RU2563174C1 - Способ лечения системных иерсиниозных бактериальных инфекций в эксперименте - Google Patents

Способ лечения системных иерсиниозных бактериальных инфекций в эксперименте Download PDF

Info

Publication number
RU2563174C1
RU2563174C1 RU2014116017/15A RU2014116017A RU2563174C1 RU 2563174 C1 RU2563174 C1 RU 2563174C1 RU 2014116017/15 A RU2014116017/15 A RU 2014116017/15A RU 2014116017 A RU2014116017 A RU 2014116017A RU 2563174 C1 RU2563174 C1 RU 2563174C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
sky
force
intestinal
yersiniosis
laboratory animals
Prior art date
Application number
RU2014116017/15A
Other languages
English (en)
Inventor
Михаил Борисович Тарасов
Иван Петрович Погорельский
Игорь Юрьевич Чичерин
Ирина Александровна Лундовских
Андрей Анатольевич Лещенко
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Вятский государственный университет"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Вятский государственный университет" filed Critical Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Вятский государственный университет"
Priority to RU2014116017/15A priority Critical patent/RU2563174C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2563174C1 publication Critical patent/RU2563174C1/ru

Links

Images

Landscapes

  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии и может быть использовано для лечения системных иерсиниозных бактериальных инфекций псевдотуберкулеза или кишечного иерсиниоза в эксперименте. Для этого проводят инфицирование лабораторных животных соответствующей культурой патогенных иерсиний псевдотуберкулеза или кишечного иерсиниоза для инициации экспериментальной патологии с последующим внутримышечным введением лечебного препарата Скай-форс в терапевтически эффективной дозе под контролем содержания патогенных бактерий и индигенной микрофлоры в течение срока, достаточного для устранения заболевания. При этом в качестве лечебного средства внутримышечно в первые 24 ч после инфицирования каждому лабораторному животному, а именно белой конвенциональной мыши, 1 раз в сутки вводят препарат Скай-форс 25 мг на 1 кг массы в течение 5 дней в приготовленном для применения виде как средство монотерапии. Изобретение обеспечивает невосприимчивость органов и тканей к возбудителю путем создания в них бактерицидных концентраций препарата Скай-форс, а также поддержание колонизационной резистентности кишечника по отношению к возбудителю. 2 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл., 3 пр.

