RU2603075C2 - Изменение иммуногенности антигена путем введения эпитопов, узнаваемых nkt-клетками - Google Patents
Изменение иммуногенности антигена путем введения эпитопов, узнаваемых nkt-клетками Download PDFInfo
- Publication number
- RU2603075C2 RU2603075C2 RU2013128744/10A RU2013128744A RU2603075C2 RU 2603075 C2 RU2603075 C2 RU 2603075C2 RU 2013128744/10 A RU2013128744/10 A RU 2013128744/10A RU 2013128744 A RU2013128744 A RU 2013128744A RU 2603075 C2 RU2603075 C2 RU 2603075C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- peptide
- polypeptide
- cells
- cd1d
- nkt cells
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 18
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 18
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 title description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 260
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 167
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 103
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 claims abstract description 87
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 51
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims abstract description 24
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 23
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 20
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 16
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 4
- 239000013566 allergen Substances 0.000 claims description 34
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 33
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 27
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 27
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 24
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 22
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 20
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 19
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 claims description 13
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 11
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 7
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 6
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 5
- 244000045947 parasite Species 0.000 claims description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 4
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 claims description 4
- -1 proto-oncogen Proteins 0.000 claims description 4
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 claims description 3
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 3
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 claims description 3
- 241000589562 Brucella Species 0.000 claims description 2
- 241001185363 Chlamydiae Species 0.000 claims description 2
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 claims description 2
- 241000700586 Herpesviridae Species 0.000 claims description 2
- 241000228402 Histoplasma Species 0.000 claims description 2
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 claims description 2
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 claims description 2
- 208000004554 Leishmaniasis Diseases 0.000 claims description 2
- 241000186781 Listeria Species 0.000 claims description 2
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 claims description 2
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 claims description 2
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 claims description 2
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 claims description 2
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 claims description 2
- 241000223997 Toxoplasma gondii Species 0.000 claims description 2
- 241000223104 Trypanosoma Species 0.000 claims description 2
- 241001492478 dsDNA viruses, no RNA stage Species 0.000 claims description 2
- 239000013568 food allergen Substances 0.000 claims description 2
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 claims description 2
- 241001147420 ssDNA viruses Species 0.000 claims description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 claims description 2
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 claims 1
- 206010048249 Yersinia infections Diseases 0.000 claims 1
- 208000025079 Yersinia infectious disease Diseases 0.000 claims 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 abstract description 23
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 10
- 238000012217 deletion Methods 0.000 abstract description 5
- 230000037430 deletion Effects 0.000 abstract description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000007815 allergy Effects 0.000 abstract description 2
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 77
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 27
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 24
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 21
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 20
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 17
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 16
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 16
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 16
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 16
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 16
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 16
- 102100036013 Antigen-presenting glycoprotein CD1d Human genes 0.000 description 15
- 101000716121 Homo sapiens Antigen-presenting glycoprotein CD1d Proteins 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- 108010061608 Dermatophagoides pteronyssinus antigen p 2 Proteins 0.000 description 11
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 11
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 10
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 9
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 9
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 9
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 8
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 8
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 8
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 7
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 7
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 7
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 7
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 7
- 150000002632 lipids Chemical group 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 7
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 6
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 5
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 5
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 5
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 5
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 5
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 5
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 5
- 241000238740 Dermatophagoides pteronyssinus Species 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 4
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 3
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 3
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 3
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 2
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 2
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 2
- 101001109501 Homo sapiens NKG2-D type II integral membrane protein Proteins 0.000 description 2
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 2
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 2
- 206010062207 Mycobacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 102100022680 NKG2-D type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 2
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 208000027531 mycobacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- VQFKFAKEUMHBLV-BYSUZVQFSA-N 1-O-(alpha-D-galactosyl)-N-hexacosanoylphytosphingosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H]([C@H](O)[C@H](O)CCCCCCCCCCCCCC)CO[C@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQFKFAKEUMHBLV-BYSUZVQFSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700012813 7-aminoactinomycin D Proteins 0.000 description 1
- YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 7-aminoactinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=C(N)C=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 0.000 description 1
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001674044 Blattodea Species 0.000 description 1
- 241000536435 Blomia <angiosperm> Species 0.000 description 1
- 235000004936 Bromus mango Nutrition 0.000 description 1
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000723382 Corylus Species 0.000 description 1
- 235000007466 Corylus avellana Nutrition 0.000 description 1
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 description 1
- 244000241257 Cucumis melo Species 0.000 description 1
- 235000015510 Cucumis melo subsp melo Nutrition 0.000 description 1
- 102000006311 Cyclin D1 Human genes 0.000 description 1
- 108010058546 Cyclin D1 Proteins 0.000 description 1
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 241000238710 Dermatophagoides Species 0.000 description 1
- 241000238713 Dermatophagoides farinae Species 0.000 description 1
- 241000238712 Dermatophagoides microceras Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000238741 Euroglyphus maynei Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 240000009088 Fragaria x ananassa Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- VJLLLMIZEJJZTE-VNQXHBPZSA-N HexCer(d18:1/16:0) Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H]([C@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC)COC1OC(CO)C(O)C(O)C1O VJLLLMIZEJJZTE-VNQXHBPZSA-N 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 241000257303 Hymenoptera Species 0.000 description 1
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 1
- 101900159346 Influenza A virus Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical group C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical group CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000234280 Liliaceae Species 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Chemical group NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Chemical group 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 244000070406 Malus silvestris Species 0.000 description 1
- 240000007228 Mangifera indica Species 0.000 description 1
- 235000014826 Mangifera indica Nutrition 0.000 description 1
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 1
- 240000008790 Musa x paradisiaca Species 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 1
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000000821 Parathyroid Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 244000025272 Persea americana Species 0.000 description 1
- 235000008673 Persea americana Nutrition 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 241000209504 Poaceae Species 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 102000052575 Proto-Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 108700020978 Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 241000238711 Pyroglyphidae Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 235000004789 Rosa xanthina Nutrition 0.000 description 1
- 241000220222 Rosaceae Species 0.000 description 1
- 101000718529 Saccharolobus solfataricus (strain ATCC 35092 / DSM 1617 / JCM 11322 / P2) Alpha-galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 241000235346 Schizosaccharomyces Species 0.000 description 1
- 244000000231 Sesamum indicum Species 0.000 description 1
- 235000003434 Sesamum indicum Nutrition 0.000 description 1
- 241000208292 Solanaceae Species 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 235000009184 Spondias indica Nutrition 0.000 description 1
- 102000000763 Survivin Human genes 0.000 description 1
- 108010002687 Survivin Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 241000255985 Trichoplusia Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 201000009961 allergic asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 description 1
- NNISLDGFPWIBDF-MPRBLYSKSA-N alpha-D-Gal-(1->3)-beta-D-Gal-(1->4)-D-GlcNAc Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC(=O)C)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 NNISLDGFPWIBDF-MPRBLYSKSA-N 0.000 description 1
- 102000006707 alpha-beta T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010087408 alpha-beta T-Cell Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- UCKDWANVYDOPEV-SVYNEFFASA-N alpha-glucuronosylceramide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)C(=O)N[C@H]([C@H](O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)CO[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UCKDWANVYDOPEV-SVYNEFFASA-N 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000021016 apples Nutrition 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 235000021015 bananas Nutrition 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 102000015736 beta 2-Microglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 1
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000011247 coating layer Substances 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 239000007891 compressed tablet Substances 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical class N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000009144 enzymatic modification Effects 0.000 description 1
- 108700010919 epstein-barr-virus proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 201000003444 follicular lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000899 immune system response Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000000126 in silico method Methods 0.000 description 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000012737 microarray-based gene expression Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 1
- 239000007932 molded tablet Substances 0.000 description 1
- 238000012243 multiplex automated genomic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 201000003913 parathyroid carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000017954 parathyroid gland carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M perchlorate Inorganic materials [O-]Cl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000008884 pinocytosis Effects 0.000 description 1
- 235000021018 plums Nutrition 0.000 description 1
- 239000013573 pollen allergen Substances 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 235000021251 pulses Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 201000010174 renal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000013599 spices Nutrition 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 235000021012 strawberries Nutrition 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 208000008732 thymoma Diseases 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000005167 vascular cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/04—Mycobacterium, e.g. Mycobacterium tuberculosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/35—Allergens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4613—Natural-killer cells [NK or NK-T]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
- C07K14/43513—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from arachnidae
- C07K14/43531—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from arachnidae from mites
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2/00—Peptides of undefined number of amino acids; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способам активации NKT-клеток млекопитающих, и может быть использовано в медицине. Способ включает введение в пептид или полипептид, которые не активируют NKT-клетки, по меньшей мере, одного CD1d-связывающего мотива путем введения, замены и/или делеции аминокислоты, где CD1d-связывающий мотив представляет собой [FWTHY]-X2X3-[ILMV]-X5X6-[FWTHY], где Х2, Х3, Х5 и Х6 обозначают любую аминокислоту. Полученный пептид или полипептид может быть использован для предотвращения или лечения инфекций внутриклеточными организмами, для противоопухолевой терапии или предотвращения инфекций или аллергий с помощью вакцинации. Изобретение позволяет получить пептид или полипептид, содержащий искусственную последовательность, способную активировать NKT-клетки млекопитающих. 10 н. и 3 з.п. ф-лы, 4 пр.
Description
Область техники
Настоящее изобретение относится к пептидам или полипептидам, способным рекрутировать и активировать NKT-клетки, и их использованию при лечении инфекций, вызванных внутриклеточными организмами, или опухолей и предотвращению заболеваний с помощью вакцинации.
Уровень техники
Хронические инфекционные заболевания, вызываемые внутриклеточными патогенами, трудно поддаются лечению, поскольку у инфицированных клеток уменьшается поверхностная экспрессия ряда молекул, которые в норме позволили бы иммунной системе специфически распознать упомянутые выше инфицированные клетки. Примерами являются микобактериальные инфекции, при которых инфицированные клетки ингибируют экспрессию молекул главного комплекса гистосовместимости (МНС), тем самым препятствуя узнаванию T-лимфоцитами линии дифференцировки CD8 (посредством узнавания MHC класса I) и лимфоцитами линии дифференцировки CD4 (посредством узнавания MHC класса II). В действительности множество бактерий и вирусов выработали способы, позволяющие избежать узнавания инфицированных клеток.
