RU2535978C1 - Biopreparation for cleaning environmental objects from hydrocarbon pollution, method of obtaining and application thereof - Google Patents
Biopreparation for cleaning environmental objects from hydrocarbon pollution, method of obtaining and application thereof Download PDFInfo
- Publication number
- RU2535978C1 RU2535978C1 RU2013112839/10A RU2013112839A RU2535978C1 RU 2535978 C1 RU2535978 C1 RU 2535978C1 RU 2013112839/10 A RU2013112839/10 A RU 2013112839/10A RU 2013112839 A RU2013112839 A RU 2013112839A RU 2535978 C1 RU2535978 C1 RU 2535978C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pah
- vkpm
- bak
- consortium
- biological product
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Processing Of Solid Wastes (AREA)
- Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии и экологии. Оно может быть использовано для защиты окружающей среды при биоремедиации промышленных и природных объектов техногенно загрязненных нефтяными и полициклическими ароматическими углеводородами (ПАУ).The invention relates to biotechnology and ecology. It can be used to protect the environment during bioremediation of industrial and natural objects technologically contaminated with oil and polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs).
Кроме нефтяных углеводородов широко распространенными, высоко токсичными загрязнителями окружающей среды являются полиароматические углеводороды и, особенно, самый токсичный из них бенз(а)пирен, являющийся по данным ВОЗ (Всемирной организации здравоохранения) провокатором онкологических заболеваний. Бенз(а)пирен и другие ПАУ образуются при неполном сгорании твердых и жидких топлив в энергетических установках, в двигателях внутреннего сгорания и концентрируются в поверхностном почвенном слое. С вдыхаемой пылью, с водой, с пищевыми продуктами, источником которых были загрязненные ПАУ почвы, по трофическим цепям техногенные токсиканты проникают в организм человека, что приводит к разрушительным последствиям для здоровья. Поэтому в санитарных правилах, регламентирующих содержание токсикантов в почвах населенных мест, сельхозугодий, бенз(а)пирен причислен к токсикантам первого класса опасности, концентрация которого в почве ограничена ПДК 20 мкг/кг почвы (предельно допустимой концентрацией).In addition to petroleum hydrocarbons, polyaromatic hydrocarbons and, especially, the most toxic of them, benz (a) pyrene, which, according to the WHO (World Health Organization), is a provocator of oncological diseases, are widespread, highly toxic environmental pollutants. Benz (a) pyrene and other PAHs are formed during the incomplete combustion of solid and liquid fuels in power plants, in internal combustion engines and are concentrated in the surface soil layer. With inhaled dust, water, and food products, the source of which was contaminated with PAH soils, man-made toxicants penetrate the human body through trophic chains, which leads to devastating health consequences. Therefore, in the sanitary rules governing the content of toxicants in soils of populated areas, farmland, benzo (a) pyrene is classified as toxicants of the first hazard class, the concentration of which in the soil is limited by the MPC of 20 μg / kg of soil (maximum permissible concentration).
Кроме гигиенического значения загрязнения ПАУ имеет и негативный экологический аспект - под действием ПАУ происходит угнетение почвенной биоты, что регистрируется подавлением биохимической активности почв, например дегидрогеназной, каталазной активностью.In addition to the hygienic significance of pollution, PAHs also have a negative ecological aspect - under the influence of PAHs, soil biota is inhibited, which is recorded by suppression of the biochemical activity of soils, for example, dehydrogenase, catalase activity.
В значительной степени подвергнуты техногенному загрязнению ПАУ городские, в большой степени, придорожные территории и промышленные зоны, особенно связанные со стоянками автотранспорта, с хранением и использованием нефтепродуктов - базы топлив различных производственных предприятий, парки железнодорожного и автотранспорта. В настоящее время, в связи с насыщением городской среды автотранспортом, поток загрязнений этими высокотоксичными веществами значительно возрастает. Поведение ПАУ в почвах зависит от климатических условий и взаимодействия их с органическими и минеральными компонентами почвы. В отсутствии сильных окислителей и УФ-излучения ведущая роль в процессах деструкции ПАУ принадлежит биологическим системам. Способность микроорганизмов утилизировать ПАУ путем включения их в свой метаболизм отмечена у многих видов аэробных бактерий, использующих ПАУ в качестве углеродсодержащего субстрата для обеспечения себя энергией.Urban, to a large extent, roadside territories and industrial zones, which are especially associated with parking lots, with the storage and use of petroleum products — the fuel bases of various industrial enterprises, railway and motor vehicle parks — are largely subject to technogenic pollution by PAHs. Currently, due to the saturation of the urban environment with motor vehicles, the flow of pollution by these highly toxic substances is significantly increasing. The behavior of PAHs in soils depends on climatic conditions and their interaction with organic and mineral components of the soil. In the absence of strong oxidizing agents and UV radiation, biological systems play a leading role in PAH degradation processes. The ability of microorganisms to utilize PAHs by incorporating them into their metabolism has been observed in many types of aerobic bacteria that use PAHs as a carbon-containing substrate to provide themselves with energy.
Биопрепарат для очистки объектов окружающей среды от нефтезагрязнений и ПАУ содержит биомассу следующих штаммов бактерий: Rhodococcus qingshengii БАК-ПАУ-1 ВКПМ АС-1946, Pusillimonas ginsegisoli БАК-ПАУ-2 ВКПМ В-11370, Shinella granuli БАК-ПАУ-3 ВКПМ В-11371 в равных соотношениях.The biological product for cleaning environmental objects from oil pollution and PAHs contains the biomass of the following bacterial strains: Rhodococcus qingshengii BAK-PAH-1 VKPM AC-1946, Pusillimonas ginsegisoli BAK-PAH-2 VKPM B-11370, Shinella granuli BAK-PAU-3 11371 in equal proportions.
Биопрепарат применяется в форме жидкой стабилизированной суспензии, для получения иммобилизованной формы биопрепарата проводится иммобилизация биомассы бактериальных клеток на минеральном или органическом носителе.The biological product is used in the form of a stabilized liquid suspension, to obtain an immobilized form of the biological product, the biomass of bacterial cells is immobilized on a mineral or organic carrier.
Известен консорциум нефтеокисляющих микроорганизмов Pseudomonas putida ПИ Ко-1, Pseudomonas fluorescens ПИ-896, Micrococcus sp. ПИ Ку-1, Burkholderia caryophylli Jap-3, Serratia odorifera Jap-1, осуществляющих наряду с деструкцией нефти и нефтепродуктов утилизацию полициклических ароматических углеводородов, а именно антрацена, фенантрена и производных пирена, в почвах, имеющих высокое содержание растворимых форм солей марганца и меди (RU №2191643 В09С 1/10, 2001.07/09).A known consortium of oil-oxidizing microorganisms Pseudomonas putida PI Ko-1, Pseudomonas fluorescens PI-896, Micrococcus sp. PI Ku-1, Burkholderia caryophylli Jap-3, Serratia odorifera Jap-1, which along with the destruction of oil and oil products utilize polycyclic aromatic hydrocarbons, namely anthracene, phenanthrene and pyrene derivatives, in soils with a high content of soluble forms of manganese and copper salts (RU No. 2191643 B09C 1/10, 2001.07 / 09).
Недостатком указанного способа является то, что деструкция полиароматических соединений ограничивается трех- и четырехъядерными полиароматическими соединениями, сведения о биодеструкции бенз(а)пирена (5-ядерный ПАУ), самого высокотоксичного соединения, первого класса опасности, отсутствуют.The disadvantage of this method is that the destruction of polyaromatic compounds is limited to tri- and tetra-nuclear polyaromatic compounds, there is no information on the biodegradation of benzo (a) pyrene (5-core PAH), the most highly toxic compound, first hazard class.