Description

Изобретение относится к области медицины, инфектологии и медицинской микробиологии и может быть использовано для моделирования системных инфекций бактериальной природы у лабораторных животных при отборе средств предотвращения развития в чувствительном организме летальной инфекции, вызванной патогенными бактериями.
Открытие А. Флемингом первого антибиотика в 1929 г. положило начало новой эры в биологии и медицине - эры антибиотиков [Васильев Н.Т., Пименов Е.В., Калининский В.Б., Бакулин М.К. Вклад военных медиков в разработку технологий промышленного производства первых отечественных антибиотиков // Антибиотики и химиотерапия. - 1996. - №4. - С. 3-6; Прозоровский В.Б. Рождение Пенициллина // Российские аптеки. - 2003. - №11. - С. 60-62].
Антибиотики, а затем и химиотерапевтические препараты, стали основными средствами борьбы с инфекционными заболеваниями бактериальной природы, в том числе опасных и особо опасных инфекционных заболеваний. Механизм действия антибиотиков состоит главным образом в их способности угнетать рост и разрушать клетки бактерий, грибов и опухолей [Шевелева М.А., Раменская Г.В. Современные представления о применении различных групп пробиотических средств при антибиотикотерапии // Антибиотики и химиотерапия. - 2009. - Т. 54, №3-4. - С. 61-68]. Однако опубликованный анализ изменения номенклатуры антибиотиков и химиотерапевтических препаратов свидетельствует о прогрессирующем снижении числа препаратов, зарегистрированных в Российской Федерации, начиная с 2002 г. [Бондарева Т.А., Калининский В.Б., Борисевич И.В., Бондарев В.П., Фоменков О.О. Современное состояние и перспективы решения проблемы повышения эффективности экстренной профилактики и лечения системных бактериальных инфекций // Молекул. медицина. - 2009. - №5. - С. 24-25]. Это не может не сказаться на общем состоянии проблемы экстренной профилактики и лечения особо опасных инфекционных заболеваний. Многие из утративших регистрацию препаратов в свое время были включены в инструкции и руководства по экстренной профилактике и лечению чумы и иерсиниозов, сапа, мелиоидоза, туляремии, бруцеллеза, сибирской язвы, холеры. В целом, общие перспективы развития мирового, а значит и отечественного рынков антибиотиков и химиотерапевтических препаратов оцениваются как неблагоприятные.
Основными причинами указанной негативной тенденции являются, с одной стороны, утрата интереса крупных фармацевтических компаний к разработке новых антибиотиков, а с другой, сложность проведения клинических испытаний, необходимых для регистрации новых противомикробных препаратов. Важно и другое: в современных условиях практические врачи с целью предотвращения распространения антибиотико-резистентных штаммов бактерий используют новые высокоэффективные антибактериальные препараты лишь в крайнем случае. Вследствие этого коммерческие перспективы нового препарата выглядят непривлекательными для производителя, которого интересует только прибыль от широкого применения в практическом здравоохранении нового антибактериального средства.
Неблагоприятные тенденции развития рынков антибиотиков и химиотерапевтических препаратов сопровождаются рядом побочных эффектов от их применения. Бессистемное и бесконтрольное использование антибактериальных препаратов негативно сказывается на человеческом организме, что проявляется токсическими реакциями, поражением паренхимы печени и почек, поражением периферической нервной системы и органов кроветворения, аллергизирующими реакциями, иммунодепрессивным состоянием, антибиотико-ассоциированным дисбактериозом [Абдуллин И.М., Баширова Д.К., Кузнецова А.В., Визель А.А. Антибиотики в клинической практике / Под ред. А.А. Визеля. Казань, 1997. - 304 с.; Бельмер С.В. Дисбактериоз кишечника как осложнение антибактериальной терапии // Детские инфекции. - 2007. - Т. 6, №2. - С. 44-48].
Перечисленные проблемы мирового производства и применения антибактериальных средств, а также связанные с этим побочные эффекты на организм человека, явились основанием для руководства США объявить в 2011 г. о намерении покончить с эрой антибиотиков [Универсальный наноантибиотик. Хроника // Изобретательство. - 2012. - Т. XII, №7. - С. 10]. Указанный прорыв в медицине должен произойти при серьезной поддержке Пентагона и специалистов оборонного научного агентства DARPA (агентства передовых оборонных исследовательских проектов), которые взялись за осуществление уникального проекта по созданию быстро адаптируемой нанотерапии (Rapidly Adaptable Nanotherapeutics). В основе проекта - разработка биотехнологии быстрого синтеза терапевтических наночастиц, которые можно использовать для лечения любых инфекционных болезней, включая борьбу со смертоносными образцами генно-инженерного биологического оружия. Это будет новый класс противомикробных и противовирусных препаратов, содержащих в качестве «носителя» наночастицы и малые интерферирующие рНК (миРНК). Такая конструкция, введенная в организм, способна отыскивать клетки, где развивается инфекция и купировать инфекционный процесс. Указанная генетическая конструкция в сочетании с наночастицами в качестве носителя, получившая название «наноантибиотик», положительно зарекомендовала себя при лечении экспериментальной лихорадки Эбола у обезьян.
Известно несколько интерферирующих РНК, заявленных для использования в медицине, в частности для подавления антигенного процесса [Заявка 2010122 640/10, 03.06.2010, С 12 №15/11, A61K 48/00, А61Р 43/00 «Малая интерферирующая рибонуклеиновая кислота (миРНК) для перорального введения»]; для лечения легочных и респираторных заболеваний, ишемически-реперфузионных повреждений, глазного ишемического синдрома, повреждений спинного мозга, возрастной макулаторной дистрофии, мукозита слизистой оболочки рта, хронического обструктивного заболевания легких при пересадке органов и тканей [Патент РФ 2487716, A61K 31/7088, С12 №15/11 «Новые структуры малых интерферирующих РНК (SIRNA)», опубл. 20.07.2013]; для продолжительной циркуляции в крови носителя и короткой интерферирующей РНК и повышения эффективности лечебного действия [Патент РФ 2476204, A61K 9/127, A61K 47/18, A61K 47/24, A61K 47/34, A61K 31/7088, опубл. 27.02.2013]; для лечения и/или профилактики пролиферативных заболеваний, рака и бактериальных инфекций [Заявка 2007141588/15, 12.04.2006, A61K 47/48 «Наночастица и на ее основе инфузионный раствор и фармацевтическая композиция»].
