RU2509153C1 - Способ анализа транслокаций eml4-alk, ассоциированных с чувствительностью рака легкого к противоопухолевой таргетной терапии - Google Patents
Способ анализа транслокаций eml4-alk, ассоциированных с чувствительностью рака легкого к противоопухолевой таргетной терапии Download PDFInfo
- Publication number
- RU2509153C1 RU2509153C1 RU2012150939/10A RU2012150939A RU2509153C1 RU 2509153 C1 RU2509153 C1 RU 2509153C1 RU 2012150939/10 A RU2012150939/10 A RU 2012150939/10A RU 2012150939 A RU2012150939 A RU 2012150939A RU 2509153 C1 RU2509153 C1 RU 2509153C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- eml4
- alk
- pcr
- biochip
- probes
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к молекулярной генетике. Способ включает: получение кДНК EML4-ALK с помощью полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) на матрице РНК гена EML4-ALK с использованием специфичных праймеров; амплификацию фрагментов гена EML4-ALK методом мультиплексной ПЦР на матрице кДНК, полученной на первом этапе ОТ-ПЦР, с помощью набора высокоспецифичных праймеров; получение флуоресцентно-меченого ПЦР-продукта на втором этапе ОТ-ПЦР; создание биочипа для анализа транслокаций EML4-ALK, содержащего набор иммобилизованных зондов; гибридизацию флуоресцентно-меченого ПЦР-продукта с зондами в гелевых ячейках на пластиковой подложке биочипа; регистрацию и интерпретацию результатов гибридизации. Способ предусматривает использование технологии ДНК-биочипов, сконструированных с целью определения 6 вариантов транслокаций EML4-ALK (V2, V3, V5, V4, V7, V1). Способ обладает высокой чувствительностью и специфичностью, универсален, его осуществление возможно с операционным материалом и опухолевой тканью, заключенной в парафиновые блоки; регистрацию результатов производят однократно в конце исследования, способ занимает менее 24 часов. 2 з.п. ф-лы, , 3 табл., 3 ил.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к генетике, молекулярной биологии, онкологии, и касается способа определения чувствительности рака легкого к противоопухолевой таргетной терапии, современного метода лечения с помощью препаратов, направленных на рецепторы опухолевых клеток.
Известен способ анализа транслокаций EML4-ALK с использованием набора праймеров, позволяющих амплифицировать исследуемый фрагмент и анализировать результат с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени, капиллярного или обычного гель-электрофореза и набора антител для иммуногистохимического анализа, позволяющего идентифицировать мутантные белки (международная патентная заявка WO 2011087709).
Недостатки способа: данный способ имеет ограниченное применение ввиду дорогостоящих реактивов и оборудования для его осуществления.
Известен способ анализа транслокаций гена ALK, включая инверсию EML4-ALK, с использованием флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) и ПЦР в реальном времени (международная патентная заявка WO 2011087709).
Недостатки способа: использование дорогостоящих реактивов и дорогого специфического оборудования, исследование занимает более 24 часов.
Известен способ анализа транслокации EML4-ALK для диагностики и терапии немелкоклеточного рака легких с использованием одностадийной ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) и набора антител к химерному белку (международная патентная заявка WO 2011095894).
Недостатки способа: осуществление данного способа требует дорогостоящих реактивов и оборудования.
Наиболее близким к заявляемому способу (прототипом) является способ анализа транслокации гена ALK, включая EML4-ALK, с использованием флуоресцентной гибридизации с биочипами. Прототип включает следующие приемы: выделение РНК-матрицы из биологического материала; двухэтапную стандартную ОТ-ПЦР; изготовление зондов, представляющих собой амплифицированные последовательности ДНК, комплементарные анализируемому участку гена; гибридизацию флуоресцентно-меченого продукта, полученного в ОТ-ПЦР, с зондом на биочипе; анализ результатов гибридизации с помощью сканера и специальных компьютерных программ (международная патентная заявка WO 2010132888).
Недостатки способа: для осуществления данного способа используют дорогостоящую тест-систему; анализ генетических изменений занимает более суток; не исключена неспецифическая гибридизация ПЦР-продукта с зондом, что снижает чувствительность и точность способа; требуется нефиксированный в формалине биологический материал.