Известен способ очистки почвы от нефти и полициклических ароматических углеводородов в условиях повышенной минерализации среды, представляющий собой консорциум бактерийA known method of cleaning the soil from oil and polycyclic aromatic hydrocarbons in conditions of increased mineralization of the environment, which is a consortium of bacteria
Rhodococcus sp.SMB37, Rhodococcus sp.SMB38, Arthrobacter sp.SMB32, Microbacterium sp.SMB33, Thalassospira sp.SMB34, Halomonas sp.SMB31, Salinicola socius SMB3 (RU №2388816 C12R1/00, 2008.04/07).Rhodococcus sp.SMB37, Rhodococcus sp.SMB38, Arthrobacter sp.SMB32, Microbacterium sp.SMB33, Thalassospira sp.SMB34, Halomonas sp.SMB31, Salinicola socius SMB3 (RU No. 2388816 C12R1 / 00, 2008.04 / 07).
Консорциум может быть использован для очистки от нефти, нефтепродуктов и полициклических ароматических углеводородов, а именно нафталина, бифенила, аценафтена, фенантрена, антрацена в условиях засоления.The consortium can be used to clean oil, petroleum products and polycyclic aromatic hydrocarbons, namely naphthalene, biphenyl, acenaphthene, phenanthrene, anthracene under saline conditions.
Недостатком указанного способа является узкий спектр биодеградируемых полициклических ароматических углеводородов, в котором не представлены самые токсичные 5-ядерные ароматические углеводороды, в том числе бенз(а)пирен.The disadvantage of this method is the narrow spectrum of biodegradable polycyclic aromatic hydrocarbons, which does not represent the most toxic 5-core aromatic hydrocarbons, including benz (a) pyrene.
Наиболее близким к предлагаемому изобретению является штамм бактерий Pseudomonas alcaligenes MEV, который утилизирует нефть, мазут, дизельное топливо, полициклические ароматические углеводороды, содержащие от 2 до 4 бензольных колец - нафталин, фенантрен, антрацен, флуорантен, фенол, также он устойчив к ионам тяжелых металлов - Pb, Zn, Mo, Fe, Cr (RU 2228953, C12N 1/20, C02F 3/34, B09C 1/10).Closest to the present invention is a bacterial strain Pseudomonas alcaligenes MEV, which utilizes oil, fuel oil, diesel fuel, polycyclic aromatic hydrocarbons containing from 2 to 4 benzene rings - naphthalene, phenanthrene, anthracene, fluorantene, phenol, it is also resistant to heavy metal ions - Pb, Zn, Mo, Fe, Cr (RU 2228953, C12N 1/20, C02F 3/34, B09C 1/10).
Недостатком этого способа очистки является то, что он осуществляет деструкцию ПАУ, содержащих только 2, 3 и 4 ароматические кольца, и также содержит только один штамм бактерий рода Псевдомонас, хотя известно, что биопрепараты, состоящие из микроорганизмов разных таксономических групп, более эффективно утилизируют органические токсиканты.The disadvantage of this purification method is that it carries out the destruction of PAHs containing only 2, 3 and 4 aromatic rings, and also contains only one strain of bacteria of the genus Pseudomonas, although it is known that biological products consisting of microorganisms of different taxonomic groups more efficiently utilize organic toxicants.
Задача данного изобретения состоит в создании эффективного способа очистки объектов окружающей среды от загрязнения нефтяными и полициклическими ароматическими углеводородами с использованием нового биопрепарата, состоящего из консорциума микроорганизмов-деструкторов, способных к глубокой деструкции нефтяных и полициклических углеводородов.The objective of this invention is to create an effective method for cleaning environmental objects from contamination with oil and polycyclic aromatic hydrocarbons using a new biological product, consisting of a consortium of degradation microorganisms capable of deep destruction of oil and polycyclic hydrocarbons.
Технический результат, который может быть достигнут при использовании предлагаемого изобретения, заключается в повышении эффективности очистки объектов окружающей среды от загрязнения нефтяными и полициклическими ароматическими углеводородами за счет того, что консорциум микроорганизмов, входящий в состав биопрепарата, способен к деградации нефтяных и полициклических углеводородов в широком диапазоне температур окружающей среды, а также в условиях загрязнения почв ионами тяжелых металлов и при высоком солевом фоне.The technical result that can be achieved by using the present invention is to increase the efficiency of cleaning environmental objects from contamination with oil and polycyclic aromatic hydrocarbons due to the fact that a consortium of microorganisms that are part of the biological product is capable of degrading oil and polycyclic hydrocarbons in a wide range ambient temperatures, as well as in conditions of soil pollution by heavy metal ions and with a high salt background.
Поставленная задача решается за счет того, что в биопрепарате для очистки объектов окружающей среды от загрязнений нефтью, нефтепродуктами, полициклическими ароматическими углеводородами (ПАУ), включающем консорциум штаммов микроорганизмов и защитную среду для жидкой формы или инертный носитель для сухой формы, предлагается использовать в качестве консорциума штаммов микроорганизмов штаммы бактерий: Rhodococcus qingshengii БАК-ПАУ-1 ВКПМ АС-1946, Pusillimonas ginsegisoli БАК-ПАУ-2 ВКПМ В-11370, Shinella granuli БАК-ПАУ-3 ВКПМ В-11371 в равных соотношениях. Дополнительными отличиями предлагаемого биопрепарата являются:The problem is solved due to the fact that in a biological product for cleaning environmental objects from oil, oil products, polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), including a consortium of microorganism strains and a protective medium for liquid form or an inert carrier for dry form, it is proposed to use it as a consortium microorganism strains bacterial strains: Rhodococcus qingshengii BAK-PAH-1 VKPM AC-1946, Pusillimonas ginsegisoli BAK-PAH-2 VKPM B-11370, Shinella granuli BAK-PAH-3 VKPM B-11371 in equal proportions. Additional differences of the proposed biological product are:
- жидкая форма содержит в качестве защитной среды раствор 5% хлорида натрия,- the liquid form contains as a protective medium a solution of 5% sodium chloride,
- сухая форма содержит в качестве инертного носителя минеральный или органический носитель, на котором иммобилизован консорциум штаммов бактерий: Rhodococcus qingshengii БАК-ПАУ-1 ВКПМ АС-1946, Pusillimonas ginsegisoli БАК-ПАУ-2 ВКПМ В-11370, Shinella granuli БАК-ПАУ-3 ВКПМ В-11371 в соотношении 1:20,- the dry form contains a mineral or organic carrier as an inert carrier on which a consortium of bacterial strains is immobilized: Rhodococcus qingshengii BAK-PAH-1 VKPM AC-1946, Pusillimonas ginsegisoli BAK-PAH-2 VKPM B-11370, Shinella granuli-BA 3 VKPM B-11371 in the ratio of 1:20,
- в качестве минерального или органического носителя может быть, например, верховой торф, вспученный перлит, вермикулит, шелуха гречихи, полипропиленовое волокно и т.д.- as a mineral or organic carrier may be, for example, horse peat, expanded perlite, vermiculite, buckwheat husk, polypropylene fiber, etc.
Поставленная задача решается также за счет того, что в способе получения биопрепарата для очистки объектов окружающей среды от загрязнений нефтью, нефтепродуктами, полициклическими ароматическими углеводородами (ПАУ), включающем глубинное культивирование консорциума микроорганизмов на питательной среде с получением клеточной суспензии и дальнейшую ее обработку в защитной среде для получения жидкой формы, предлагается в качестве консорциума штаммов микроорганизмов использовать штаммы бактерий: Rhodococcus qingshengii БАК-ПАУ-1 ВКПМ АС-1946, Pusillimonas ginsegisoli БАК-ПАУ-2 ВКПМ В-11370, Shinella granuli БАК-ПАУ-3 ВКПМ В-11371 в равных соотношениях.The problem is also solved due to the fact that in the method of obtaining a biological product for cleaning environmental objects from pollution by oil, oil products, polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), including deep cultivation of a consortium of microorganisms on a nutrient medium to obtain a cell suspension and its further processing in a protective environment to obtain a liquid form, it is proposed to use bacterial strains as a consortium of microorganism strains: Rhodococcus qingshengii BAK-PAH-1 VKPM AC-1946, Pusillimo nas ginsegisoli BAK-PAH-2 VKPM B-11370, Shinella granuli BAK-PAH-3 VKPM B-11371 in equal proportions.
