTM1 del / del genotype is detected in combination with the MTRR 66G / G or MTRR 66A / G genotype, a conclusion is made that a woman has a genetic predisposition to rapid growth of myomatous nodes within 5 years from the moment of their appearance .

Недостаток метода заключается в том, что способ расширяет арсенал прогностических средств выявления быстрого роста миоматозных узлов в течение 5 лет с момента их появления, но не дает прогноза риска развития миоматозных узлов больших размеров более 4 см, которые требуют оперативного вмешательства.The disadvantage of this method is that the method expands the arsenal of prognostic tools for detecting rapid growth of myomatous nodes within 5 years from the moment of their appearance, but does not predict the risk of developing large myomatous nodes larger than 4 cm, which require surgical intervention.

В изученной научно-медицинской и доступной патентной литературе авторами не было обнаружено способа прогнозирования риска развития миоматозных узлов больших размеров у пациенток с миомой матки на основе данных о сочетаниях генетических полиморфизмов rs2107538 RANTES, rs1801157 SDF 1, rs16944 IL-1β.In the studied medical and patent literature, the authors did not find a method for predicting the risk of developing large myomatous nodes in patients with uterine myoma based on data on combinations of genetic polymorphisms rs2107538 RANTES, rs1801157 SDF 1, rs16944 IL-1β.

Задачей настоящего изобретения является расширение арсенала способов прогнозирования риска развития миоматозных узлов больших размеров у пациенток с миомой матки на основе данных о сочетаниях генетических вариантов.The objective of the present invention is to expand the arsenal of methods for predicting the risk of developing large myomatous nodes in patients with uterine myoma based on data on combinations of genetic variants.

Технический результат использования изобретения – получение критериев оценки риска развития миоматозных узлов больших размеров более 4 см у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья на основе данных о сочетаниях генетических вариантов локусов rs2107538 RANTES, rs1801157 SDF 1, rs16944 IL-1β.The technical result of using the invention is to obtain criteria for assessing the risk of developing large myomatous nodes of more than 4 cm in women of Russian nationality, a native of the Central Chernozem region based on data on combinations of genetic variants of the rs2107538 RANTES, rs1801157 SDF 1, rs16944 IL-1β loci.

В соответствии с поставленной задачей был разработан способ прогнозирования риска развития миоматозных узлов больших размеров у пациенток с миомой матки, включающий:In accordance with the task, a method was developed for predicting the risk of developing large myomatous nodes in patients with uterine myoma, including:

- выделение ДНК из периферической венозной крови;- DNA isolation from peripheral venous blood;

- анализ полиморфизмов генов rs2107538 RANTES, rs1801157 SDF 1 и rs16944 IL-1β;- analysis of polymorphisms of the rs2107538 RANTES, rs1801157 SDF 1 and rs16944 IL-1β genes;

- прогнозирование повышенного риска развития миоматозных узлов больших размеров в случае выявления сочетания генотипа GG SDF-1 rs1801157 с генотипом CC IL-1β rs16944 и генотипом АА RANTES rs2107538.- predicting an increased risk of the development of large myomatous nodes in the event of a combination of the GG SDF-1 rs1801157 genotype with the CC IL-1β rs16944 genotype and the AA RANTES rs2107538 genotype.

Новизна и изобретательский уровень заключается в том, что из уровня техники не известна возможность прогноза риска развития миоматозных узлов больших размеров по данным о сочетании генотипа GG SDF-1 rs1801157 с генотипом CC IL-1β rs16944 и генотипом АА RANTES rs2107538.The novelty and inventive step is that the prior art does not know the possibility of predicting the risk of developing large myomatous nodes according to the combination of the GG SDF-1 rs1801157 genotype with the CC IL-1β rs16944 genotype and the AA RANTES rs2107538 genotype.