Известно комплексное лекарственное средство для лечения бактериальных инфекций (коклюша, псевдотуберкулеза, иерсиниоза, пневмоний различной этиологии, в том числе атипичных), характеризующееся тем, что содержит антитела к гамма-интерферону человека и к CD4-рецептору и активированную потенцированную форму антител к гистамину [Патент РФ 2502521, A61P 31/32, A61K 39/00 «Комплексное лекарственное средство для лечения бактериальных инфекций и способ лечения бактериальных инфекций», опубл. 27.12.2013].
Учитывая всеобщую настороженность в отношении возбудителей системных (опасных и особо опасных) инфекций, которые могут быть использованы в биотеррористических целях, существующие негативные тенденции на мировом и отечественном рынках антибиотиков и химиотерапевтических препаратов, разработка и внедрение в практическое здравоохранение новых средств экстренной профилактики и лечения системных бактериальных инфекций, обладающих высокой эффективностью, является актуальной проблемой. Для ее решения много внимания уделяется моделированию бактериальных инфекций на лабораторных животных, в ходе которого оценивается эффективность разрабатываемых средств как при профилактическом, так и лечебном курсах [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р.Ю. Хабриева. - М.: Медицина, 2005. - 832 с.].
Наиболее близким к изобретению является техническое решение, известное из описания изобретения [Горшков Г.И., Тарасов М.Б., Хмельков Я.Т., Кравченко Э.А., Яковлева Е.Г., Тарасова Л.Б. «Способ лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней телят и поросят». Патент РФ 2427366, A61K 31/00, А61Р 31/04, опубл. 27.08.2011]. Однако известный способ, предусматривающий энтеральное введение с кормом препарата Пентациклин [Сноз Г.В., Горшков Г.И., Яковлева Е.Г., Кравченко Э.А., Тарасов М.Б., Хмельков Я.Т. «Испытание пентациклина при заболеваниях телят // Ветеринария. - 2010. - №10. - С. 44-47] больным кишечной инфекцией телятам и поросятам, не может быть использован при остро протекающих системных (генерализованных) бактериальных инфекциях, когда требуется создать в тканях и крови чувствительного организма в кратчайшие сроки бактерицидные концентрации вводимого антибактериального препарата. Для этого требуется парентеральный способ введения и иной антибактериальный препарат.
Техническим результатом изобретения является обоснование такого способа введения в инфицированный организм нового лечебного средства, которые бы позволяли применять их в эксперименте у лабораторных животных, уже зараженных патогенным микроорганизмом из числа опасных и особо опасных возбудителей, обеспечивая при этом полное излечение без сопутствующих негативных последствий.
Этот технический результат достигается тем, что в заявляемом способе лечения псевдотуберкулеза или кишечного иерсиниоза, возбудители которых близкородственны возбудителю чумы (т.е. относятся к роду Yersinia), путем инициирования у лабораторных животных экспериментальной, соответствующей возбудителю, патологии с последующим внутримышечным введением лечебного препарата в терапевтически активной дозе под контролем содержания патогенной микрофлоры, в течение срока, обеспечивающего купирование заболевания, в качестве лечебного средства внутримышечно в первые 24 ч после энтерального инфицирования (естественного для псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза) каждому лабораторному животному 1 раз в сутки вводят препарат Скай-форс как средство монотерапии, обеспечивающее гибель возбудителя в организме животного, при этом каждому лабораторному животному препарат Скай-форс вводят в дозе 25 мг на 1 кг массы в течение 5 дней. Об эффективности препарата Скай-форс судят по отсутствию гибели и общему состоянию подопытных лабораторных животных, энтерально инфицированных возбудителями псевдотуберкулеза или кишечного иерсиниоза.
Формирование у лабораторных животных экспериментальной системной кишечной патологии осуществляют путем энтерального введения им или возбудителя псевдотуберкулеза или кишечного иерсиниоза в количестве 10 LD50.
Кроме того, технический результат достигается тем, что в заявляемом способе лечения псевдотуберкулеза или кишечного иерсиниоза (типичных системных кишечных инфекций) в эксперименте используют новый лечебный препарат Скай-форс - синергидно действующее наноструктурное комплексное средство, обладающее широким спектром антибактериального действия в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий [Временное наставление по применению препарата Скай-форс в птицеводстве. Утверждено начальником управления ветеринарии, заместителем начальника департамента АПК Правительства Белгородской области, главным государственным ветеринарным инспектором Белгородской области О.В. Бабенко 05.12.2011 г.]. В рекомендованной дозе препарат Скай-форс нетоксичен, побочного действия не оказывает; противопоказаний к применению не установлено.
Способ лечения системного генерализованного псевдотуберкулеза или кишечного иерсиниоза в эксперименте осуществляют следующим образом:
1. Готовят две группы подопытных лабораторных животных - опытную и контрольную; перорально вводят каждому лабораторному животному в обеих группах культуру возбудителя псевдотуберкулеза или кишечного иерсиниоза в дозе 10 LD50, обеспечивающей гарантированное воспроизведение генерализованной смертельной кишечной инфекции.