Дополнительным отличием предлагаемого способа явялтся то, что в качестве защитной среды вносят раствор 5% хлорид натрия.An additional difference of the proposed method was that a solution of 5% sodium chloride was added as a protective medium.
Поставленная задача решается также за счет того, что в способе получения биопрепарата для очистки объектов окружающей среды от загрязнений нефтью, нефтепродуктами, полициклическими ароматическими углеводородами (ПАУ), включающем глубинное культивирование консорциума микроорганизмов на питательной среде с получением клеточной суспензии и дальнейшую ее иммобилизацию на инертном носителе для получения сухой формы, предлагается в качестве консорциума штаммов микроорганизмов использовать штаммы бактерий: Rhodococcus qingshengii БАК-ПАУ-1 ВКПМ АС-1946, Pusillimonas ginsegisoli БАК-ПАУ-2 ВКПМ В-11370, Shinella granuli БАК-ПАУ-3 ВКПМ В-11371 в равных соотношениях.The problem is also solved due to the fact that in the method of obtaining a biological product for cleaning environmental objects from pollution by oil, oil products, polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), including deep cultivation of a consortium of microorganisms on a nutrient medium to obtain a cell suspension and its further immobilization on an inert carrier to obtain a dry form, it is proposed to use bacterial strains as a consortium of microorganism strains: Rhodococcus qingshengii BAK-PAH-1 VKPM AC- 1946, Pusillimonas ginsegisoli BAK-PAH-2 VKPM B-11370, Shinella granuli BAK-PAH-3 VKPM B-11371 in equal proportions.
Дополнительными отличиями предлагаемого способа являются:Additional differences of the proposed method are:
- в качестве защитной среды вносят раствор 5% хлорида натрия,- as a protective medium make a solution of 5% sodium chloride,
- консорциум штаммов бактерий: Rhodococcus qingshengii БАК-ПАУ-1 ВКПМ АС-1946, Pusillimonas ginsegisoli БАК-ПАУ-2 ВКПМ В-11370, Shinella granuli БАК-ПАУ-3 ВКПМ В-11371 иммобилизуют на инертном носителе в соотношении 1:20, - a consortium of bacterial strains: Rhodococcus qingshengii BAK-PAH-1 VKPM AC-1946, Pusillimonas ginsegisoli BAK-PAH-2 VKPM B-11370, Shinella granuli BAK-PAH-3 VKPM B-11371 are immobilized on an inert carrier, in a ratio of 1:20, in a carrier of 1:20
- в качестве инертного носителя используют минеральный или- as an inert carrier, mineral or
органический носитель, например верховой торф, вспученный перлит, вермикулит, шелуху гречихи, полипропиленовое волокно и т.д.organic carrier, e.g. horse peat, expanded perlite, vermiculite, buckwheat husk, polypropylene fiber, etc.
Поставленная задача решается также за счет того, что в способе очистки объектов окружающей среды от загрязнений нефтью, нефтепродуктами, полициклическими ароматическими углеводородами (ПАУ), включающем внесение в загрязненную среду биопрепарата, состоящего из консорциума микроорганизмов и защитной среды для жидкой формы или инертного носителя для твердой формы, предлагается использовать в качестве консорциума микроорганизмов следующие штаммы бактерий: Rhodococcus qingshengii БАК-ПАУ-1 ВКПМ АС-1946, Pusillimonas ginsegisoli БАК-ПАУ-2 ВКПМ В-11370, Shinella granuli БАК-ПАУ-3 ВКПМ В-11371 в равных соотношениях. Внесение биопрепарата предлагается производить из расчета 0,5-1 л/м кв. в концентрации 1×106-1×107 КОЕ/г биопрепарата совместно с комплексным минеральным удобрением - азофоска, в концентрации 20-200 г/м2.The problem is also solved due to the fact that in the method of purification of environmental objects from pollution by oil, oil products, polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), including the introduction of a biological product into a polluted medium, consisting of a consortium of microorganisms and a protective medium for liquid form or an inert carrier for solid forms, it is proposed to use the following bacterial strains as a consortium of microorganisms: Rhodococcus qingshengii BAK-PAH-1 VKPM AC-1946, Pusillimonas ginsegisoli BAK-PAH-2 VKPM B-11370, Shinella granuli BAK-PAH -3 VKPM B-11371 in equal proportions. The introduction of a biological product is proposed to be carried out at the rate of 0.5-1 l / m2. in a concentration of 1 × 10 6 -1 × 10 7 CFU / g of a biological product together with complex mineral fertilizer - azofoska, in a concentration of 20-200 g / m 2 .
Дополнительными отличиями предлагаемого способа являются:Additional differences of the proposed method are:
- жидкая форма биопрепарата содержит в качестве защитной среды раствор 5% хлорида натрия,- the liquid form of the biological product contains as a protective medium a solution of 5% sodium chloride,
Сухая форма биопрепарата содержит в качестве инертного носителя минеральный или органический носитель, на котором иммобилизован консорциум штаммов бактерий: Rhodococcus qingshengii БАК-ПАУ-1 ВКПМ АС-1946, Pusillimonas ginsegisoli БАК-ПАУ-2 ВКПМ В-11370, Shinella granuli БАК-ПАУ-3 ВКПМ В-11371 в соотношении 1:20,The dry form of the biological product contains a mineral or organic carrier as an inert carrier, on which a consortium of bacterial strains is immobilized: Rhodococcus qingshengii BAK-PAH-1 VKPM AS-1946, Pusillimonas ginsegisoli BAK-PAH-2 VKPM B-11370, Shaella gran 3 VKPM B-11371 in the ratio of 1:20,
- в качестве минерального или органического носителя может быть, например, верховой торф, вспученный перлит, вермикулит, шелуха гречихи, полипропиленовое волокно и т.д.- as a mineral or organic carrier may be, for example, horse peat, expanded perlite, vermiculite, buckwheat husk, polypropylene fiber, etc.
Предлагаемое микробное сообщество является естественной природной ассоциацией, выделенной из почвы, загрязненной креозотом и нефтепродуктами. Состав консорциума стабилен во времени, соотношение штаммов может варьироваться в зависимости от условий культивирования микробного сообщества.The proposed microbial community is a natural association derived from soil contaminated with creosote and petroleum products. The composition of the consortium is stable over time, the ratio of strains may vary depending on the cultivation conditions of the microbial community.
Бактериальный консорциум непатогенен (невирулентен, нетоксичен, токсигенностью не обладает), его преимуществом является высокая скорость деструкции полициклических углеводородов.The bacterial consortium is non-pathogenic (non-virulent, non-toxic, non-toxic), its advantage is the high rate of destruction of polycyclic hydrocarbons.