Способ осуществляют следующим образомThe method is as follows

ДНК выделяют из образцов периферической венозной крови в 2 этапа. На первом этапе к 4 мл крови добавляют 25 мл лизирующего буфера, содержащего 320 мМ сахарозы, 1% тритон Х-100, 5 мМ MgCl2, 10 мМ трис-HCl (pH=7,6). Полученную смесь перемешивают и центрифугируют при 4°С, 4000 об/мин в течение 20 минут. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 4 мл раствора, содержащего 25 мМ ЭДТА (рН=8,0) и 75 мМNaCl, ресуспензируют. Затем прибавляют 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10 мг/мл) и инкубируют образец при 37°С в течение 16 часов.DNA is isolated from samples of peripheral venous blood in 2 stages. At the first stage, 25 ml of lysis buffer containing 320 mM sucrose, 1% Triton X-100, 5 mM MgCl2, 10 mM Tris-HCl (pH = 7.6) is added to 4 ml of blood. The resulting mixture was stirred and centrifuged at 4 ° C, 4000 rpm for 20 minutes. After centrifugation, the supernatant is drained, 4 ml of a solution containing 25 mM EDTA (pH = 8.0) and 75 mM NaCl are added to the precipitate, and they are resuspended. Then, 0.4 ml of 10% SDS, 35 μl of proteinase K (10 mg / ml) are added and the sample is incubated at 37 ° C for 16 hours.

На втором этапе из полученного лизата последовательно проводят экстракцию ДНК равными объемами фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с центрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 минут. После каждого центрифугирования производят отбор водной фазы. ДНК осаждают из раствора двумя объемами охлажденного 96% этанола. Сформированную ДНК растворяют в бидистиллированной, деионизованной воде и хранят при -20°С. Выделенную ДНК используют для проведения полимеразной цепной реакции синтеза ДНК.At the second stage, DNA is sequentially extracted from the obtained lysate in equal volumes of phenol, phenol-chloroform (1: 1) and chloroform with centrifugation at 4000 rpm for 10 minutes. After each centrifugation, the aqueous phase is selected. DNA is precipitated from solution in two volumes of chilled 96% ethanol. The formed DNA is dissolved in bidistilled, deionized water and stored at -20 ° C. Isolated DNA is used to carry out the polymerase chain reaction of DNA synthesis.

Анализ всех локусов (rs2107538 RANTES, rs1801157 SDF 1 и rs16944 IL-1β) осуществляют методами полимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК.Analysis of all loci (rs2107538 RANTES, rs1801157 SDF 1 and rs16944 IL-1β) is carried out by polymerase chain reaction (PCR) DNA synthesis.

Для локусов rs2107538 RANTES и rs1801157 SDF 1 ПЦР проводят на аппарате IQ5 Bio-Rad в режиме real time с использованием ДНК-полимеразы Thermus aquaticus производства фирмы «Силекс-М» и стандартных олигонуклеотидных праймеров и зондов, синтезированных фирмой «Синтол» с последующим анализом полиморфизмов методом дискриминации аллелей. Для дискриминации аллелей используют программу Bio-Rad «IQ5-Standart Edition».For the rs2107538 RANTES and rs1801157 SDF 1 loci, PCR is performed on an IQ5 Bio-Rad apparatus in real time using Thermus aquaticus DNA polymerase manufactured by Sileks-M and standard oligonucleotide primers and probes synthesized by Syntol followed by analysis of polymorphisms allele discrimination method. To discriminate alleles, the Bio-Rad program “IQ5-Standart Edition” is used.

Для локуса rs16944 IL-1β ПЦР производят методом анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ) продуктов ПЦР-амплификации специфических участков генома с использованием соответствующих ферментов рестрикции производства фирмы «Сибэнзим» (Новосибирск).For the rs16944 IL-1β locus, PCR is performed by analysis of restriction fragment length polymorphism (RFLP) of PCR amplification products of specific genome sections using the corresponding restriction enzymes manufactured by Sibenzym (Novosibirsk).

Изобретение характеризуется следующими изображениями.The invention is characterized by the following images.

