RU2575831C2 - Получение трансплантата из дермы животного с применением раствора сульфида натрия - Google Patents
Получение трансплантата из дермы животного с применением раствора сульфида натрия Download PDFInfo
- Publication number
- RU2575831C2 RU2575831C2 RU2013137859/15A RU2013137859A RU2575831C2 RU 2575831 C2 RU2575831 C2 RU 2575831C2 RU 2013137859/15 A RU2013137859/15 A RU 2013137859/15A RU 2013137859 A RU2013137859 A RU 2013137859A RU 2575831 C2 RU2575831 C2 RU 2575831C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dermis
- treated
- stage
- derma
- animal
- Prior art date
Links
- GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N Sodium sulfide Chemical compound [Na+].[Na+].[S-2] GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 23
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 24
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 21
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims abstract description 20
- 206010019909 Hernia Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 210000004207 Dermis Anatomy 0.000 claims description 78
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 30
- 210000003491 Skin Anatomy 0.000 claims description 29
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 21
- 229910052979 sodium sulfide Inorganic materials 0.000 claims description 21
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 17
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 claims description 10
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 10
- 210000002615 Epidermis Anatomy 0.000 claims description 7
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M Lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L MgCl2 Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N iso-propanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 210000003815 Abdominal Wall Anatomy 0.000 claims description 3
- 229910001508 alkali metal halide Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910001615 alkaline earth metal halide Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 3
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims description 3
- 229910001514 alkali metal chloride Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910001617 alkaline earth metal chloride Inorganic materials 0.000 claims description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L cacl2 Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 2
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 claims description 2
- 208000002847 Surgical Wound Diseases 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 5
- 230000003187 abdominal Effects 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 description 29
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 10
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 6
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 6
- 229960005188 collagen Drugs 0.000 description 6
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 4
- 210000002808 Connective Tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 description 3
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 3
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 230000003204 osmotic Effects 0.000 description 2
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 210000000988 Bone and Bones Anatomy 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L Calcium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000001590 Congenital Abnormality Diseases 0.000 description 1
- 210000001624 Hip Anatomy 0.000 description 1
- 210000003041 Ligaments Anatomy 0.000 description 1
- VTHJTEIRLNZDEV-UHFFFAOYSA-L Magnesium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Mg+2] VTHJTEIRLNZDEV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004303 Peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 210000002435 Tendons Anatomy 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 229910001854 alkali hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001860 alkaline earth metal hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminum Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 1
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000032798 delamination Effects 0.000 description 1
- 230000035617 depilation Effects 0.000 description 1
- 230000000249 desinfective Effects 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000347 magnesium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910001862 magnesium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic Effects 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 1
- 238000009999 singeing Methods 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming Effects 0.000 description 1
- 238000004642 transportation engineering Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Abstract
Группа изобретений относится к области фармацевтики и касается способа получения трансплантата из дермы животного, предпочтительно из дермы свиньи, включающего в себя следующие стадии: a) подготовка дермы животного; b) обработка дермы животного водным щелочным раствором, содержащим от 0,01 до 1,5% масс. сульфида натрия; c) одно- или многократная обработка дермы водным солевым раствором; d) одно- или многократная обработка дермы водным раствором пероксида водорода; e) обезвоживание дермы. Другим объектом изобретения является трансплантат, получаемый указанным способом, и применение его в хирургии грыжи или для лечения расхождения краев операционной раны брюшной стенки. Группа изобретений обеспечивает простоту и быстроту способа получения трансплантата, который в значительной степени соответствует нативной структуре дермы. 3 н. и 9 з.п. ф-лы, 1 табл.,1 пр.
Description
Настоящее изобретение относится к способу получения трансплантата из дермы животного, в частности из дермы свиньи, а также к полученному таким образом трансплантату.
Тканевые трансплантаты используют во многих случаях применения, например, при стоматологических операциях для восстановления челюстной кости или для регенерации мягких тканей, для восполнения костных дефектов в случае опухоли, при операциях по восстановлению сухожилий и связок, а также при исправлении врожденных дефектов. Кроме того, они могут быть использованы также при операциях на позвоночнике, при ревизии протезов тазобедренного сустава или при лечении дефектов брюшной стенки.