В некоторой степени аналогичные механизмы позволяют опухолям избежать обнаружения. Некоторые из таких опухолей, по меньшей мере, при воспалительных процессах экспрессируют детерминанты MHC класса II. Недавние эксперименты показали, что даже в случае повышенного CD8 узнавания пептидов, полученных из опухоли презентирующей MHC класса I, например, в результате вакцинации, общее воздействие на рост опухоли остается умеренным.
Как при хронической инфекции внутриклеточными патогенами, так и при опухолях существует острая необходимость разработки новых способов распознавания и уничтожения инфицированных или опухолевых клеток, соответственно.
Современной практикой является вакцинация против инфекционных заболеваний. Тем не менее, в значительном количестве случаев эффективность вакцинации ограничена преимущественной индукцией специфических антител к патогенам и отсутствием или недостаточной активацией иммунных клеток, которые должны распознавать инфицированные клетки. Таким образом, предотвращение вирусных и бактериальных заболеваний путем вакцинации часто имеет ограниченную эффективность. Можно найти примеры эффективности некоторых вакцин против вирусных заболеваний, таких как вирус гриппа, ротавирус или даже полиовирус, по меньшей мере, в некоторых областях земного шара. В ряде случаев антигены, которые предполагалось использовать для вакцинации, являются слабыми иммуногенами, и, вследствие большого разнообразия MHC детерминант, наблюдается значительное варьирование эффективности от одного субъекта к другому.
Вакцинация против аллергических заболеваний также страдает от ограничений, имеющих отношение или к слабой иммуногенности аллергенов, или к отсутствию контроля за рисками, связанными с введением аллергена субъекту, определенно склонному к проявлению аллергических симптомов.
Существует необходимость в более эффективных и более безопасных способах вакцинации как против инфекционных агентов, так и против аллергенов.
Натуральные T клетки-киллеры (NKT) составляют отдельную линию дифференцировки необычных T-лимфоцитов, распознающих антигены, презентируемые молекулой неклассического MHC комплекса CD1d. В настоящее время описано два подкласса NKT-клеток. Наиболее распространены NKT-клетки типа 1, также называемые инвариантными NKT-клетками (iNKT). Они характеризуются наличием альфа-бета T-клеточного рецептора (TCR), состоящего из инвариантной альфа-цепи, Vальфа14 у мыши и Vальфа24 у человека. Данная альфа-цепь соединена с переменным, хотя и ограниченным числом бета-цепей. NKT-клетки типа 2 обладают альфа-бета TCR, но с полиморфной альфа-цепью. Однако очевидно, что существуют другие подклассы NKT-клеток, фенотип которых все еще не полностью определен, но которые имеют общие характерные черты, будучи активируемыми гликолипидами, презентируемыми в тесной связи с молекулой CD1d.
Как правило, NKT-клетки экспрессируют комбинацию рецепторов клеток-натуральных киллеров (NK), включая NKG2D и NK1.1. NKT-клетки являются частью системы врожденного иммунитета, которую можно отличить от системы адаптивного иммунитета по тому факту, что клеткам не требуется размножения перед достижением полной эффекторной способности. Активация NKT-клеток приводит к различным эффектам. Такие клетки высвобождают предварительно образованные медиаторы, включая большой набор цитокинов (включая IL-4, IFN-гамма, IL-21 и IFN-альфа), которые способствуют выработке антител В-клетками, при этом предполагается, что высвобождение цитокинов также может оказывать влияние на CD4+ T клетки (Burrows et al Nature Immunology 2009, 10; 669-671). В контексте настоящего изобретения, увеличение активации B-клеток и активация рестриктированных по главному комплексу гистосовместимости (MHC) класса II CD4+ T клеток было бы целесообразным.
Единица распознавания для NKT-клеток, молекула CD1d, обладает структурой, близко сходной со структурой молекулы MHC класса I, включая наличие бета-2 микроглобулина. Она характеризуется глубоким углублением, окаймленным двумя альфа-цепями и содержащим высокогидрофобные остатки, которые взаимодействуют с липидными цепями. Углубление открыто с обоих концов, что обеспечивает возможность размещения более длинных цепей. Каноническим лигандом CD1d является синтетический альфа-галактозилцерамид (альфа GalCer). Однако было описано множество альтернативных природных лигандов, включая глико- и фосфолипиды, природный липид сульфатид, обнаруженный в миелине, микробные фосфоинозитолманнозид и альфа-глюкуронозилцерамид. Существующее общее мнение сводится к тому (смотри обзоры, например, Matsudaetal, Current Opinion in Immunology 2008, 20: 358-368 и Godfrey et al, Nature reviews Immunology 2010, 11: 197-206), что CD1d связывает только лиганды, содержащие липидные цепи или в большинстве случаев типичную структуру, состоящую из липидного хвоста, углубленного в CD1d, и концевой группы остатка сахара, которая выступает из CD1d.
Пептиды не считаются способными активировать NKT-клетки посредством презентации CD1d. Однако было сделано предположение о том, что длинные гидрофобные пептиды, содержащие объемные аминокислотные остатки, могут связываться с CD1d (Castano et al. Science 1995, 269: 223-226). Наблюдения, сделанные при использовании библиотек фагов, экспрессирующих пептиды произвольных последовательностей с неустановленной физиологической значимостью, обеспечили возможность установления теоретического консенсусного мотива (Castano et al, Science 1995, 269: 223-226 и смотри ниже).
Известно, что Castano et al показали, что активированные клетки представляют собой CD8+ T клетки, а именно рестриктированные по MHC класса I клетки, и не являются NKT-клетками. Эти данные специалисту в этой области техники говорят о том, что отсутствуют доказательства того, что гидрофобные пептиды презентируются молекулами CD1d. Физиологическая значимость заявлений, сделанных Castano et al, в дальнейшем подвергалась сомнению вследствие невозможности вызвать (образование) NKT-клеток по общепринятым протоколам иммунизации (Matsuda et al, Current Opinion in Immunology 2008, 20: 358-368 and Brutkiewicz Journal of Immunology 2006, 177: 769-775). Искусственные системы, такие как иммунизация клетками, трансфицированными для сверхэкспрессии CD1d и загруженными in vitro пептидом, полученным из овальбумина, были способны вызвать образование NKT-клеток. Аналогично внутрикожная иммунизация плазмидной ДНК вместе с мышиным CD1d и ко-стимулирующими молекулами индуцирует цитолитические рестриктированные по CD1d T клетки (Lee et al, Journal of Experimental Medicine 1998, 187: 433-438). Гидрофобные пептиды, содержащие структурный мотив, состоящий из ароматического остатка в положении P1 и P7 и алифатической цепи в положении P4, заявленные Castano et al (Science 269: 223, 1995), содержат основной мотив для CD1d-связывающих эпитопов. Как описано выше, выводы, сделанные Castano et al, не подтверждаются данными.
Нами было неожиданно обнаружено, что пептиды, содержащие гидрофобную аминокислотную последовательность, на самом деле способны вызывать активацию NKT-клеток.
Кроме того, активация NKT-клеток дает возможность увеличения эффективности вакцин против инфекционных заболеваний и против аллергенов благодаря большим количествам цитокинов, секретируемых NKT-клетками, которые способствуют стимулированию выработки В-клеток и активации рестриктированных по классу II T клеток (Burrows et al Nature Immunology 2009, 10: 669-671) и, таким образом, производству антител.
Если бы эпитопы белков могли связываться с CD1d, то введение CD1d-связывающего мотива в белок могло бы повысить активацию NKT-клеток, что могло бы привести или к индукции гибели антиген-презентирующей клетки, что было бы необходимо для лечения инфекций внутриклеточными патогенами или опухолей, или увеличению иммуногенности антигенов, что было бы целесообразно при вакцинации против инфекционных заболеваний или аллергии.
Примеры инфекций внутриклеточными патогенами включают микобактериальные инфекции, внутриклеточные бактериальные инфекции, вирусные заболевания и паразитические инфекции. Примерами опухолей являются любые опухоли, экспрессирующие CD1d. Примерами антигенов, используемых для вакцинации, являются вирусные белки, используемые при противогриппозной вакцинации, пероральной вакцинации против ротавируса или против вируса полиомиелита и вакцинации против аллергена.
Конкретнее, введение CD1d-связывающего мотива может быть использовано, когда желательно повысить «убивающую» активность NKT-клеток по отношению к антиген-презентирующим клеткам или увеличить продукцию цитокинов NKT-клетками и посредством этого увеличить иммуногенность.
Создание нового CD1d связывающего мотива(ов) в пределах природной последовательности пептидов или полипептидов или введение CD1d-связывающего мотива(ов) в такие пептиды или полипептиды для рекрутирования и активации NKT-клеток составляет основу настоящего изобретения.
Раскрытие изобретения
Настоящее изобретение относится к применению пептидов или полипептидов для лечения инфекций внутриклеточными патогенами у субъекта путем увеличения уничтожения клеток, содержащих такие патогены.
Настоящее изобретение также относится к применению пептидов или полипептидов для лечения опухолей у субъекта путем увеличения распознавания и уничтожения опухолевых клеток.
Настоящее изобретение также имеет отношение к применению пептидов или полипептидов в целях вакцинации субъекта антигенами, полученными от инфекционных агентов или аллергенами.
Мы сделали неожиданное наблюдение, что пептиды могут презентироваться молекулами CD1d и активировать NKT-клетки. Активация таких клеток приводит к приобретению цитолитических свойств по отношению к клетке, презентирующей пептид, связанный с CD1d, и высвобождению цитокинов.
В одном аспекте настоящее изобретение имеет отношение к применению, по меньшей мере, одного выделенного иммуногенного пептида или полипептида, полученного из внутриклеточного патогена, который модифицирован путем создания, по меньшей мере, одного CD1d-связывающего мотива в пределах природной последовательности указанного пептида или полипептида, или путем добавления, по меньшей мере, одного CD1d-связывающего мотива к указанному пептиду или полипептиду, в качестве медикамента для лечения у субъекта инфекции, вызванной указанным внутриклеточным патогеном.
В одном аспекте настоящее изобретение также имеет отношение к применению, по меньшей мере, одного выделенного иммуногенного пептида или полипептида, полученного из опухоли, модифицированного путем создания, по меньшей мере, одного нового CD1d-связывающего мотива в пределах природной последовательности указанного пептида или полипептида, или путем введения, по меньшей мере, одного CD1d-связывающего мотива в указанный пептид или полипептид, в качестве медикамента для лечения у субъекта указанной опухоли.
