RU2609253C1 - Method for treating deep defects of cornea - Google Patents

Method for treating deep defects of cornea Download PDF

Info

Publication number
RU2609253C1
RU2609253C1 RU2015152299A RU2015152299A RU2609253C1 RU 2609253 C1 RU2609253 C1 RU 2609253C1 RU 2015152299 A RU2015152299 A RU 2015152299A RU 2015152299 A RU2015152299 A RU 2015152299A RU 2609253 C1 RU2609253 C1 RU 2609253C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
defect
cornea
corneal
contact lens
epithelisation
Prior art date
Application number
RU2015152299A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Екатерина Валериановна Ченцова
Наталья Валерьевна Боровкова
Ольга Ивановна Конюшко
Максим Сергеевич Макаров
Наталья Сергеевна Егорова
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Московский научно-исследовательский институт глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение "Московский научно-исследовательский институт глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения Российской Федерации filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение "Московский научно-исследовательский институт глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Priority to RU2015152299A priority Critical patent/RU2609253C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2609253C1 publication Critical patent/RU2609253C1/en

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61FFILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F9/00Methods or devices for treatment of the eyes; Devices for putting-in contact lenses; Devices to correct squinting; Apparatus to guide the blind; Protective devices for the eyes, carried on the body or in the hand
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Prostheses (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: bioconstruction, consisting of soft contact lens, filled with mixture of autologous progenitor cells of buccal epithelium and thick collagenous gel Applicoll in volume ratio 1:1, until complete epithelisation of cornea defect takes place.
EFFECT: method ensures covering of stroma defect and complete epithelisation of cornea with acceleration of epithelisation terms and without development of side effects in form of opacity in defect area, toxic reaction, inflammatory processes.
1 ex

Description

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и предназначено для лечения глубоких дефектов роговицы, таких как ожоги, эрозии и язвы роговицы, десцеметоцеле и т.д.The invention relates to medicine, in particular to ophthalmology, and is intended for the treatment of deep corneal defects, such as burns, erosion and corneal ulcers, descemetocele, etc.

Патология передней поверхности глаза занимает одно из ведущих мест в структуре глазной заболеваемости. По данным ВОЗ поражения роговицы составляют 5,1% из всех причин слепоты в мире [Grueterich M., Espana Е.М., Tseng S.C. // Surv. Ophthalmol. 2003. Vol. 48, N. 6. P. 631-646]. При глубоких дефектах роговицы наблюдаются такие осложнения, как снижение рецепторной вооруженности клеточных мембран, нарушение основных ферментативных взаимодействий, снижение продукции цитокинов, дефицит лимбальных клеток - основного источника регенерации роговицы. Все это способствует усилению деструктивных изменений пораженных тканей, замедлению внутри- и внеклеточных восстановительных процессов, что в конечном итоге приводит к неудовлетворительным структурным и функциональным результатам [Ченцова Е.В. Петриашвили Г.Г., Арутюнова И.Р. и др. // Офтальмохирургия. 1999. №4. С. 3-9].Pathology of the anterior surface of the eye occupies one of the leading places in the structure of ocular morbidity. According to WHO, corneal lesions account for 5.1% of all causes of blindness in the world [Grueterich M., Espana E.M., Tseng S.C. // Surv. Ophthalmol. 2003. Vol. 48, N. 6. P. 631-646]. With deep defects of the cornea, complications such as a decrease in the receptor armament of cell membranes, a violation of the main enzymatic interactions, a decrease in the production of cytokines, and deficiency of limbal cells, the main source of corneal regeneration, are observed. All this contributes to the strengthening of destructive changes in the affected tissues, slowing down the intra- and extracellular regenerative processes, which ultimately leads to unsatisfactory structural and functional results [Chentsova EV Petriashvili G.G., Arutyunova I.R. and others // Ophthalmic surgery. 1999. No4. S. 3-9].

