RU2564914C2 - Method of determining hereditary predisposition to sensitisation with industrial allergens - Google Patents
Method of determining hereditary predisposition to sensitisation with industrial allergens Download PDFInfo
- Publication number
- RU2564914C2 RU2564914C2 RU2013149745/15A RU2013149745A RU2564914C2 RU 2564914 C2 RU2564914 C2 RU 2564914C2 RU 2013149745/15 A RU2013149745/15 A RU 2013149745/15A RU 2013149745 A RU2013149745 A RU 2013149745A RU 2564914 C2 RU2564914 C2 RU 2564914C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- genotype
- gene
- tnfα
- allergens
- hereditary predisposition
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения наследственной предрасположенности к сенсибилизации производственными аллергенами.The invention relates to medicine and can be used to determine a hereditary predisposition to sensitization by industrial allergens.
Известен способ выявления наследственной предрасположенности к сенсибилизации, включающий забор венозной крови, выделение ДНК, проведение полимеразной цепной реакции со специфическими праймерами, определение нуклеотидной последовательности и на основании этого выявление полиморфных вариантов гена ФНОα в полиморфном положении G308A, -590С>Т гена ИЛ4 и 431G>A гена ИЛ13 (см. Карунас А.С. Молекулярно-генетическое исследование аллергических заболеваний. Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук, Уфа, 2012 г., с. 8-16).A known method for identifying a hereditary predisposition to sensitization, including venous blood sampling, DNA isolation, polymerase chain reaction with specific primers, determination of the nucleotide sequence and based on this, the identification of polymorphic variants of the TNFα gene in the polymorphic position G308A, -590C> T of the IL4 and 431G> A gene IL13 (see Karunas A.S. Molecular genetic study of allergic diseases. Abstract of dissertation for the degree of Doctor of Biological Sciences, Ufa, 2012, p. 8- 16).
Однако, известный способ выявления наследственной предрасположенности к сенсибилизации имеет специфическую особенность, так как определение полиморфного варианта 431G>A гена ИЛ 13 для выявления наследственной предрасположенности к сенсибилизации этноспецифично в отношении единичной популяции - татар, что снижает возможность выявления наследственной предрасположенности к сенсибилизации у лиц различных популяционных групп, работающих с веществами сенсибилизирующего действия.However, the known method for identifying a hereditary predisposition to sensitization has a specific feature, since the determination of the polymorphic variant 431G> A of the IL 13 gene for identifying a hereditary predisposition to sensitization is ethnically specific for a single population - Tatars, which reduces the possibility of identifying a hereditary predisposition to sensitization in people of various groups working with sensitizing substances.
Задачей настоящего изобретения является определение наследственной предрасположенности к сенсибилизации производственными аллергенами и риску развития профессиональных аллергодерматозов у лиц различных популяционных групп в процессе предварительных или периодических медицинских осмотров большого количества работающих или поступающих на работу на аллергоопасные производства.The objective of the present invention is to determine the hereditary predisposition to sensitization by industrial allergens and the risk of developing occupational allergic dermatoses in people of various population groups during preliminary or periodic medical examinations of a large number of people working or going to work at allergic hazardous industries.
Техническим результатом изобретения является возможность индивидуального определения наследственной предрасположенности к сенсибилизации производственными аллергенами у лиц различных популяционных групп, работающих с веществами сенсибилизирующего действия, что позволит своевременно выявлять лиц, предрасположенных к развитию профессиональных аллергодерматозов, для предупреждения развития профессиональной патологии путем рационального трудоустройства вне контакта с веществами сенсибилизирующего действия и формирования групп повышенного риска с целью проведения своевременной иммунокоррекции для повышения адаптационных способностей организма различными неспецифическими способами.The technical result of the invention is the ability to individually determine the hereditary predisposition to sensitization by industrial allergens in people of various population groups working with substances with a sensitizing effect, which will allow timely identification of persons predisposed to the development of occupational allergic dermatoses to prevent the development of occupational pathology by rational employment outside contact with sensitizing substances actions and group formation higher risk in order to conduct timely immune to enhance the body by various non-specific methods of adaptation abilities.