На фиг.1. представлена дискриминация аллелей по локусу rs2107538 RANTES, где

Figure 00000001
– гомозиготы по аллелю GG,
Figure 00000002
– гомозиготы по аллелю АА,
Figure 00000003
– гетерозиготы GА,
Figure 00000004
– отрицательный контроль, которая осуществляется методом Tag Man зондов по данным величин уровня относительной флуоресценции (далее УОФ) каждого зонда. Зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю 1, зонд с красителем FAM – аллелю 2.In figure 1. Allele discrimination at the rs2107538 RANTES locus is presented, where
Figure 00000001
- homozygotes for the GG allele,
Figure 00000002
- homozygotes for the AA allele,
Figure 00000003
- heterozygotes GA,
Figure 00000004
- negative control, which is carried out by the Tag Man method of probes according to the values of the relative fluorescence level (hereinafter UOF) of each probe. A probe with a fluorescent dye ROX corresponds to allele 1, a probe with a FAM dye corresponds to allele 2.

На фиг.2. представлена дискриминация аллелей по локусу rs1801157 SDF 1 (где

Figure 00000001
– гомозиготы по аллелю GG,
Figure 00000002
– гомозиготы по аллелю AA,
Figure 00000003
– гетерозиготы GA,
Figure 00000004
– отрицательный контроль), также осуществленная методом Tag Man зондов по данным величин УОФ. Зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю 1, зонд с красителем FAM – аллелю 2.In figure 2. the discrimination of alleles at the locus rs1801157 SDF 1 (where
Figure 00000001
- homozygotes for the GG allele,
Figure 00000002
- homozygotes for the AA allele,
Figure 00000003
- GA heterozygotes,
Figure 00000004
- negative control), also carried out using the Tag Man method of probes according to the UOF values. A probe with a fluorescent dye ROX corresponds to allele 1, a probe with a FAM dye corresponds to allele 2.

На фиг. 1 и 2 две полосы, вертикальная и горизонтальная, делят график на четыре секции: одна для каждого гомозиготного состояния, одна для гетерозиготного состояния и секция без реакции. Присвоение генотипов неизвестным образцам определяется вычерчиванием УОФ для одного флуорофора на оси x относительно УОФ, для другого флуорофора на оси y на диаграмме дискриминации аллелей.In FIG. 1 and 2, two bands, vertical and horizontal, divide the graph into four sections: one for each homozygous state, one for the heterozygous state and the section without reaction. Assignment of genotypes to unknown samples is determined by plotting the PF for one fluorophore on the x axis relative to PF, for another fluorophore on the y axis on the allele discrimination diagram.

• Если значения УОФ неизвестного образца находятся выше горизонтальной полосы и правее вертикальной полосы, генотип гетерозиготен, GA RANTES rs2107538, GA SDF1 rs1801157, соответственно.• If the UVR values of an unknown sample are above the horizontal strip and to the right of the vertical strip, the genotype is heterozygous, GA RANTES rs2107538, GA SDF1 rs1801157, respectively.

• Если значения УОФ неизвестного образца находятся выше горизонтальной полосы и левее вертикальной полосы, генотип гомозиготен по аллелю A RANTES rs2107538 и аллелю A SDF1 rs1801157, соответственно, т.к. УОФ для данных аллелей отложены по оси y.• If the UVR values of an unknown sample are above the horizontal strip and to the left of the vertical strip, the genotype is homozygous for the A RANTES rs2107538 allele and the A SDF1 allele rs1801157, respectively, because The PFV for these alleles is plotted along the y axis.

• Если значения УОФ неизвестного образца находятся ниже горизонтальной полосы и правее вертикальной, генотип гомозиготен по аллелю G RANTES rs2107538 и аллелю G SDF1 rs1801157, соответственно, т.к. УОФ для данных аллелей отложены по оси x.• If the UVR values of an unknown sample are below the horizontal strip and to the right of the vertical one, the genotype is homozygous for the G RANTES rs2107538 allele and G SDF1 rs1801157 allele, respectively, because The PFV for these alleles is plotted along the x axis.