При хирургическом лечении повреждений роговицы путем послойной или сквозной кератопластики отмечается высокая частота рецидивов, отторжения и некроза трансплантата, развитие иммунологического конфликта в организме реципиента с донорской тканью; кроме того, имеются трудности в получении материала для сквозной кератопластики.In the surgical treatment of corneal injuries by layered or through keratoplasty, a high frequency of relapse, rejection and transplant necrosis, the development of an immunological conflict in the recipient's body with donor tissue; in addition, there are difficulties in obtaining material for end-to-end keratoplasty.

В настоящее время перспективным направлением в лечении патологии роговицы считается трансплантация прогениторных клеток, как аллогенных, так и аутологичных, стимулирующих процессы регенерации и репарации. При этом неизбежно возникает проблема выбора нужного типа прогениторных клеток и их культивирования перед клиническим использованием, а также выбора биосовместимого носителя для клеток, пригодного для использования в офтальмохирургии.Currently, transplantation of progenitor cells, both allogeneic and autologous, stimulating the processes of regeneration and repair, is considered a promising direction in the treatment of corneal pathology. This inevitably raises the problem of choosing the right type of progenitor cells and their cultivation before clinical use, as well as the choice of a biocompatible carrier for cells suitable for use in ophthalmic surgery.

Известен способ трансплантации культивированных аллогенных и аутогенных клеток лимбального эпителия на амниотической мембране в лечении патологии поверхности роговицы (Grueterich M., Espana Е.М., Tseng S.C.G., Ex Vivo Expansion of Limbal Epithelial Stem Cell: Amniotic Membrane Serving as a Stem Cell Niche / M. Grueterich, E.M Espana., S.С.G. Tseng // Survey of Ophthalmol. - 2003. - Vol. 48, Ν 6 - P. 631-646).A known method of transplanting cultured allogeneic and autologous limbal epithelial cells on the amniotic membrane in the treatment of corneal surface pathology (Grueterich M., Espana E.M., Tseng SCG, Ex Vivo Expansion of Limbal Epithelial Stem Cell: Amniotic Membrane Serving as a Stem Cell Niche / M. Grueterich, EM Espana., S.C. G. Tseng // Survey of Ophthalmol. - 2003. - Vol. 48, Ν 6 - P. 631-646).

Амниотическая мембрана может быть успешно использована в качестве субстрата для культивирования эпителиальных СК и их последующего применения в лечении патологии поверхности роговицы, т.к. не содержит антигенов гистосовместимости и не является таким образом иммуногенной, поэтому ее применение не требует иммуносуппрессии, которая обычно применяется при трансплантации других тканей. Кроме того, амниотическая мембрана сама обладает выраженным репаративным действием в отношении дефекта ткани роговицы.The amniotic membrane can be successfully used as a substrate for the cultivation of epithelial SC and their subsequent use in the treatment of pathology of the corneal surface, because does not contain histocompatibility antigens and is thus not immunogenic, therefore its use does not require immunosuppression, which is usually used for transplantation of other tissues. In addition, the amniotic membrane itself has a pronounced reparative effect against corneal tissue defect.

Однако применение известного способа связано с необходимостью заготовки амниотической мембраны и созданием специальных условий для ее хранения. Кроме того, следует использовать парный глаз при заборе аутоткани лимба, что нежелательно, либо аллогенный материал, что связано с проблемами совместимости со всеми вытекающими последствиями.However, the application of the known method is associated with the need to prepare an amniotic membrane and the creation of special conditions for its storage. In addition, you should use a paired eye when sampling limb autotissue, which is undesirable, or allogeneic material, which is associated with compatibility problems with all the ensuing consequences.