Указанная задача достигается тем, что в известном способе определения наследственной предрасположенности к сенсибилизации производственными аллергенами, включающем забор венозной крови, выделение ДНК, проведение полимеразной цепной реакции со специфическими праймерами, определение нуклеотидной последовательности гена ФНОα в полиморфном положении G308A, гена ИЛ 4 в полиморфном положении С589Т, гена ИЛ10 в полиморфных положениях Т819С и A1082G и при обнаружении гомозиготных вариантов АА генотипа гена ФНОα G308A, ТТ генотипа гена ИЛ4 С589Т, ТТ генотипа гена ИЛ10 Т819С, АА генотипа гена ИЛ10 A1082G или АА генотипа гена ФНОα G308A, ТТ генотипа гена ИЛ4 С589Т, АА генотипа гена ИЛ10 A1082G определяют наследственную предрасположенность к сенсибилизации производственными аллергенами.This task is achieved by the fact that in the known method for determining the hereditary predisposition to sensitization by industrial allergens, including venous blood sampling, DNA isolation, polymerase chain reaction with specific primers, determination of the nucleotide sequence of the TNFα gene in the polymorphic position G308A, IL 4 gene in the polymorphic position C589T , IL10 gene in the polymorphic positions of T819C and A1082G and upon detection of homozygous variants of the AA genotype of the TNFα gene G308A, TT of the genotype of the IL4 C589T gene, TT of the genotype PA of the IL10 gene T819C, AA of the genotype of the IL10 gene A1082G or AA of the genotype of the TNFα gene G308A, TT of the genotype of the IL4 C589T gene, AA of the genotype of the IL10 A1082G gene determine a hereditary predisposition to sensitization by production allergens.
Проведенные исследования по патентным и научно-техническим информационным источникам показали, что предлагаемый способ неизвестен и не следует явным образом из изученного уровня техники, т.е. соответствует критериям "новизна" и "изобретательский уровень".Studies on patent and scientific and technical information sources have shown that the proposed method is unknown and does not follow explicitly from the studied prior art, i.e. meets the criteria of "novelty" and "inventive step".
Предлагаемый способ может быть применен в клинических, биохимических, молекулярно-генетических лабораториях, укомплектованных широко используемым оборудованием, выпускаемым отечественной или зарубежной промышленностью.The proposed method can be applied in clinical, biochemical, molecular genetic laboratories equipped with widely used equipment manufactured by domestic or foreign industry.
Следовательно, заявленный способ является доступным и практически применимым.Therefore, the claimed method is affordable and practically applicable.
Таким образом, предложена совокупность приемов, позволяющих обеспечить определение наследственной предрасположенности к сенсибилизации производственными аллергенами у лиц различных популяционных групп.Thus, a set of techniques has been proposed that allows for the determination of a hereditary predisposition to sensitization by industrial allergens in individuals of various population groups.
Предлагаемый способ основан на исследовании комплекса диагностических тестов, при этом наличие или отсутствие полиморфных вариантов генов ИЛ4 С589Т, ИЛ10 Т819С, ИЛ10 A1082G, ФНОα G308A соответственно в генах ИЛ4, ИЛ10, ФНОα играет основную роль при выявления наследственной предрасположенности к сенсибилизации производственными аллергенами у лиц различных популяционных групп.The proposed method is based on the study of a set of diagnostic tests, while the presence or absence of polymorphic variants of the IL4 C589T, IL10 T819C, IL10 A1082G, TNFα, G308A genes, respectively, in the IL4, IL10, TNFα genes plays the main role in identifying a hereditary predisposition to sensitization by production allergens in individuals of various population groups.
Гомозиготный ТТ вариант генотипа гена ИЛ4 С589Т определяет снижение количественного уровня ИЛ4, обладающего противовоспалительным действием, гомозиготный ТТ вариант гена ИЛ10 Т819С и гомозиготный АА вариант гена ИЛ10 A1082G, при которых наблюдают снижение уровня ИЛ10, обладающего противовоспалительным действием, гомозиготный АА вариант гена ФНОα G308A, продуцирующего напротив повышенное количество воспалительного белка ФНОα, обладающего провоспалительными свойствами, что свидетельствует о нарушении соотношения провоспалительных и противооспалительных цитокинов в сторону увеличения провоспалительных, активизирующих и запускающих воспалительные процессы. На основании этого выявляют наследственную предрасположенность к сенсибилизации при воздействии на организм производственных факторов сенсибилизирующего действия.Homozygous TT variant of the genotype of the IL4 C589T gene determines a decrease in the quantitative level of IL4, which has an anti-inflammatory effect, homozygous TT variant of the IL10 T819C gene and homozygous AA variant of the IL10 gene A1082G, in which there is a decrease in the level of IL10, which has the anti-inflammatory action of A gene G30 on the contrary, an increased amount of inflammatory protein TNFα with pro-inflammatory properties, which indicates a violation of the ratio of pro-inflammatory and anti-inflammatory -inflammatory cytokines in the direction of increasing pro-inflammatory, and firing trigger inflammatory processes. Based on this, a hereditary predisposition to sensitization when exposed to an organism of production factors of a sensitizing effect is revealed.
Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.The proposed method is as follows.
У пациентов осуществляют забор венозной крови. Кровь исследуют в соответствии с предлагаемым способом. Из 100 мкл цельной крови выделяют ДНК с использованием комплекта для выделения "ДНК-сорб-В" (ТУ9398-071-01897593-2008), в соответствии с инструкцией к используемому комплекту.Venous blood sampling is performed in patients. Blood is examined in accordance with the proposed method. DNA is isolated from 100 μl of whole blood using the DNA-sorb-B isolation kit (TU9398-071-01897593-2008), in accordance with the instructions for the kit used.
Далее проводят полимеразную цепную реакцию со специфическими праймерами и определяют нуклеотидную последовательность. Для этого из полученного препарата ДНК объемом 50 мкл готовят серии разведений в ТЕ-буфере до конечной концентрации 1-3 нг/мкл, добавляют 10 мг конечного раствора ДНК в пробирку для осуществления генотипирования ИЛ4 С589Т, ИЛ10 Т819С, ИЛ10 A1082G, ФНОα G308A с помощью наборов, например, фирмы «Литех», Россия. При этом используют реагенты производства фирмы «Литех», Россия: разбавитель, реакционная смесь (НОРМА - N, ПАТОЛОГИЯ - Р), Taq-полимераза. Объем амплификационной смеси - 25 мкл.Next, a polymerase chain reaction is carried out with specific primers and the nucleotide sequence is determined. For this, a series of dilutions in TE buffer is prepared from the obtained DNA preparation with a volume of 50 μl to a final concentration of 1-3 ng / μl, 10 mg of the final DNA solution are added to the tube for genotyping of IL4 C589T, IL10 T819C, IL10 A1082G, TNFα G308A using sets, for example, the company "Litekh", Russia. In this case, reagents manufactured by Litekh, Russia are used: diluent, reaction mixture (NORMA - N, PATHOLOGY - P), Taq polymerase. The volume of the amplification mixture is 25 μl.
Полимеразную цепную реакцию проводят по следующей программе.The polymerase chain reaction is carried out according to the following program.
При использовании термоциклера Т 100 Thermal Cycler (фирма BIO RAD, США), когда температура достигнет 94°C - режим Pause, ставят пробирки в ячейки термоциклера и выдерживают их при температуре 93°C - 1 мин. Далее выдерживают пробирки 35 циклов: при 93°C - 10 с, при 64°C - 10 с, при 72°C - 20 с, а в конце при 72°C - 1 мин, затем 10° Storage.When using the T 100 Thermal Cycler thermal cycler (BIO RAD company, USA), when the temperature reaches 94 ° C - Pause mode, place the tubes in the thermal cycler cells and maintain them at a temperature of 93 ° C - 1 min. The tubes are then kept for 35 cycles: at 93 ° C - 10 s, at 64 ° C - 10 s, at 72 ° C - 20 s, and at the end at 72 ° C - 1 min, then 10 ° Storage.
После проведения полимеразной цепной реакции со специфическими праймерами осуществляют анализ продуктов реакции в 3% полиакриламидном геле с последующей окраской этидиумбромидом и визуализацией в проходящем УФ-свете.After carrying out a polymerase chain reaction with specific primers, the reaction products are analyzed in a 3% polyacrylamide gel, followed by staining with ethidium bromide and visualization in transmitted UV light.
При этом определяют нуклеотидную последовательность гена ФНОα в полиморфном положении G308A, гена ИЛ4 в полиморфном положении С589Т, гена ИЛ10 в полиморфных положениях Т819С и A1082G. При обнаружении гомозиготных вариантов АА генотипа гена ФНОα G308A, ТТ генотипа гена ИЛ4 С589Т, ТТ генотипа гена ИЛ10 Т819С, АА генотипа гена ИЛ10 A1082G или АА генотипа гена ФНОα G308A, ТТ генотипа гена ИЛ4 С589Т, АА генотипа гена ИЛ10 A1082G определяют наследственную предрасположенность к сенсибилизации производственными аллергенами у лиц различных популяционных групп, работающих с веществами сенсибилизирующего действия.The nucleotide sequence of the TNFα gene in the polymorphic position of G308A, the IL4 gene in the polymorphic position of C589T, the IL10 gene in the polymorphic positions of T819C and A1082G are determined. If homozygous variants of the AA genotype of the TNFα gene G308A, TT of the genotype of the IL4 C589T gene, TT of the genotype of the IL10 T819C gene, AA of the genotype of the IL10 A1082G gene or AA of the genotype of the TNFα G308A gene, TT of the genotype IL4 C1089 IL10 genotype are identified, industrial allergens in individuals of various population groups working with sensitizing substances.