В состав биопрепарата входит консорциум бактерий-деструкторов нефтяных и полиароматических углеводородов: штаммы бактерий: Rhodococcus qingshengii БАК-ПАУ-1 ВКПМ АС-1946, Pusillimonas ginsegisoli БАК-ПАУ-2 ВКПМ В-11370, Shinella granuli БАК-ПАУ-3 ВКПМ В-11371, которые идентифицированы до вида с помощью анализа генов, кодирующих 16S рРНК ВКМП, ФГУП ГосНИИГенетика, и депонированы во Всероссийскую коллекцию промышленных штаммов микроорганизмов (ВКПМ).The composition of the biological product includes a consortium of destruction bacteria of petroleum and polyaromatic hydrocarbons: bacterial strains: Rhodococcus qingshengii BAK-PAH-1 VKPM AS-1946, Pusillimonas ginsegisoli BAK-PAU-2 VKPM B-11370, Shinella granuli-BAK-3K BAK 11371, which were identified to the species by analysis of genes encoding 16S rRNA of VKMP, FSUE GosNIIGenetika, and deposited in the All-Russian collection of industrial microorganism strains (VKPM).
Штамм бактерий Rhodococcus qingshengii БАК-ПАУ-1 ВКПМ АС-1946, выделен из почвы, загрязненной креозотом.The bacterial strain Rhodococcus qingshengii BAK-PAH-1 VKPM AC-1946, isolated from soil contaminated with creosote.
Культурально-морфологические признаки: грамположительные неправильные палочки с заостренными концами 0.5×2.0-4.0 мкм. Кустистые, первичное ветвление и мицелий не характерны, цикл палочка-кокк отсутствует. Колонии довольно крупные - 4-7 мм в диаметре, округлые, выпуклые, кремовые, матовые (не блестящие), на 7-10 сутки колонии грязно-оранжевые с более плотным центром, суховатые.Cultural and morphological signs: gram-positive irregular rods with pointed ends 0.5 × 2.0-4.0 microns. Bushy, primary branching and mycelium are not characteristic, the cycle of bacillus-coccus is absent. The colonies are quite large - 4-7 mm in diameter, roundish, convex, cream, dull (not shiny), on the 7-10th day the colonies are dirty orange with a denser center, rather dry.
Физиолого-биохимические признаки: аэроб, хемоорганотроф, каталазоположительный. Галотолерантность (8% NaCl) не характерна, сероводород не образует.Physiological and biochemical signs: aerob, chemoorganotroph, catalase-positive. Halotolerance (8% NaCl) is not characteristic, hydrogen sulfide does not form.
Штамм бактерий Pusillimonas ginsegisoli БАК-ПАУ-2 ВКПМ В-11370 выделен из почвы, загрязненной креозотом.The bacterial strain Pusillimonas ginsegisoli BAK-PAH-2 VKPM B-11370 was isolated from soil contaminated with creosote.
Культурально-морфологические признаки: грамотрицательные мелкие тонкие правильные палочки 0.3 х 1.0-3.0 мкм, подвижные. Колонии блестящие 4-7 мм в диаметре, округлые оранжево-бежевые, слегка выпуклые, с более светлым полупрозрачным краем.Cultural and morphological characteristics: gram-negative small thin regular bacilli 0.3 x 1.0-3.0 microns, motile. The colonies are brilliant 4-7 mm in diameter, rounded orange-beige, slightly convex, with a lighter translucent edge.
Физиолого-биохимические признаки: аэроб, О/F - тест - «+/-», внеклеточные пигменты не характерны, оксидазо- и каталазоположительные. Способны использовать глюкозу, валин и аргинин в качестве единственного источника углерода.Physiological and biochemical characteristics: aerob, O / F - test - "+/-", extracellular pigments are not characteristic, oxidase - and catalase-positive. Able to use glucose, valine and arginine as the sole carbon source.
Штамм бактерий Shinella granuli БАК-ПАУ-3 ВКПМ В-11371 выделен из почвы, загрязненной креозотом.The bacterial strain Shinella granuli BAK-PAH-3 VKPM B-11371 isolated from soil contaminated with creosote.
Культурально-морфологические признаки: грамотрицательные, мелкие тонкие правильные палочки, 0.3 ч 1.0-3.0 мкм, подвижные. Колонии блестящие, 5-8 мм в диаметре, округлые, грязно-белые, слегка выпуклые, полупрозрачные, с более светлым тонким краем.Cultural and morphological signs: gram-negative, small thin thin regular bacilli, 0.3 h 1.0-3.0 μm, motile. The colonies are brilliant, 5-8 mm in diameter, roundish, off-white, slightly convex, translucent, with a lighter thin edge.
Физиолого-биохимические признаки: аэроб, O/F - тест - «+/-», внутри- и внеклеточные пигменты не характерны, оксидазо- и каталазоположительные. Способны использовать глюкозу, но не валин и аргинин в качестве единственного источника углерода.Physiological and biochemical characteristics: aerob, O / F - test - "+/-", intracellular and extracellular pigments are not characteristic, oxidase - and catalase-positive. Able to use glucose, but not valine and arginine as the sole carbon source.
Для получения иммобилизованных форм биопрепарата суспензию биомассы бактериального консорциума наносят на минеральный или органический инертный носитель типа вспученный вермикулит, вспученный перлит, верховой торф с последующей сушкой.To obtain immobilized forms of a biological product, a suspension of the biomass of a bacterial consortium is applied to a mineral or organic inert carrier such as expanded vermiculite, expanded perlite, and peat, followed by drying.
Бактериальный консорциум хранится на агаризованном ферментативном гидролизате рыбной муки, содержащей 50 мкг креазота на чашку Петри, при +4°C, с регулярным пересевом.The bacterial consortium is stored on an agarized enzymatic hydrolyzate of fishmeal containing 50 μg of creazote per Petri dish, at + 4 ° C, with regular reseeding.
Биопрепарат, полученный на основе этого консорциума, предложен для очистки почвы от углеводородов впервые, в связи с чем можно сделать вывод о соответствии предлагаемого консорциума критериям изобретения «новизна» и «изобретательский уровень».The biological product obtained on the basis of this consortium was proposed for the first time to clean the soil of hydrocarbons, in connection with which we can conclude that the proposed consortium meets the criteria of the invention of "novelty" and "inventive step".
Изобретение подтверждается следующими примерами.The invention is confirmed by the following examples.
Пример 1: Получение жидкой формы.Example 1: Obtaining a liquid form.
Предлагаемый бактериальный консорциум был выделен из техногенно загрязненной почвы. Для получения биомассы препарата проводится совместное культивирование штаммов, входящих в состав биопрепарата. Для культивирования микроорганизмов деструкторов Rhodococcus qingshengii, Pusillimonas ginsegisoli, Shinella granuli используют ферментаторы вместительностью 100-250 литров - с коэффициентом заполнения 0,6-0,7. Ферментаторы оснащены фильтрами тонкой очистки воздуха, датчиками температуры, рН, скорости перемешивания и расхода воздуха на аэрацию. Внесение посевного материала в ферментатор производится из соотношения 3 л микробной суспензии с концентрацией 109 клеток/мл на 60 л питательной среды. Выращивание культур микроорганизмов осуществляется в ферментаторе на питательной среде следующего состава (г/л):The proposed bacterial consortium was isolated from technologically contaminated soil. To obtain the biomass of the drug, co-cultivation of the strains that make up the biological product is carried out. For the cultivation of microorganisms of the destructors Rhodococcus qingshengii, Pusillimonas ginsegisoli, Shinella granuli, fermenters with a capacity of 100-250 liters with a fill factor of 0.6-0.7 are used. Fermenters are equipped with fine filters, sensors for temperature, pH, mixing speed and air flow for aeration. The introduction of seed into the fermenter is made from a ratio of 3 l of microbial suspension with a concentration of 109 cells / ml per 60 l of nutrient medium. Cultivation of microorganism cultures is carried out in a fermenter on a nutrient medium of the following composition (g / l):
- Кислотный гидролизат казеина или пептон - 10- Acid hydrolyzate of casein or peptone - 10
- Дрожжевой автолизат - 0,08 л- Yeast autolysate - 0.08 L
- K2HPO4 - 2- K 2 HPO 4 - 2
- MqSO4 - 0,3- MqSO 4 - 0.3
- MnSO4 - 0,05- MnSO 4 - 0.05
- (NH4)2SO4 - 6- (NH 4 ) 2 SO 4 - 6
- NaCl - 0,5- NaCl - 0.5
- Глюкоза - 20- Glucose - 20
- Дизельное топливо - 0,5- Diesel fuel - 0.5
- Софексил - 1 мл- Sofexil - 1 ml
- Вода водопроводная до 60 л- Tap water up to 60 l
pH среды - 6,8-7,2pH of the medium - 6.8-7.2
Поддерживаем следующие значения технологических параметров процесса культивирования:We support the following values of the technological parameters of the cultivation process:
- Температура 28±1 C°- Temperature 28 ± 1 C °
- Перемешивание - 200 об/мин- Mixing - 200 rpm
- Аэрация - 1 об/об/мин- Aeration - 1 rpm
- pH - 6,9±0,1 ед. рН- pH - 6.9 ± 0.1 units pH
Величину pH поддерживают автоматическим путем подачи 15%-ного раствора NH4OH, при непрерывном перемешивании.The pH value is maintained automatically by feeding a 15% solution of NH 4 OH, with continuous stirring.