В одном аспекте настоящее изобретение также имеет отношение к применению, по меньшей мере, одного выделенного иммуногенного пептида или полипептида, полученного из внеклеточного инфекционного агента, который модифицирован путем создания, по меньшей мере, одного нового CD1d-связывающего мотива в пределах природной последовательности указанного пептида или полипептида, или путем введения, по меньшей мере, одного CD1d-связывающего мотива в указанный пептид или полипептид, в качестве медикамента для предотвращения указанной инфекции у субъекта.
В одном аспекте настоящее изобретение относится к применению, по меньшей мере, одного выделенного иммуногенного пептида или полипептида, полученного из аллергена, который модифицирован путем создания, по меньшей мере, одного нового CD1d-связывающего мотива в пределах природной последовательности указанного пептида или полипептида, или путем введения, по меньшей мере, одного CD1d-связывающего мотива в указанный пептид или полипептид, в качестве медикамента для предотвращения у субъекта аллергических реакций.
Специалисту в данной области техники должно быть ясно, что создание CD1d-связывающего мотива при любом из вышеуказанных показаний, подразумевает, что, будучи презентируемым молекулой CD1d, экспрессированной антиген-презентирующей клеткой, указанный мотив распознается NKT-клетками и активирует указанные NKT-клетки.
В дополнительном аспекте изобретение также относится к применению, по меньшей мере, одного выделенного пептида или полипептида, полученного из внутриклеточного патогена, опухоли, инфекционного агента или аллергена, который модифицирован путем создания, по меньшей мере, одного нового CD1d-связывающего мотива в пределах природной последовательности указанного пептида или полипептида, или путем добавления, по меньшей мере, одного CD1d-связывающего мотива к указанному пептиду или полипептиду для привлечения и активации NKT-клеток, в качестве медикамента для активации у субъекта цитолитической активности и продукции цитокинов CD4+ NKT-клетками у указанного субъекта.
В любом из вышеперечисленных вариантов использования указанный пептид или полипептид, полученный из внутриклеточного патогена, может представлять собой любой пептид или полипептид, полученный из вирусов, бактерий, микобактерий или паразитов с внутриклеточным жизненным циклом. Вирусы включают ssДНК-, dsДHK- и РНК-вирусы, например, Herpesviridae, Flaviviridae и Picornaviridae, вирусы гриппа, кори и иммунодефицита. Бактерии и микобактерий включают Mycobacterium tuberculosis, другие микобактерий, патогенные для человека или животных, Yersinia, Brucella, Chlamydiae, Mycoplasma, Rickettsiae, Salmonellae и Shigellae. Паразиты включают Plasmodiums, Leishmanias, Trypanosomas, Toxoplasma gondii, Listeria, Histoplasma.
В любом из вышеперечисленных вариантов применения указанный пептид или полипептид, полученный из опухоли, может представлять собой любой пептид или полипептид, полученный из: (1) онкогенов, таких как MAGE, идентифицированный в некоторых меланомах; (2) протоонкогенов, таких как циклин D1, экспрессируемый карциномами мягких тканей, такими как карцинома почки или паращитовидной железы, а также во множественной миеломе; (3) белков, полученных из вирусов, таких как белки вируса Эпштейна-Барр в некоторых карциномах и некоторых лимфомах ходжкинского типа; (4) факторов выживания (surviving factors), являющихся антиапоптотическими факторами, таких как сурвивин или bc12; (5) клонотипических детерминант, таких как идиотипические детерминанты, полученные из B-клеточного рецептора при фолликулярной лимфоме или множественной миеломе или детерминант T-клеточного рецептора в T-клеточных злокачественных опухолях.
В любом из вышеперечисленных вариантов применения указанный пептид или полипептид получают из инфекционного агента, включая вирусы, бактерии и паразитов.
В любом из вышеперечисленных вариантов применения указанный пептид или полипептид, полученный из аллергена, может представлять собой любой пептид или полипептид, полученный из:
- пищевых аллергенов, присутствующих в арахисе, рыбе, например треске, яичном белке, ракообразных, например креветках, молоке, например коровьем молоке, пшенице, злаках, фруктах семейства Розоцветных (яблоках, сливах, клубнике), овощах семейств Лилейных, Крестоцветных, Пасленовых и Зонтичных, лесных орехах, кунжуте, арахисе, соевых бобах и других аллергенов семейства бобовых, пряностей, дыни, авокадо, манго, инжира, бананов и т.д.,
- аллергенов клещей, обитающих в домашней пыли, полученных из Dermatophagoides spp или D. pteronyssinus, D. farinae и D. microceras, Euroglyphus maynei или Blomia sp.,
- аллергенов насекомых, например тараканов или Перепончатокрылых,
- аллергенов пыльцы, в частности пыльцы деревьев, трав и сорняков,
- аллергенов животных, в частности кошек, собак, лошадей и грызунов,
- аллергенов грибов, в частности Aspergillus, Allernaria или Cladosporinmu, и
- производственных аллергенов, присутствующих в таких продуктах, как латекс или амилаза.
Кроме того, изобретение дополнительно включает выделенные вирусные векторы, характеризующиеся тем, что они содержат, по меньшей мере, один пептид или полипептид, полученный из внутриклеточного патогена, из опухоли, из инфекционного агента или из аллергена, в котором, по меньшей мере, один новый CD1d-связывающий мотив создается в пределах природной последовательности указанного пептида или полипептида, или в который вводится, по меньшей мере, один CD1d-связывающий мотив,
Определения
Термин "пептид" при использовании в данном описании относится к молекуле, включающей аминокислотную последовательность, содержащую от 2 до 200 аминокислот, соединенных пептидными связями, но которая может в определенном варианте осуществления содержать структуры, не являющиеся аминокислотами (как, например, сшивающее органическое соединение). Пептиды в соответствии с изобретением могут содержать любые из 20 обычных аминокислот или их модифицированные варианты, или могут содержать не встречающиеся в природе (искусственные) аминокислоты, включенные путем химического пептидного синтеза или с помощью химической или ферментативной модификации. Термин "полипептид" при использовании в данном описании в большинстве случаев относится к более длинным пептидам или белкам.
Термин "эпитоп", использующийся в данном описании, относится к одному или нескольким участкам (которые могут определять конформационный эпитоп) белка, который/ые специфически узнается/ются и связываются антителом или его фрагментом (Fab1, Fab2' и т.д.) или рецептором, присутствующим на клеточной поверхности B или T-клеточного лимфоцита, и который способен, с помощью указанного связывания, индуцировать иммунный ответ.
Термин "антиген", использующийся в данном описании, относится к структуре макромолекулы, содержащей один или более гаптенов и/или содержащей один или более T-клеточных эпитопов. Как правило, указанная макромолекула представляет собой белок или пептид (с или без полисахаридов) или состоит из композиции белков и содержит один или более эпитопов; указанная макромолекула в этом описании может альтернативно называться "антигенный белок" или "антигенный пептид".
Термин "аллерген" относится к специфической разновидности антигена, отличающейся способностью вызывать образование антител IgE изотипа у предрасположенных лиц.
Термин "T-клеточный эпитоп" или "T-клеточная антигенная детерминанта" в контексте настоящего изобретения относится к доминирующему, субдоминирующему или второстепенному T-клеточному эпитопу, т.е. части антигенного белка, которая специфически распознается и связывается рецептором клеточной поверхности T-лимфоцита. Является ли эпитоп доминирующим, субдоминирующим или второстепенным зависит от иммунного ответа, вызванного к данному эпитопу. Доминантность зависит от частоты, с которой такие эпитопы распознаются T-клетками и способны активировать их среди всех возможных T-клеточных эпитопов белка. В частности, T-клеточный эпитоп представляет собой эпитоп, связываемый молекулами MHC класса I или MHC класса II.
Термин "NKT-клеточный эпитоп (детерминанта)" относится к части антигенного белка, которая специфически распознается и связывается рецептором на поверхности клетки T-лимфоцита. В частности, NKT-клеточный эпитоп представляет собой эпитоп, связываемый CD1d молекулами.
Термин "CD4+ эффекторные клетки" относится к клеткам, принадлежащим к подклассу CD4-положительных T-клеток, функцией которых является обеспечение содействия другим клеткам, таким как, например, B-клетки. Эти эффекторные клетки обычно называются Th-клетками (T-хелперные клетки), при наличии различных подклассов, таких как ThO, Th1, Th2 и Thl7 клетки.
Термин "NKT-клетки" относится к клеткам системы врожденного иммунитета, характеризующимся тем фактом, что они несут рецепторы, такие как NK1.1 и NKG2D, и распознают эпитопы, презентируемые молекулой CD1d. В контексте настоящего изобретения NKT-клетки могут принадлежать как к подклассу типа 1 (инвариантные), так и типа 2.
"Молекула CD1d" относится к молекуле, не происходящей от MHC, состоящей из 3 альфа-цепей и антипараллельного набора бета-цепей, сгруппированных в глубокий гидрофобный желобок, открытый с обеих сторон и способный презентировать липиды, гликолипиды или гидрофобные пептиды NKT-клеткам.
Термин "CD1d-связывающий мотив" относится к аминокислотной последовательности, соответствующей общему аминокислотному мотиву [FW]-XX-[ILMV]-XX-[FW], в котором F обозначает фенилаланин, W - триптофан, I - изолейцин, L - лейцин, M - метионин и V - валин. X представляет собой любую аминокислоту. В некоторых случаях, [FW] в положении 7 замещен на T (треонин) или H (гистидин). Термин "предполагаемый CD1d-связывающий мотив" при использовании в данном описании относится к аминокислотной последовательности, которая соответствует общему аминокислотному мотиву [FWHY]-X2X3-[ILMV] или [ILMV]-X2X3-[FWHY], в котором Y обозначает тирозин. В некоторых случаях, предполагаемый мотив может представлять собой [FWHY]-X2-[ILMV] или [ILMV]-X2-[FWHY] или [FWHY]-X2X3X4-[ILMV] или [ILMV]-X2X3X4-[FWHY].
Термин "иммунные расстройства" или "иммунные заболевания" относится к заболеваниям, при которых реакция иммунной системы несет ответственность за или поддерживает нарушение функции или нефизиологическое состояние в организме. Иммунные расстройства в контексте настоящего изобретения относятся к патологии, вызванной инфекционными агентами, и иммунологическому надзору за опухолями.
Термин "субъект" относится к млекопитающим, включая приматов и неприматов.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение предоставляет способы подавления или устранения у субъекта инфекции внутриклеточным патогеном или опухоли, или увеличения иммуногенности антигенов, таких как некоторые инфекционные агенты и аллергены, используемые для вакцинации.