• Если значения УОФ неизвестного образца находятся ниже горизонтальной полосы и левее вертикальной, определение генотипа невозможно, в данном случае неопределенный образец – отрицательный контроль.• If the UVR values of an unknown sample are below the horizontal strip and to the left of the vertical, determination of the genotype is not possible, in this case an undefined sample is a negative control.

На фиг.3 представлено электрофоретическое разделение продуктов рестрикции гена IL-1β rs16944, где 1, 9 – гомозиготы ТТ; 2, 3, 5, 7, 8, 12 – гетерозиготы СТ, 4, 6, 10,11 – гомозиготы СС.Figure 3 presents the electrophoretic separation of restriction products of the IL-1β rs16944 gene, where 1, 9 are TT homozygotes; 2, 3, 5, 7, 8, 12 — heterozygotes ST, 4, 6, 10.11 — homozygotes CC.

Реакцию проводят в 12,5 мкл общего объема смеси, содержащей 33,5 мМ трис-HCl (pH=8,8), 1,25 тмМ MgCl2, 0,5 мкг геномной ДНК, по 5 пМ каждого праймера, по 100 мкМ dATP, dGTP, dCTP, dTTP и 1 единицу активной Taq-полимеразы. После денатурации (4 мин при 95°С) выполняют 35 циклов амплификации по схеме: денатурация – 30 с при 95°С; отжиг праймеров – 30 с при 55°С; элонгация – 40 с при 72°С. Затем пробы выдерживают 10 мин при 72°С и охлаждают. После ПДРФ-анализа продукты рестрикции разделяют в 2% агарозном геле, предварительно окрашенном бромистым этидием, в течение 20 мин при 160V. В качестве электрофорезного буфера используют 1хТАЕ (трис-ацетатный буфер). Результаты анализируют в проходящем ультрафиолетовом свете. Фрагменты длиной 304 п.н. соответствуют аллелю Т, 190 и 114 п.н. – С, а 304, 190 и 114 п.н. выявлены у гетерозигот СТ.The reaction is carried out in 12.5 μl of the total volume of the mixture containing 33.5 mM Tris-HCl (pH = 8.8), 1.25 tM MgCl2, 0.5 μg genomic DNA, 5 pM each primer, 100 μM dATP , dGTP, dCTP, dTTP and 1 unit of active Taq polymerase. After denaturation (4 min at 95 ° C), 35 amplification cycles are performed according to the scheme: denaturation - 30 s at 95 ° C; primer annealing - 30 s at 55 ° C; elongation - 40 s at 72 ° C. Then the samples were incubated for 10 min at 72 ° C and cooled. After RFLP analysis, the restriction products were separated on a 2% agarose gel, previously stained with ethidium bromide, for 20 min at 160V. As electrophoresis buffer use 1xTAE (Tris-acetate buffer). The results are analyzed in transmitted ultraviolet light. Fragments 304 bp long correspond to the T allele, 190 and 114 bp - S, a 304, 190 and 114 bp identified in heterozygotes ST.

На фиг. 4 представлена таблица, где показана распространенность сочетаний генотипов генов цитокинов у женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья РФ, больных миомой матки с миоматозными узлами больших размеров и в группе пациенток с малыми размерами миоматозных узлов.In FIG. Figure 4 presents a table showing the prevalence of combinations of cytokine gene genotypes in women of Russian nationality who are natives of the Central Black Earth Region of the Russian Federation, patients with uterine myoma with large myomatous nodes and in the group of patients with small sizes of myomatous nodes.