Продолжительность процесса культивирования до 22-26 часов. Полученная суспензия имеет высокий клеточный титр 1010 КОЕ/мл. Биопрепарат получают стабилизацией полученной суспензии подходящим протектором. Биопрепарат хранят в виде суспензии при температуре 4-6°C до 60 суток.The duration of the cultivation process is up to 22-26 hours. The resulting suspension has a high cell titer of 10 10 CFU / ml. The biological product is obtained by stabilizing the resulting suspension with a suitable protector. The biological product is stored in suspension at a temperature of 4-6 ° C for up to 60 days.
Пример 2: Получение иммобилизованной (сухой) формы.Example 2: Obtaining an immobilized (dry) form.
В качестве носителя для иммобилизованной формы могут быть использованы следующие носители:The following carriers can be used as a carrier for the immobilized form:
- органические (торф, опилки, отходы зерновых сельскохозяйственных производств: шелухи гречихи и ячменя, лузги риса, полимерные волокна),- organic (peat, sawdust, agricultural grain waste: buckwheat and barley husks, rice husks, polymer fibers),
- минеральные (вспученный вермикулит, перлит, каолин, глауконит).- mineral (expanded vermiculite, perlite, kaolin, glauconite).
Для получения иммобилизованной формы микробный препарат суспензию клеток, полученную, как указано в примере 1, наносят на поверхность носителя в соотношении 1:20. Получившийся после иммобилизации препарат имеет стабильную устойчивую форму с высоким титром нефтеокисляющих культур 106 КОЕ/г препарата. Срок хранения биопрепарата в иммобилизованной форме без потери активности - 1 год.To obtain the immobilized form of the microbial preparation, a suspension of cells obtained as described in example 1 is applied to the surface of the carrier in a ratio of 1:20. The preparation obtained after immobilization has a stable stable form with a high titer of oil-oxidizing cultures 10 6 CFU / g of the preparation. The shelf life of the biological product in immobilized form without loss of activity is 1 year.
Поверхность или часть поверхности удерживаемой носителем клетки свободно "омывается" внешней средой (жидкой или газообразной); при этом потребление субстратов и выделение продуктов жизнедеятельности микроорганизма определяются преимущественно биологическими факторами.The surface or part of the surface of the cell held by the carrier is freely “washed” by the external environment (liquid or gaseous); while the consumption of substrates and the release of waste products of the microorganism are determined mainly by biological factors.
Преимущество сухой формы иммобилизованного препарата заключается в том, что он поставляется в виде, готовом к внесению в нефтезагрязненную почву, без предварительной подготовки на месте использования.The advantage of the dry form of the immobilized preparation is that it is supplied in a form ready for application to oil-contaminated soil, without preliminary preparation at the place of use.
Иммобилизованные клетки препарата устойчивее к неблагоприятному воздействию окружающей среды и более эффективно окисляют углеводородные загрязнения при высоких концентрациях.Immobilized cells of the drug are more resistant to adverse environmental effects and more effectively oxidize hydrocarbon contaminants at high concentrations.
Пример 3:Example 3:
Консорциум микроорганизмов выращивали на минеральной среде Раймонда. Нефть, мазут, дизельное топливо добавляли в питательную среду в количестве 1% от массы питательной среды в качестве единственного источника углерода. Опыт производился в трех повторностях. В колбы объемом 750 см3 вносили по 200 см3 минеральной среды и по 2000 мг нефти, мазута и дизельного топлива. Колбы засевали клетками Rhodococcus qingshengii, Pusillimonas ginsegisoli, Shinella granuli в равных соотношениях до концентрации 106 КОЕ/см. В качестве контролей использовали колбы с минеральной средой с нефтепродуктами. Колбы культивировали на качалке при 200 об/мин и 22°C в течение 14 суток. Измерение концентрации нефтепродуктов выполнено флуориметрическим методом по ПНД Ф 16.1.21-98. Полученные результаты показали, что в течение 14 суток при 22°C данный консорциум утилизирует нефть, мазут и дизельное топливо на: 76,3; 54,2 и 96,6% соответственно.A consortium of microorganisms was grown on Raymond's mineral medium. Oil, fuel oil, diesel fuel was added to the nutrient medium in an amount of 1% by weight of the nutrient medium as the sole source of carbon. The experiment was carried out in triplicate. 200 cm 3 of mineral medium and 2000 mg of oil, fuel oil and diesel fuel were introduced into flasks with a volume of 750 cm 3 . The flasks were seeded with Rhodococcus qingshengii, Pusillimonas ginsegisoli, Shinella granuli cells in equal proportions to a concentration of 10 6 CFU / cm. As controls, flasks with a mineral medium with oil products were used. The flasks were cultured on a shaker at 200 rpm and 22 ° C for 14 days. The measurement of the concentration of petroleum products was performed by the fluorimetric method according to PND F 16.1.21-98. The results showed that within 14 days at 22 ° C this consortium utilizes oil, fuel oil and diesel fuel at: 76.3; 54.2 and 96.6%, respectively.
Пример 4:Example 4:
Консорциум штаммов бактерий: Rhodococcus qingshengii, Pusillimonas ginsegisoli, Shinella granuli выращивали на минеральной среде Раймонда, в качестве единственного источника углерода использовали 1% нефть. Выращенную суспензию клеток вносили в колбы с минеральной средой объемом 200 см3, содержащей 1% нефть и различной степени солености (3%, 5% и 7% NaCl). В качестве контролей использовали колбы с минеральной средой различной солености с нефтью. Колбы культивировали на качалке при 200 об/мин и 22°C в течение 14 суток. Измерение концентрации нефтепродуктов выполнено флуориметрическим методом по ПНД Ф 16.1.21-98. Полученные результаты показали, что в течение 14 суток при 22°C данный консорциум утилизирует нефть в присутствии высокой солености.A consortium of bacterial strains: Rhodococcus qingshengii, Pusillimonas ginsegisoli, Shinella granuli was grown on Raymond's mineral medium; 1% oil was used as the sole carbon source. The grown cell suspension was introduced into flasks with a 200 cm 3 mineral medium containing 1% oil and various degrees of salinity (3%, 5%, and 7% NaCl). As controls, flasks with a mineral medium of various salinity with oil were used. The flasks were cultured on a shaker at 200 rpm and 22 ° C for 14 days. The measurement of the concentration of petroleum products was performed by the fluorimetric method according to PND F 16.1.21-98. The results showed that within 14 days at 22 ° C this consortium utilizes oil in the presence of high salinity.