2. Диагностируют заболевание с использованием бактериологического метода, позволяющего обнаруживать в фекалиях инфицированного лабораторного животного бактерии псевдотуберкулеза или кишечного иерсиниоза, и определения клинически значимых симптомов болезни.
3. Вводят внутримышечно животным опытной группы водный раствор препарата Скай-форс в рекомендованной дозировке и продолжительности введения до достижения лечебного эффекта - полного излечения лабораторных животных и нормализации кишечных функций и стабилизации кишечной микрофлоры, определяемой бактериологическим методом.
4. Определяют наличие и количество бактерий возбудителя кишечной инфекции в содержимом кишечника и внутренних органах у погибших лабораторных животных контрольной группы, а также общее количество кишечной микробиоты и отдельных ее представителей для установления степени дисбиотических изменений в кишечнике.
5. При сравнении количества выживших инфицированных лабораторных животных в опытной группе с количеством погибших/выживших инфицированных лабораторных животных в контрольной группе выносят суждение о лечебной эффективности препарата Скай-форс.
6. Вынесение суждения о профилактической или лечебной эффективности внутримышечного введения препарата Скай-форс инфицированным лабораторным животным опытной группы производят на основании улучшения самочувствия и выздоровления, а также определения общего количества микроорганизмов кишечной микрофлоры и отдельных ее представителей в 1 г фекалий, свидетельствующего об отсутствии дисбиотических изменений в составе кишечной микрофлоры.
7. В качестве профилактического и лечебного средства для купирования системных иерсиниозных инфекций используют препарат Скай-форс (производитель ООО «НПФ «НаноВетПром»).
Лечение системных иерсиниозных бактериальных инфекций у лабораторных животных проводили как в режиме профилактики, когда препарат Скай-форс вводили белым мышам через 2 ч после их инфицирования, так и в режиме собственно лечения - спустя 24 ч после инфицирования лабораторных животных. В режиме профилактики каждому инфицированному животному вводили внутримышечно по 0,5 мг растворенного в 0,1 мл дистиллированной воды, а в режиме лечения - внутримышечно по 1 мг препарата, растворенного в 0,1 мл дистиллированной воды. При обоих терапевтических курсах продолжительность введения препарата Скай-форс составила 5 суток. Увеличение дозы препарата Скай-форс, вводимого лабораторным животным в режиме лечения, связано с необходимостью быстрейшего подавления роста размножившихся за 24 ч бактерий и предотвращения развития эндотоксического шока у животных.
В экспериментах на белых конвенциональных мышах был использован препарат с 1% действующего вещества: соответствующую навеску порошка в расчете на одно животное растворяли в 0,1 мл дистиллированной воды, после чего вводили лабораторному животному внутримышечно.
Описание средства для осуществления способа лечения системных иерсиниозных бактериальных инфекций.
Препарат Скай-форс - это наноструктурное комплексное средство. Препарат Скай-форс производится из фармакопейного сырья с применением авторских технологий. Представляет собой водорастворимый мелкодисперсный порошок песочно-кремового цвета с вкраплениями. Выпускается в герметичных полиэтиленовых упаковках по 100 г, 500 г и 1 кг в соответствии с ГОСТ 24104-88. Применяется с целью профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных. В рекомендованных дозах (25 мг на 1 кг живой массы) нетоксичен, побочного действия не оказывает, совместим с приемом пробиотиков, противопоказаний к применению не установлено.
Препарат Скай-форс был синтезирован как препарат первого выбора для практического применения в инфектологии, когда еще не установлен и не идентифицирован возбудитель инфекционного заболевания, но уже есть явные признаки генерализации инфекционного процесса. К препарату Скай-форс в принципе не может быть индуцирована устойчивость у микроорганизмов в связи с совершенно иным механизмом бактерицидного действия, чем у известных антибиотиков: один из компонентов препарата ингибирует процесс распознавания бактериальной клеткой «свой-чужой», второй компонент предотвращает доставку питательных веществ внутрь бактериальной клетки и инициирует дезинтеграцию клеточной стенки и цитоплазматической мембраны, а третий компонент обеспечивает целевую доставку всего комплекса в очаг поражения и его депонирование.
Препарат идеально подходит в качестве препарата первого выбора для купирования генерализации системных бактериальных инфекций, таких как чума, возбудитель которой близкородственен возбудителям псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза и которые могут служить прототипами чумного микроба.
Хорошая растворимость препарата Скай-форс в воде, апирогенность, нетоксичность и безвредность водного раствора обуславливают возможность парентерального введения препарата в организм подопытного животного.
Моделирование системного заболевания у конвенциональных белых мышей осуществляют следующим образом.
1. Выбирают возбудитель системного инфекционного заболевании, в качестве которого могут быть выбраны:
возбудитель Yersinia pseudotuberculosis (близкородственный чумному микробу Yersinia pestis), вызывающий генерализованное системное заболевание псевдотуберкулез, летальность при котором достигает 50-70%;
возбудитель Yersinia enterocolitica (относится как и возбудитель чумы к роду Yersinia) - вызывающий генерализованное системное заболевание -кишечный иерсиниоз с выраженным полиморфизмом клинических проявлений, поражением желудочно-кишечного тракта, склонностью к хронизации.
2. Оценивают патогенность возбудителя системного инфекционного заболевания при энтеральном введении подопытным лабораторным животным - естественном для возбудителей Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica. На основании результатов инфицирования конвенциональных белых мышей рассчитывают показатель патогенности (вирулентность) возбудителя в виде значения среднесмертельной дозы LD50 [Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. - Л.: Медгиз, 1962 - 280 с.]. Значение среднесмертельной дозы возбудителя Y. pseudotuberculosis при энтеральном введении конвенциональным белым мышам составляет 8,2·104 КОЕ, а возбудителя кишечного иерсиниоза - 7,6·107 КОЕ.