Пример 1Example 1
Больной П., 57 год. При анализе анамнеза и профессионального маршрута пациента было выявлено, что больной П. работал оператором на заводе в контакте с эпоксидной смолой. Через год после начала работы по результатам обследования был поставлен диагноз профессиональная экзема верхних конечностей. Со слов, имеет аллергическую реакцию на новокаин и эритромицин в виде сыпи. По результатам клинико-лабораторных исследований: эозинофилы - 15% (норма до 5%), эозинофильный катионный белок - 27 нг/мл (норма до 10 нг/мл), иммуноглобулин Е - 204 МЕ/мл (норма до 120 МЕ/мл).Patient P., 57 years old. When analyzing the patient’s history and professional route, it was revealed that patient P. worked as an operator in a factory in contact with epoxy resin. A year after the start of work, the results of the examination were diagnosed with occupational eczema of the upper extremities. It is said to have an allergic reaction to novocaine and erythromycin in the form of a rash. According to the results of clinical and laboratory studies: eosinophils - 15% (normal up to 5%), eosinophilic cationic protein - 27 ng / ml (normal up to 10 ng / ml), immunoglobulin E - 204 IU / ml (normal up to 120 IU / ml) .
Согласно предлагаемому способу кровь исследовали следующим образом.According to the proposed method, the blood was examined as follows.
Из 100 мкл цельной крови выделяли ДНК-сорбент однопробирочным методом с использованием комплекта для выделения "ДНК-сорб-В" (ТУ9398-071-01897593-2008), в соответствии с инструкцией к используемому комплекту.DNA sorbent was isolated from 100 μl of whole blood using a single-tube method using the DNA sorb-B isolation kit (TU9398-071-01897593-2008), in accordance with the instructions for the kit used.
Из полученного препарата ДНК объемом 50 мкл готовили серии разведений в ТЕ-буфере до конечной концентрации 1-3 нг/мкл, добавляют 10 мг конечного раствора ДНК в пробирку для осуществления генотипирования ИЛ4 С589Т, ИЛ10 Т819С, ИЛ10 A1082G, ФНОα G308A с помощью наборов фирмы «Литех», Россия. При этом использовали реагенты производства фирмы «Литех», Россия: разбавитель, реакционная смесь (НОРМА - N, ПАТОЛОГИЯ - P), Taq-полимераза. Объем амплификационной смеси - 25 мкл.A series of dilutions in TE buffer was prepared from the obtained DNA preparation with a volume of 50 μl to a final concentration of 1-3 ng / μl, 10 mg of the final DNA solution was added to the tube for genotyping of IL4 C589T, IL10 T819C, IL10 A1082G, TNFα G308A using company kits Litekh, Russia. We used reagents manufactured by Litech, Russia: diluent, reaction mixture (NORMA - N, PATHOLOGY - P), Taq polymerase. The volume of the amplification mixture is 25 μl.
Реакцию амплификации проводили по следующей программе.The amplification reaction was carried out according to the following program.
При использовании термоциклера Т 100 Thermal Cycler (фирма BIO RAD, США), когда температура достигала 94°C - режим Pause, ставили пробирки в ячейки термоциклера и выдерживали их при температуре 93°C - 1 мин. Далее выдерживали пробирки 35 циклов: при 93°С - 10 с, при 64°C - 10 с, при 72°C - 20 с, а в конце при 72°C - 1 мин, затем 10° Storage.When using a T 100 Thermal Cycler thermal cycler (BIO RAD, USA), when the temperature reached 94 ° C - Pause mode, test tubes were placed in the thermal cycler cells and kept at 93 ° C for 1 min. Further, the tubes were kept for 35 cycles: at 93 ° C for 10 s, at 64 ° C for 10 s, at 72 ° C for 20 s, and at the end at 72 ° C for 1 min, then 10 ° Storage.
После проведения амплификации осуществляли анализ продуктов реакции в 3% полиакриламидном геле с последующей окраской этидиумбромидом и визуализацией в проходящем УФ-свете.After amplification, the reaction products were analyzed in a 3% polyacrylamide gel, followed by staining with ethidium bromide and visualization in transmitted UV light.