Пример 5:Example 5:
Консорциум бактерий: Rhodococcus qingshengii, Pusillimonas ginsegisoli, Shinella granuli, которые выращивали на минеральной среде Раймонда с добавлением дизельного топлива в количестве 1%. Выращенную суспензию клеток вносили в загрязненную сырой нефтью почву (3% содержание углеводородов в почве) разной степени засоления (3%, 5% и 7% NaCL) из расчета 107 клеток на 1 г почвы. Через 21 день исследований методом ИКС-спектрометрии оценивали содержание нефтепродуктов в почве. В почве после обработки консорциумом микроорганизмов отмечается снижение концентрации нефтепродуктов. Существенное ингибирование процесса деструкции углеводородов наблюдается при минерализации 7%, концентрация нефтепродуктов в вариантах без внесения микроорганизмов осталось на прежнем уровне, в опытных вариантах снизилась на 28,2%, 20,5% и 15,4% соответственноA consortium of bacteria: Rhodococcus qingshengii, Pusillimonas ginsegisoli, Shinella granuli, which were grown on Raymond's mineral medium with the addition of diesel fuel in an amount of 1%. The grown cell suspension was introduced into soil contaminated with crude oil (3% hydrocarbon content in the soil) of different degrees of salinization (3%, 5% and 7% NaCL) at the rate of 10 7 cells per 1 g of soil. After 21 days of research, the content of petroleum products in the soil was evaluated by IR spectrometry. In the soil after treatment by a consortium of microorganisms, a decrease in the concentration of petroleum products is noted. Significant inhibition of the process of destruction of hydrocarbons is observed with a mineralization of 7%, the concentration of oil products in the variants without introducing microorganisms remained at the same level, in the experimental variants it decreased by 28.2%, 20.5% and 15.4%, respectively
Таким образом, предлагаемый консорциум может использоваться для очистки почвы от нефти в условиях засоления.Thus, the proposed consortium can be used to clean the soil from oil in saline conditions.
Пример 6:Example 6:
Одним из наиболее токсичных загрязнителей окружающей среды, оказывающих по данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) значительное влияние на состояние здоровья человека, является группа полициклических ароматических углеводородов (ПАУ), в которую входят такие соединения как нафталин, антрацен, фенантрен, 3,4-бенз(а)пирен, (бенз(а)пирен) и другие.One of the most toxic environmental pollutants, which according to the World Health Organization (WHO) has a significant impact on human health, is the group of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), which includes compounds such as naphthalene, anthracene, phenanthrene, 3,4-benz (a) pyrene, (benz (a) pyrene) and others.
Выращенной суспензией клеток Rhodococcus qingshengii, Pusillimonas ginsegisoli, Shinella granuli (смотри пример 1) обрабатывали почву, загрязненную полициклическими ароматическими углеводородами (ПАУ). В течение 3 месяцев исследований оценивали содержание ПАУ методом КХА (МУК 4.1.1062-01). Результаты обезвреживания загрязненной ПАУ почвы предлагаемым консорциумом представлены в таблице. В почве после обработки биопрепаратом отмечается снижение концентрации ПАУ на протяжении всего периода исследования. Через 3 месяца после внесения биопрепарата суммарная концентрации ПАУ снизилась в 31,6 раз и составила 67,6 мкг/кг почвы. Концентрация самого токсичного бенз[а]пирена (1-й класс опасности) снизилась в 24 раза и составила 3,31 мкг/кг.A cultured cell suspension of Rhodococcus qingshengii, Pusillimonas ginsegisoli, Shinella granuli (see example 1) was used to treat soil contaminated with polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs). During 3 months of research, the content of PAHs was evaluated by the KHA method (MUK 4.1.1062-01). The results of the neutralization of contaminated PAH soil proposed by the consortium are presented in the table. In the soil after treatment with a biological product, there is a decrease in the concentration of PAHs throughout the study period. 3 months after the application of the biological product, the total concentration of PAHs decreased by 31.6 times and amounted to 67.6 μg / kg of soil. The concentration of the most toxic benz [a] pyrene (hazard class 1) decreased by 24 times and amounted to 3.31 μg / kg.
Предлагаемый консорциум может быть использован для очистки почв от нефти, а также полициклических ароматических углеводородов.The proposed consortium can be used to clean soils from oil, as well as polycyclic aromatic hydrocarbons.
Пример 7: Полевые испытания биопрепарата в жидкой форме.Example 7: Field trials of a biological product in liquid form.
Испытание углеводород окисляющей способности консорциума клеток Rhodococcus qingshengii, Pusillimonas ginsegisoli, Shinella granuli на нефтешламе и водной поверхности, загрязненной нефтью.Testing the hydrocarbon oxidizing ability of a consortium of Rhodococcus qingshengii, Pusillimonas ginsegisoli, Shinella granuli cells on oil sludge and an oil-contaminated water surface.
Биоремедиацию (очистку) нефтезагрязненной почвы поводили в сочетании с агротехническими мероприятиями - рыхление почвы, внесение комплексного минерального удобрения «азофоска» из расчета 20-200 г/м2, периодическое увлажнение.Bioremediation (cleaning) of oil-contaminated soil was carried out in combination with agrotechnical measures - loosening the soil, applying complex azofoska fertilizer at the rate of 20-200 g / m 2 , and periodical moistening.
1. Место проведения эксперимента: Ленинградская область, Волосовский район, площадка обезвреживания почв и грунтов, 2011 год. Загрязнитель: нефтешлам, время обезвреживания - 50 дней, количество обработок - 2 биообработки. Исходная концентрация нефтепродуктов - 110,33 г/кг, степень очистки -78,58%, снижение класса опасности с III до IV класса опасности.1. Place of the experiment: Leningrad Region, Volosovsky District, site for the disposal of soils and soils, 2011. Pollutant: oil sludge, neutralization time - 50 days, the number of treatments - 2 biological treatment. The initial concentration of oil products is 110.33 g / kg, the degree of purification is 78.58%, the hazard class is reduced from III to IV hazard class.
2. Место проведения эксперимента: г.Бологое, локомотивное депо, 2012 год. Загрязнитель: нефтешлам, время обезвреживания - 30 дней, количество обработок - 2 биообработки. Исходная концентрация нефтепродуктов - 92,33 г/кг, степень очистки - 62,23%. Исходная концентрация бенз(а)пирена 0,061 мг/кг, степень очистки - 60,6%, снижение класса опасности с III до IV класса опасности.2. The place of the experiment: Bologoe, locomotive depot, 2012. Pollutant: oil sludge, neutralization time - 30 days, the number of treatments - 2 biological treatment. The initial concentration of petroleum products is 92.33 g / kg, the degree of purification is 62.23%. The initial concentration of benz (a) pyrene is 0.061 mg / kg, the degree of purification is 60.6%, the hazard class is reduced from III to IV hazard class.
3. Место проведения эксперимента: Ленинградская область, Всеволожский район, территория котельной, 2011 год. Загрязнитель: нефтешлам, время обезвреживания - 90 дней, количество обработок - 4 биообработки. Исходная концентрация нефтепродуктов - 86,4 г/кг, степень очистки - 81,6%. Исходная концентрация бенз(а)пирена 0,068 мг/кг, степень очистки - 82,4%, снижение класса опасности с III до IV класса опасности.3. Location of the experiment: Leningrad region, Vsevolozhsk district, the territory of the boiler room, 2011. Pollutant: oil sludge, neutralization time - 90 days, the number of treatments - 4 biological treatment. The initial concentration of petroleum products is 86.4 g / kg, the degree of purification is 81.6%. The initial concentration of benz (a) pyrene is 0.068 mg / kg, the degree of purification is 82.4%, the hazard class is reduced from III to IV hazard class.