В частности, изобретение предоставляет способы увеличения экспансии (размножения) и функциональной активности CD4+ NKT-клеток. Такие клетки обычно подразделяют на два различных подкласса, а именно NKT-клетки 1 типа, несущие инвариантную TCR альфа-цепь (Vальфа14 у мыши, Vальфа24 у человека), или NKT-клетки типа 2, которые имеют различный набор альфа-цепей. Однако последние данные свидетельствуют об альтернативных подклассах NKT-клеток, которые не соответствуют типу 1 или типу 2. Целью настоящего изобретения является включение этих необычных NKT-клеток, при условии, что они несут CD4 ко-рецептор. В результате презентации антигена, связанного с CD1d, NKT-клетки быстро активируются, приобретают цитолитические свойства и секретируют ряд цитокинов, которые как полагают, являются определяющими при оказании влияния на другие клетки систем как врожденного, так и адаптивного иммунитета.
В контексте настоящего изобретения было неожиданно обнаружено, что пептиды могут презентироваться молекулой CD1d и могут активировать NKT-клетки, распознающие комплекс, образованный CD1d и пептидом. Характерной чертой молекулы CD1d являются две антипараллельные альфа-цепи, образующие углубление, располагающееся на вершине платформы, состоящей из двух антипараллельных бета-цепей. Узкое и глубокое углубление связывает только гидрофобные остатки, и как полагают, представляющие собой исключительно липиды.
В этом углублении может разместиться последовательность из 7 аминокислот, характеризующаяся наличием гидрофобного остатка в положении (P)1 и 7 и алифатического остатка в P4. P1 обязательно является гидрофобным остатком, таким как F, W, H или Y. Однако P7 является необязательным и может содержать другие остатки при условии, что они не являются полярными. Остатки в P4 предпочтительно являются алифатическими, однако это необязательно. Общая последовательность CD1d-связывающего мотива, таким образом, представляет собой [FWTHY]-X2X3-[ILMV]-X5X6-[FWTHY]. Однако специалисту в данной области техники должно быть ясно, что мотив является симметричным, и что P7 может рассматриваться как P1 и P1 может рассматриваться как P7. Общая последовательность CD1d-связывающего мотива предоставляется в описании в качестве общего указания без какого-либо ограничения. Пептиды и полипептиды изобретения определены в соответствии с их способностью активировать NKT-клетки путем презентации CD1d молекулы.
Множество пептидов и полипептидов не несут CD1d-связывающий мотив в естественных условиях. Однако настоящее изобретение также включает пептиды и полипептиды, которые уже несут, по меньшей мере, один CD1d мотив в своей природной последовательности, так как это может оказаться полезным, увеличив количество указанных мотивов для усиления подавления инфекций внутриклеточными патогенами или опухолевых клеток или для увеличения иммуногенности к антигенам инфекционных агентов или аллергенов.
Настоящее изобретение относится к получению пептидов и полипептидов, которые модифицированы путем создания, по меньшей мере, одного нового CD1d-связывающего мотива в пределах природной последовательности указанных пептидов и полипептидов, или путем добавления, по меньшей мере, одного CD1d-связывающего мотива к указанному пептиду или полипептиду, несмотря на то, что они уже несут такой мотив.
В дополнительном аспекте изобретение также включает использование, по меньшей мере, одного выделенного гидрофобного пептида или полипептида, содержащего, по меньшей мере, один CD1d-связывающий мотив, представленный мотивом общей последовательности [FW]-X2X3-[ILMV]-X5X6-[FWTHY] для увеличения у субъекта уничтожения клеток, инфицированных внутриклеточными патогенами, или опухолевых клеток, или для увеличения у указанного субъекта иммуногенности инфекционных антигенов или аллергенов, использованных для вакцинации.
В другом дополнительном аспекте изобретение также включает использование, по меньшей мере, одного выделенного пептида или полипептида, в котором, по меньшей мере, один CD1d-связывающий мотив, представленный последовательностью [FW]-X2X3-[ILMV]-X5X6-[FWTHY], был создан в пределах природной последовательности указанного пептида или полипептида, или был добавлен к указанной природной последовательности для активации у субъекта NKT-клеток.
В другом дополнительном аспекте изобретение также включает использование, по меньшей мере, одного, выделенного гидрофобного пептида или полипептида, содержащего, по меньшей мере, один новый CD1d-связывающий мотив, представленный последовательностью [FW]-X2X3-[ILMV]-X5X6-[FWTHY], в качестве медикамента для подавления у субъекта инфекции внутриклеточными патогенами или опухолевых клеток или для повышения эффективности антигенов из инфекционных агентов или аллергенов для вакцинации.
Дополнительным преимуществом настоящего изобретения является то, что введение ароматических аминокислотных остатков в пептиды или полипептиды приводит к образованию CD1d-связывающих мотивов, которые являются разнородными в том смысле, что указанные мотивы могут связываться с молекулами CD1d всех или подавляющего большинства субъектов. Это связано с тем, что сама молекула CD1d обладает очень ограниченной степенью полиморфизма. В дополнение к этому, учитывая, что полиморфизм антигенного рецептора NKT-клетки является строго ограниченным, специалисту в данной области техники должно быть очевидно, что введение одной и той же ароматической аминокислоты применимо ко всем субъектам, рассматриваемым в отношении применения настоящего изобретения.
Это находится в резком контрасте с пептидными и полипептидными мотивами, связывающимися с молекулами главного комплекса гистосовместимости класса II, когда может быть описано большое количество пептидов, содержащих подходящую последовательность. Это обусловлено минимальными ограничениями, налагаемыми на пептиды, связывающиеся с MHC класса II, и широким полиморфизмом молекул класса II.
Пептиды и полипептиды, являющиеся целью настоящего изобретения, получают, как указано далее:
(1) в некоторых случаях оценивается способность пептида или полипептида активировать NKT-клетки. Это осуществляется путем инкубации указанного пептида или полипептида с клеточной линией, экспрессирующей молекулу CD1d. Примеры таких клеточных линий известны в данной области техники (например, JAWS2 клетки). В предпочтительном варианте осуществления клеточная линия не имеет молекул МНС класса II и для сверхэкспрессии CD1d трансфектируется вирусным вектором, содержащим ДНК-последовательность CD1d, или используются любые другие способы введения гена в клетку, известные в данной области техники. Способы трансдукции клеток известны в данной области техники. Пептид или полипептид вводится при культивировании клеточной линии. Эффективное презентирование пептида или полипептида молекулой CD1d затем оценивается путем измерения активации NKT-клеток. Такие клетки можно получить из периферической крови, например, путем магнитной сепарации и поддерживать в культуре со стимуляторами, такими как альфа-гал-церамид, в присутствии цитокинов, таких как IL-2 и IL-15 или IL-7. Такие методы описаны в данной области техники (смотри, например, Brutkiewicz Journal of Immunology 2006, 177: 769-775). Для оценки активации NKT-клеток может использоваться, например, метод оценки выработки цитокинов. Выбираются пептиды или полипептиды, обнаруживающие отсутствие или только ограниченную активацию NKT-клеток.
(2) затем определяют присутствие в аминокислотной последовательности пептида или полипептида, по меньшей мере, одного мотива, соответствующего последовательности [FWHY]-X2X3[ILMV] или [ILMV]-X2X3-[FWHY] (предполагаемый CD1d-связывающий мотив) с использованием алгоритмов, хорошо известных в данной области техники, таких как http://expasy,org/tools/scanprositc/
В частности, указанные алгоритмы делают возможным предсказание в пределах пептида или полипептида одной или более последовательностей длиной 7 аминокислот, которые соответствуют последовательности [FWHY]-X2X3-[ILMV]-X5X6-[FWHY] и, таким образом, имеют возможность уместиться в углубление молекулы CD1d. Конкретнее, указанные алгоритмы обеспечивают возможность предсказания аминокислотных последовательностей, соответствующих [FW]-X2X3-[ILMV] или [ILMV]-X2X3-[FW].
(3) последовательности аминокислот, установленные при помощи указанных алгоритмов, анализируют и модифицируют заменой аминокислот для увеличения способности связывания с CD1d. В основном, это включает замену аминокислот в положении P1 такими гидрофобными остатками, как F, W, H или Y и/или замену аминокислот в положении P7 на F, W, T, H или Y, в случае необходимости.
(4) дополнительно устанавливают предполагаемый CD1d-связывающий мотив, соответствующий [FWHY]-X2-[ILMV] или [ILMV]-X2-[FWHY], или [FWHY]-X2X3X4-[ILMV] или [ILMV]-X2X3X4-[FWHY]. В таких случаях добавление X3 или делеция X4, соответственно, оказывается выгодной для воссоздания CD1d-связывающего мотива, содержащего алифатический аминокислотный остаток в положении P4. В более общем смысле, предполагаемый CD1d-связывающий мотив может соответствовать общей формуле [FWHY]-R-[ILMV] или [ILMV]-R-[FWHY], где R представляет собой аминокислоту или аминокислотную последовательность.
(5) в некоторых случаях CD1d мотив может быть введен в аминокислотную последовательность пептида или полипептида как с карбоксиконцевого, так и с аминоконцевого конца последовательности или где-либо в пределах природной последовательности пептида или полипептида.
(6) в некоторых случаях пептиды и полипептиды изобретения могут быть модифицированы путем создания, по меньшей мере, одного CD1d-мотива и путем введения, по меньшей мере, одного CD1d-связывающего мотива.
(7) в некоторых случаях синтетический пептид, включающий последовательность, содержащую CD1d-связывающий мотив, тестируется in vitro при помощи клеточной линии, экспрессирующей молекулу CD1d, как описано в (1).
(8) в некоторых случаях способность пептида или полипептида, модифицированная путем замены, вставки или удаления аминокислот, как описано выше, связываться с CD1d тестируется in vitro с использованием тетрамеров молекулы CD1d для обнаружения NKT-клеток, специфичных к такому пептиду. Одним из возможных вариантов является использование флуоресцентно-меченых тетрамеров и обнаружение методом флуоресцентно-активируемой сортировки клеток (facs).
Специалисту в данной области техники должно быть ясно, что замена или добавление аминокислотных остатков, или добавление CD1d-связывающего мотива(ов) может осуществляться с использованием нефизиологических аминокислотных остатков, таких как D-аминокислоты или органического соединения.
Затем пептид или полипептид, содержащий замену, вставку или делецию аминокислоты, получают с использованием методов, известных в данной области техники, для производства рекомбинантных белков при помощи экспрессионных систем, таких как бактериальные клетки, клетки дрожжей, клетки насекомых, растительные клетки или клетки млекопитающих.