Задачей заявляемого изобретения является создание нового, более точного, простого в исполнении, менее дорогостоящего и занимающего меньше времени способа анализа транслокаций EML4-ALK, ассоциированных с чувствительностью рака легкого к противоопухолевой таргетной терапии.
Технический результат. Заявляемый способ прост в исполнении, является экономически оправданным, осуществляется без использования специального дорогостоящего оборудования; обладает высокой чувствительностью и специфичностью, универсален, его осуществление возможно с операционным материалом и опухолевой тканью, заключенной в парафиновые блоки, регистрацию результатов производят однократно в конце исследования, способ занимает менее 24 часов.
Сущность заявляемого способа заключается в анализе транслокаций EML4-ALK, ассоциированных с чувствительностью рака легкого к противоопухолевой таргетной терапии, с использованием технологии мультиплексной ОТ-ПЦР и последующей гибридизации флуоресцентно-меченого ПЦР-продукта с биологическим микрочипом (биочипом), в ячейки которого нанесены высокоспецифичные зонды для дифференцировки сигналов гибридизации. Анализ результатов гибридизации осуществляется с помощью детектирующей системы, распознающей флуоресцентный сигнал портативным анализатором биочипов, снабженным ПЗС-камерой со специальным программным обеспечением.
Заявляемый способ анализа основан на определении 6 вариантов транслокаций EML4-ALK (V2, V3, V5, V4, V7, V1) с использованием мультиплексной ОТ-ПЦР и биочипа, содержащего набор иммобилизованных дифференцирующих зондов для гибридизации с ПЦР-продуктами.
Способ иллюстрируется фигурами 1-3 и таблицами 1-3.
На фиг.1 представлена схема биочипа для анализа транслокаций EML4-ALK.
На фиг.2 представлена картина гибридизации экспериментального образца опухоли, не несущей транслокаций EML4-ALK.
На фиг.3 - картина образца опухоли, несущей вариант транслокации EML4-ALK V3.
В табл.1 представлены выбранные последовательности прямого и обратного праймеров для ОТ-ПЦР.
В табл.2 представлены последовательности праймеров для первого этапа мультиплексной ПЦР (SEQ ID NO: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 18).
В табл.3 представлены последовательности набора 11 зондов, использованных для изготовления биочипа (SEQ ID NO: 21-31).
Заявляемый способ включает следующие приемы: получение кДНК EML4-ALK с помощью ОТ-ПЦР на матрице РНК гена EML4-ALK с использованием специфичных праймеров; амплификацию фрагментов гена EML4-ALK методом мультиплексной ПЦР на матрице кДНК, полученной на первом этапе ОТ-ПЦР, с помощью набора высокоспецифичных праймеров; получение флуоресцентно-меченого ПЦР-продукта на втором этапе ОТ-ПЦР; создание биочипа для анализа транслокаций EML4-ALK, содержащего набор иммобилизованных зондов; гибридизацию флуоресцентно-меченого ПЦР-продукта с зондами в гелевых ячейках на пластиковой подложке биочипа; регистрацию и интерпретацию результатов гибридизации.
Заявляемый способ осуществляется следующим образом. На первом этапе забирали биологический материал - опухолевую ткань, замороженную в жидком азоте или заключенную в парафин в виде блоков. Фрагменты опухолевой ткани измельчали или снимали стерильным скальпелем со стекол путем микродиссекции, суспендировали и выделяли тотальную РНК с помощью набора RNeasy FFPE Kit.
Анализируемые последовательности гена EML4-ALK амплифицировали с помощью ОТ-ПЦР. Для амплификации гена EML4-ALK (V3a) использовали праймеры SEQ ID NO: 11, 15. ПЦР-смесь первого этапа общим объемом 25 мкл содержала 1 × ПЦР-буфер (трис-НСl - 67 мМ, рН 8.6, (NH4)2SO4 - 166 мМ, 0,01% Тритон Х-100), MgCl2 - 1,5 мМ, дНТФ - по 0,2 мМ, 2,5 Ед Taq-полимеразы, праймеры - по 0,2 мкМ (SEQ ID NO: 11, 15) и 20 нг ДНК. Амплификацию проводили по следующей схеме: денатурация при t=94°С в течение 3 мин 30 с и далее 35 циклов амплификации при t=94°C в течение 30 с, при t=62°C в течение 20 с, при t=72°C в течение 10 с и элонгация при t=72°C в течение 3 мин.
