RU2533456C1 - Способ прогнозирования уровня гликированного гемоглобина у больных сахарным диабетом 2 типа - Google Patents
Способ прогнозирования уровня гликированного гемоглобина у больных сахарным диабетом 2 типа Download PDFInfo
- Publication number
- RU2533456C1 RU2533456C1 RU2013131659/15A RU2013131659A RU2533456C1 RU 2533456 C1 RU2533456 C1 RU 2533456C1 RU 2013131659/15 A RU2013131659/15 A RU 2013131659/15A RU 2013131659 A RU2013131659 A RU 2013131659A RU 2533456 C1 RU2533456 C1 RU 2533456C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- diabetes mellitus
- type
- tnfr1
- patients
- glycated hemoglobin
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования уровня гликированного гемоглобина y индивидуумов русской национальности, больных сахарным диабетом 2 типа. После выделения ДНК из периферической венозной крови проводят анализ полиморфного варианта +36A/G гена рецептора фактора некроза опухоли 1-го типа (TNFR1). В случае выявления генотипа +36АА TNFR1 прогнозируют повышенный уровень гликированного гемоглобина у больных сахарным диабетом 2-го типа. Изобретение обеспечивает возможность определения компенсации сахарного диабета 2 типа y индивидуумов русской национальности, больных сахарным диабетом 2 типа путем генотипирования TNFR1. 2 ил., 1 табл., 1 пр.
Description
Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для оценки степени компенсации сахарного диабета 2 типа.
Сахарный диабет - это эндокринное заболевание, характеризующееся хроническим повышением уровня сахара в крови вследствие абсолютного или относительного дефицита инсулина - гормона поджелудочной железы. Заболевание приводит к нарушению всех видов обмена веществ, поражению сосудов, нервной системы, а также других органов и систем. Согласно литературным данным роль генетических факторов в развитии СД2 составляет 60-80% [Аметов А.С. Гипергликемия и глюкозотоксичность - ключевые факторы прогрессирования сахарного диабета 2-го типа [Текст] / А.С. Аметов, Л.Н. Богданова // Русский медицинский журнал. - 2010. - Т.18, №23. - С.1416-1418; Bluher, M Role of muscle and fat tissue in the pathogenesis of type 2 diabetes [Text] / M. Bluher, M. Stumvoll // Dtsch. Med. Wochenschr. - 2006. - Vol.131, suppl.8. - P.S231-S235].
Важное значение в определении степени компенсации сахарного диабета 2 типа имеет уровень гликированного гемоглобина, который отражает средний уровень гликемии за последние три месяца [Дедов И.И. Алгоритмы специализированной медицинской помощи больным сахарным диабетом [Текст] / И.И. Дедов, M.В. Шестакова // Сахарный диабет. - 2011. - 72 с. - (Прил. к журн. №3, вып.5)]. Высокий уровень гликированного гемоглобина говорит о декомпенсированном сахарном диабете и возможно более раннем развитии осложнений на фоне повышенной гликемии. Низкий уровень гликированного гемоглобина отражает благоприятное течение сахарного диабета и положительный эффект от проводимого лечения сахароснижающими препаратами.
По данным литературы установлено, что фактор некроза опухолей и его рецепторы ассоциированы с клинико-лабораторным статусом больных сахарным диабетом 2-го типа [Кондратова Н.В. Клинико-лабораторные проявления метаболического синдрома у пациентов с различными аллелями гена фактора некроза опухолей альфа [Текст]: дис. канд. мед. наук: 14.00.06 / Н.В. Кондратова. - M., 2004. - 121 с.: ил.].
Рецептор фактора некроза опухолей 1-го типа (TNFR1), который известен также как CD120a, является белком с молекулярной массой 55-60 kDa (p55) и опосредует все виды действия факторов некроза опухолей - апоптоз, пролиферацию и дифференцировку клеток, а также обладает противовирусной активностью. Ген TNFR1 у человека расположен на хромосоме 12р13. Данный рецептор несет ответственность за острый воспалительный ответ и экспрессируется в большинстве типов клеток. Клеточный ответ приводит к протеолитическому расщеплению мембранного рецептора и образованию его растворимой формы. Растворимый TNFR1 стабилизирует циркулирующий TNF и увеличивает период полураспада данного цитокина. Факторы некроза опухолей, соединяясь со своим рецептором, образуют домен, обусловливающий конформационные изменения TNFR1 и инициацию определенного клеточного сигнала [Insulin sensitivity and adipocytokines in patients with diabetes and prediabetes [Text] / A. Mayorov, K. Urbanova, G. Galstyan [et al.] // Journal of Diabetes, 2009. - Vol.1, suppl. s.1. - P. A17].