В соответствии с настоящим изобретением рассматриваются медикаменты для лечения заболеваний, вызванных внутриклеточными пато генами. Примеры указанных внутриклеточных патогенов включают ssДНК, dsДНК и РНК-вирусы, бактерии и микобактерии и паразиты.
Кроме того, рассматриваются медикаменты для лечения опухолей.
Дополнительно также рассматриваются медикаменты для вакцинации против инфекционных агентов, преимущественно с внеклеточным жизненным циклом, и против аллергенов.
Следует понимать, что любой из пептидов или полипептидов, рассматриваемых в контексте настоящего изобретения, может вводиться в виде гена для переноса генов, который может осуществляться с использованием вирусных векторов или других способов, известных специалисту в данной области техники. В этом случае может оказаться выгодным изменение аминокислотной последовательности собственно вирусного вектора путем добавления CD1d-связывающего мотива, и тем самым увеличение экспрессии трансгена.
В предпочтительном варианте осуществления пептид может состоять из CD1d-связывающего мотива, включающего последовательность [FW]-X2X3-[ILMV]-X5X6-[FWTHY]. В еще более предпочтительном варианте осуществления указанный пептид также содержит фланкирующие аминокислотные остатки как на амино-конце, так и на карбокси-конце или обоих концах указанного пептида. В другом предпочтительном варианте осуществления указанный пептид содержит большие аминокислотные остатки внутри фланкирующих остатков. В следующем варианте осуществления указанный пептид несет, по меньшей мере, один рестриктированный по классу II T-клеточный эпитоп. В другом варианте осуществления указанный пептид содержит фланкирующие аминокислотные остатки, которые являются частью природной последовательности, на основе которой получен пептид.
Медикамент изобретения является, хотя и необязательно, (фармацевтической) композицией, содержащей в качестве активного ингредиента, по меньшей мере, один из пептидов или полипептидов изобретения или генотерапевтический вектор, способный экспрессировать указанные пептиды или полипептиды. Помимо активного ингредиента(ов), такая композиция будет содержать, по меньшей мере, один (фармацевтически приемлемый) разбавитель.
В общем, введение пептидов или полипептидов изобретения увеличивает активацию системы врожденного иммунитета, конкретнее, активацию NKT-клеток, конкретнее, продукцию цитокинов вследствие активации NKT-клеток, конкретнее, цитолитические свойства NKT-клеток.
Способ введения пептидов и полипептидов настоящего изобретения может варьировать в соответствии с показанием и/или природой пептидов и полипептидов. Примерами являются подкожная или внутримышечная инъекция вакцин против инфекционного заболевания и против аллергенов или опухолей или пероральное, назальное или интратрахеальное введение при инфекциях внутриклеточными патогенами. Настоящее изобретение охватывает все другие возможные способы введения, такие как интраназальное, подъязычное, чрескожное, внутримышечное, интраректальное или интравагинальное введение.
Как подробно объясняется в дальнейшем, пептиды или полипептиды настоящего изобретения могут быть получены с помощью химического синтеза, обеспечивающего возможность включения искусственных аминокислот.
Другой аспект настоящего изобретения относится к способам получения пептидов или полипептидов, содержащих искусственную последовательность, способную активировать NKT-клетки, указанный способ включает стадии:
(a) установления пептидов или полипептидов, которые не активируют NKT-клетки или активируют только в ограниченной степени;
(b) введения, по меньшей мере, одного CD1d-связывающего мотива путем добавления, замены и/или удаления аминокислот.
Такие способы включают установление эпитопов, которые могут быть модифицированы путем замещения, добавления или удаления аминокислот для того, чтобы нести CD1d-связывающий мотив. Способы in silico установления предполагаемых NKT-клеточных эпитопов широко известны в данной области техники, а некоторые аспекты поясняются ниже. Например, когда указанный предполагаемый NKT-клеточный эпитоп установлен, получают синтетические пептиды, включающие указанную последовательность. Также синтезируются альтернативные пептиды, которые включают замены, добавления или делеции аминокислот, считающиеся подходящими для увеличения способности аминокислотной последовательности связываться с CD1d. Пептид, включающий природную последовательность, и пептиды с заменами, добавлениями, делениями аминокислот или их комбинации тестируют в отношении их способности связывать CD1d-тетрамеры и/или активировать NKT-клетки путем нагрузки антиген-презентирующих клеток, экспрессирующих CD1d.
Например, получают растворимые молекулы CD1d и создают тетрамеры путем синтеза и/или химического связывания. Молекулы CD1d очищают при помощи аффинной хроматографии. Растворимые молекулы CD1d инкубируют с меченым биотином эталонным пептидом, полученным в соответствии с его сильной связывающей способностью к указанной молекуле CD1d. Пептиды, подлежащие оценке на связывание с CD1d, затем инкубируют в различных концентрациях, а их способность вытеснять эталонный пептид из связи с CD1d вычисляют путем добавления нейтравидина. Описание методов, касающихся пептидов, презентируемых молекулой главного комплекса гистосовместимости класса II, можно найти, например, в Texier et al, (2000) J. Immunology 164, 3177-3184), однако данный метод можно легко применить к рестриктированным по CD Id T-клеточным эпитопам.
В некоторых случаях связывание пептидов изобретения с тетрамерами CD1d можно оценить путем инкубации с NKT-клетками и флуоресцентно-активируемой сортировки клеток (facs). Эти способы хорошо описаны в данной области техники.
Альтернативно, антиген-презентирующие клетки, такие как JAWS2 клетки, которые экспрессируют CD1d, но не экспрессируют главный комплекс гистосовместимости класса II, загружаются пептидами или полипептидами изобретения, и их способность активировать NKT-клетки оценивается по пролиферации NKT-клеток с помощью метода включения меченого тритием тимидина. Специалисту в данной области техники эти методы хорошо известны. Пептиды или полипептиды изобретения обладают средним индексом стимуляции NKT-клеток, большим или равным 2. Пептид, обладающий индексом стимуляции NKT-клеток, большим или равным 2, считается подходящим в качестве кандидата для осуществления настоящего изобретения.
Аминокислотная замена(ы), установленная как подходящая для настоящего изобретения, добавление или удаление указанных аминокислот затем вводится в полноразмерный пептид или полипептид для осуществления на практике данного изобретения.
Пептиды или полипептиды изобретения могут быть получены при помощи рекомбинантной экспрессии, например, в бактериальных клетках (например, Escherichia coli), дрожжевых клетках (например, видах Pichia, видах Hansenula, видах Saccharomyces или Schizosaccharomyces), клетках насекомых (например, из Spodoptera frugiperda или Trichoplusia in), клетках растений или млекопитающих (например, клетках CHO, COS). Соответственно, создание необходимых подходящих векторов экспрессии (включающих дополнительную информацию, такую как промоторная и терминальная последовательности) предполагает использование стандартных технологий рекомбинантных ДНК. Рекомбинантные пептиды или полипептиды изобретения могут быть получены из более крупного белка-предшественника, например, путем ферментативного расщепления сайтов ферментативного расщепления, введенных рядом с N- и/или C-концом пептида или полипептида, с последующей подходящей очисткой.
Принимая во внимание ограниченную длину некоторых пептидов или полипептидов изобретения, их можно получить с помощью химического синтеза пептидов, при котором пептиды получают путем соединения различных аминокислот друг с другом. В частности, химический синтез подходит для введения, например, D-аминокислот, аминокислот с не встречающимися в природе боковыми цепями или природных аминокислот с модифицированными боковыми цепями, таких как метилированный цистеин. Способы химического синтеза пептидов хорошо описаны, и пептиды можно заказать у таких компаний, как Applied Biosystems, и других компаний. Синтез пептидов может осуществляться как твердофазный синтез пептидов (SPPS) или как синтез пептидов в жидкой фазе. Наиболее хорошо известными методами SPPS являются твердофазный синтез пептидов по t-Boc и Fmoc методам, которые хорошо известны специалисту. Кроме того, пептиды можно сшить друг с другом с образованием более длинных пептидов, используя стратегию лигирования (хемоселективное соединение двух незащищенных пептидных фрагментов), как первоначально описано в Kent (Schnolzer & Kent (1992) Int. J. Pept. Protein Res. 40, 180-193) и анализируется, например, в работе Tam et at (2001) Biopolymers 60, 194-205. Это обеспечивает потенциальные возможности для достижения белкового синтеза, выходящего за пределы SPPS. Множество белков размером 100-300 остатков были успешно синтезированы с использованием этого способа.
Физические и химические свойства искомого пептида или полипептида (например, растворимость, устойчивость) проверяются для того, чтобы определить, подходит ли пептид/будет ли подходить пептид для использования в терапевтических композициях. Как правило, оптимизацию осуществляют путем корректировки последовательности пептида. В некоторых случаях пептид можно модифицировать после синтеза (химические модификации, например, введение/удаление функциональных групп) с помощью известных в данной области техники методов.
Получение генетически модифицированных пептидов или полипептидов основывается на способах, хорошо известных специалисту в данной области техники, включая клонирование, сайт-специфический мутагенез и культивирование (growth).
Настоящее изобретение также относится к последовательностям нуклеиновых кислот, кодирующим пептиды или полипептиды изобретения, и способам их использования, например, для рекомбинантной экспрессии или в генной терапии. В частности, указанные нуклеиновокислотные последовательности способны экспрессировать пептиды изобретения.
В генной терапии рекомбинантные молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие пептиды или полипептиды настоящего изобретения, могут быть использованы в виде депротеинизированной ДНК или в липосомах или других липидных системах для доставки в клетки-мишени. Специалистам в данной области техники хорошо известны другие способы прямого переноса плазмидной ДНК в клетки для использования в генной терапии человека, которые предполагают нацеливание ДНК на рецепторы на клетках путем образования комплексов плазмидной ДНК с белками. В самой простой форме перенос гена может осуществляться путем введения малых количеств ДНК в ядро клетки с помощью микроинъекции. Когда рекомбинантные гены вводятся в клетку, они могут распознаваться нормальными клеточными механизмами транскрипции и трансляции, после чего будет экспрессироваться продукт гена. Также были опробованы другие способы введения ДНК в большие количества клеток. Эти способы включают: трансфекцию, при которой ДНК осаждается с фосфатом кальция и попадает в клетки путем пиноцитоза; электропорацию, при которой клетки подвергаются действию высоковольтных импульсов для образования пор в мембране; липофекция/слияние липосом, при которой ДНК упакована в липофильные везикулы, которые сливаются с клеткой-мишенью; и бомбардировку частицами с использованием ДНК, связанной с небольшими «частицами-пулями». Другой способ введения ДНК в клетки представляет собой соединение ДНК с химически модифицированными белками.