Возможность использования предложенного способа для оценки риска развития миоматозных узлов больших размеров у больных миомой матки русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья РФ, подтверждает анализ результатов наблюдений 120 больных миомой матки с большими миоматозными узлами с размером доминантного узла более 4 см и 107 пациенток с миоматозными узлами небольших размеров до 4 см. Формирование выборок больных миомой матки с большими и малыми миоматозными узлами осуществляли на базе гинекологического отделения Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа.The possibility of using the proposed method for assessing the risk of developing large myomatous nodes in patients of Russian uterine myoma, who are natives of the Central Black Earth Region of the Russian Federation, confirms the analysis of the observation results of 120 patients with uterine myoma, with large myomatous nodes with a dominant node size of more than 4 cm and 107 patients with myomatous nodes small sizes up to 4 cm. The sampling of patients with uterine myoma with large and small myomatous nodes was carried out on the basis of the gynecological department I Belgorod Regional Hospital St. Ioasafa.

Критерии включения в исследуемые выборки:Criteria for inclusion in the studied samples:

1. Индивидуумы русской национальности, являющиеся уроженками Центрального Черноземья РФ и не имеющие родства между собой.1. Individuals of Russian nationality, who are natives of the Central Black Soil of the Russian Federation and do not have kinship with each other.

2. Добровольное согласие пациенток на проведение исследования.2. Voluntary consent of patients to conduct the study.

3. В группу больных включали индивидуумов только после установления диагноза миомы матки, который подтверждался клиническими и лабораторно-инструментальными методами обследования, в соответствии с обязательными диагностическими стандартами.3. Individuals were included in the group of patients only after a diagnosis of uterine fibroids was established, which was confirmed by clinical and laboratory-instrumental examination methods, in accordance with the mandatory diagnostic standards.

Типирование молекулярно-генетических маркеров осуществляли в лаборатории «Молекулярной генетики человека» медицинского института Белгородского государственного национального исследовательского университета.Molecular genetic markers were typed in the laboratory of Human Molecular Genetics at the Medical Institute of the Belgorod State National Research University.

Изучение роли комбинаций генетических вариантов rs2107538 RANTES, rs1801157 SDF 1 и rs16944 IL-1β в формировании миоматозных узлов больших размеров у пациенток с миомой матки проводили с помощью программного обеспечения АРSampler [http://sources.redhat.com/cygwin/], использующего метод Монте-Карло марковскими цепями и байесовскую непараметрическую статистику [A Gibbs sampler for identification of symmetrically structured, spaced DNA motifs with improved estimation of the signal length [Text] /A. V.Favorov, M. S. Gelfand, A. V. Gerasimova [et al.] //Bioinformatics. – 2005. – Vol.21, №10. – P. 2240-2245].The role of combinations of the rs2107538 RANTES, rs1801157 SDF 1 and rs16944 IL-1β genetic variants in the formation of large myomatous nodes in patients with uterine fibroids was studied using the APSampler software [http://sources.redhat.com/cygwin/] using the method Monte Carlo Markov Chains and Bayesian Nonparametric Statistics [A Gibbs sampler for identi fi cation of symmetrically structured, spaced DNA motifs with improved estimation of the signal length [Text] / A. V. Favorov, M. S. Gelfand, A. V. Gerasimova [et al.] // Bioinformatics. - 2005. - Vol.21, No. 10. - P. 2240-2245].

Применение данного способа позволит прогнозировать риск развития миоматозных узлов больших размеров у пациенток с миомой матки для женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья России и своевременно подбирать индивидуальную тактику ведения больной миомой матки.The application of this method will allow to predict the risk of developing large myomatous nodes in patients with uterine myoma for women of Russian nationality, a native of the Central Black Earth Region of Russia and to select in time the individual tactics of managing a sick uterine myoma.

В качестве примеров конкретного выполнения предложенного способа было проведено генетическое обследование по локусам rs2107538 RANTES, rs1801157 SDF 1 и rs16944 IL-1β трех добровольцев больных миомой матки на ранних стадиях заболевания, русской национальности уроженок Центрального Черноземья России.As examples of the specific implementation of the proposed method, a genetic examination was carried out at the rs2107538 RANTES, rs1801157 SDF 1 and rs16944 IL-1β loci of three volunteers of patients with uterine myoma in the early stages of the disease, of Russian nationality, a native of the Central Black Earth Region of Russia.