Пример 1
Выращивают культуру псевдотуберкулезного микроба (Y.pseudotuberculosis) с учетом его психрофильности при температуре (5±1)°С в течение 4 суток, после чего готовят бактериальную суспензию на изотоническом растворе хлорида натрия, исходя из расчета концентрации микробных клеток 10 LD50 в вводимом объеме суспензии (0,2 мл) для энтерального заражения подопытных лабораторных животных. Указанная концентрация бактерий в суспензии, соответствующая 10 среднесмертельным дозам возбудителя, гарантированно обеспечивает моделирование манифестной формы заболевания с генерализацией инфекционного процесса и созданием в организме подопытных лабораторных животных летальных популяций возбудителя.
Берут 20 прошедших акклиматизацию конвенциональных белых мышей массой 18-20 г и рассаживают по 10 особей в 2 кювета с крышками (опытная и контрольная группы). От каждого лабораторного животного в начале исследования отбирают фекальные массы для подсчета общего количества микроорганизмов кишечной микрофлоры и отдельных ее представителей (КОЕ·г-1) с учетом выросших колоний на селективных плотных питательных средах при температуре 37°C в течение 48 ч.
Лабораторным животным обеих групп энтерально вводят суспензию бактерий возбудителя псевдотуберкулеза в объеме 0,2 мл, содержащем 10 LD50 бактерий. Через 24 ч инфицированным лабораторным животным опытной группы внутримышечно вводят в объеме 0,1 мл водный раствор препарата Скай-форс из расчета 1 мг препарата на одно лабораторное животное. Лабораторным животным контрольной группы препарат Скай-форс не вводят. Наблюдение за лабораторными животными осуществляют в течение 14 дней, отмечая исход инфицирования. В табл. 1 приведен результат инфицирования конвенциональных белых мышей возбудителем псевдотуберкулеза
Figure 00000001
.
Представленные в табл. 1 данные свидетельствуют, что в результате инфицирования возбудителем псевдотуберкулеза все лабораторные животные контрольной группы, в которой лечение не проводили, погибли в срок от 5 до 13 суток от начала инфицирования. От всех погибших лабораторных животных из внутренних органов выделена культура псевдотуберкулезного микроба: в 1 г фекалий количество бактерий составляет 1,6·106-9,5·107 КОЕ·г-1. При этом отмечается снижение общего количества микробиоты в 3,6·105 раз, бифидобактерий - в 5,1·105 раз, лактобактерий - в 3,0·106 раз, эшерихий - в 3,5·103 раз. Полученные результаты свидетельствуют о развитии у инфицированных лабораторных животных контрольной группы системной генерализованной инфекции - псевдотуберкулеза и выраженных дисбиотических изменений в составе кишечной микрофлоры.
Из данных табл. 1 также следует, что все инфицированные лабораторные животные опытной группы, которым внутримышечно вводили препарат Скай-форс, выздоровели. Отсутствие гибели животных, отсутствие дисбиотических изменений в составе кишечной микрофлоры, отсутствие в кишечном содержимом возбудителя псевдотуберкулеза свидетельствуют о высокой эффективности препарата Скай-форс при лечении системной бактериальной инфекции - псевдотуберкулеза.
Пример 2
Выращивают культуру возбудителя кишечного иерсиниоза (Y.enterocolitica) в течение 48 ч при температуре (27±1)°C, после чего готовят бактериальную суспензию на изотоническом растворе хлорида натрия, исходя из расчета концентрации микробных клеток 10 LD50 в вводимом объеме суспензии (0,2 мл) для энтерального заражения подопытных лабораторных животных.
Указанная концентрация бактерий в суспензии, соответствующая 10 среднесмертельным дозам возбудителя, гарантированно обеспечивает моделирование манифестной формы заболевания с генерализацией инфекционного процесса и созданием в организме подопытных лабораторных животных летальных популяций возбудителя.
Берут 20 прошедших акклиматизацию конвенциональных белых мышей массой 18-20 г и рассаживают по 10 особей в 2 кювета с крышками (опытная и контрольная группы). От каждого животного в начале исследования отбирают фекальные массы для подсчета общего количества микроорганизмов кишечной микрофлоры и отдельных ее представителей (КОЕ·г-1) с учетом выросших колоний на селективных плотных питательных средах при температуре 37°C в течение 48 ч.
Лабораторным животным обеих групп энтерально вводят суспензию бактерий возбудителя кишечного иерсиниоза в объеме 0,2 мл, содержащем 10 LD50 бактерий. Через 24 ч инфицированным животным опытной группы внутримышечно вводят в объеме 0,1 мл водный раствор препарата Скай-форс из расчета 1 мг препарата на одно лабораторное животное. Лабораторным животным контрольной группы препарат Скай-форс не вводят. Наблюдение за животными осуществляют в течение 18 дней, отмечая исход инфицирования. В табл. 2 приведен результат инфицирования конвенциональных белых мышей возбудителем кишечного иерсиниоза
Figure 00000002
.
Представленные в табл. 2 данные свидетельствуют, что в результате инфицирования возбудителем кишечного иерсиниоза все лабораторные животные контрольной группы, в которой лечение не проводили, погибли в срок от 5 до 15 суток от начала инфицирования. От всех погибших лабораторных животных из внутренних органов выделена культура бактерий кишечного иерсиниоза: в 1 г фекалий количество бактерий составило 5,1·105-6,5·105 КОЕ·г-1. При этом отмечается снижение общего количества микробиоты в 3,4·105 раз, бифидобактерий - в 3,2·105 раз, лактобактерий - в 3,3·106 раз, эшерихий - в 103 раз. Полученные результаты свидетельствуют о развитии у инфицированных лабораторных животных контрольной группы системной генерализованной инфекции - кишечного иерсиниоза и выраженных дисбиотических изменений в составе кишечной микрофлоры.