Аденовирусные белки способны дестабилизировать эндосомы и увеличивать поглощение ДНК-клетками. Смешивание аденовируса с растворами, содержащими ДНК-комплексы, или связывание ДНК с полилизином, ковалентно связанным с аденовирусом при помощи сшивающих белки агентов, значительно улучшает поглощение и экспрессию рекомбинантного гена. Адено-ассоциированные вирусные векторы также могут использоваться для доставки гена в васкулярные клетки. В данном описании "перенос генов" подразумевает процесс введения чужеродной молекулы нуклеиновой кислоты в клетку, который в большинстве случаев осуществляется для того, чтобы обеспечить возможность экспрессии определенного продукта, закодированного геном. Указанный продукт может включать белок, полипептид, антисмысловую ДНК или РНК или ферментативно активную РНК. Перенос генов может проводиться в культивируемых клетках или путем прямого введения млекопитающим. В другом варианте осуществления предоставляется вектор, содержащий последовательность молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей пептид согласно изобретению. В отдельных вариантах осуществления вектор создается таким образом, что последовательность молекулы нуклеиновой кислоты экспрессируется только в конкретной ткани. Способы достижения тканеспецифической экспрессии гена хорошо известны в данной области техники, например, путем «помещения» последовательности, кодирующей иммуногенный пептид изобретения, под контроль промотора, который специфически направляет экспрессию пептида в одной или более тканей или органов. Векторы экспрессии, полученные на основе вирусов, таких как ретровирусы, вирус осповакцины, аденовирус, адено-ассоциированный вирус, вирусы герпеса, РНК-вирусы или вирус папилломы крупного рогатого скота, могут использоваться для доставки нуклеотидных последовательностей (например, кДНК), кодирующих пептиды, их гомологи или производные в соответствии с изобретением, в ткани-мишени или популяции клеток. Для создания рекомбинантных вирусных векторов, содержащих такие кодирующие последовательности, можно использовать хорошо известные специалистам в данной области техники методы. Альтернативно, в генной терапии могут использоваться сконструированные клетки, содержащие молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую пептид или полипептид в соответствии с изобретением.
Медикамент изобретения, как правило, но не обязательно, представляет собой, (фармацевтическую) композицию, содержащую в качестве активного ингредиента, по меньшей мере, один из пептидов или полипептидов изобретения, генотерапевтический вектор, способный экспрессировать указанный пептид или полипептид. Помимо активного ингредиента(ов), такая композиция будет содержать, по меньшей мере, один (фармацевтически приемлемый) разбавитель. Как правило, фармацевтически приемлемые соединения можно найти, например, в руководстве Фармакопея (Pharmacopeia handbook) (например, США-, Европейская- или Международная Фармакопея). Медикамент или фармацевтическая композиция изобретения обычно содержит (профилактически или терапевтически) эффективное количество активного ингредиента(ов), при этом эффективность имеет отношение к состоянию или нарушению, которое необходимо предотвратить или лечить.
Медикамент или фармацевтическая композиция изобретения может вводиться субъекту как часть профилактического или терапевтического режима, включающего множество введений указанного медикамента или композиции. Указанные множественные введения обычно осуществляются последовательно, а временной интервал между двумя введениями может варьировать и будет определяться природой активного ингредиента и природой состояния, которое необходимо лечить или предотвратить. Количество активного ингредиента, назначенное субъекту, нуждающемуся в единственном введении, также может варьировать и будет зависеть от таких факторов, как физическое состояние субъекта (как например вес и возраст), текущего состояния заболевания, которое необходимо предотвратить или лечить, и опыта лечащего врача, терапевта или медсестры.
Термин "разбавитель" относится, например, к физиологическим растворам. Термин "фармацевтически приемлемый носитель" подразумевает любое вещество или материал, вместе с которым активный ингредиент заключается в состав композиции, предназначенный для облегчения его применения или распространения в место, нуждающееся в лечении, например, путем растворения, диспергирования или диффузии указанной композиции, и/или для облегчения его хранения, транспортировки или перемещения без ухудшения его эффективности. Они включают любые возможные растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые агенты (например, фенол, сорбиновую кислоту, хлорбутанол), изотонические агенты (такие, как сахара или хлорид натрия) и тому подобное. Дополнительные ингредиенты могут быть включены для того, чтобы контролировать продолжительность действия активного ингредиента в композиции. Фармацевтически приемлемый носитель может представлять собой твердое вещество или жидкость или газ, который был сжат с образованием жидкости, т.е. композиции этого изобретения могут использоваться в виде концентратов, эмульсий, растворов, гранулятов, порошков, спрэев, аэрозолей, суспензий, мазей, кремов, таблеток, драже или пудр.
Фармацевтические носители, подходящие для использования в указанных фармацевтических композициях и их составе, хорошо известны специалистам в данной области техники, и не существует особого ограничения для их выбора в пределах настоящего изобретения. Также они могут включать вспомогательные вещества, такие как увлажняющие вещества, диспергирующие вещества, клейкие вещества, связывающие вещества, эмульгирующие вещества, растворители, покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства (например, фенол, сорбиновая кислота, хлорбутанол), изотонические средства (такие как сахара или хлорид натрия) и тому подобное, при условии, что применение всех этих веществ соответствует фармацевтической практике, т.е. носители и вспомогательные вещества не вызывают необратимых повреждений у млекопитающих. Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут быть приготовлены любым известным способом, например путем гомогенного смешивания, нанесения покровного слоя или измельчения активных ингредиентов, с помощью одностадийного или многостадийного метода, вместе с выбранным веществом-носителем и, при необходимости, другими вспомогательными веществами, такими как поверхностно-активные вещества. Они также могут быть приготовлены путем микронизации, например, с целью получения их в форме микросфер, как правило, имеющих диаметр примерно от 1 до 10 мкм, т.е. для производства микрокапсул с контролируемым или пролонгированным высвобождением активных ингредиентов.
Пептиды или полипептиды, их гомологи или производные согласно настоящему изобретению (и все их физиологически приемлемые соли или фармацевтические композиции, включенные в термин "активные ингредиенты") могут вводиться любым способом, соответствующим состоянию, которое необходимо предотвратить или лечить, и подходящим для соединений, в данном случае пептида или полипептида, который должен быть введен. Возможные способы включают регионарный, системный, пероральный (в виде твердой формы или ингаляции), ректальный, назальный, местный (включая глазной, щечный и подъязычный), вагинальный и парентеральный (включая подкожный, внутримышечный, внутривенный, внутрикожный, внутриартериальный, подоболочечный и эпидуральный). Предпочтительный способ введения может варьировать, например, в зависимости от состояния реципиента или от состояния, которое необходимо предотвратить или лечить.
Композиции могут быть удобно представлены в стандартной лекарственной форме и могут быть приготовлены любым из способов, хорошо известных в области фармацевтики. Композиции настоящего изобретения, подходящие для перорального введения, могут быть представлены в виде отдельных единиц, таких как капсулы, облатки или таблетки, каждая из которых содержит заранее установленное количество активного ингредиента; в виде порошка или гранул; в виде раствора или суспензии в водосодержащей жидкости или неводной жидкости; или в виде жидкой эмульсии масло-в-воде или жидкой эмульсии вода-в-масле. Активный ингредиент также может быть представлен в виде шарика, электуария или пасты. Таблетки можно изготавливать прессованием или формовкой необязательно с одним или более вспомогательным ингредиентом. Прессованные таблетки могут быть изготовлены с помощью подходящей машины путем сжатия (прессования) активного ингредиента в сыпучей форме, такой как порошок или гранулы, необязательно смешанной со связующим веществом, смазывающим веществом, инертным разбавителем, консервирующим веществом, поверхностно-активным или диспергирующим веществом. Формованные таблетки могут быть изготовлены с помощью подходящей машины путем формования порошкообразной смеси, смоченной инертным жидким разбавителем. На таблетки необязательно может быть нанесено покрытие или метка, и они могут быть изготовлены таким образом, чтобы обеспечить медленное или контролируемое высвобождение активного ингредиента.
Теперь настоящее изобретение будет проиллюстрировано с помощью следующих примеров, предоставленных без какого-либо ограничения. Кроме того, все ссылки, описанные здесь, включаются в описание путем отсылки.
Примеры
Пример 1. Микобактерии
Mycobacterium tuberculosis является причиной тысяч смертей ежегодно. Единственная доступная вакцина, вакцина на основе бычьей микобактерии Кальмета-Герена (BCG), не является эффективной. Единственным кандидатом для вакцинации является 6 kDa ранний секреторный микобактериальный антиген (ESAT-6), продуцируемый М. tuberculosis, являющийся одним из главных антигенов, распознаваемых как человеком, так и животными, например, мышами.
Последовательность ESAT-6 (SEQ ID1) анализировали при помощи компьютерного алгоритма для выявления CD1d-связывающих мотивов, соответствующих последовательности [FW]-X2X3-[ILMV]-X5X6-[FWTHY]. Таких мотивов обнаружено не было. Мутации с заменой A на F и G на F были введены путем стандартных способов мутагенеза в положениях 14 и 20, соответственно, что привело к образованию CD1d-связывающего мотива, способного активировать NKT-клетки (мутированный ESAT-6; SEQ ID2).
Мышей C57BL/6 иммунизировали ESAT-6 (SEQ ID1) или мутированным ESAT-6 SEQ ID NO: 2 вместе с адъювантом, таким как квасцы. Были сделаны четыре инъекции пептида (50 мкг) с двухнедельными интервалами. Через две недели после последней иммунизации мышей забивали и, сочетая методы центрифугирования в градиенте плотности и сортировки на магнитных шариках, покрытых антителами, выделяли из селезенки CD4+ T лимфоциты.
Затем CD4+ T клетки активировали и наращивали in vitro при помощи JAWS2 клеток в качестве антиген-презентирующих клеток, загруженных мутированным ESAT-6 SEQ ID2. JAWS2 клетки не экспрессируют детерминанты главного комплекса гистосовместимости класса II, таким образом, предотвращая активацию рестриктированных по классу II CD4+ T клеток, однако JAWS2 клетки экспрессируют CD1d и, таким образом, могут использоваться для определения способности пептидов активировать NKT-клетки. Было отмечено, что только NKT-клетки, полученные от мышей, иммунизированных мутированным ESAT-6 (SEQ ID2) активируются загруженными JAWS2 клетками, в то время как NKT-клетки от мышей, иммунизированных ESAT-6 (SEQ ID1), не активируются.