Пример 1. Пациентка В. в дебюте заболевания имела миоматозный узел размером 2,5 см. При обследовании было выявлено наличие сочетания следующих генетических вариантов: GG SDF-1 rs1801157, CC IL-1β rs16944, АA RANTES rs2107538. При поступлении в стационар через 21 месяц у данной пациентки был выявлен миоматозный узел размером 7 см. Таким образом выявление комбинации генетических вариантов GG SDF-1 rs1801157, CC IL-1β rs16944, АA RANTES rs2107538 могут служить основанием для включения в группу риска по развитию миоматозных узлов больших размеров.Example 1. Patient B. in the onset of the disease had a 2.5 cm myomatous node. Examination revealed a combination of the following genetic options: GG SDF-1 rs1801157, CC IL-1β rs16944, AA RANTES rs2107538. Upon admission to the hospital after 21 months, this patient was diagnosed with a 7 cm myomatous node. Thus, the identification of a combination of genetic variants GG SDF-1 rs1801157, CC IL-1β rs16944, AA RANTES rs2107538 can serve as a basis for inclusion in the risk group for the development of myomatous nodes of large sizes.

Пример 2. У пациентки А., имеющей миоматозные узлы размером до 3 см, были выявлены следующие генетические варианты: GG SDF-1 rs1801157, CC IL-1β rs16944, АA RANTES rs2107538. На основании этих результатов данная пациентка включена в группу риска по развитию миоматозных узлов больших размеров и ей назначен соответствующий комплекс профилактических мероприятий (динамический контроль роста миоматозных узлов, гормональная терапия, нормализация психо-эмоционального состояния и др.). При контрольном обследовании через 18 месяцев размеры миоматозных узлов не увеличились. Данный пример подтверждает, что своевременное определение риска развития миоматозных узлов больших размеров позволяет своевременно принять профилактические меры и остановить процесс роста миоматозных узлов.Example 2. In patient A., with myomatous nodes up to 3 cm in size, the following genetic variants were identified: GG SDF-1 rs1801157, CC IL-1β rs16944, AA RANTES rs2107538. Based on these results, this patient is included in the risk group for the development of large myomatous nodes and she is assigned an appropriate set of preventive measures (dynamic control of the growth of myomatous nodes, hormonal therapy, normalization of the psycho-emotional state, etc.). During the follow-up examination after 18 months, the size of the myomatous nodes did not increase. This example confirms that the timely determination of the risk of development of large myomatous nodes allows timely preventive measures to be taken and the growth of myomatous nodes to be stopped.

У пациентки С., имеющей миоматозные узлы размером до 3 см, были выявлены следующие генетические варианты: АА SDF-1 rs1801157, CТ IL-1β rs16944, GG RANTES rs2107538. На основании этих результатов у данной пациентки прогнозируют минимальный риск развития миоматозных узлов больших размеров. При контрольном обследовании через 18 месяцев установлено, что размеры миоматозных узлов не увеличились.In patient C., with myomatous nodes up to 3 cm in size, the following genetic variants were revealed: AA SDF-1 rs1801157, CT IL-1β rs16944, GG RANTES rs2107538. Based on these results, the patient is predicted to have a minimal risk of developing large myomatous nodes. A follow-up examination after 18 months found that the size of the myomatous nodes did not increase.

Применение данного способа позволит формировать среди пациенток с миомой матки группы риска развития миоматозных узлов больших размеров и своевременно реализовывать в этих группах необходимые лечебно-профилактические мероприятия по предупреждению оперативных вмешательств из-за развития миомы матки больших размеров.The use of this method will allow to form among patients with uterine fibroids at-risk groups for the development of large myomatous nodes and to timely implement in these groups the necessary therapeutic and preventive measures to prevent surgical interventions due to the development of large uterine fibroids.