Известен способ хирургического лечения глубоких дефектов роговицы (Патент RU 2177284), заключающийся в том, что дефект роговицы заполняют коллагеновым гелем с включенными в него аллогенными постнатальными или эмбриональными фибробластами, полученными из кожного лоскута донора и культивированными в среде DMEM: F12 с добавлением эпидермального фактора роста (10 нг/мл), инсулина (5 мкг/мл), изопротеринола (10 М) в течение 2-7 суток. Затем дефект закрывают мягкой контактной линзой с нанесенными на внутреннюю поверхность ее аллогенными постнатальными или эмбриональными эпителиальными клетками после 7-23 суток культивирования в среде DMEM: F12 на поверхности линзы. Укладывание мягкой контактной линзы на поврежденную роговицу проводят без предварительной анестезии. Контактная линза остается на поверхности глазного яблока в течение 3-5 дней. В зависимости от результатов лечения через 3-5 дней трансплантацию повторяют до полного закрытия эпителиального дефекта роговицы. Данный способ принят за ближайший аналог.A known method of surgical treatment of deep corneal defects (Patent RU 2177284), which consists in the fact that the corneal defect is filled with collagen gel with included allogeneic postnatal or embryonic fibroblasts obtained from a donor skin flap and cultured in DMEM: F12 medium with the addition of epidermal growth factor (10 ng / ml), insulin (5 μg / ml), isoproterinol (10 M) for 2-7 days. Then the defect is closed with a soft contact lens with allogeneic postnatal or embryonic epithelial cells deposited on the inner surface after 7-23 days of cultivation in DMEM: F12 medium on the lens surface. The laying of a soft contact lens on the damaged cornea is carried out without prior anesthesia. The contact lens remains on the surface of the eyeball for 3-5 days. Depending on the results of treatment, after 3-5 days the transplantation is repeated until the corneal epithelial defect is completely closed. This method is taken as the closest analogue.

Недостатки способа связаны с необходимостью заготовки эмбрионального материала; возможностью развития иммунологических реакций при использовании аллогенных клеток; вероятностью повреждения клеток под действием гидроксида натрия или уксусной кислоты во время изготовления коллагенового геля, насыщенного клетками.The disadvantages of the method are associated with the need for procurement of embryonic material; the possibility of developing immunological reactions when using allogeneic cells; the likelihood of damage to cells under the influence of sodium hydroxide or acetic acid during the manufacture of collagen gel saturated with cells.

Задачей предлагаемого изобретения является дальнейшая разработка способа лечения глубоких дефектов роговицы с помощью клеточных технологий.The objective of the invention is the further development of a method for the treatment of deep defects of the cornea using cell technology.

Техническим результатом способа является закрытие дефекта стромы и полная эпителизация роговицы с ускорением сроков эпителизации и без развития побочных эффектов в виде помутнения в области дефекта, токсической реакции, воспалительных процессов.The technical result of the method is the closure of a stromal defect and complete epithelization of the cornea with an acceleration of the epithelization time and without the development of side effects in the form of turbidity in the defect, toxic reaction, inflammatory processes.

Технический результат достигается за счет закрытия дефекта роговицы с помощью комбинированной биоконструкции, состоящей из мягкой контактной линзы, заполненной смесью аутологичных прогениторных клеток буккального эпителия и густого коллагенового геля Аппликолл в объемном соотношении 1:1.The technical result is achieved by closing the corneal defect with the help of a combined bioconstruction, consisting of a soft contact lens filled with a mixture of autologous progenitor cells of buccal epithelium and thick collagen gel Applicoll in a volume ratio of 1: 1.

Прогениторные клетки буккального эпителия взрослого человека отличаются высокой способностью к пролиферации и низкой иммуногенностью, оказывают стимулирующее воздействие на процессы репарации и регенерации в поврежденных тканях, при этом они легкодоступны для выделения. Таким образом, использование аутологичного буккального эпителия в качестве источника прогениторных клеток позволяет избежать многих технических и социально-этических трудностей.Progenitor cells of adult buccal epithelium are characterized by high proliferation ability and low immunogenicity, have a stimulating effect on the processes of repair and regeneration in damaged tissues, while they are easily accessible for isolation. Thus, the use of autologous buccal epithelium as a source of progenitor cells avoids many technical and socio-ethical difficulties.