Принципиально различают три вида тканевых трансплантатов, а именно аутогенные тканевые трансплантаты, в случае которых донор и реципиент представляют собой одно и то же лицо, причем трансплантат, как правило, применяют на месте, отличающемся от места отбора, аллогенные тканевые трансплантаты, в случае которых донор и реципиент представляют собой разные особи одного вида, а также ксеногенные тканевые трансплантаты, в случае которых донор, например, свинья, относится к другому виду, чем реципиент, например, человек. Вследствие ограниченной возможности использования аллогенных и особенно аутогенных тканевых трансплантатов ксеногенные тканевые трансплантаты представляют особенный интерес. При этом особенно предпочтительными являются тканевые трансплантаты, полученные от свиньи, например из дермы свиньи, так как они физиологически лучше соответствуют характеристикам тела человека, чем, например, тканевые трансплантаты, полученные от приматов. При этом имеется почти неограниченная возможность использования свиной кожи.
Существенный аспект при получении тканевых трансплантатов состоит в том, чтобы в готовом трансплантате сохранить в возможно большей степени нативную структуру ткани, с тем чтобы он, например, в отношении внутренней поверхности, удобства применения и эластичности по меньшей мере в значительной степени сохранял свойства нативной ткани. Однако известными в настоящее время способами невозможно получать трансплантаты из дермы животного, в частности из дермы свиньи или свиной дермы, с удовлетворительным сохранением нативной структуры ткани. Как правило, такие тканевые трансплантаты получают способом, по которому ткань сначала обрабатывают 1 M раствором гидроксида натрия, чтобы разрыхлить структуру ткани, удалить из дермы щетину и обезволосить дерму. Однако эта стадия обработки сильно повреждает коллагеновый матрикс кожи, так что нативная структура дермы значительно ухудшается.
Таким образом, задача настоящего изобретения состоит в разработке способа получения трансплантата, по которому из дермы животного, предпочтительно из дермы свиньи, просто, быстро и с низкими затратами может быть получен тканевый трансплантат, морфология которого по меньшей мере в значительной степени соответствует нативной структуре дермы.
По настоящему изобретению эта задача решается благодаря способу получения трансплантата из дермы животного, предпочтительно из дермы свиньи, в который входят следующие стадии:
a) подготовка дермы животного;
b) обработка дермы животного водным раствором, содержащим сульфид натрия;
c) одно- или многократная обработка дермы водным солевым раствором;
d) при необходимости одно- или многократная обработка дермы водным раствором пероксида водорода;
e) обезвоживание дермы.
Это решение основано на знании того факта, что при обработке дермы животного раствором, содержащим сульфид натрия, так же, как при обработке сравнительно концентрированным раствором гидроксида натрия, может достигаться разрыхление структуры ткани, удаление щетины из матрикса дермы и обезволашивание дермы, при этом неожиданно таким образом, что в отличие от обработки сравнительно концентрированным раствором гидроксида натрия повреждение кожного коллагенового матрикса дермы почти полностью предотвращается. На этой основе способом по настоящему изобретению из дермы животного просто, быстро и с низкими затратами может быть получен стерильный и не содержащий клеток ксеногенный трансплантат, который в отношении своей морфологической структуры по меньшей мере в значительной степени соответствует нативной структуре ткани. В частности, в случае способа по настоящему изобретению можно отказаться от химической обработки ткани химическими агентами, вызывающими перекрестное сшивание содержащихся в коллагене протеинов с потерей нативной структуры ткани, такими, как формальдегид, глутаровый альдегид и т.п. Такое перекрестное сшивание протеинов ткани представляет собой недостаток, так как такое перекрестное сшивание отрицательно влияет на свойства врастания трансплантата в ткань реципиента. Во многих случаях такое перекрестное сшивание белков может вести даже к тому, что трансплантат вообще не врастает в ткань реципиента, а капсулируется, не выполнив ранее предусмотренной функции стабилизации ткани.
Для надежного предотвращения образования сероводорода при осуществлении способа по настоящему изобретению в предпочтительном варианте настоящего изобретения предложено на технологической стадии b) применять водный щелочной раствор, содержащий сульфид натрия. С применяемым в этом варианте осуществления щелочным раствором, содержащим сульфид натрия и имеющим в любом случае значение pH больше 7, и предпочтительно с соответствующими растворами, значение pH которых составляет по меньшей мере 10 и предпочтительно по меньшей мере 12, принципиально могут быть получены хорошие результаты.
В настоящем изобретении принципиально не ограничено количество сульфида натрия, содержащегося в водном растворе, применяемом на технологической стадии b). Водный раствор, применяемый на технологической стадии b), предпочтительно содержит от 0,01 до 10% масс., особенно предпочтительно от 0,1 до 5% масс., более предпочтительно от 0,5 до 3% масс., наиболее предпочтительно от 0,75 до 1,5% масс. и в высшей степени предпочтительно приблизительно 1% масс. сульфида натрия.