Из представленных в табл. 2 данных также следует, что все инфицированные лабораторные животные опытной группы, которым внутримышечно вводили препарат Скай-форс, выздоровели. Отсутствие гибели животных, отсутствие дисбиотических изменений в составе кишечной микрофлоры, отсутствие в кишечном содержимом бактерий кишечного иерсиниоза свидетельствуют о высокой эффективности препарата Скай-форс при лечении системной бактериальной инфекции - кишечного иерсиниоза.
Исследование органов и тканей подопытных лабораторных животных.
Для гистологических исследований отбирали кусочки органов и тканей, готовили тонкие срезы препаратов, окрашивали их гематоксилином Эрлиха и эозином, просматривали окрашенные срезы препаратов под световым микроскопом ЛОМО «Микмед-2». Для здоровых животных характерна следующая гистологическая картина: печень - дольчатая структура сохранена, кровенаполнение в норме, центральные вены не расширены, инфильтрация в портальных трактах отсутствует, дистрофических изменений гепатоцитов не выявлено; легкие - альвеолы не утолщены, кровенаполнение нормальное, инфильтация отсутствует; почки - клубочки без изменений, эпителий канальцев без признаков дистрофии.
При развитии патологического процесса наиболее выраженные изменения выявляются в кишечнике. Стенка кишки резко истончена, слизистая оболочка некротизирована, оставшиеся клетки железистого эпителия с выраженными дистрофическими изменениями, со стороны просвета кишки определяются некротические массы. Изменения в других внутренних органах являются следствием интоксикации организма микробными токсинами, а также продуктами распада тканей. В частности в легких просветы альвеол свободные, межальвеолярные перегородки утолщены, сосуды полнокровны, ткань легкого инфильтрирована клеточными элементами крови. Структура печени сохранена, сосуды полнокровны, в портальных трактах выявляется умеренная лимфогистиоцитарная инфильтрация, гепатоциты с выраженными дистрофическими изменениями, выявляются портопортальные некрозы. Для эпителия почечных канальцев характерна зернистая дистрофия, единичные клетки эпителия некротизированы и слущены просвет канальцев, в некоторых клубочках определяются эритроциты.
В опытных группах, где отмечено выздоровление лабораторных животных после лечения препаратом Скай-форс, гистологическая картина внутренних органов практически соответствует гистологическому описанию внутренних органов здоровых животных.
Поддержание колонизационной резистентности кишечника лабораторного животного по отношению к возбудителю.
От состояния колонизационной резистентности слизистой оболочки кишечника зависит начальный этап взаимодействия возбудителя с чувствительным организмом, то есть приживление или элиминация возбудителя, и в последующем исход заболевания. Препарат Скай-форс, введенный в организм, разрушает микробные клетки, в результате чего предотвращается адгезия возбудителя к эпителиоцитам и последующее его размножение. Таким образом, препарат Скай-форс препятствует размножению возбудителя, поддерживает колонизационную резистентность слизистой оболочки кишечника, обеспечивает нормальной микрофлоре кишечника микроэкологическое преимущество. Так, если в контрольной группе лабораторных животных, где лечение не проводили, общее количество нормальной микрофлоры снизилось с (6,0-6,4)·109 КОЕ·г-1 до (1,6-2,4)·104 КОЕ·г-1, то при введении лабораторным животным препарата Скай-форс изменений в состоянии нормальной микрофлоры не выявлено: в начале эксперимента общее ее количество составляло (6,1-6,5)·109 КОЕ·г-1, а в конце - (5,8-8,1)·109 КОЕ·г-1 (данные представлены в табл. 1 и 2). Сохранение микробиоты при введении препарата Скай-форс подтверждается также определением количества таких ведущих представителей микробиоты, как бифидобактерии, лактобактерии и эшерихии (данные также представлены в табл 1 и 2).
Пример 3
Выращивают культуру вакцинного штамма чумного микроба (Y. pestis EV НИИЭГ), после чего готовят суспензию бактерий на изотоническом растворе хлорида натрия. Вносят в пробирку с бактериальной суспензией препарат Скай-форс до конечной концентрации 10 мкг·мл-1. Производят отбор проб через 5, 8, 10 мин для определения количества жизнеспособных бактериальных клеток и проведения электронной микроскопии. Посев проб, отобранных после взаимодействия бактерий с препаратом Скай-форс, проводят на плотную питательную среду в чашках Петри и просматривают по окончании инкубирования в течение 48 ч при температуре 28°C. Результаты контроля бактерицидного действия препарата Скай-форс оценивают по наличию или отсутствию роста бактерий Y. pestis EV НИИЭГ на плотных питательных средах, а также по данным электронно-микроскопического исследования (рисунок).
Изучение бактерицидного действия препарата Скай-форс на микробную клетку показало, что через 5 мин контакта жизнеспособными остаются единичные бактерии. Через 8 мин контакта микробных клеток с препаратом Скай-форс жизнеспособных бактерий бактериологическим методом обнаружить не удается: как следует из микрофотографии на рисунке, контур клеток нарушен, видны расслоение клеточной стенки и разрывы в ней. К 10 минуте воздействия препарата Скай-форс на микробные клетки наблюдается их фрагментация, нарушение целостности клеточной оболочки и выход цитоплазмы за пределы клеточной оболочки. Указанные повреждения структуры клетки делают ее абсолютно нежизнеспособной.
Представленные результаты экспериментальных исследований со всей очевидностью свидетельствуют о больших потенциальных возможностях и уникальности свойств препарата Скай-форс, а также о перспективности его использования в качестве препарата первого выбора при лечении системных бактериальных инфекций, когда фактор времени является ключевым, а безотлагательно введенное парентерально лаборраторным животным лекарственное средство Скай-форс полностью купирует генерализацию инфекционного процесса.
Figure 00000003
Figure 00000004