Во всех вариантах наблюдалось снижение численности микроорганизмов в первые сутки, которое может быть обусловлено токсическим влиянием нефтепродуктов и адаптацией микроорганизмов к условиям среды, отмечается общая тенденция к резкому увеличению численности углеводородокисляющих микроорганизмов в последующий период окисления.In all cases, there was a decrease in the number of microorganisms on the first day, which may be due to the toxic effect of oil products and the adaptation of microorganisms to environmental conditions, there is a general tendency to a sharp increase in the number of hydrocarbon-oxidizing microorganisms in the subsequent oxidation period.
4. Место проведения эксперимента: Ленинградская область, Всеволожский район, ливневые стоки, 2012 год. Загрязнитель: нефтепродукты, количество обработок - 5 биообработок. Исходная концентрация нефтепродуктов - 0,35 г/л, степень очистки - 85%.4. Location of the experiment: Leningrad region, Vsevolozhsk district, storm drains, 2012. Pollutant: petroleum products, the number of treatments - 5 biological treatments. The initial concentration of oil products is 0.35 g / l, the degree of purification is 85%.
Пример 8: Полевые испытания сухой формы биопрепарата.Example 8: Field trials of a dry form of a biological product.
Испытание биопрепарата на нефтешламе и водной поверхности, загрязненной нефтью (иммобилизованная форма). Биоремедиацию (очистку) нефтезагрязненной почвы поводили в сочетании с агротехническими мероприятиями - рыхление почвы, внесение комплексного минерального удобрения «азофоска» из расчета 20-200 г/м2, периодическое увлажнение.Testing a biological product on oil sludge and water surface contaminated with oil (immobilized form). Bioremediation (cleaning) of oil-contaminated soil was carried out in combination with agrotechnical measures - loosening the soil, applying complex azofoska fertilizer at the rate of 20-200 g / m 2 , and periodical moistening.
1. Биопрепарат на органическом носителе /торф/. Место проведения эксперимента: Ленинградская область, Волосовский район, площадка обезвреживания, 2012 год. Загрязнитель: нефтешлам, время обезвреживания - 90 дней, количество обработок - 4 биообработки. Исходная концентрация нефтепродуктов - 138 г/кг, степень очистки - 82,36%, снижение класса опасности с III до IV класса опасности.1. Biological product on an organic medium / peat /. Place of experiment: Leningrad Region, Volosovsky District, site of neutralization, 2012. Pollutant: oil sludge, neutralization time - 90 days, the number of treatments - 4 biological treatment. The initial concentration of petroleum products is 138 g / kg, the degree of purification is 82.36%, the hazard class is reduced from III to IV hazard class.
2. Биопрепарат на минеральном носителе /вермикулит/. Место проведения эксперимента: г.Петрозаводск, локомотивное депо, 2012 год. Загрязнитель: нефтешлам, время обезвреживания - 30 дней, количество обработок - 2 биообработки. Исходная концентрация нефтепродуктов - 68,5 г/кг, степень очистки - 71,64%. Исходная концентрация бенз(а)пирена 0,091 мг/кг, степень очистки - 72,4%.2. Biological product on a mineral carrier / vermiculite /. Place of experiment: Petrozavodsk, locomotive depot, 2012. Pollutant: oil sludge, neutralization time - 30 days, the number of treatments - 2 biological treatment. The initial concentration of petroleum products is 68.5 g / kg, the degree of purification is 71.64%. The initial concentration of benz (a) pyrene is 0.091 mg / kg, the degree of purification is 72.4%.
Во всех вариантах после внесения иммобилизованного препарата сразу наблюдался активный рост, как гетеротрофов, так и нефтедеструкторов. Иммобилизованные клетки препарата устойчивее к неблагоприятному воздействию окружающей среды и не требуют периода адаптации.In all cases, after the introduction of the immobilized preparation, active growth of both heterotrophs and oil destructors was immediately observed. Immobilized cells of the drug are more resistant to adverse environmental effects and do not require a period of adaptation.
3. Биопрепарат на растительном носителе /шелуха гречихи/. Место проведения эксперимента: Ленинградская область, Тосненский район, ливневые стоки, 2012 год. Загрязнитель: нефтепродукты, количество обработок - 8 биообработок. Исходная концентрация нефтепродуктов - 0,15 г/л, степень очистки - 60%.3. Biological product on a vegetable carrier / buckwheat husk /. Place of the experiment: Leningrad region, Tosnensky district, storm drains, 2012. Pollutant: petroleum products, the number of treatments - 8 biological treatments. The initial concentration of oil products is 0.15 g / l, the degree of purification is 60%.
4. Биопрепарат на полипропиленовом волокне. Санкт-Петербургский метрополитен, локальные очистные сооружения ливневого стока, выходной колодец. Установлена загрузка из полипропиленового волокна с иммобилизованным консорциумом Концентрация нефтепродуктов в воде до загрузки 0.37 мг/л, после загрузки 0.01 мг/л.4. Biopreparation on polypropylene fiber. St. Petersburg Metro, local sewage treatment facilities, outlet well. A loading from polypropylene fiber with an immobilized consortium was established. The concentration of oil products in water before loading 0.37 mg / L, after loading 0.01 mg / L.
Claims (13)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013112839/10A RU2535978C1 (en) | 2013-03-15 | 2013-03-15 | Biopreparation for cleaning environmental objects from hydrocarbon pollution, method of obtaining and application thereof |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013112839/10A RU2535978C1 (en) | 2013-03-15 | 2013-03-15 | Biopreparation for cleaning environmental objects from hydrocarbon pollution, method of obtaining and application thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2013112839A RU2013112839A (en) | 2014-10-27 |
RU2535978C1 true RU2535978C1 (en) | 2014-12-20 |
Family
ID=53286198
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013112839/10A RU2535978C1 (en) | 2013-03-15 | 2013-03-15 | Biopreparation for cleaning environmental objects from hydrocarbon pollution, method of obtaining and application thereof |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2535978C1 (en) |
Cited By (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2615464C1 (en) * | 2015-12-31 | 2017-04-04 | Общество с ограниченной ответственностью Малое инновационное предприятие "СахаНефтеБиоСорб" | Preparation for soils and water bodies purification from oil products |
RU2616284C1 (en) * | 2016-03-14 | 2017-04-13 | Общество с ограниченной ответственностью "Петербургские Биотехнологии" | Microbiological preparation for increasing crop yields |
RU2623156C1 (en) * | 2016-03-14 | 2017-06-22 | Общество с ограниченной ответственностью "Петербургские Биотехнологии" | Microbiological specimen for increasing yield of agricultural crops in liquid form |
RU2624047C1 (en) * | 2016-03-14 | 2017-06-30 | Общество с ограниченной ответственностью "Петербургские Биотехнологии" | Microbiological specimen for increasing yield of agricultural crops in liquid form |
RU2633690C2 (en) * | 2015-12-07 | 2017-10-16 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" | Microbial preparation for hydrocarbon contamination |
RU2634397C2 (en) * | 2016-03-23 | 2017-10-26 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" | Microbial preparation for hydrocarbon contamination disposal |
RU2634399C2 (en) * | 2016-03-23 | 2017-10-26 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" | Microbial preparation for hydrocarbon contamination disposal |
RU2634403C2 (en) * | 2016-03-23 | 2017-10-26 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" | Microbial preparation for hydrocarbon contamination disposal |
RU2634396C2 (en) * | 2016-03-23 | 2017-10-26 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" | Microbial preparation for hydrocarbon contamination |
RU2637132C1 (en) * | 2017-04-07 | 2017-11-30 | Общество с ограниченной ответственностью "Сити Строй" | Biopreparation for purification of soil polluted by oil and oil products |