Для установки указанных ранее предпочтительных значений pH в щелочной области согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения предусмотрено, что на технологической стадии b) применяют водный раствор, который наряду с сульфидом натрия содержит от 0,001 до 0,5 M, предпочтительно от 0,005 до 0,4 M, особенно предпочтительно от 0,01 до 0,3 M, более предпочтительно от 0,05 до 0,2 M, наиболее предпочтительно от 0,075 до 0,125 M и в высшей степени предпочтительно приблизительно 0,1 M гидроксида натрия.
Вместо гидроксида натрия для установки значений pH специалистами в данной области техники могут быть использованы известные основания, такие как, например, любой гидроксид щелочного или щелочно-земельного металла, такой как гидроксид калия, гидроксид лития, гидроксид магния, гидроксид кальция, аммиак и т.п.
Раствор сульфида натрия на технологической стадии b) принципиально должен быть использован в достаточно большом количестве и в течение достаточно длительного времени, чтобы дерма была эффективно разрыхлена, а содержащиеся в ней щетина и волосы были почти полностью удалены. В связи с этим хорошие результаты достигаются, в частности, в случае, когда дерму обрабатывают водным раствором, содержащим сульфид натрия, в течение от 1 до 48 часов, предпочтительно от 5 до 36 часов, более предпочтительно от 12 до 24 часов и наиболее предпочтительно от 14 до 20 часов. При этом водный раствор, содержащий сульфид натрия, предпочтительно используют в количестве от 5- до 15-кратного объема в расчете на объем дермы. Более предпочтительно водный раствор, содержащий сульфид натрия, применяют в количестве от 6- до 14-кратного объема, особенно предпочтительно от 7- до 13-кратного объема, более предпочтительно от 8- до 12-кратного объема, наиболее предпочтительно от 9- до 11-кратного объема и в высшей степени предпочтительно приблизительно в 10-кратном объеме в расчете на объем дермы.
Обработка раствором, содержащим сульфид натрия, на технологической стадии b) принципиально может быть осуществлена за один раз или за несколько раз последовательно, причем дерму между отдельными стадиями обработки раствором, содержащим сульфид натрия, обрабатывают и/или промывают водой. Однако по настоящему изобретению оказалось предпочтительным проводить на технологической стадии b) только однократную обработку дермы раствором, содержащим сульфид натрия, предпочтительно при упомянутой ранее продолжительности обработки.
В предпочтительном варианте настоящего изобретения предложено проводить обработку раствором сульфида натрия на технологической стадии b) во вращающемся барабане. Благодаря этому достигается равномерная и полная инкубация дермы с сульфидом натрия. Например, вращающийся барабан может быть расположен горизонтально для вращения вокруг его оси. По практическим соображениям в барабане предусмотрены присоединительные элементы, по которым технологические растворы могут быть поданы в барабан и отведены из барабана. Кроме того, в барабане также могут быть предусмотрены присоединительные элементы, позволяющие при необходимости устанавливать в барабане повышенное или пониженное давление. Кроме того, предпочтительным является исполнение барабана с рубашкой, чтобы во внутреннем пространстве барабана можно было поддерживать постоянную температуру благодаря присоединительным элементам, предусмотренным в рубашке. Наконец, также предпочтительным является исполнение барабана, обеспечивающее возможность электронного регулирования скорости его вращения.
Благодаря обработке дермы водным солевым раствором на технологической стадии c) после технологической стадии b) еще оставшиеся целыми клетки разрушаются под действием осмотического стресса. При этом могут быть использованы любые приемлемые для этой цели соли, такие как, в частности, галогениды щелочных и щелочно-земельных металлов. По критерию цены особенно приемлемыми для этой цели являются хлориды щелочных и щелочно-земельных металлов, такие как, в частности, хлорид натрия.
В связи с этим хорошие результаты получают предпочтительно в случае, когда дерму на технологической стадии c) обрабатывают водным раствором, содержащим от 1 до 50% масс., предпочтительно от 2 до 20% масс., более предпочтительно от 5 до 15% масс. и наиболее предпочтительно 10% масс. хлорида натрия. Указанные количества являются предпочтительными также при использовании иных галогенидов щелочных и щелочно-земельных металлов, таких как хлорид калия, хлорид лития, хлорид магния, хлорид кальция и т.п.