Claims (3)

1. Способ лечения системных иерсиниозных бактериальных инфекций псевдотуберкулеза или кишечного иерсиниоза в эксперименте путем инфицирования лабораторных животных соответствующей культурой патогенных иерсиний псевдотуберкулеза или кишечного иерсиниоза для инициации экспериментальной патологии с последующим внутримышечным введением лечебного препарата Скай-форс в терапевтически эффективной дозе под контролем содержания патогенных бактерий и индигенной микрофлоры в течение срока, достаточного для устранения заболевания, отличающийся тем, что в качестве лечебного средства внутримышечно в первые 24 ч после инфицирования каждому лабораторному животному, а именно белой конвенциональной мыши, 1 раз в сутки вводят препарат Скай-форс в приготовленном для применения виде как средство монотерапии, обеспечивающее невосприимчивость органов и тканей к возбудителю путем создания в них бактерицидных концентраций препарата Скай-форс, а также поддержание колонизационной резистентности кишечника по отношению к возбудителю, при этом каждому лабораторному животному препарат Скай-форс вводят 25 мг на 1 кг массы в течение 5 дней.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что о колонизационной резистентности слизистой кишечника судят по отсутствию дисбиотических изменений в составе кишечной микрофлоры путем подсчета общего количества микроорганизмов кишечной микрофлоры и отдельных ее представителей (КОЕ·г-1) на основании учета выросших колоний после посева суспензий фекалий лабораторных животных на селективные питательные среды и инкубации посевов при температуре 37°C в течение 48 ч.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что инициация у лабораторных животных экспериментальной системной иерсиниозной бактериальной инфекции осуществляют путем энтерального введения им возбудителей псевдотуберкулеза или кишечного иерсиниоза в дозе, равной 10 LD50.
RU2014116017/15A 2014-04-22 2014-04-22 Способ лечения системных иерсиниозных бактериальных инфекций в эксперименте RU2563174C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2014116017/15A RU2563174C1 (ru) 2014-04-22 2014-04-22 Способ лечения системных иерсиниозных бактериальных инфекций в эксперименте