В изученной научно-медицинской и доступной патентной литературе авторами не было обнаружено способа прогнозирования уровня гликированного гемоглобина у больных сахарным диабетом 2-го типа на основе данных о полиморфизме гена рецептора фактора некроза опухоли 1-го типа.
Для оценки сложившейся патентной ситуации был выполнен поиск по охранным документам за период с 1990 по 2013 гг. Анализ документов производился по направлению: способ прогнозирования уровня гликированного гемоглобина у больных сахарным диабетом 2-го типа на основе молекулярно-генетических данных в зависимости от полиморфных маркеров генов рецептора 1-го типа фактора некроза опухоли.
Известен способ по патенту №2038597 (публ. 27.06.1995) «Способ определения гликированного гемоглобина в крови», включающий забор крови, отделение эритроцитов, их гемолиз, нанесение гемолизата на колонку с сорбентом с привитыми группами м-аминофенилборной кислоты, элюирование гликированного гемоглобина с последующим измерением оптической плотности и расчетом, отличающийся тем, что в качестве сорбента используют кремнезем, содержащий привитые группы м-аминофенилборной кислоты.
Недостатком этого метода является определение только гликированного гемоглобина, без оценки уровня компенсации сахарного диабета 2 типа.
За прототип выбран патент №2022270 (публ. 30.10.1994 г.) «Способ определения компенсации сахарного диабета у детей». Данное изобретение относится к медицине, в частности к эндокринологии, может быть использовано для установления компенсации сахарного диабета у детей, а также для оценки правильности выбора дозы инсулина. Сущность изобретения: для определения компенсации сахарного диабета у детей определяют содержание гликированных гемоглобинов и активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в крови. И при содержании гликированных гемоглобинов до 3,5% и активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в пределах 1,8-2,7 мкмоль мин/г Hb определяют компенсацию сахарного диабета.
Недостаток прототипа заключается в том, что он имеет ограниченное применение, только для детей, и не учитывает влияние генетических маркеров на уровень гликированного гемоглобина больных сахарным диабетом 2 типа.
Задачей настоящего исследования является расширение арсенала способов прогнозирования уровня гликированного гемоглобина для определения компенсации сахарного диабета 2 типа.
Технический результат использования изобретения - возможность определения компенсации сахарного диабета 2 типа путем прогнозирования уровня гликированного гемоглобина у индивидуумов русской национальности, больных сахарным диабетом 2 типа по данным генетического полиморфизма рецептора фактора некроза опухоли 1-го типа (+36A/G TNFR1).
В соответствии с поставленной задачей был разработан способ прогнозирования уровня гликированного гемоглобина у больных сахарным диабетом 2-го типа, включающий:
- забор периферической венозной крови;
- выделение ДНК из периферической венозной крови;
- анализ полиморфизма гена +36A/G TNFR1;
- прогнозирование повышенного уровня гликированного гемоглобина у больных сахарным диабетом 2-го типа в случае выявления полиморфного варианта +36АА TNFR1.
Новизна и изобретательский уровень заключается в том, что из уровня техники не известна возможность прогноза уровня гликированного гемоглобина у больных сахарным диабетом 2-го типа по наличию генотипа +36АА TNFR1 гена рецептора фактора некроза опухоли 1-го типа (+36A/G TNFR1).
Способ осуществляют следующим образом.
ДНК выделяют из образцов периферической венозной крови больных сахарным диабетом 2-го типа в 2 этапа. На первом этапе к 4 мл крови добавляют 25 мл лизирующего буфера, содержащего 320 мМ сахарозы, 1% тритон Х-100, 5 мМ MgCl2, 10 мМ трис-HCl (pH=7,6). Полученную смесь перемешивают и центрифугируют при 4°C, 4000 об./мин в течение 20 минут. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 4 мл раствора, содержащего 25 мМ ЭДТА (pH=8,0) и 75 мМ NaCI, ресуспензируют. Затем прибавляют 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10 мг/мл) и инкубируют образец при 37°C в течение 16 часов.