Согласно следующему предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения дерму на технологической стадии c) несколько раз обрабатывают солевым раствором, каждый раз перемежая с обработкой и/или промывкой водой. Такая обработка с переменой ванн с солевым раствором и водой благоприятствует транспортировке клеточных компонентов из структуры ткани за счет диффузионных процессов вследствие переменного осмотического соотношения в ткани и, таким образом, улучшает эффект обработки в солевой ванне. При этом хорошие результаты получают предпочтительно в случае, когда дерму на технологической стадии c) обрабатывают водным солевым раствором от двух до десяти раз, предпочтительно от трех до пяти раз и особенно предпочтительно четыре раза, причем дерму между стадиями обработки солевым раствором каждый раз обрабатывают водой.
При этом продолжительность отдельных стадий обработки на технологической стадии c) составляет предпочтительно от 1 до 48 часов, причем по меньшей мере одну из этих стадий обработки проводят предпочтительно в течение от 5 до 36 часов, более предпочтительно от 12 до 24 часов и в высшей степени предпочтительно от 14 до 20 часов, например в течение 16 часов.
Технологическую стадию c) предпочтительно осуществляют также во вращающемся барабане, описанном ранее в качестве предпочтительного для технологической стадии b).
Для уничтожения бактерий и вирусов, содержащихся в ткани, и для отбеливания ткани в предпочтительном варианте настоящего изобретения предложено при необходимости осуществлять технологическую стадию d) предпочтительно с применением водного раствора, содержащего от 1 до 10% масс., предпочтительно от 2 до 5% масс. и более предпочтительно приблизительно 3% масс. пероксида водорода.
При этом дерму на технологической стадии d) предпочтительно обрабатывают несколько раз водным раствором пероксида водорода, предпочтительно от двух до пяти раз и более предпочтительно три раза, причем дерму между стадиями обработки раствором пероксида водорода каждый раз обрабатывают и/или промывают водой.
При этом хорошие результаты получают предпочтительно в случае, когда продолжительность отдельных стадий обработки на технологической стадии d) составляет предпочтительно от 5 до 60 часов, более предпочтительно от 10 до 36 часов и наиболее предпочтительно от 20 до 30 часов, например 24 часа.
Технологическую стадию d) предпочтительно осуществляют также во вращающемся барабане, описанном ранее в качестве предпочтительного для технологической стадии b).
Для достижения на технологической стадии e) особенно эффективного обезвоживания, которое делает возможным последующее хранение дермы в замороженном состоянии без изменения ее структуры, согласно следующему предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения предусмотрено обезвоживать дерму на технологической стадии e) обработкой органическим растворителем, осуществляемой от двух до десяти раз, предпочтительно от четырех до восьми раз и более предпочтительно шесть раз. При этом особенно хорошие результаты получают в случае, когда органический растворитель выбран из группы, в которую входят ацетон, метанол, этанол и изопропиловый спирт.
Согласно особенно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения на технологической стадии e) в качестве органического растворителя применяют ацетон, так как он не только обезвоживает дерму, но также и обезжиривает и даже инактивирует содержащиеся вирусы.
При этом хорошие результаты в отношении степени обезвоживания предпочтительно получают в случае, когда дерму на технологической стадии e) обрабатывают органическим растворителем несколько раз. Дерму обрабатывают органическим растворителем предпочтительно от двух до десяти раз, более предпочтительно от четырех до восьми раз и наиболее предпочтительно шесть раз. Кроме того, для достижения начального медленного удаления воды или щадящего обезвоживания на первой стадии предпочтительным является использование органического растворителя, разбавленного водой, например, 70%-ного раствора ацетона, с тем чтобы на следующих стадиях обработки использовать органический растворитель, разбавленный до высокой концентрации, например 90%-ный раствор ацетона, используемый на второй стадии обработки, а затем использовать концентрированный органический растворитель, такой как неразбавленный ацетон.
При этом продолжительность отдельных стадий обработки на технологической стадии e) составляет предпочтительно от 1 до 48 часов, причем по меньшей мере одну из этих стадий обработки проводят предпочтительно в течение от 5 до 48 часов, более предпочтительно от 12 до 36 часов и в высшей степени предпочтительно от 20 до 30 часов, например в течение 24 часов.
Технологическую стадию e) предпочтительно осуществляют также во вращающемся барабане, описанном ранее в качестве предпочтительного для технологической стадии b).
После завершения обезвоживания органический растворитель, оставшийся в дерме, предпочтительно удаляют циркуляционной воздушной сушкой при температуре от 25 до 60°C, например при 35°C.
Как было пояснено, настоящий способ является предпочтительно приемлемым для получения трансплантата из дермы свиньи. Однако он является также приемлемым для любых других видов дермы животного, таких как, например, дерма крупного рогатого скота.