Результаты, полученные с помощью биоинформатического анализа, свидетельствуют о вовлеченности указанного сочетания полиморфных вариантов генов регулятора активности нормальной экспрессии и секреции Т-клеток (rs2107538 RANTES), фактора стромальных клеток (rs1801157 SDF-1) и интерлейкина 1β (rs16944 IL-1β) в формирование миоматозных узлов больших размеров при миоме матки. Как следует из данных, представленных в таблице на фиг. 4, в группе больных с большими миоматозными узлами сочетание генотипа GG SDF-1 rs1801157 с генотипом CC IL-1β rs16944 и генотипом АА RANTES rs2107538. (19,81%) встречается в 4,5 раз чаще, чем в группе пациенток с малыми размерами миоматозных узлов (4,30%, рf=0,0006, pperm=0,009). Следовательно, данное сочетание генетических вариантов цитокинов повышает риск формирования больших миоматозных узлов при миоме матки (OR=5,56).The results obtained using bioinformatics analysis indicate the involvement of the indicated combination of polymorphic variants of regulator genes for normal expression and secretion of T cells (rs2107538 RANTES), stromal cell factor (rs1801157 SDF-1) and interleukin 1β (rs16944 IL-1β) large myomatous nodes with uterine myoma. As follows from the data presented in the table in FIG. 4, in the group of patients with large myomatous nodes, the combination of GG SDF-1 rs1801157 genotype with CC IL-1β rs16944 genotype and AA RANTES rs2107538 genotype. (19.81%) occurs 4.5 times more often than in the group of patients with small sizes of myomatous nodes (4.30%, pf = 0.0006, pperm = 0.009). Therefore, this combination of genetic variants of cytokines increases the risk of the formation of large myomatous nodes in uterine myoma (OR = 5.56).

Таким образом, поставленная задача решена. Использование данного способа позволит еще до появления признаков заболевания миомой матки на основании одного анализа выявлять у женщин риск развития миоматозных узлов больших размеров и проводить профилактические мероприятия по предупреждению оперативных вмешательств.Thus, the task is solved. Using this method will allow even before the onset of signs of uterine myoma, on the basis of one analysis, to identify in women the risk of developing large myomatous nodes and to carry out preventive measures to prevent surgical interventions.

Claims (1)

Способ прогнозирования риска развития миоматозных узлов больших размеров у пациенток с миомой матки, включающий выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ полиморфизмов методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК, отличающийся тем, что анализируют полиморфизмы генов вариантов rs2107538 RANTES, rs1801157 SDF1 и rs16944 IL-1β и прогнозируют повышенный риск развития миоматозных узлов больших размеров при миоме матки у уроженок Центрального Черноземья России русской национальности в случае выявления сочетания генотипа GG SDF1 rs1801157 с генотипом CC IL-1β rs16944 и генотипом АА RANTES rs2107538.A method for predicting the risk of developing large myomatous nodes in patients with uterine myoma, including the extraction of DNA from peripheral venous blood, the analysis of polymorphisms by the polymerase chain reaction of DNA synthesis, characterized in that the polymorphisms of the variants rs2107538 RANTES, rs1801157 SDF1 and rs16944 IL-1β and they predict an increased risk of developing large myomatous nodes in uterine myoma in natives of the Central Chernozem region of Russia of Russian nationality if a combination of the GG SDF1 rs1801157 genotype with the genotype is detected CC IL-1β rs16944 and AA genotype RANTES rs2107538.
RU2016103160A 2016-02-01 2016-02-01 Method of predicting risk of development of myomatous nodes of large sizes in patients with myoma RU2616246C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016103160A RU2616246C1 (en) 2016-02-01 2016-02-01 Method of predicting risk of development of myomatous nodes of large sizes in patients with myoma

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016103160A RU2616246C1 (en) 2016-02-01 2016-02-01 Method of predicting risk of development of myomatous nodes of large sizes in patients with myoma

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2616246C1 true RU2616246C1 (en) 2017-04-13

Family

ID=58642615

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016103160A RU2616246C1 (en) 2016-02-01 2016-02-01 Method of predicting risk of development of myomatous nodes of large sizes in patients with myoma