RU2695881C1 (en) * | 2018-11-25 | 2019-07-29 | Виктория Владимировна Хадеева | Recultivator for cleaning soil and soils from contamination with oil, oil products, polycyclic aromatic hydrocarbons, a method for production and use thereof |
RU2779866C2 (en) * | 2016-12-23 | 2022-09-14 | Роквул Интернэшнл А/С | Compact body |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110484462B (en) * | 2019-07-09 | 2021-03-16 | 中国医学科学院医药生物技术研究所 | Novel species of genus Shen-shi and application thereof |
CN113046265B (en) * | 2021-03-19 | 2023-10-20 | 哈尔滨工业大学(深圳) | Screening and application of benzo [ a ] anthracene degrading bacteria in black and odorous substrate sludge |
CN114085790B (en) * | 2021-11-11 | 2023-07-18 | 怀化学院 | Shen's bacillus JC11, method for degrading phenol-containing waste liquid and application thereof |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2138451C1 (en) * | 1997-12-05 | 1999-09-27 | Саксон Валерий Михайлович | Biopreparation for removing environmental petroleum and petroleum product pollution |
RU2228953C2 (en) * | 2002-08-23 | 2004-05-20 | Научно-исследовательский центр токсикологии и гигиенической регламентации биопрепаратов | Strain of bacterium pseudomonas alcaligenes mev used for treatment of soil, ground and surface water from petroleum and products of its processing |
RU2422587C1 (en) * | 2009-12-21 | 2011-06-27 | Учреждение Российской академии наук Институт биологии Коми научного центра Уральского отделения РАН | Complex bio-sorbent on base of bacteria strain and fungi for purification of water medium from oil and oil products at presence of micro-alga |
-
2013
- 2013-03-15 RU RU2013112839/10A patent/RU2535978C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2138451C1 (en) * | 1997-12-05 | 1999-09-27 | Саксон Валерий Михайлович | Biopreparation for removing environmental petroleum and petroleum product pollution |
RU2228953C2 (en) * | 2002-08-23 | 2004-05-20 | Научно-исследовательский центр токсикологии и гигиенической регламентации биопрепаратов | Strain of bacterium pseudomonas alcaligenes mev used for treatment of soil, ground and surface water from petroleum and products of its processing |
RU2422587C1 (en) * | 2009-12-21 | 2011-06-27 | Учреждение Российской академии наук Институт биологии Коми научного центра Уральского отделения РАН | Complex bio-sorbent on base of bacteria strain and fungi for purification of water medium from oil and oil products at presence of micro-alga |
Cited By (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2633690C2 (en) * | 2015-12-07 | 2017-10-16 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" | Microbial preparation for hydrocarbon contamination |
RU2615464C1 (en) * | 2015-12-31 | 2017-04-04 | Общество с ограниченной ответственностью Малое инновационное предприятие "СахаНефтеБиоСорб" | Preparation for soils and water bodies purification from oil products |
RU2616284C1 (en) * | 2016-03-14 | 2017-04-13 | Общество с ограниченной ответственностью "Петербургские Биотехнологии" | Microbiological preparation for increasing crop yields |
RU2623156C1 (en) * | 2016-03-14 | 2017-06-22 | Общество с ограниченной ответственностью "Петербургские Биотехнологии" | Microbiological specimen for increasing yield of agricultural crops in liquid form |
RU2624047C1 (en) * | 2016-03-14 | 2017-06-30 | Общество с ограниченной ответственностью "Петербургские Биотехнологии" | Microbiological specimen for increasing yield of agricultural crops in liquid form |
RU2634399C2 (en) * | 2016-03-23 | 2017-10-26 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" | Microbial preparation for hydrocarbon contamination disposal |
RU2634397C2 (en) * | 2016-03-23 | 2017-10-26 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" | Microbial preparation for hydrocarbon contamination disposal |
RU2634403C2 (en) * | 2016-03-23 | 2017-10-26 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" | Microbial preparation for hydrocarbon contamination disposal |
RU2634396C2 (en) * | 2016-03-23 | 2017-10-26 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Арктический Научно-Проектный Центр Шельфовых Разработок" | Microbial preparation for hydrocarbon contamination |
RU2779866C2 (en) * | 2016-12-23 | 2022-09-14 | Роквул Интернэшнл А/С | Compact body |
RU2637132C1 (en) * | 2017-04-07 | 2017-11-30 | Общество с ограниченной ответственностью "Сити Строй" | Biopreparation for purification of soil polluted by oil and oil products |
RU2695881C1 (en) * | 2018-11-25 | 2019-07-29 | Виктория Владимировна Хадеева | Recultivator for cleaning soil and soils from contamination with oil, oil products, polycyclic aromatic hydrocarbons, a method for production and use thereof |
RU2823026C1 (en) * | 2023-10-16 | 2024-07-17 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственное объединение "Эко Ойл Сервис" | Biopreparation for carbon tetrachloride degradation |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2013112839A (en) | 2014-10-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2535978C1 (en) | Biopreparation for cleaning environmental objects from hydrocarbon pollution, method of obtaining and application thereof | |
Shradha et al. | Isolation and characterization of phenol degrading bacteria from oil contaminated soil | |
Eskandary et al. | The synergistic use of plant and isolated bacteria to clean up polycyclic aromatic hydrocarbons from contaminated soil | |
JPH0436758B2 (en) | ||
Semenyuk et al. | Effect of activated charcoal on bioremediation of diesel fuel-contaminated soil | |
RU2565549C2 (en) | Biopreparation for bioremediation of oil-contaminated soils for climatic conditions of far north | |
Maurya et al. | Recent advances in the application of biofilm in bioremediation of industrial wastewater and organic pollutants | |
CN100475950C (en) | Bacillus megaterium and use thereof | |
CN101475925B (en) | A strain of quinoline-degrading bacterium, as well as cultivation method and use thereof | |
WO2011074007A2 (en) | Process and composition for bioremediation of oily sludge | |
RU2509150C2 (en) | Association of strains of bacteria-oil decomposers, and remediation method of oil-contaminated objects | |
Thimmarayan et al. | Biodegradation of naphthalene–Ecofriendly approach for soil pollution mitigation | |
CN113957004A (en) | Chryseobacterium and application thereof in preparation of halophyte epiphytic repair maintenance microbial inoculum | |
Dehghani et al. | Biodegradation of n-hexadecane in acinetobacter radioresistens liquid culture | |
Wemedo et al. | Biodegradation potential of bacteria isolated from crude oil polluted site in South South, Nigeria | |
CN104004685A (en) | Polycyclic aromatic hydrocarbon degrading bacterium 1-25R09ZXC-2 and application thereof | |
Coulon et al. | Effects of Biostimulation on Growth of Indigenous Bacteria in Sub-Antarctic Soil Contamined with Oil Hydrocarbons | |
Safahieh et al. | Isolation and characterization of Pseudomonas resistant to heavy metals and poly aromatics hydrocarbons (PAHs) from Persian Gulf sediments | |
RU2093478C1 (en) | Method of water and soil treatment from oil, petroleum products and polymeric additions in drilling fluid | |
Tambekar et al. | Biodegradation of phenol by native microorganisms isolated from Lonar Lake in Maharashtra State (India) | |
CN112608862B (en) | Petroleum hydrocarbon degradation functional bacterium SCSIO19801 and application thereof | |
RU2502569C1 (en) | Method of removing hydrocarbon contaminants from soils | |
CN100439491C (en) | Globular bacillus and its use | |
RU2266958C2 (en) | Destructor microorganism strains zoogloea sp.14h, arthrobacter sp.13h, arthrobacter sp.15h, bacillus sp.3h, bacillus sp.12h, useful in remediation of ponds and soils contaminated with petroleum and petroleum product, and strain association based on the same | |
Liu et al. | Degradation of diesel pollutants in Huangpu-Yangtze River estuary wetland using a plant-microbes system |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RH4A | Copy of patent granted that was duplicated for the russian federation |
Effective date: 20160321 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180316 |