Для оценки цитолитических свойств CD4+ NKT-клеток, активированных мутированным ESAT-6 SEQ ID2, JAWS2 клетки анализировали через 18 час инкубации с NKT-клетками с целью индукции апоптоза. Так, связывание аннексина V с поверхностью апоптотических клеток обнаруживается путем добавления флуоресцентно-меченого аннексина V. Результаты указывают на то, что JAWS2 клетки, инкубированные с NKT-клетками, полученными от мыши, иммунизированной мутированным ESAT-6 (SEQ 1D2), подвергаются апоптозу.
Таким образом, эти результаты показывают, что единичные аминокислотные замены, создающие CD1d-связывающий мотив, являются достаточными для того, чтобы вызвать активацию NKT-клеток и апоптоз антиген-презентирующих клеток.
Пример 2. EG7 опухоль
Опухолевые клетки EG7 (H-2b) получены из тимомы, трансфектированной овальбумин-(оуа)-содержащим конструктом. CD1d-рестриктированный ova эпитоп презентируется такими клетками, однако известно, что этого недостаточно для инициации NKT-активации и уничтожения опухолевых клеток (Castano et al, Science 1995, 269: 223-226).
При помощи компьютерных алгоритмов был проведен поиск с целью выявления альтернативных эпитопов, которые могут быть изменены путем аминокислотного замещения с целью создания новых CD1d-связывающих мотивов. Были обнаружены две последовательности в положениях 16-22 (FKELKVH) и 181-187 (FKGLWEK). H22 и K187 были изменены на F в последовательности ova, тем самым образуя белок SEQ ID4.
Иммунизацию мышей ova SEQ ID4 проводили с использованием 50 мкг ova в квасцах, который вводили подкожно за 4 раза, разделенных интервалом 10 дней. Контрольную группу иммунизировали ova с природной последовательностью (SEQ ID3). Затем всем мышам прививали 106 клеток опухоли EG7 с помощью инъекции в бок, причем рост опухоли продолжался в течение некоторого времени. У мышей, предварительно иммунизированных ova SEQ ID4, наблюдалось отторжение опухоли, в то время как у контрольных мышей, предварительно иммунизированных ova с природной SEQ ID3, - не наблюдалось.
Уничтожение EG7 клеток in vitro оценивали с использованием NKT-клеток, полученных из селезенки при помощи сортировки на магнитных шариках. NKT-клетки предварительно стимулировали in vitro в течение 4 час антиген-презентирующими клетками, загруженными ova SEQ ID4. Мембраны EG7 клеток были помечены 1 мкМ DiOCig (3,3'-диоктадецикло-оксакарбоцианин перхлорат от Invitrogen). Затем EG7 клетки (1×105 на лунку) культивировали в течение 18 час при 37°C в присутствии NKT-клеток, полученных от каждой из 2 групп мышей, в отношении, равном от 1/1 до 1/5 (EG7 клетки к NKT-клеткам). Через 18 час клетки собирали, окрашивали Аннексином V и 7-AAD, следуя инструкциям производителя (Apoptosis Detection kit; BD Biosciences), и анализировали на проточном цитометре FACSCantoII (BD Biosciences). Результаты показывают, что у EG7 клеток, инкубированных с NKT-клетками, полученными от мышей, иммунизированных ova SEQ ID4, наблюдается индукция апоптоза, в то время как NKT-клетки, полученные от контрольных мышей, иммунизированных ova SEQ ID3, не вызывают значительной степени апоптоза у опухолевых клеток.
Пример 3. Вирус гриппа
Гемагглютинин вируса гриппа является основным антигеном, используемым в целях вакцинации. Эффективность вакцинации, однако ограничена относительно слабой иммуногенностью гемагглютинина.
Последовательность гемагглютинина (SEQ ID5) содержит 3 последовательности, подходящие для осуществления мутации с целью получения аминокислотных последовательностей, кодирующих CD1d-связывающий мотив, имеющий конфигурацию [FW]-X2X3-[ILMV]-X5X6-[FWTHY]. Была получена кДНК гемагглютинина, и методами стандартного мутагенеза были введены 3 мутации для замены аминокислоты в положении 7 CD1d-связывающего мотива на F (фенилаланин). Эти мутации соответствовали V314F, A348F и K459F, в которых валин, аланин и лизин в положениях 314, 348 и 459, соответственно, были изменены на фенилаланин. Мутированный гемагглютинин SEQ ID6 получали при помощи рекомбинантной технологии.
Мышей 4 раза иммунизировали гемагглютинином SEQ ID5 или SEQ ID6 подкожным способом с 1-недельными интервалами. Через семь дней после последней иммунизации мышей забивали и получали CD4+ T клетки из селезенки с использованием сортировки на магнитных шариках. Клетки JAWS2 загружали мутированным гемагглютинином SEQ ID6 путем инкубации в течение 18 час при комнатной температуре. Затем клетки промывали и инкубировали в присутствии CD4+ T клеток, полученных от мышей, иммунизированных или гемагглютинином SEQ ID5 или гемагглютинином SEQ 1D6. Было отмечено, что значительная часть NKT-клеток активируется, если их получают от мышей, иммунизированных гемагглютинином SEQ ID6, но не гемагглютинином SEQ IDS, показывая, что иммунизация гемагглютинином SEQ ID6 вызывала экспансию NKT-клеток in vivo.
Затем мутированный гемагглютинин SEQ ID6 используется для вакцинации. Было отмечено, что мыши, иммунизированные гемагглютинином SEQ ID6, вырабатывают более высокие концентрации антител, специфичных к гемагглютинину.
Пример 4. Аллерген
В настоящее время вакцинация против аллергических заболеваний ограничена относительно слабой иммуногенностью аллергенов. Способы, при помощи которых может быть достигнута увеличенная продукция аллерген-специфических IgG антител, чрезвычайно необходимы.
Der p 2 является одним из главных аллергенов клеща домашней пыли, D. pteronyssinus, связанного с возникновением аллергического ринита и астмы по всему миру. Поиск при помощи компьютерных алгоритмов не выявил в пределах последовательности Der p 2 последовательности, несущей CD1d-связывающий мотив. Мотив, состоящий из 7 аминокислот (FAALAAF), был добавлен на карбоксильный конец последовательности Der p 2. Такая последовательность кодирует CD1d-связывающий мотив, соответствующий последовательности [FW]-X2X3-[ILMV]-X5X6-[FWTHY|.
Известно, что главный T-клеточный эпитоп, презентируемый комплексами гистосовместимости класса II, располагается в положениях 24-35 зрелой молекулы Der p 2.
Две группы мышей C57BL/6 (H-2b) иммунизировали или нативным Der p 2 (SEQ ID7), или нативным Der p 2, отличающимся добавленным CD1d-связывающим мотивом (SEQ ID8), используя 50 мкг белка в квасцах, инъецированного подкожно 4 раза с интервалами 10 дней. Затем мышей обескровливали и определяли концентрацию специфических анти-Der p 2 антител методом прямого связывания ELISA. Было отмечено, что концентрация антител была в 10 раз выше в группе мышей, иммунизированных Der p 2 SEQ IDS.
Кроме того, были получены CD4+ T клетки из селезенки каждой мыши из двух групп с использованием сортировки на магнитных шариках. Такие клетки (106 клеток/лунку) культивировали с дендритными клетками, полученными от сингенных CD1d КО мышей. Такие клетки могут активировать только рестриктированные по классу II CD4+ T клетки. Было отмечено, что клетки, полученные от мышей, иммунизированных Der p 2 SEQ ID8, пролиферируют с индексом стимуляции в 4 раза более высоким, чем клетки, полученные от мышей, иммунизированных нативным Der p 2 (SEQ ID7).
Таким образом, был сделан вывод, что наличие CD1d-связывающего мотива увеличивает продукцию специфических антител и пролиферацию рестриктированных по классу II CD4+ T-клеток.
Должно быть понятно, что предоставленные в описании примеры не являются исчерпывающими и что комбинации белков или пептидов, содержащих разное количество аминокислотных замен или делеций для создания новых CD1d-связывающих мотивов или содержащих разное количество введенных CD1d-связывающих мотивов, предусматриваются в рамках настоящего изобретения.
Список последовательностей
SEQ ID1 ESAT-6 (микробактерия)
SEQ ID2 мутированный ESAT-6 (мутации подчеркнуты)
SEQ ID3 овальбумин (курица)
SEQ ID4 мутированный овальбумин (мутации подчеркнуты)
SEQ ID5 гемагглютинин вируса гриппа A
SEQ ID6 мутированный гемагглютинин вируса гриппа A (мутации подчеркнуты)
SEQ ID7 аллерген Der p 2 (pyroglyphidae, Dermatophagoides pteronyssinus, Европейский клещ домашней пыли)
SEQ IDS модифицированный аллерген Der p 2 (мотив CD1d подчеркнут)
Claims (13)
1. Способ получения пептида или полипептида, содержащих искусственную последовательность, способную активировать NKT-клетки млекопитающих, указанный способ, включающий стадии:
(a) установления пептида или полипептида, которые не активируют NKT-клетки;
(b) введения в указанный пептид или полипептид, которые не активируют NKT-клетки, по меньшей мере, одного CD1d-связывающего мотива путем введения, замены и/или делеции аминокислоты, где CD1d-связывающий мотив представляет собой [FWTHY]-X2X3-[ILMV]-X5X6-[FWTHY], где Х2, Х3, Х5 и Х6 обозначают любую аминокислоту;
(c) продукции указанного пептида или полипептида, содержащих, по меньшей мере, один CD1d-связывающий мотив и способных активировать NKT-клетки млекопитающих.
(a) установления пептида или полипептида, которые не активируют NKT-клетки;
(b) введения в указанный пептид или полипептид, которые не активируют NKT-клетки, по меньшей мере, одного CD1d-связывающего мотива путем введения, замены и/или делеции аминокислоты, где CD1d-связывающий мотив представляет собой [FWTHY]-X2X3-[ILMV]-X5X6-[FWTHY], где Х2, Х3, Х5 и Х6 обозначают любую аминокислоту;
(c) продукции указанного пептида или полипептида, содержащих, по меньшей мере, один CD1d-связывающий мотив и способных активировать NKT-клетки млекопитающих.