Согласно другому особенно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения в технологическую стадию a), в частности в случае дермы свиньи, входят следующие стадии:
a1) очистка кожи туши животного, в частности свиньи, водой, содержащей при необходимости детергент, причем вода имеет температуру в интервале от комнатной температуры до 40°C максимально;
a2) снятие кожи со спинной части туши свиньи;
a3) удаление щетины с кожи, подготовленной на стадии a2);
a4) удаление из дермы субкутиса и эпидермиса посредством двоильной машины.
По настоящему изобретению было найдено, что на качество получаемого трансплантата помимо способа химической обработки большое влияние оказывает также способ подготовки дермы животного. В частности, по настоящему изобретению было установлено, что кожа свиньи, полученная в скотобойне традиционным способом, дает трансплантаты со сравнительно плохими свойствами. Это объясняется тем, что при традиционном способе убоя свиней после убоя ошпаривают горячей водой с температурой около 65°C для очистки и дезинфекции по поверхности перед последующим опаливанием щетины. Вследствие этой термической обработки коллаген, содержащийся в коже свиньи, необратимо повреждается или денатурируется.
Во избежание этого согласно указанному ранее особенно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения предусмотрено, что кожу туши свиньи очищают щадящим образом, а именно теплой водой, имеющей температуру не выше 40°C и содержащей при необходимости мягкий детергент. Другими словами, в случае способа по настоящему изобретению термическую обработку кожи не осуществляют горячей средой с температурой выше 40°C.
В способе по настоящему изобретению предпочтительно используют только вырезку кожи со спинной части туши животного, предпочтительно свиньи, так как эта часть по сравнению с кожей брюшины отличается усиленной структурой кожи и наибольшей толщиной. Таким образом, на технологической стадии a2) от цельной шкуры отделяют и отбрасывают брюшные части и используют только кожу спинной части с поверхностью приблизительно 800 x 1200 мм.
Затем на технологической стадии a3) щетину со шкуры предпочтительно удаляют механически, предпочтительно лезвием, перед разрезанием шкуры, например, на куски площадью приблизительно 400×600 мм. Толщина кожи на этой стадии составляет приблизительно от 2,5 до 3 мм. Подготовленная таким образом кожа может быть подана непосредственно на технологическую стадию a4) или сначала на хранение при температуре не выше -20°C.
После этого на технологической стадии a4) из дермы удаляют субкутис и эпидермис предпочтительно посредством двоильной машины. Для этой цели двоильная машина предпочтительно содержит бесконечный нож, который можно сравнить с полотном ленточной пилы без зубцов и который приводится в действие двумя шестернями и направляется дополнительными роликами. Нож предпочтительно расположен горизонтально и движется со скоростью нескольких метров в секунду. Такая двоильная машина позволяет плавно регулировать толщину отделяемого слоя. При этом дерму подают к ножу посредством двух валков и разделяют на два куска вдоль поперечного сечения.
В предпочтительном варианте настоящего изобретения предложено на технологической стадии a4) сначала удалять из дермы субкутис, а затем удалять эпидермис. На первой промежуточной стадии удаления из дермы субкутиса машину регулируют, например, на толщину отделяемого слоя, равную 2 мм. Затем предварительно отрезанный кусок кожи вводят в машину жировой стороной вверх, при этом отделяют и затем отбрасывают выходящую сверх толщины 2 мм жировую часть и часть соединительной ткани, включая корни волос. Кроме того, толщина расслоения альтернативно может быть задана приблизительно равной 1,5 или 1,0 мм.
На следующей промежуточной стадии удаления эпидермиса из дермы толщину отделяемого слоя на двоильной машине устанавливают равной 0,5 мм и полученную на предыдущей промежуточной стадии кожу еще раз вводят в двоильную машину для последующего отделения и удаления эпидермиса.
Подготовленная таким образом кожа может быть подана непосредственно на технологическую стадию b) или сначала на хранение при температуре не выше -20°C или альтернативно в 25%-ном растворе хлорида натрия при 4°C.
В заключение, после осуществления предварительной обработки и химической обработки дермы согласно технологических стадий от a) до d) из обезвоженной на стадии e) дермы вырезают и/или вырубают штампом трансплантат при необходимости с применением шаблона. При этом трансплантаты могут быть вырезаны прямоугольной, круглой или овальной формы. Кроме того, при необходимости трансплантаты могут быть вырублены штампом также по сетчатому образцу.