Клеточный материал для культивирования получают из лоскута слизистой щеки. Как показали наши исследования, выделенные клетки буккального эпителия при культивировании в ростовой среде хорошо прикреплялись, сохраняли высокую жизнеспособность и пролиферацию. В течение 1-2 пассажей они сохраняли эпителиальный фенотип и экспрессировали маркеры эпителиальной дифференцировки (СК19). В качестве матрикса для клеток использовали коллагеновые носители 2 видов - коллагеновый гель Аппликолл и коллагеновый кератопротектор Аппликолл, разработанные компанией ООО «МакМеди». Анализ клеток в присутствии исследуемых коллагеновых носителей (кератопротектор коллагеновый Аппликолл, гель коллагеновый для заживления роговицы глаза (жидкий), гель коллагеновый для заживления роговицы глаза (густой) показал, что наиболее подходящим материалом для создания матрикса является густой гель Аппликолл (отсутствие токсичности, удобство в работе).Cellular material for cultivation is obtained from a flap of the mucous membrane of the cheek. As our studies showed, the isolated buccal epithelial cells, when cultured in a growth medium, adhered well and maintained high viability and proliferation. For 1-2 passages, they retained the epithelial phenotype and expressed markers of epithelial differentiation (CK19). Two types of collagen carriers were used as a matrix for the cells — the collagen gel Upplicoll and the collagen keratoprotector Upplicoll developed by MacMedi. Cell analysis in the presence of collagen carriers under study (collagen keratoprotector Applicoll, collagen gel for healing the cornea of the eye (liquid), collagen gel for healing the cornea of the eye (thick) showed that the most suitable material for creating the matrix is thick Applicoll gel (no toxicity, convenience in work).

Способ осуществляют следующим образом.The method is as follows.

Слизистую оболочку щеки отслаивают путем введения 2,0 мл физ. раствора, затем скальпелем проводят выкраивание лоскута 3×3 мм2. Лоскут отсекают от подлежащей ткани и затем помещают в питательную среду. В месте выкраивания лоскута производят гомеостаз. Биоптат помещают в 0,25% раствор диспазы на 18 часов при +4°C для отделения эпителия. Отделившуюся пленку измельчают ножницами, и полученный материал помещают в 0,25% трипсина на 30 минут при 37°C, затем пипетируют его в течение 1-2 минут, после чего добавляют эмбриональную сыворотку для нейтрализации действия фермента и полученную взвесь центрифугируют 10 минут при 1000 об/мин. Супернатант удаляют, а осадок ресуспендируют в среде ДМЕМ/Р12 с добавлением глютамина, гентамицина и 20% эмбриональной сыворотки. Полученную первичную клеточную взвесь переносят в чашку Петри диаметром 90 мм и инкубируют в CO2-инкубаторе при 37°C и содержанием CO2 в атмосфере 5%. Через 4 недели после формирования монослойной культуры проводят первый пассаж. Клетки отделяют от поверхности роста механическим способом, после чего собирают отделившиеся клетки и фрагменты монослоя и пипетируют с добавлением трипсина, подогретого до 37°C в течение 2-3 минут, инактивируют действие трипсина эмбриональной сывороткой и центрифугируют. Осадок ресуспендируют в питательной среде, указанной выше, и расселяют клетки по другим чашкам Петри диаметром 35 мм, получают культуру клеток, используемую в изобретении. Мягкую контактную линзу заполняют полученной смесью клеток-предшественников буккального эпителия и густого коллагенового геля Аппликолл в объемном соотношении 1:1. Наблюдают за процессом регенерации поврежденной роговицы через контактную линзу. После достижения полной эпителизации линзу удаляют.The mucous membrane of the cheek is peeled off by the introduction of 2.0 ml of physical. solution, then with a scalpel spend cutting flap 3 × 3 mm 2 . The flap is cut off from the underlying tissue and then placed in a nutrient medium. In the place of cutting the flap produce homeostasis. The biopsy sample is placed in a 0.25% dispase solution for 18 hours at + 4 ° C to separate the epithelium. The separated film is ground with scissors, and the resulting material is placed in 0.25% trypsin for 30 minutes at 37 ° C, then it is pipetted for 1-2 minutes, after which embryonic serum is added to neutralize the action of the enzyme, and the resulting suspension is centrifuged for 10 minutes at 1000 rpm The supernatant was removed and the pellet was resuspended in DMEM / P12 medium supplemented with glutamine, gentamicin and 20% fetal serum. The resulting primary cell suspension was transferred to a 90 mm diameter Petri dish and incubated in a CO 2 incubator at 37 ° C and 5% CO 2 in the atmosphere. 4 weeks after the formation of the monolayer culture, the first passage is carried out. Cells are separated from the growth surface mechanically, after which the separated cells and monolayer fragments are collected and pipetted with the addition of trypsin, heated to 37 ° C for 2-3 minutes, inactivate the effect of trypsin by embryonic serum and centrifuged. The pellet was resuspended in the nutrient medium indicated above, and the cells were spread on other Petri dishes with a diameter of 35 mm, and the cell culture used in the invention was obtained. A soft contact lens is filled with the obtained mixture of buccal epithelial progenitor cells and the thick Applicoll collagen gel in a volume ratio of 1: 1. Observe the process of regeneration of the damaged cornea through a contact lens. After complete epithelization is achieved, the lens is removed.