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2014116017/15A RU2563174C1 (ru) 2014-04-22 2014-04-22 Способ лечения системных иерсиниозных бактериальных инфекций в эксперименте

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2563174C1 true RU2563174C1 (ru) 2015-09-20

Family

ID=54147709

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2014116017/15A RU2563174C1 (ru) 2014-04-22 2014-04-22 Способ лечения системных иерсиниозных бактериальных инфекций в эксперименте

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2563174C1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2789465C1 (ru) * 2022-04-21 2023-02-03 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Вятский государственный университет" Способ профилактики и лечения патологических изменений зубочелюстной системы при пародонтозе

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2161972C2 (ru) * 1998-10-16 2001-01-20 Хачатрян Ашот Папикович Способ комплексной патогенетической терапии больных описторхозом
RU2230564C2 (ru) * 2002-01-25 2004-06-20 Щинов Андрей Иванович Способ лечения дисбактериоза различной этиологии, в том числе острых кишечных инфекций

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2161972C2 (ru) * 1998-10-16 2001-01-20 Хачатрян Ашот Папикович Способ комплексной патогенетической терапии больных описторхозом
RU2230564C2 (ru) * 2002-01-25 2004-06-20 Щинов Андрей Иванович Способ лечения дисбактериоза различной этиологии, в том числе острых кишечных инфекций

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ТРУШ Р.В. и др. Изучение токсичности наноструктурного препарата скай-форса.// Ученые записки Казанской Государственной академии ветеринарной медицины им.Н.Э.Баумана, 2013, том 214, с. 440-445, найдено из Интернета на сайте http://cyberleninka.ru/article/n/izuchenie-toksichnosti-nanostrukturnogo-preparata-skay-forsa. ТРУШ Р.В. Производственные испытания экспериментального ветеринарного препарата скай-форс.// Материалы конференции "Инновационные пути развития АПК на современном этапе" XVI Международная научно- производственная конференция (14-16 мая 2012) г. Белгород, с.76. М.Д. ШЕСТАКОВА идр. Диагностическая и лечебная тактика при абдоминальной форме иерсиниозов у детей // Педиатрия, 2012, Том.91, N4, с. 37-42 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2789465C1 (ru) * 2022-04-21 2023-02-03 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Вятский государственный университет" Способ профилактики и лечения патологических изменений зубочелюстной системы при пародонтозе

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Amdekar et al. Probiotic therapy: immunomodulating approach toward urinary tract infection
Mulcahy et al. Pseudomonas aeruginosa biofilms in disease
Horvath Jr et al. Morphological plasticity promotes resistance to phagocyte killing of uropathogenic Escherichia coli
WO2021109549A1 (zh) 一种槲皮素与抗菌药物的联合应用
Arif et al. In vitro and in vivo antimicrobial activities of seeds of Caesalpinia bonduc (Lin.) Roxb.
Lock et al. Ophidia (snakes)
Kim et al. Scrub typhus meningoencephalitis occurring during doxycycline therapy for Orientia tsutsugamushi
CN110124012B (zh) 一种颗粒溶素作为多粘菌素类抗生素增效剂的应用
Ferris Current understanding of bacterial biofilms and latent infections: A clinical perspective
CN116870118B (zh) 一种杂化膜囊泡及其制备方法和抗菌应用
CN110151761B (zh) 一种替代抗生素的药物--褪黑素抵抗患儿脑膜炎大肠杆菌病原感染的应用
RU2563174C1 (ru) Способ лечения системных иерсиниозных бактериальных инфекций в эксперименте
WO2019178954A1 (zh) 琥珀酸在提高细菌对抗生素敏感性方面的应用
Dzhabrailova et al. Characterization of Physico-Chemical Parameters and Toxicological Properties of Neocytin
Kumar et al. Advanced acuity in microbial biofilm genesis, development, associated clinical infections and control
Sykora et al. Protothecal peritonitis in child after bone marrow transplantation: case report and literature review of paediatric cases
RU2614730C1 (ru) Антибактериальное средство и способ лечения кишечного иерсиниоза, или псевдотуберкулеза, или эшерихиоза
Jayathilaka et al. Immunomodulatory responses of extracellular vesicles released by gram-positive fish pathogen Streptococcus parauberis
ES2371398A1 (es) Uso de un iminoazúcar como inhibidor de la adherencia a células epiteliales.
CN114652716B (zh) 地美硝唑在制备抗β-内酰胺类耐药性大肠杆菌药物中的应用
Pruthi et al. Etio-pathological studies on poultry mortality with reference to E. coli infections
CN108186618A (zh) 柠檬醛及其衍生物在制备mrsa感染性疾病药物中的新用途
CN116747221B (zh) 一种抗菌组合物及其制备方法和应用
CN109045044A (zh) 一种复方药剂及其制备方法、用途
RU2526806C2 (ru) Способ предотвращения развития кишечной инфекции бактериальной природы