Затем трансплантаты предпочтительно попарно помещают в плоские пакеты из ламинированной синтетической пленки или двухслойной пленки из пластмассы и алюминиевой фольги и запаивают. При этом трансплантаты упаковывают предпочтительно в сухом состоянии. Однако трансплантаты после осуществления вторичного увлажнения могут быть упакованы также во влажном состоянии.
В заключение, упакованные трансплантаты могут быть обработаны для стерилизации гамма-излучением, например гамма-излучением с дозой энергии от 17 до 22 кГр. Если сухие трансплантаты облучают предпочтительно при температуре от 20 до 40°C, то облучение влажных трансплантатов осуществляют предпочтительно при температуре от -20 до -80°C.
Другим объектом настоящего изобретения является трансплантат, получаемый способом по настоящему изобретению.
Например, трансплантат по настоящему изобретению может иметь прямоугольную форму размерами, например, от 50×100 мм до 350×350 мм, круглую форму диаметром от 30 до 100 мм или овальную форму размерами, например, от 100×155 мм до 250×350 мм.
Кроме того, настоящее изобретение относится к применению описанного ранее трансплантата в хирургии грыжи, например для лечения грыжи в рубце, или для лечения расхождения краев операционной раны брюшной стенки.
При лечении грыжи трансплантат по настоящему изобретению сшивается с прилежащей интактной тканью и вначале служит в качестве покрова, закрывающего дефект. В ходе заключительного моделирования ткани трансплантат служит в качестве направляющей шины для собственных клеток пациента, которые заселяют коллагеновую структуру трансплантата. Благодаря превращению трансплантата, т.е. разложению коллагена трансплантата и параллельному образованию собственной ткани пациента, дефект закрывается новообразующейся соединительной тканью.
Далее настоящее изобретение более подробно поясняется неограничительным примером осуществления.
ПРИМЕР
Парную тушу свиньи перед снятием шкуры очищали по поверхности теплой водой, имевшей температуру 40°C и содержавшей от 0,1 до 1% масс. додецилсульфата натрия (SDS). От цельной шкуры отделяли и отбрасывали брюшные части и далее обрабатывали только шкуру спинной части с поверхностью приблизительно 800×1200 мм.
Затем щетину со свиной шкуры удаляли механически лезвием перед разрезанием шкуры на куски площадью приблизительно 400×600 мм. Затем кожу вводили жировой стороной вверх в двоильную машину с установленной толщиной отделяемого слоя, равной 2 мм, для отделения выходящей сверх толщины 2 мм жировой части и части соединительной ткани, включая корни волос. При этом двоильная машина содержала горизонтально расположенный бесконечный нож, приводимый двумя шестернями и дополнительными роликами.
В заключение, толщину отделяемого слоя на двоильной машине устанавливали равной 0,5 мм и кожу еще раз вводили в двоильную машину для отделения эпидермиса. Таким образом, получали дерму толщиной 1,5 мм.
Затем дерму обрабатывали во вращающемся барабане согласно приведенной далее схеме обработки.
| Стадия | Действие | Время, ч | Цель |
| 1 | Промывка водой (3 раза) | ||
| 2 | Выдержка в воде | 0,5 | |
| 3 | Выдержка в воде | 0,5 | |
| 4 | Обработка 1%-ным водным раствором сульфида натрия с 0,1 M раствором NaOH | 16 | Удаление волос |
| 5 | Промывка водой (3 раза) | Диффузия, осмос | |
| 6 | Выдержка в воде | 1 | |
| 7 | Выдержка в 10%-ном растворе NaCl | 3 | |
| 8 | Выдержка в воде | 1 | |
| 9 | Выдержка в 10%-ном растворе NaCl | 16 | |
| 10 | Промывка водой (3 раза) | Диффузия, осмос | |
| 11 | Выдержка в воде | 1 | |
| 12 | Выдержка в 10%-ном растворе NaCl | 3 | |
| 13 | Выдержка в воде | 1 | |
| 14 | Выдержка в 10%-ном растворе NaCl | 16 | |
| 15 | Промывка водой (3 раза) | ||
| 16 | Выдержка в 3%-ном растворе пероксида водорода | 24 | Инактивация бактерий и вирусов, обецвечивание пигментов |
| 17 | Выдержка в 3%-ном растворе пероксида водорода | 24 | |
| 18 | Выдержка в 3%-ном растворе пероксида водорода | 24 | |
| 19 | Промывка водой (3 раза) | Вымывание H2O2 | |
| 20 | Выдержка в 70%-ном растворе ацетона | 2 | |
| 21 | Выдержка в 90%-ном растворе ацетона | 2 | Медленнее обезвоживание |
| 22 | Выдержка в 100%-ном ацетоне | 2 | Обезвоживание/ обезжиривание |
| 23 | Выдержка в 100%-ном ацетоне | 16 | Обезвоживание/ обезжиривание |
| 24 | Выдержка в 100%-ном ацетоне | 24 | Обезвоживание/ обезжиривание |
| 25 | Выдержка в 100%-ном ацетоне | 24 | Инактивация вирусов |
| 26 | Сушка при 35°C | 24 | Удаление ацетона |
В заключение, после химической обработки из дермы вырубали штампом овальные трансплантаты размерами 160×250 мм каждый, попарно помещали в сухие пакеты из ламинированной синтетической пленки и запаивали, а затем при 35°C облучали гамма-излучением с дозой энергии 20 кГр.