Пример 1Example 1

Кролик №1 породы шиншилла весом 2,5 кг. Забор биоптата проводили в состоянии медикаментозного сна животного (Sol. Ketamini 5% в дозе 1 мг/кг, 2% раствор ксилазина гидрохлорида (рометара) в дозе 5,0 мг/кг в/м). Мягкую контактную линзу iWear dr Comfort заполнили полученной смесью прогениторных клеток буккального эпителия и густого коллагенового геля Аппликолл в объемном соотношении 1:1. Затем в контейнер с контактной линзой добавляли физиологический раствор хлорида натрия 0,9%, закрывали его и помещали в чашку Петри с физиологическим раствором. Чашку оставляли в инкубаторе при 37°C и 5% CO2 в атмосфере в течение 24 часов.Rabbit No. 1 of chinchilla breed weighing 2.5 kg. The biopsy sample was taken in the state of medical sleep of the animal (Sol. Ketamini 5% at a dose of 1 mg / kg, 2% solution of xylazine hydrochloride (rometar) at a dose of 5.0 mg / kg / m). A soft contact lens iWear dr Comfort was filled with the obtained mixture of progenitor cells of buccal epithelium and thick collagen gel Applicall in a volume ratio of 1: 1. Then, a 0.9% saline solution of sodium chloride was added to the container with a contact lens, closed, and placed in a Petri dish with saline. The cup was left in an incubator at 37 ° C and 5% CO 2 in the atmosphere for 24 hours.

В результате получали комбинированную биоконструкцию, содержащую клетки буккального эпителия на коллагеновом носителе, в качестве подложки для коллагенового носителя использована контактная линза iWear dr Comfort. Для изучения влияния трансплантации полученной комбинированной биоконструкции на поврежденную ткань роговицы использовали экспериментальную модель кератэктомии. Наркоз Sol. Rometari 2,0 Sol. Ketamini 2,0. OD - опытный глаз. Удалено третье веко. Проведена кератэктомия трепаном 8,1 мм. Глубина дефекта 1/3 роговицы. На дефект уложена полученная биоконструкция. Проведена некровавая блефарорафия.As a result, a combined bioconstruction containing buccal epithelial cells on a collagen carrier was obtained; an iWear dr Comfort contact lens was used as a substrate for the collagen carrier. An experimental model of keratectomy was used to study the effect of transplantation of the resulting combined bioconstruction on damaged corneal tissue. Narcosis Sol. Rometari 2.0 Sol. Ketamini 2.0. OD is the experienced eye. The third eyelid has been removed. Keratectomy was performed with trepan 8.1 mm. The depth of the defect is 1/3 of the cornea. The resulting bioconstruction is laid on the defect. Conducted bloodless blepharography.

OS - контроль. Удалено третье веко. Проведена кератэктомия трепаном 8,1 мм. Глубина дефекта 1/3 роговицы. Блефарорафия. На контрольном глазу проводили только общепринятое консервативное лечение дефекта роговицы. На 1-7 сутки в оба глаза проводили инсталляции а/б капель - Офтаквикс по 1 кап. 3 раза для профилактики вторичного инфицирования.OS - control. The third eyelid has been removed. Keratectomy was performed with trepan 8.1 mm. The depth of the defect is 1/3 of the cornea. Blepharoraphia. Only conventional conservative treatment of corneal defect was performed on the control eye. On days 1-7, in both eyes, a / b drops were installed - Oftakviks 1 cap. 3 times for the prevention of secondary infection.