При анализе результатов были выявлены полиморфные гомозиготные варианты ИЛ4 С589Т - ТТ, ИЛ10 Т819С - ТТ и ФНОα G308A - АА, ИЛ10 A1082G - АА, что свидетельствует о нарушении экспрессии генов провоспалительных и противовоспалительных цитокинов, следствием чего явилось развитие наследственной предрасположенности к сенсибилизации производственными аллергенами. Это подтверждают данные клинико-лабораторного обследования: повышение уровня эозинофилов крови, значительное повышение содержания воспалительного белка - эозинофильного катионного протеина и антител, ответственных за аллергическую реакцию - иммуноглобулина Е в сыворотке крови.The analysis of the results revealed polymorphic homozygous variants of IL4 C589T - TT, IL10 T819C - TT and TNFα G308A - AA, IL10 A1082G - AA, which indicates impaired gene expression of pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines, which resulted in the development of a hereditary susceptibility to allergen production. This is confirmed by clinical and laboratory examination data: an increase in the level of blood eosinophils, a significant increase in the content of the inflammatory protein - the eosinophilic cationic protein and antibodies responsible for the allergic reaction - immunoglobulin E in blood serum.
Пример 2Example 2
Больная М., 53 года. При анализе анамнеза и профессионального маршрута пациента было выявлено, что больная М. работала аппаратчиком на заводе, подвергаясь воздействию солей хрома, никеля и кобальта, входящих в состав цемента. Через 6 лет после начала работы по результатам обследования был поставлен диагноз профессиональный аллергический распространенный дерматит. По данным анамнеза имеет пищевую аллергию, проявляющуюся сыпью. По результатам клинико-лабораторных исследований: эозинофилы - 3% (норма до 5%), эозинофильный катионный белок - 23 нг/мл (норма до 10 нг/мл), иммуноглобулин Е - 56 МЕ/мл (норма до 120 МЕ/мл).Patient M., 53 years old. When analyzing the patient’s history and professional route, it was revealed that patient M. worked as an apprentice at the factory, being exposed to the salts of chromium, nickel and cobalt, which are part of the cement. 6 years after the start of work, the results of the examination were diagnosed with occupational allergic widespread dermatitis. According to the anamnesis, it has a food allergy, manifested by a rash. According to the results of clinical and laboratory studies: eosinophils - 3% (normal up to 5%), eosinophilic cationic protein - 23 ng / ml (normal up to 10 ng / ml), immunoglobulin E - 56 IU / ml (normal up to 120 IU / ml) .
Согласно предлагаемому способу кровь исследовали следующим образом.According to the proposed method, the blood was examined as follows.
Из 100 мкл цельной крови выделяли ДНК-сорбент однопробирочным методом с использованием комплекта для выделения "ДНК-сорб-В" (ТУ9398-071-01897593-2008), в соответствии с инструкцией к используемому комплекту.DNA sorbent was isolated from 100 μl of whole blood using a single-tube method using the DNA sorb-B isolation kit (TU9398-071-01897593-2008), in accordance with the instructions for the kit used.
Из полученного препарата ДНК объемом 50 мкл готовили серии разведений в ТЕ-буфере до конечной концентрации 1-3 нг/мкл, добавляют 10 мг конечного раствора ДНК в пробирку для осуществления генотипирования ИЛ4 С589Т, ИЛ10 Т819С, ИЛ10 A1082G, ФНОα G308A с помощью наборов фирмы «Литех», Россия. При этом использовали реагенты производства фирмы «Литех», Россия: разбавитель, реакционная смесь (НОРМА - N, ПАТОЛОГИЯ - P), Taq-полимераза. Объем амплификационной смеси - 25 мкл.A series of dilutions in TE buffer was prepared from the obtained DNA preparation with a volume of 50 μl to a final concentration of 1-3 ng / μl, 10 mg of the final DNA solution was added to the tube for genotyping of IL4 C589T, IL10 T819C, IL10 A1082G, TNFα G308A using company kits Litekh, Russia. We used reagents manufactured by Litech, Russia: diluent, reaction mixture (NORMA - N, PATHOLOGY - P), Taq polymerase. The volume of the amplification mixture is 25 μl.
Реакцию амплификации проводили по следующей программе.The amplification reaction was carried out according to the following program.
При использовании термоциклера Т 100 Thermal Cycler (фирма BIO RAD, США), когда температура достигала 94°C - режим Pause, ставили пробирки в ячейки термоциклера и выдерживали их при температуре 93°C - 1 мин. Далее выдерживали пробирки 35 циклов: при 93°C - 10 с, при 64°C - 10 с, при 72°C - 20 с, а в конце при 72°C - 1 мин, затем 10° Storage.When using a T 100 Thermal Cycler thermal cycler (BIO RAD, USA), when the temperature reached 94 ° C - Pause mode, test tubes were placed in the thermal cycler cells and kept at 93 ° C for 1 min. Then the tubes were kept for 35 cycles: at 93 ° C - 10 s, at 64 ° C - 10 s, at 72 ° C - 20 s, and at the end at 72 ° C - 1 min, then 10 ° Storage.