Полученные таким образом трансплантаты имели нативную структуру почти идентичной морфологии.
Claims (12)
1. Способ получения трансплантата из дермы животного, включающий в себя следующие стадии:
a) подготовка дермы животного;
b) обработка дермы животного водным щелочным раствором, содержащим сульфид натрия, который содержит от 0,01 до 1,5% масс. сульфида натрия;
c) одно- или многократная обработка дермы водным солевым раствором;
d) одно- или многократная обработка дермы водным раствором пероксида водорода;
e) обезвоживание дермы.
a) подготовка дермы животного;
b) обработка дермы животного водным щелочным раствором, содержащим сульфид натрия, который содержит от 0,01 до 1,5% масс. сульфида натрия;
c) одно- или многократная обработка дермы водным солевым раствором;
d) одно- или многократная обработка дермы водным раствором пероксида водорода;
e) обезвоживание дермы.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что на стадии b) применяют водный раствор, который наряду с сульфидом натрия содержит от 0,001 до 0,5 М, предпочтительно от 0, 005 до 0,4 М, особенно предпочтительно от 0,01 до 0,3 М, более предпочтительно от 0,05 до 0,2 М, наиболее предпочтительно 0,075 до 0,125 М и в высшей степени предпочтительно 1 М гидроксида натрия.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дерму на стадии b) в течение от 1 до 48 часов, предпочтительно от 5 до 36 часов, более предпочтительно от 12 до 24 часов и наиболее предпочтительно от 14 до 20 часов обрабатывают водным раствором, содержащим сульфид натрия, в количестве от 5- до 15-кратного объема, предпочтительно от 6- до 14-кратного объема, особенно предпочтительно от 7- до 13-кратного объема, более предпочтительно от 8- до 12-кратного объема и наиболее предпочтительно от 9- до 11-кратного объема в расчете на дерму.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дерму на стадии с) обрабатывают водным раствором, содержащим от 1 до 50% масс., предпочтительно от 2 до 20% масс., более предпочтительно от 5 до 15% масс. и наиболее предпочтительно 10% масс. соли, причем соль представляет собой предпочтительно галогенид щелочного или щелочно-земельного металла, особенно предпочтительно хлорид щелочного или щелочно-земельного металла, такого как хлорид калия, хлорид лития, хлорид магния или хлорид кальция.
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дерму на стадии c) обрабатывают водным солевым раствором от двух до десяти раз, предпочтительно от трех до пяти раз и более предпочтительно четыре раза, причем дерму между стадиями обработки солевым раствором каждый раз обрабатывают и/или промывают водой.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дерму на стадии d) обрабатывают водным раствором, содержащим от 1 до 10% масс., предпочтительно от 2 до 5% масс. и более предпочтительно 3% масс. пероксида водорода.
7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дерму на стадии d) обрабатывают водным раствором пероксида водорода от двух до пяти раз и предпочтительно три раза, причем дерму между стадиями обработки раствором пероксида водорода каждый раз обрабатывают и/или промывают водой.
8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дерму на стадии e) обезвоживают обработкой от двух до десяти раз, предпочтительно от четырех до восьми раз и более предпочтительно шесть раз органическим растворителем, выбранным из группы, в которую входят ацетон, метанол, этанол и изопропиловый спирт.
9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что на стадии а) осуществляют подготовку свиной дермы.
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что подготовка дермы на стадии а) включает в себя следующие стадии:
a1) очистка шкуры туши свиньи водой, содержащей при необходимости детергент, причем вода имеет температуру в интервале от комнатной температуры до 40°C максимально;
a2) снятие шкуры со спинной части туши свиньи;
a3) удаление щетины с шкуры, подготовленной на стадии a2);
a4) удаление из дермы субкутиса и эпидермиса посредством двоильной машины.
a1) очистка шкуры туши свиньи водой, содержащей при необходимости детергент, причем вода имеет температуру в интервале от комнатной температуры до 40°C максимально;
a2) снятие шкуры со спинной части туши свиньи;
a3) удаление щетины с шкуры, подготовленной на стадии a2);
a4) удаление из дермы субкутиса и эпидермиса посредством двоильной машины.