2. Способ по п. 1, согласно которому указанные пептиды или полипептиды, которые не активируют NKT-клетки, содержат, по меньшей мере, один потенциальный CD1d-связывающий мотив, выбранный из [FWHY]-R-[ILMV] и/или [ILMV]-R-[FWHY], где R представляет собой аминокислоту или аминокислотную последовательность.
3. Способ по п. 2, в котором указанный, по меньшей мере, один потенциальный CD1d-связывающий мотив выбирают из аминокислотной последовательности [FWHY]-X2X3-[ILMV], [ILMV]-X2X3-[FWHY], [FWHY]-X2X3X4-[ILMV], [ILMV]-X2X3X4-[FWHY], [FWHY]-X2-[ILMV], [ILMV]-X2-[FWHY] или любой их комбинации, где Х2, Х3, X4 обозначает любую аминокислоту.
4. Способ по пп. 1-3, согласно которому пептид или полипептид, которые не активируют NKT-клетки, получают из внутриклеточного патогена, опухоль - ассоциированного антигена, антигена инфекционного агента или аллергена, где указанный внутриклеточный патоген представляет собой ssДНК, dsДНК и РНК-вирус, например, Herpesviridae, Flaviviridae и Picornaviridae, вирусы гриппа, кори и иммунодефицита, где указанные бактерии и микобактерии представляют собой Mycobacterium tuberculosis, другие микобактерии, патогенные для человека или животных, Yersiniosis, Brucella, Chlamydiae, Mycoplasma, Rickettsiae, Salmonellae и Shigellae, паразиты представляют собой Plasmodiums, Leishmanias, Trypanosomas, Toxoplasma gondii, Listeria, Histoplasma, где указанная опухоль представляет собой онкоген, протоонкоген, белки, полученные из вируса, «факторы выживания» или клонотипическую детерминанту, где указанный инфекционный агент представляет собой вирус, бактерию или паразит, где указанный аллерген представляет собой ингаляционный аллерген, контактный аллерген, системный аллерген или пищевой аллерген.
5. Пептид или полипептид, обладающий способностью вызывать активацию NKT клеток, полученный согласно способу по п. 4, характеризующийся тем, что пептид или полипептид содержит, по меньшей мере, один дополнительный CD1d-связывающий мотив, и получен путем химического синтеза или рекомбинантной экспрессии.
6. Пептид или полипептид, обладающий способностью вызывать активацию NKT клеток, полученный согласно способу по п. 4, где последовательности, фланкирующие указанный CD1d-связывающий мотив в указанном пептиде или полипептиде дополнительно содержат объемные аминокислотные остатки.
7. Пептид или полипептид, обладающий способностью вызывать активацию NKT клеток, полученный согласно способу по п. 4, где последовательности, фланкирующие указанный CD1d-связывающий мотив в указанном пептиде или полипептиде дополнительно содержат, по меньшей мере, один рестриктированный по классу II Т-клеточный эпитоп.
8. Применение пептида или полипептида, полученного согласно способу по п. 1, в качестве медикамента для активации NKT клеток млекопитающих.
9. Применение, по меньшей мере, одного пептида или полипептида по п. 5 в качестве медикамента для предотвращения или лечения у субъекта инфекции внутриклеточным патогеном.
10. Применение, по меньшей мере, одного пептида или полипептида по п. 5 в качестве медикамента для лечения опухоли.
11. Применение, по меньшей мере, одного пептида или полипептида по п. 5 в качестве медикамента для предотвращения или лечения инфекции.
12. Применение, по меньшей мере, одного пептида или полипептида по п. 5 в качестве медикамента для предотвращения или лечения аллергических заболеваний.
13. Вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую пептид или полипептид согласно п. 5.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP10192564 | 2010-11-25 | ||
EP10192564.2 | 2010-11-25 | ||
PCT/EP2011/070907 WO2012069572A1 (en) | 2010-11-25 | 2011-11-24 | Modulation of antigen immunogenicity by addition of epitopes recognized by nkt cells |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2013128744A RU2013128744A (ru) | 2014-12-27 |
RU2603075C2 true RU2603075C2 (ru) | 2016-11-20 |
Family
ID=43827717
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013128744/10A RU2603075C2 (ru) | 2010-11-25 | 2011-11-24 | Изменение иммуногенности антигена путем введения эпитопов, узнаваемых nkt-клетками |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US11236127B2 (ru) |
EP (1) | EP2643346B1 (ru) |
JP (1) | JP2014501726A (ru) |
CN (1) | CN103517917B (ru) |
AU (1) | AU2011333753B2 (ru) |
BR (1) | BR112013013044A2 (ru) |
CA (1) | CA2818536C (ru) |
DK (1) | DK2643346T3 (ru) |
ES (1) | ES2689141T3 (ru) |
RU (1) | RU2603075C2 (ru) |
WO (1) | WO2012069572A1 (ru) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB201319160D0 (en) * | 2013-10-30 | 2013-12-11 | Imcyse Sa | Methods for induction of antigen-specific regulatory t cells |
CN104031125B (zh) * | 2014-06-27 | 2016-10-05 | 顾玉奎 | 自然杀伤t细胞活化剂多肽及其应用 |
CN104031126B (zh) * | 2014-06-27 | 2016-10-12 | 顾玉奎 | 一种自然杀伤t细胞活化剂多肽及其应用 |
KR20180134935A (ko) * | 2016-04-19 | 2018-12-19 | 임시스 에스에이 | 신규 면역원성 CD1d 결합 펩티드 |
EP3388447A1 (en) | 2017-04-14 | 2018-10-17 | Imnate Sarl | Methods to produce peptides, polypeptides or cells for modulating immunity |
EP3936867A1 (en) | 2020-07-06 | 2022-01-12 | Imnate Sarl | Cd1 peptide-epitope for use in the treatment of a disease caused by an intracellular pathogen |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010037395A2 (en) * | 2008-10-01 | 2010-04-08 | Dako Denmark A/S | Mhc multimers in cancer vaccines and immune monitoring |
WO2010037402A1 (en) * | 2008-10-02 | 2010-04-08 | Dako Denmark A/S | Molecular vaccines for infectious disease |
RU2008140732A (ru) * | 2006-03-15 | 2010-04-20 | Новартис Вэксинес Энд Дайэгностикс Срл (It) | КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ИММУНИЗАЦИИ С ПРИМЕНЕНИЕМ ЛИГАНДОВ CD1d |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002019968A2 (en) | 2000-09-08 | 2002-03-14 | University Of Maryland Biotechnology Institute | Genetically engineered co-expression dna vaccines, construction methods and uses thereof |
EP1812015B1 (en) * | 2004-11-02 | 2012-01-04 | The Board of Trustees of Leland Stanford Junior University | Methods for inhibition of nkt cells |
EP2370819A4 (en) | 2008-12-01 | 2012-09-19 | Univ Johns Hopkins | IMMUNAL-BASED DIAGNOSIS AND TREATMENT METHOD FOR CANCER |
-
2011
- 2011-11-24 CN CN201180064048.3A patent/CN103517917B/zh active Active
- 2011-11-24 AU AU2011333753A patent/AU2011333753B2/en active Active
- 2011-11-24 EP EP11787875.1A patent/EP2643346B1/en active Active
- 2011-11-24 WO PCT/EP2011/070907 patent/WO2012069572A1/en active Application Filing
- 2011-11-24 DK DK11787875.1T patent/DK2643346T3/en active
- 2011-11-24 ES ES11787875.1T patent/ES2689141T3/es active Active
- 2011-11-24 JP JP2013540355A patent/JP2014501726A/ja active Pending
- 2011-11-24 CA CA2818536A patent/CA2818536C/en active Active
- 2011-11-24 US US13/989,351 patent/US11236127B2/en active Active
- 2011-11-24 RU RU2013128744/10A patent/RU2603075C2/ru active
- 2011-11-24 BR BR112013013044A patent/BR112013013044A2/pt not_active Application Discontinuation
-
2022
- 2022-01-03 US US17/567,716 patent/US20220259262A1/en active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2008140732A (ru) * | 2006-03-15 | 2010-04-20 | Новартис Вэксинес Энд Дайэгностикс Срл (It) | КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ИММУНИЗАЦИИ С ПРИМЕНЕНИЕМ ЛИГАНДОВ CD1d |
WO2010037395A2 (en) * | 2008-10-01 | 2010-04-08 | Dako Denmark A/S | Mhc multimers in cancer vaccines and immune monitoring |
WO2010037402A1 (en) * | 2008-10-02 | 2010-04-08 | Dako Denmark A/S | Molecular vaccines for infectious disease |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
CASTANO A.R. ET AL., PEPTIDE BINDING AND PRESENTATION BY MOUSE CD1, SCIENCE, 1999, v.269, n.5221, p.223-226. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ES2689141T3 (es) | 2018-11-08 |
US20220259262A1 (en) | 2022-08-18 |
EP2643346B1 (en) | 2018-08-29 |
US11236127B2 (en) | 2022-02-01 |
US20130302375A1 (en) | 2013-11-14 |
DK2643346T3 (en) | 2018-10-29 |
WO2012069572A1 (en) | 2012-05-31 |
RU2013128744A (ru) | 2014-12-27 |
CA2818536A1 (en) | 2012-05-31 |
CN103517917B (zh) | 2016-10-12 |
CA2818536C (en) | 2020-04-28 |
AU2011333753B2 (en) | 2016-06-30 |
JP2014501726A (ja) | 2014-01-23 |
EP2643346A1 (en) | 2013-10-02 |
CN103517917A (zh) | 2014-01-15 |
BR112013013044A2 (pt) | 2016-09-13 |
AU2011333753A1 (en) | 2013-06-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6763832B2 (ja) | 感染症、自己免疫疾患、同種因子に対する免疫応答、アレルギー性疾患、腫瘍、移植片拒絶反応、および、遺伝子療法または遺伝子ワクチン接種のために使用されるウイルスベクターに対する免疫応答の予防および/または治療における使用のための免疫原性ペプチド | |
CN109069605B (zh) | 新免疫原性CD1d结合肽 | |
KR102556485B1 (ko) | 신규 면역원성 펩티드 | |
JP6931598B2 (ja) | Cd4+t細胞応答を向上するための修飾されたエピトープ | |
US20220259262A1 (en) | Modulation of antigen immunogenicity by addition of epitopes recognized by nkt cells | |
RU2598247C2 (ru) | Изменение иммуногенности антигена путем устранения эпитопов, узнаваемых nkt-клетками |