После проведения амплификации осуществили анализ продуктов реакции в 3% полиакриламидном геле с последующей окраской этидиумбромидом и визуализацией в проходящем УФ-свете.After amplification, the reaction products were analyzed in a 3% polyacrylamide gel, followed by staining with ethidium bromide and visualizing in transmitted UV light.
При анализе результатов были выявлены полиморфные варианты ИЛ 4 С589Т - ТТ, ИЛ10 A1082G - АА, и ФНОα G308A - АА и полиморфные варианты генов интерлейкинов, соответствующие норме - ИЛ10 (Т819С) СС, что свидетельствует о нарушении экспрессии генов провоспалительных и противовоспалительных цитокинов, следствием чего явилось развитие наследственной предрасположенности к сенсибилизации производственными аллергенами. Это подтверждают данные клинико-лабораторного обследования: показатели эозинофилов крови в пределах нормы, повышение содержания воспалительного белка - эозинофильного катионного протеина и нормальные показатели ответственного за аллергическую реакцию иммуноглобулина Е в сыворотке крови.The analysis of the results revealed polymorphic variants of IL 4 C589T - TT, IL10 A1082G - AA, and TNFα G308A - AA and polymorphic variants of interleukin genes corresponding to the norm - IL10 (T819C) SS, which indicates a violation of the expression of proinflammatory and anti-inflammatory cytokine genes. which was the development of a hereditary predisposition to sensitization by industrial allergens. This is confirmed by the results of clinical and laboratory examination: blood eosinophils are within normal limits, an increase in the content of the inflammatory protein - eosinophilic cationic protein and normal levels of the immunoglobulin E responsible for the allergic reaction in blood serum.
Пример 3Example 3
Больная Р., 64 года. При анализе анамнеза и проф. маршрута пациента было выявлено, что больная Р. работала в АМО «ЗИЛ», в течение 29 лет имела контакт с солями хрома, шпатлевкой, клеем ПВА, отвердителем. Через 26 после начала работы по результатам обследования в НИИ Медицины Труда был поставлен диагноз профессиональная экзема верхних конечностей. Аллергоанамнез со слов не отягощен. По результатам клинико-лабораторных исследований: эозинофилы - 2% (норма до 5%), эозинофильный катионный белок - 11 нг/мл (норма до 10 нг/мл), иммуноглобулин Е - 61 МЕ/мл (норма до 120 МЕ/мл).Patient R., 64 years old. In the analysis of history and prof. the patient’s route, it was revealed that patient R. worked at the AMO ZIL, had contact with chromium salts, putty, PVA glue, and hardener for 29 years. 26 after the start of work, according to the results of the examination at the Research Institute of Labor Medicine, a diagnosis of occupational eczema of the upper extremities was made. An allergic history from words is not burdened. According to the results of clinical and laboratory studies: eosinophils - 2% (normal up to 5%), eosinophilic cationic protein - 11 ng / ml (normal up to 10 ng / ml), immunoglobulin E - 61 IU / ml (normal up to 120 IU / ml) .
Согласно предлагаемому способу кровь исследовали следующим образом.According to the proposed method, the blood was examined as follows.
Из 100 мкл цельной крови выделяли ДНК-сорбент однопробирочным методом с использованием комплекта для выделения "ДНК-сорб-В" (ТУ9398-071-01897593-2008), в соответствии с инструкцией к используемому комплекту.DNA sorbent was isolated from 100 μl of whole blood using a single-tube method using the DNA sorb-B isolation kit (TU9398-071-01897593-2008), in accordance with the instructions for the kit used.
Из полученного препарата ДНК объемом 50 мкл готовили серии разведений в ТЕ-буфере до конечной концентрации 1-3 нг/мкл, добавляют 10 мг конечного раствора ДНК в пробирку для осуществления генотипирования ИЛ4 С589Т, ИЛ10 Т819С, ИЛ10 A1082G, ФНОα G308A с помощью наборов фирмы «Литех», Россия. При этом использовали реагенты производства фирмы «Литех», Россия: разбавитель, реакционная смесь (НОРМА - N, ПАТОЛОГИЯ - P), Taq-полимераза. Объем амплификационной смеси - 25 мкл.A series of dilutions in TE buffer was prepared from the obtained DNA preparation with a volume of 50 μl to a final concentration of 1-3 ng / μl, 10 mg of the final DNA solution was added to the tube for genotyping of IL4 C589T, IL10 T819C, IL10 A1082G, TNFα G308A using company kits Litekh, Russia. We used reagents manufactured by Litech, Russia: diluent, reaction mixture (NORMA - N, PATHOLOGY - P), Taq polymerase. The volume of the amplification mixture is 25 μl.