На втором этапе из полученного лизата последовательно проводят экстракцию ДНК равными объемами фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с центрифугированием при 4000 об./мин в течение 10 минут. После каждого центрифугирования производят отбор водной фазы. ДНК осаждают из раствора двумя объемами охлажденного 96% этанола. Сформированную ДНК растворяют в бидистиллированной, деионизованной воде и хранят при -20°C.
Выделенную ДНК затем подвергают полимеразной цепной реакции с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров (таблица 1).
Анализ полиморфизма гена TNFR1 в области 1 экзона проводили методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК на амплификаторе IQ5 (Bio-Rad) с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров с последующим анализом полиморфизма методом дискриминации аллелей. Реакционная смесь объемом 25 мкл включает: 67 мМ трис-HCl (pH=8,8), 2,5 мМ MgCl2, 0,1 мкг геномной ДНК, по 10 пМ каждого праймера, по 5 пкмоль каждого зонда, по 200 мкМ dATP, dGTP, dCTP, dTTP и 1 единицу активной Taq-полимеразы. После денатурации (5 мин при 95°C) выполняли 40 циклов амплификации по схеме: отжиг праймеров - 1 мин при 50°C; денатурация - 15 сек при 95°C.
| Таблица 1 | |||
| Ген | Полиморфизм и его локализация в гене | Структура праймеров | Литература |
| NFR1 | +36A/G (1 экзон) | F:5'-AGCCCACTCTTCCCTTTGTC-3' | (Soo Jin Chae et al., 2008) |
| R:5'-CCACCGTGCCTGACCTG-3' | |||
| 5'-FAM:CTGCTGCCACTGGT-RTQ1-3' | |||
| 5'-ROX:CTGCTGCCGCTGGT-BHQ2-3' | |||
Изобретение характеризуется на фигурах 1 и 2.
На фигуре 1 представлена дискриминация аллелей по локусу +36A/G TNFR1 (где ● - гомозиготы 36АА TNFR1, □ - гомозиготы 36GG TNFR1, ▲ - гетерозиготы 36AG TNFR1, ◊ - отрицательный контроль), которая осуществляется методом Tag Man зондов по данным величин RFU, где RFU - это уровень относительной флуоресценции (УОФ) каждого зонда. Зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю A, зонд с красителем - FAM-аллелю G.
Две полосы, вертикальная и горизонтальная, делят график на четыре секции: одна для каждого гомозиготного состояния, одна для гетерозиготного состояния и секция без реакции. Присвоение генотипов неизвестным образцам определяется вычерчиванием RFU для одного флуорофора (на оси x) относительно RFU для другого флуорофора (на оси у) на диаграмме дискриминации аллелей.
- Если значения RFU неизвестного образца находятся выше горизонтальной полосы и правее вертикальной полосы, генотип гетерозиготен (GA).
- Если значения RFU неизвестного образца находятся выше горизонтальной полосы и левее вертикальной полосы, генотип гомозиготен по аллелю G (RFU аллеля G отложены по оси y).
- Если значения RFU неизвестного образца находятся ниже горизонтальной полосы и правее вертикальной, генотип гомозиготен по аллелю A (RFU аллеля А отложены по оси x).
- Если значения RFU неизвестного образца находятся ниже горизонтальной полосы и левее вертикальной, определение генотипа невозможно (в данном случае неопределенный образец - отрицательный контроль).
На фигуре 2 представлены ассоциации генетического полиморфизма +36A/G TNFR1 с уровнем гликированного гемоглобина у больных СД2.
Формирование базы данных и статистические расчеты осуществлялись с использованием программы «STATISTICA 6.0». Ассоциации аллелей и генотипов изученных ДНК-маркеров с течением заболевания у пациентов с сахарным диабетом 2-го типа оценивали с помощью анализа таблиц сопряженности 2×2 с расчетом критерия χ2 с поправкой Йетса на непрерывность и отношения шансов (OR) с 95% доверительными интервалами (CI) [Реброва О. Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA [Текст] / О.Ю. Реброва. - М.: Медиасфера, 2006. - 305 с.; Боровиков В. Statistica: искусство анализа данных на компьютере / В. Боровиков. - 2-е изд. - СПб.: Питер, 2003. - 688 с.: ил. - (Для профессионалов)].