На 5 сутки сняты швы с контрольного глаза. На опытном глазу наблюдалась эпителизация дефекта роговицы с остаточной зоной эпителиопатии. На контрольном глазу сохранялся дефект эпителия и верхних слоев стромы 2×3 мм. В ходе дальнейшего наблюдения отмечали полную эпителизацию дефекта на опытном глазу на 6 сутки, на контрольным глазу эпителизация наступила на 8 сутки.On day 5, the sutures were removed from the control eye. In the experimental eye, epithelization of a corneal defect with a residual area of epithelialopathy was observed. A defect in the epithelium and upper stromal layers of 2 × 3 mm remained on the control eye. During further observation, complete epithelization of the defect in the experimental eye on the 6th day was noted, on the control eye epithelization occurred on the 8th day.

Кролик №2 породы шиншилла вес 2,0 кг. Забор биоптата проводили в состоянии медикаментозного сна животного (Sol. Ketamini 5% в дозе 1 мг/кг, 2% раствор ксилазина гидрохлорида (рометара) в дозе 5,0 мг/кг в/м). Мягкую контактную линзу iWear dr Comfort заполнили полученной смесью клеток-предшественников буккального эпителия в среде DMEM/F12 с 10% эмбриональной сывороткой «Gibco» и густого коллагенового геля Аппликолл в объемном соотношении 1:1. Затем в контейнер с контактной линзой добавляли физиологический раствор хлорида натрия 0,9%, закрывали его и помещали в чашку Петри с физиологическим раствором. Чашку оставляли в СO2 инкубаторе при 37°C и 5% CO2 в атмосфере в течение 24 часов.Rabbit No. 2 of chinchilla breed weight 2.0 kg. The biopsy sample was taken in the state of medical sleep of the animal (Sol. Ketamini 5% at a dose of 1 mg / kg, 2% solution of xylazine hydrochloride (rometar) at a dose of 5.0 mg / kg / m). The iWear dr Comfort soft contact lens was filled with the obtained mixture of buccal epithelial progenitor cells in DMEM / F12 medium with 10% Gibco fetal serum and thick Applicall thick collagen gel in a 1: 1 volume ratio. Then, a 0.9% saline solution of sodium chloride was added to the container with a contact lens, closed, and placed in a Petri dish with saline. The cup was left in a CO 2 incubator at 37 ° C and 5% CO 2 in the atmosphere for 24 hours.

В результате получали комбинированную биоконструкцию, содержащую клетки буккального эпителия на коллагеновом носителе, в качестве подложки для коллагенового носителя использована контактная линза iWear dr Comfort. Для изучения влияния трансплантации полученной комбинированной биоконструкции на поврежденную ткань роговицы использовали экспериментальную модель кератэктомии. Наркоз Sol. Rometari 2,0 Sol. Ketamini 2,0. OD - опытный глаз. Удалено третье веко. Проведена кератэктомия трепаном 8,1 мм. Глубина дефекта 1/3 роговицы. На дефект уложена полученная биоконструкция. Проведена некровавая блефароррафия.As a result, a combined bioconstruction containing buccal epithelial cells on a collagen carrier was obtained; an iWear dr Comfort contact lens was used as a substrate for the collagen carrier. An experimental model of keratectomy was used to study the effect of transplantation of the resulting combined bioconstruction on damaged corneal tissue. Narcosis Sol. Rometari 2.0 Sol. Ketamini 2.0. OD is the experienced eye. The third eyelid has been removed. Keratectomy was performed with trepan 8.1 mm. The depth of the defect is 1/3 of the cornea. The resulting bioconstruction is laid on the defect. Conducted bloodless blepharorography.

OS - контроль. Удалено третье веко. Проведена кератэктомия трепаном 8,1 мм. Глубина дефекта 1/3 роговицы. Блефарорафия. На контрольном глазу проводили только общепринятое консервативное лечение дефекта роговицы. На 1-7 сутки в оба глаза проводили инсталляции а/б капель - Офтаквикс по 1 кап. 3 раза для профилактики вторичного инфицирования.OS - control. The third eyelid has been removed. Keratectomy was performed with trepan 8.1 mm. The depth of the defect is 1/3 of the cornea. Blepharoraphia. Only conventional conservative treatment of corneal defect was performed on the control eye. On days 1-7, in both eyes, a / b drops were installed - Oftakviks 1 cap. 3 times for the prevention of secondary infection.