Реакцию амплификации проводили по следующей программе.The amplification reaction was carried out according to the following program.
При использовании термоциклера Т 100 Thermal Cycler (фирма BIO RAD, США), когда температура достигала 94°C - режим Pause, ставили пробирки в ячейки термоциклера и выдерживали их при температуре 93°C - 1 мин. Далее выдерживали пробирки 35 циклов: при 93°C - 10 с, при 64°C - 10 с, при 72°C - 20 с, а в конце при 72°C - 1 мин, затем 10° Storage.When using a T 100 Thermal Cycler thermal cycler (BIO RAD, USA), when the temperature reached 94 ° C - Pause mode, test tubes were placed in the thermal cycler cells and kept at 93 ° C for 1 min. Then the tubes were kept for 35 cycles: at 93 ° C - 10 s, at 64 ° C - 10 s, at 72 ° C - 20 s, and at the end at 72 ° C - 1 min, then 10 ° Storage.
После проведения амплификации осуществили анализ продуктов реакции в 3% полиакриламидном геле с последующей окраской этидиумбромидом и визуализацией в проходящем УФ-свете.After amplification, the reaction products were analyzed in a 3% polyacrylamide gel, followed by staining with ethidium bromide and visualizing in transmitted UV light.
При анализе результатов были выявлены полиморфные варианты генов ИЛ4 С589Т - СС, ИЛ10 Т819С - СС, ИЛ10 A1082G - GG, ФНОα G308A GG, соответствующие норме, вследствие чего не диагностировали наследственную предрасположенность к сенсибилизации производственными аллергенами. Этот вывод подтверждают результаты клинико-лабораторных исследований: нормальные показатели содержания количества эозинофилов крови, незначительное повышение воспалительного белка - эозинофильного катионного протеина и нормальное содержание антител, ответственных за аллергическую реакцию иммуноглобулина Е в сыворотке крови.The analysis of the results revealed polymorphic variants of the IL4 C589T - SS, IL10 T819C - SS, IL10 A1082G - GG, TNFα G308A GG genes corresponding to the norm, as a result of which hereditary susceptibility to sensitization by production allergens was not diagnosed. This conclusion is confirmed by the results of clinical and laboratory studies: normal blood eosinophil counts, a slight increase in the inflammatory protein — the eosinophilic cationic protein, and normal antibody levels responsible for the allergic reaction of immunoglobulin E in blood serum.
Таким образом, предложенная совокупность приемов позволяет осуществить выявление наследственной предрасположенности к сенсибилизации производственными аллергенами у лиц различных популяционных групп в процессе предварительных или периодических медицинских осмотров большого количества работающих или поступающих на работу на аллергоопасные производства, а также при оценке риска развития профессиональных аллергодерматозов при воздействии на организм производственных факторов сенсибилизирующего действия.Thus, the proposed set of techniques makes it possible to identify a hereditary predisposition to sensitization by industrial allergens in people of various population groups during preliminary or periodic medical examinations of a large number of people working or going to work at allergenic industries, as well as when assessing the risk of developing occupational allergic dermatoses when exposed to the body sensitizing production factors.