Возможность использования предложенного способа для оценки уровня гликированного гемоглобина у больных сахарным диабетом 2-го типа подтверждает анализ результатов наблюдений 236 больных сахарным диабетом. Пациенты включались в соответствующую группу больных только после установления диагноза заболевания, подтвержденного с помощью клинических и лабораторно-инструментальных методов обследования, являлись индивидуумами русской национальности, уроженцами Центрального Черноземья России и не имели родства между собой.
Установлено, что медиана уровня гликированного гемоглобина в исследуемой группе больных составила 8,65% (интерквартильный размах 7,20-9,90%). Выявлено, что больные СД2 с генотипом +36АА TNFR1 отличаются повышенным уровнем гликированного гемоглобина (медиана - 8,95%, нижний квартиль - 7,80%, верхний квартиль - 10,60%) по сравнению с больными, имеющими генетические варианты +36AG и +36GG TNFR1 (медиана - 8,50%, интерквартильный размах 7,10-9,6%, p=0,03) (фиг.2).
Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что маркером повышенного уровня гликированного гемоглобина у индивидуумов русской национальности, больных сахарным диабетом 2 типа, является полиморфный вариант +36AA TNFR1, что может быть использовано в эндокринологических стационарах при обследовании пациентов с сахарным диабетом 2 типа для формирования группы риска с неблагоприятным клиническим течением СД2 (с прогнозируемым повышенным уровнем гликированного гемоглобина), что позволит оптимизировать тактику ведения данных пациентов (раннее назначение инсулинотерапии, реализация мероприятий по профилактике осложнений сахарного диабета 2 типа, проведение курсов сосудистой и метаболической терапии, более частое посещение эндокринолога и смежных специалистов).
Claims (1)
- Способ прогнозирования уровня гликированного гемоглобина y индивидуумов русской национальности, больных сахарным диабетом 2 типа, включающий забор периферической венозной крови, отличающийся тем, что после выделения из периферической венозной крови ДНК, проводят анализ полиморфизма гена рецептора фактора некроза опухоли 1-го типа (+36A/G TNFR1) и прогнозируют повышенный уровень гликированного гемоглобина у больных сахарным диабетом 2-го типа в случае выявления полиморфного варианта +36АА TNFR1.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013131659/15A RU2533456C1 (ru) | 2013-07-09 | 2013-07-09 | Способ прогнозирования уровня гликированного гемоглобина у больных сахарным диабетом 2 типа |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013131659/15A RU2533456C1 (ru) | 2013-07-09 | 2013-07-09 | Способ прогнозирования уровня гликированного гемоглобина у больных сахарным диабетом 2 типа |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2533456C1 true RU2533456C1 (ru) | 2014-11-20 |
Family
ID=53382714
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013131659/15A RU2533456C1 (ru) | 2013-07-09 | 2013-07-09 | Способ прогнозирования уровня гликированного гемоглобина у больных сахарным диабетом 2 типа |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2533456C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2694505C1 (ru) * | 2018-09-03 | 2019-07-15 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Способ прогнозирования динамики внутрипочечного сосудистого сопротивления и гликированного гемоглобина у пациентов с артериальной гипертонией и сахарным диабетом 2 типа через 30 недель от начала антигипертензивной терапии |
| RU2817501C1 (ru) * | 2022-11-23 | 2024-04-16 | Галина Николаевна Милюкова | Способ стратификации пациента, страдающего сахарным диабетом 2 типа, для оценки неотложности госпитализации |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2022270C1 (ru) * | 1991-06-27 | 1994-10-30 | Санкт-Петербургский педиатрический медицинский институт | Способ определения компенсации сахарного диабета у детей |
| CN102146474A (zh) * | 2011-03-21 | 2011-08-10 | 广东蓝岛生物技术有限公司 | 人猴通用2型糖尿病检测引物组、pcr芯片及检测方法 |
-
2013
- 2013-07-09 RU RU2013131659/15A patent/RU2533456C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2022270C1 (ru) * | 1991-06-27 | 1994-10-30 | Санкт-Петербургский педиатрический медицинский институт | Способ определения компенсации сахарного диабета у детей |