На 3 сутки швы на опытном глазу сняты. Наблюдается сокращение дефекта до 6,5×6,0 мм. На контрольном глазу дефект - 7,0×7,1 мм. Полную эпителизацию дефекта на опытном глазу отмечали на 7 сутки, а на контрольном глазу - на 9 сутки наблюдения.On day 3, the sutures on the experimental eye were removed. The defect is reduced to 6.5 × 6.0 mm. On the control eye, the defect is 7.0 × 7.1 mm. Complete epithelization of the defect in the experimental eye was observed on the 7th day, and on the control eye on the 9th day of observation.

Общеизвестно, что моделирование патологических процессов, в частности, на роговице у кроликов является адекватным патологическим процессам в клинических условиях, а экстраполяция разработанного способа для клинических условий является обоснованной.It is well known that modeling of pathological processes, in particular, on the cornea in rabbits is adequate to pathological processes in a clinical setting, and extrapolation of the developed method for clinical conditions is justified.

Таким образом, предложенный способ обеспечивает возможность получения ускоренной эпителизации глубоких роговичных дефектов с помощью клеточной технологии при отсутствии нежелательных осложнений.Thus, the proposed method provides the possibility of obtaining accelerated epithelization of deep corneal defects using cell technology in the absence of undesirable complications.

Claims (1)

Способ лечения глубоких дефектов роговицы, отличающийся тем, что на роговицу накладывают биоконструкцию, состоящую из мягкой контактной линзы, заполненной смесью аутологичных прогениторных клеток буккального эпителия и густого коллагенового геля Аппликолл в объемном соотношении 1:1 до полной эпителизации дефекта роговицы.A method for treating deep corneal defects, characterized in that a bioconstruction is applied to the cornea, consisting of a soft contact lens filled with a mixture of autologous progenitor cells of buccal epithelium and thick Applicoll collagen gel in a 1: 1 volume ratio until the corneal defect is completely epithelized.
RU2015152299A 2015-12-08 2015-12-08 Method for treating deep defects of cornea RU2609253C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015152299A RU2609253C1 (en) 2015-12-08 2015-12-08 Method for treating deep defects of cornea

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015152299A RU2609253C1 (en) 2015-12-08 2015-12-08 Method for treating deep defects of cornea

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2609253C1 true RU2609253C1 (en) 2017-01-31

Family

ID=58457455

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2015152299A RU2609253C1 (en) 2015-12-08 2015-12-08 Method for treating deep defects of cornea

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2609253C1 (en)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2699206C1 (en) * 2019-02-27 2019-09-03 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ГБ им. Гельмгольца" Минздрава России) Method of treating corneal defects via an autologous thrombofibrin clot
RU2770287C1 (en) * 2021-08-12 2022-04-15 федеральное государственное автономное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации Method for the treatment and prevention of corneal transplant rejection
RU2793525C1 (en) * 2022-09-12 2023-04-04 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ГБ им. Гельмгольца" Минздрава России) Method for surgical treatment of corneal defects in limbal cell insufficiency

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2173121C1 (en) * 2000-11-28 2001-09-10 Московский НИИ глазных болезней им. Гельмгольца Surgical method for treating deep defects of the cornea
RU2177284C1 (en) * 2000-11-28 2001-12-27 Васильев Андрей Валентинович Surgical method for treating deep cornea defects

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2173121C1 (en) * 2000-11-28 2001-09-10 Московский НИИ глазных болезней им. Гельмгольца Surgical method for treating deep defects of the cornea
RU2177284C1 (en) * 2000-11-28 2001-12-27 Васильев Андрей Валентинович Surgical method for treating deep cornea defects