11. Трансплантат, получаемый способом по любому из предыдущих пунктов.
12. Применение трансплантата по п. 11 в хирургии грыжи, для лечения грыжи в рубце или для лечения расхождения краев операционной раны брюшной стенки.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE102011008604A DE102011008604A1 (de) | 2011-01-14 | 2011-01-14 | Herstellung eines Transplantats aus tierischer Dermis mit Natriumsulfidlösung |
| DE102011008604.8 | 2011-01-14 | ||
| PCT/EP2012/000124 WO2012095316A1 (de) | 2011-01-14 | 2012-01-12 | Herstellung eines transplantats aus tierischer dermis mit natriumsulfidlösung |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2013137859A RU2013137859A (ru) | 2015-02-20 |
| RU2575831C2 true RU2575831C2 (ru) | 2016-02-20 |
Family
ID=
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007124127A2 (en) * | 2006-04-21 | 2007-11-01 | Wake Forest University Health Sciences | Structurally modified acellular tissue engineering scaffolds and methods of production |
| WO2009049568A2 (en) * | 2007-10-17 | 2009-04-23 | Bio-Skin, A.S. | Sterile autologous, allogenic or xenogenic implant and the method of its production |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007124127A2 (en) * | 2006-04-21 | 2007-11-01 | Wake Forest University Health Sciences | Structurally modified acellular tissue engineering scaffolds and methods of production |
| WO2009049568A2 (en) * | 2007-10-17 | 2009-04-23 | Bio-Skin, A.S. | Sterile autologous, allogenic or xenogenic implant and the method of its production |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| I. PRASERTSUNG et al. Development of acellular dermis from porcine skin using periodic pressurized technique. J. of Biomedical Material Research, Part B: Applied Biomaterials, 85, No 1, 12.09.2007, pp.210-219. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2012206763B2 (en) | Producing a transplant from animal dermis using sodium sulfide solution | |
| US4456589A (en) | Preparation of animal tissues for surgical implantation in human recipients | |
| CN103191466B (zh) | 制备人体或动物脱细胞组织的方法 | |
| US20020146393A1 (en) | EB Matrix Production from Fetal Tissues and its Use for Tissue Repair | |
| AU2002309898A1 (en) | EB matrix production from fetal tissues and its use for tissue repair | |
| US9610383B2 (en) | Method for producing a bone transplant material, and bone transplant material produced by same | |
| KR101346853B1 (ko) | 저염장 해파리 | |
| CN104491920A (zh) | 一种可吸收缝合线的制备方法 | |
| CN101537207B (zh) | 一种组织工程化异种皮的制备方法 | |
| CN100464791C (zh) | 一种可注射性软组织生物填充材料的制备方法 | |
| CN106310384A (zh) | 一种脱细胞异种真皮及其制取方法 | |
| CN106474547B (zh) | 一种适合细胞生长的生物支架材料及其制备方法 | |
| RU2575831C2 (ru) | Получение трансплантата из дермы животного с применением раствора сульфида натрия | |
| KR101522733B1 (ko) | 해파리―해초 샐러드 제조방법 | |
| CN109701077B (zh) | 一种微孔再生组织基质及其制备和应用 | |
| CN109550075A (zh) | 一种猪皮脱细胞真皮基质敷料的制备方法 | |
| NZ614239B2 (en) | Producing a transplant from animal dermis using sodium sulfide solution | |
| CN100493628C (zh) | 一种医用生物皮的制备方法 | |
| EP1414368B1 (en) | Eb matrix production from fetal tissues and its use for tissue repair | |
| CN107509987B (zh) | 一种具有生物活性无鳞囊罗非鱼皮的制作方法 | |
| RU2542432C1 (ru) | Способ изготовления пластины на основе модифицированной ксеногенной подслизистой оболочки тонкой кишки | |
| KR101507508B1 (ko) | 해파리―무말랭이 무침 제조방법 | |
| CN114146224A (zh) | 一种脱细胞真皮基质微粒的制备方法 | |
| TW202045105A (zh) | 去細胞骨移植物及包含該去細胞骨移植物之人工移植組件 | |
| KR20160127077A (ko) | 동물 및 특히 돼지 연골 조직의 보존 저장 방법 |