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2616246C1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2679637C1 (en) * 2018-03-07 2019-02-12 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Method for forecasting the risk of development of combination of genital endometriosis and hyperplastic endometry processes based on molecular-genetic data

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2433402C1 (en) * 2010-10-19 2011-11-10 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный университет" Method of predicting area of myomatous knots in case of uterus myoma
RU2475740C1 (en) * 2011-09-26 2013-02-20 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации Method of detecting hereditary predisposition to fast growth of uterine myoma

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2433402C1 (en) * 2010-10-19 2011-11-10 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный университет" Method of predicting area of myomatous knots in case of uterus myoma
RU2475740C1 (en) * 2011-09-26 2013-02-20 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации Method of detecting hereditary predisposition to fast growth of uterine myoma

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KALAI M. et al. Frequency of three polymorphisms of the CCL5 gene (rs2107538, rs2280788 and rs2280789) and their implications for the phenotypic expression of sickle cell anemia in Tunisia. Pol J Pathol. 2013 Jun; 64(2): 84-89. GONG H. et al. The CXCL12 G801A polymorphism and cancer risk: evidence from 17 case-control studies. Gene. 2012 Nov 10; 509(2): 228-231. Epub 2012 Aug 23. WANG X. et al. Interleukin-1β-31C/T and -511T/C polymorphisms were associated with preeclampsia in Chinese Han population. PLoS One. 2014 Sep 15; 9(9): e106919. eCollection 2014. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2679637C1 (en) * 2018-03-07 2019-02-12 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Method for forecasting the risk of development of combination of genital endometriosis and hyperplastic endometry processes based on molecular-genetic data

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Bonyadi et al. TNF-α gene polymorphisms in Iranian Azeri Turkish patients with Behcet’s Disease
RU2568892C1 (en) Method of predicting severe pre-eclampsia
RU2468367C1 (en) Method of predicting risk of development of endometrium hyperplasia in women with genital endometriosis
RU2557954C1 (en) Method of predicting development of risk of combined proliferative reproductive system diseases in women
RU2616246C1 (en) Method of predicting risk of development of myomatous nodes of large sizes in patients with myoma
RU2558854C1 (en) Method for prediction of risk of endometriosis
RU2480763C1 (en) Method for prediction of risk of developing benign mammry dysplasia in females with genital endometriosis
RU2453850C2 (en) Method for prediction of character of uterine involvement in myomatous nodes
RU2642939C1 (en) Method for prediction of risk of preeclampsia
RU2653765C1 (en) Method for prediction of severe preeclampsia development risk considering genetic data
RU2557977C1 (en) Method for prediction of risk of hyperplastic processes of endometrium
RU2550933C1 (en) Method for predicting risk of hysteromyoma
RU2568891C1 (en) Method for prediction of risk of preeclampsia by combination of cytokine genes
US10689704B2 (en) Method for predicting cervical shortening and preterm birth
RU2611358C1 (en) Method of predicting high risk of reproductive loss in first trimester of pregnancy
RU2498313C1 (en) Method for prediction of overall survival in patients with chronic lymphatic leukaemia
RU2646448C1 (en) Method for prediction of risk of preeclampsia development based on matrix metal proteinase genes combinations
CN109321658B (en) Kit for detecting susceptibility of cervical cancer
CN108707659B (en) Application of LncRNA in serum as URSA diagnosis and pregnancy outcome assessment marker
RU2650994C1 (en) Method for prediction of risk of genital endometriosis
RU2679637C1 (en) Method for forecasting the risk of development of combination of genital endometriosis and hyperplastic endometry processes based on molecular-genetic data
RU2646455C1 (en) Method for prediction of risk of preeclampsia development in women depending on hereditary burden
RU2678970C1 (en) Method for forecasting risk of development of combination of uterine fibroid and endometrial hyperplastic processes
RU2677866C1 (en) Method for predicting risk of developing combination of uterine fibroids and adenomyosis using genetic data
RU2507519C1 (en) Method for prediction of clinical course of acute pancreatitis

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20190202