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHOI J.A. et al. Combined application of autologous serum eye drops and silicone hydrogel lenses for the treatment of persistent epithelial defects. Eye Contact Lens. 2011 Nov; 37(6):370-3. doi: 10.1097/ICL.0b013e318233c9bb PMID: 21983552 [PubMed - indexed for MEDLINE]. *
РЫБАКОВА Е.Г. и др. Использование мягких контактных линз в лечении заболеваний роговицы. Русский медицинский журнал. Офтальмология. 1970, 1, с. 17. *
РЫБАКОВА Е.Г. и др. Использование мягких контактных линз в лечении заболеваний роговицы. Русский медицинский журнал. Офтальмология. 1970, 1, с. 17. CHOI J.A. et al. Combined application of autologous serum eye drops and silicone hydrogel lenses for the treatment of persistent epithelial defects. Eye Contact Lens. 2011 Nov; 37(6):370-3. doi: 10.1097/ICL.0b013e318233c9bb PMID: 21983552 [PubMed - indexed for MEDLINE]. *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2699206C1 (en) * 2019-02-27 2019-09-03 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ГБ им. Гельмгольца" Минздрава России) Method of treating corneal defects via an autologous thrombofibrin clot
RU2770287C1 (en) * 2021-08-12 2022-04-15 федеральное государственное автономное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации Method for the treatment and prevention of corneal transplant rejection
RU2793525C1 (en) * 2022-09-12 2023-04-04 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ГБ им. Гельмгольца" Минздрава России) Method for surgical treatment of corneal defects in limbal cell insufficiency
RU2801488C1 (en) * 2022-11-10 2023-08-09 федеральное государственное автономное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации Method of treatment of corneal defects with delayed epithelialization using scleral contact lenses

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Inatomi et al. Midterm results on ocular surface reconstruction using cultivated autologous oral mucosal epithelial transplantation
Shimazaki et al. Factors influencing outcomes in cultivated limbal epithelial transplantation for chronic cicatricial ocular surface disorders
CA2542041C (en) Methods and compositions for growing corneal endothelial and related cells on biopolymers and creation of artifical corneal transplants
Lange et al. Corneal endothelial cell transplantation using Descemet's membrane as a carrier
JP5835693B2 (en) Corneal endothelial cell culture method, method for producing corneal endothelial cell sheet for transplantation, and corneal endothelial cell culture kit
JP5255846B2 (en) Corneal endothelial preparation capable of cell proliferation in vivo
WO2003043542A1 (en) Ectocornea-like sheet and method of constructing the same
KR101141985B1 (en) Cell sheets for ectocornea formation, method of producing the same and method of using the same
JP2001161353A (en) Cell piece for transplantation and method for preparing the same
He et al. Growing human corneal epithelium on collagen shield and subsequent transfer to denuded cornea in vitro
WO2007032224A1 (en) Cultured cell sheet and method for preparation thereof
RU2609253C1 (en) Method for treating deep defects of cornea
KR20070008590A (en) Corneal epithelial sheet, method of constructing the same and transplantation method using the sheet
Scuderi et al. Transplantation of autologous cultivated conjunctival epithelium for the restoration of defects in the ocular surface
RU2570041C1 (en) Method for preparing post-burn corneal leukoma for keratoprosthesis
BRPI0708039A2 (en) feeder cells derived from tissue stem cells
JP3935093B2 (en) Highly engrafted regenerative corneal epithelial cell sheet, production method and use thereof
JP2009225675A (en) Feeder cell derived from same kind of skin for preparing epithelial cell sheet
RU2793525C1 (en) Method for surgical treatment of corneal defects in limbal cell insufficiency
RU2177284C1 (en) Surgical method for treating deep cornea defects
EP3399028A1 (en) Method for culturing limbal stem cells by using amniotic slide support
RU2814630C1 (en) Method of treating limbal insufficiency by transplantation of cultured stem cells into intrastromal corneal tunnels
RU2809076C1 (en) Method of obtaining limbal stem cells in collagen hydrogel
Gimeno et al. One-year follow-up of epithelial corneal cell sheet allografts mounted on platelet poor plasma in rabbits
RU2720470C1 (en) Method of producing transplant for treating limbal insufficiency

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20171209