Предлагаемый способ может быть использован в клинических, биохимических, молекулярно-генетических лабораториях, укомплектованных оборудованием, выпускаемым отечественной или зарубежной промышленностью, при проведении диспансеризации или периодических медицинских осмотров большого количества лиц различных популяционных групп, работающих во вредных и/или опасных условиях труда за короткие (сжатые) сроки времени.The proposed method can be used in clinical, biochemical, molecular genetic laboratories equipped with equipment manufactured by domestic or foreign industry, during medical examinations or periodic medical examinations of a large number of people of various population groups working in harmful and / or dangerous working conditions for short ( compressed) time frames.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013149745/15A RU2564914C2 (en) | 2013-11-08 | 2013-11-08 | Method of determining hereditary predisposition to sensitisation with industrial allergens |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013149745/15A RU2564914C2 (en) | 2013-11-08 | 2013-11-08 | Method of determining hereditary predisposition to sensitisation with industrial allergens |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2013149745A RU2013149745A (en) | 2015-05-20 |
| RU2564914C2 true RU2564914C2 (en) | 2015-10-10 |
Family
ID=53283667
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013149745/15A RU2564914C2 (en) | 2013-11-08 | 2013-11-08 | Method of determining hereditary predisposition to sensitisation with industrial allergens |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2564914C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2655658C1 (en) * | 2017-04-26 | 2018-05-29 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью | Method of detecting disorders of physiological immunosuppression in children in first generation through parental lineage with hereditary tainted in conditions of aluminum excessive exposure |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012172370A1 (en) * | 2011-06-17 | 2012-12-20 | Electrophoretics Limited | Materials and methods for determining sensitivity potential of compounds |
-
2013
- 2013-11-08 RU RU2013149745/15A patent/RU2564914C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012172370A1 (en) * | 2011-06-17 | 2012-12-20 | Electrophoretics Limited | Materials and methods for determining sensitivity potential of compounds |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| MORI T. et al. Comparison of cytokine profiles in bronchoalveolar lavage fluid of mice exposed to respiratory and contact sensitizers. J Toxicol Sci. 2012; 37(2): 337-343 [Найдено 25.12.2014] [он-лайн]. Найдено из Интернет: URL: https://www.jstage.jst.go.jp/article/jts/37/2/37_2_337/_article. FUKUYAMA T. et al. Detection of low-level environmental chemical allergy by a long-term sensitization method. Toxicol Lett. 2008 Jul 30; 180(1): 1-8. Epub 2008 May 16 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2655658C1 (en) * | 2017-04-26 | 2018-05-29 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью | Method of detecting disorders of physiological immunosuppression in children in first generation through parental lineage with hereditary tainted in conditions of aluminum excessive exposure |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2013149745A (en) | 2015-05-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10522245B2 (en) | Systems and methods for detecting infectious diseases | |
| EP2663864B1 (en) | Immunodiversity assessment method and its use | |
| CN116171198A (en) | Systems, methods, and compositions for rapid early detection of infected host RNA biomarkers and early identification of human COVID-19 coronavirus infection | |
| CN104946749A (en) | Universal primers and probe for on-site rapid detection of Brucella and kit | |
| Rutanga et al. | Clinical significance of molecular diagnostic tools for bacterial bloodstream infections: a systematic review | |
| TWI495727B (en) | A micro electrochemical multiplex real time pcr system | |
| RU2564914C2 (en) | Method of determining hereditary predisposition to sensitisation with industrial allergens | |
| RU2009144277A (en) | METHODS AND COMPOSITIONS FOR DIAGNOSTIC OF OSTEOARTHRITIS IN AN ANIMAL FAMILY | |
| Tamassia et al. | Fast and accurate quantitative analysis of cytokine gene expression in human neutrophils by reverse transcription real-time PCR | |
| KR102219895B1 (en) | Composition for diagnosis of Tsutsugamushi disease and kit comprising the same | |
| CN104388552A (en) | Kit for detecting mutation of apparent mineralocorticoid excess related gene | |
| WO2021039777A1 (en) | Method for examining rheumatoid arthritis | |
| Kaur et al. | Cytokine gene polymorphisms: methods of detection and biological significance | |
| RU2296328C1 (en) | Method for detecting the predisposition to oncological diseases and diagnostic kit for its implementation | |
| Janovičová et al. | Isolation and quantification of extracellular dna from biofluids | |
| RU2645089C1 (en) | Method of dna extraction, suitable for conducting quantitative real-time pcr, from dry blood spots of newborns | |
| WO2020236745A1 (en) | Immunorepertoire wellness assessment systems and methods | |
| RU2585960C1 (en) | Method for detection of genetic predisposition to disruption of skin barrier function | |
| Coşkun et al. | Electrophoresis applications used in medicine | |
| Kasaras | Future diagnostic of Sepsis: Biomarker miRSeps-5 manual vs robotic extraction and optimization of miRNA detection by Two-Tailed RT-qPCR technology | |
| RU2553534C1 (en) | Pair of synthetic oligonucleotide primers for detection of virus of immunodeficiency of cats and method of diagnostics of virus of immunodeficiency of cats | |
| RU2811690C1 (en) | Test system for quantitative diagnostics of human mrna of mxa, oas1, eif2ak2 genes based on pcr | |
| EA024837B1 (en) | Method for predicting risk of early development of professional allergodermatosis affected by chrome, nickel and cobalt | |
| JP2023020631A (en) | Method for testing systemic lupus erythematosus | |
| O'Brien et al. | Droplet digital PCR for the determination of fetal red cell antigens in pregnancy |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20191109 |