| CN102146474A (zh) * | 2011-03-21 | 2011-08-10 | 广东蓝岛生物技术有限公司 | 人猴通用2型糖尿病检测引物组、pcr芯片及检测方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| RAZEGHINEJAD M.R. et al. Association of TNFA -308 G/A and TNFRI +36 A/G gene polymorphisms with glaucoma. Ophthalmic Res. 2009; 42(3): 118-124. Epub 2009 Jun 24 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2694505C1 (ru) * | 2018-09-03 | 2019-07-15 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Способ прогнозирования динамики внутрипочечного сосудистого сопротивления и гликированного гемоглобина у пациентов с артериальной гипертонией и сахарным диабетом 2 типа через 30 недель от начала антигипертензивной терапии |
| RU2817501C1 (ru) * | 2022-11-23 | 2024-04-16 | Галина Николаевна Милюкова | Способ стратификации пациента, страдающего сахарным диабетом 2 типа, для оценки неотложности госпитализации |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6628226B2 (ja) | 痛風発症素因の評価方法 | |
| Xu et al. | Klotho gene polymorphism of rs3752472 is associated with the risk of urinary calculi in the population of Han nationality in Eastern China | |
| Xu et al. | SLC30A8 (ZnT8) variations and type 2 diabetes in the Chinese Han population | |
| Vázquez-Huerta et al. | Tumor necrosis factor alpha-238 G/A and-308 G/A polymorphisms and soluble TNF-α levels in chronic kidney disease: correlation with clinical variables | |
| US20170240893A1 (en) | Methods and compositions for treating a subject with a smad7 antisense oligonucleotide | |
| Peng et al. | Relationships between genetic polymorphisms of triggering receptor expressed on myeloid cells-1 and septic shock in a Chinese Han population | |
| Rüter et al. | Host genetic loci LZTFL1 and CCL2 associated with SARS-CoV-2 infection and severity of COVID-19 | |
| Vargas-Alarcón et al. | The interleukin-1β-511 T> C (rs16944) gene polymorphism is associated with risk of developing silent myocardial ischemia in diabetic patients | |
| Zhang et al. | CD36 genotype associated with ischemic stroke in Chinese Han | |
| Tran et al. | Association between AGT M235T and left ventricular mass in Vietnamese patients diagnosed with essential hypertension | |
| Andalib et al. | Association of polymorphism of ser311cys paraoxonase-2 gene with type 2 diabetes mellitus in Iran | |
| Wongpiyabovorn et al. | Association of the CTG (− 2578/− 460/+ 405) haplotype within the vascular endothelial growth factor gene with early‐onset psoriasis | |
| US20240011091A1 (en) | Methods for preventing or reducing acute kidney injury | |
| RU2533456C1 (ru) | Способ прогнозирования уровня гликированного гемоглобина у больных сахарным диабетом 2 типа | |
| Liu et al. | Associations of high altitude polycythemia with polymorphisms in EPHA2 and AGT in Chinese Han and Tibetan populations | |
| Chikoti et al. | Cytokine gene variants of TNF-α and IL-10 in the propensity of type 2 diabetes in south Indian population | |
| RU2626670C2 (ru) | Способ прогнозирования эффективности терапии больных сахарным диабетом 2 типа | |
| RU2598745C2 (ru) | Способ прогнозирования риска развития iii стадии гипертонической болезни у больных гипертонической болезнью с метаболическим синдромом | |
| Al-Omari et al. | Association between TNF-α (-308G→ A) Gene Polymorphism and Burn Patient with Sepsis | |
| RU2585382C1 (ru) | Способ прогнозирования риска формирования хронической истинной экземы у индивидуумов в зависимости от наличия наследственной отягощенности | |
| RU2498313C1 (ru) | Способ прогнозирования общей выживаемости больных хроническим лимфолейкозом | |
| RU2533286C1 (ru) | Способ прогнозирования течения и эффективности терапии сахарного диабета 2 типа | |
| RU2507520C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития диабетической ангиопатии нижних конечностей у больных сахарным диабетом 2 типа | |
| Avzaletdinova et al. | The association of TCF7L2 rs7903146 polymorphism with type 2 diabetes mellitus among Tatars of Bashkortostan | |
| RU2775433C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии на основе молекулярно-генетического анализа |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160710 |