Смесь второго этапа ПЦР отличалась составом, концентрацией, температурой отжига праймеров и содержала прямой праймер - 0,2 мкМ (SEQ ID NO: 12), обратный праймер - 2 мкМ (SEQ ID NO: 16). Для флуоресцентного мечения ПЦР-продукта второго этапа в смесь добавляли флуоресцентно-меченый дУТФ-Су5 - 0,2 нМ, который встраивался в цепь в процессе амплификации. Для этого в стандартную реакционную смесь добавляли избыток одного из пары праймеров и флуоресцентной метки (дезоксинуклеотидтрифосфата Су5-дУТФ), получали избыток флуоресцентно-меченого одноцепочечного ПЦР-продукта - ампликона, способного к гибридизации с аллель-специфичными зондами, иммобилизованными в ячейках биочипа.
Полученную на первом этапе ОТ-ПЦР кДНК использовали как матрицу и проводили амплификацию по схеме: денатурация при t=94°С в течение 3 мин 30 с, далее 35 циклов амплификации при t=94°C в течение 30 с, при t=56°C в течение 20 с, при t=72°C в течение 10 с, затем элонгация при t=72°C в течение 3 мин.
Праймеры и зонды синтезировали с помощью фосфоамидитного метода на автоматическом ДНК/РНК синтезаторе. В табл.1 представлены выбранные последовательности прямого и обратного праймеров для ОТ-ПЦР. Модификацию зондов для введения активной группы проводили как в автоматическом режиме при синтезе с использованием широкого спектра коммерческих модификаторов, так и после синтеза, в ручном режиме. При синтезе зондов с помощью 3'-Amino-Modifier С7 CPG 500 на 3'-конец присоединяли последовательность-спейсер со свободной аминогруппой для последующей иммобилизации зонда в ячейке биочипа.
В табл.2 представлены последовательности праймеров для первого этапа мультиплексной ПЦР (SEQ ID NO: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 18). На втором этапе использовали праймеры SEQ ID NO: 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 19, 20. Для оптимизации ПЦР использовали только праймеры, которые не образовывали между собой высокоэнергетических внутренних структур: шпилек и дуплексов, и обеспечивали специфичную амплификацию необходимого количества продукта. Отжиг праймеров осуществляли при одинаковой температуре. Оптимизировали такие параметры ПЦР, как концентрацию MgCl2 и праймеров в ПЦР-смеси, соотношение прямых и обратных праймеров, количество циклов амплификации, время элонгации, денатурации и отжига праймеров на первом и втором этапах ПЦР.
Зонды для иммобилизации на биочипе и праймеры подбирали так, чтобы идентифицировать все выбранные для анализа транслокации EML4-ALK варианты. Затем проводили гибридизацию флуоресцентно-меченых ПЦР-продуктов, полученных после второго этапа ОТ-ПЦР, с иммобилизованными в ячейках геля зондами - участками гена EML4-ALK, комплементарными последовательности гена дикого типа или мутантного гена.
Ампликоны денатурировали путем прогрева гибридизационной смеси при t=95°C в течение 5 мин с последующим быстрым охлаждением на льду 2 мин и затем проводили гибридизацию SSPE-буфере 1X. Состав буфера 20 X: NaCl - 174 г, Na3C6H5O7 - 88,2 г, деионизированной Н2О - 800 мл, ЭДТА - 7,4 г, доводили рН до 7,0 с помощью 1 ON раствора NaOH (6,5 мл), затем объем буфера доводили Н2О до 1 л и стерилизовали автоклавированием. Продолжительность гибридизации составляла 12-14 ч при t=37°C.
Анализ генотипов и аллелей в исследуемом образце проводили с учетом расположения зондов на биочипе, схема которого указывала на вариант транслокации. При наличии стабильных совершенных дуплексов между ПЦР-продуктом и зондом получали сигнал флуоресценции. При отсутствии комплементарности между ПЦР-продуктом и зондом сигнал флуоресценции отсутствовал.
Биочипы изготовливали путем последовательного нанесения ячеек акриламидного геля на пластиковую подложку матрицы с иммобилизацией зондов в соответствующих ячейках. Для иммобилизации использовали зонды, несущие по 5'- или 3'-концу активную группу. В табл.3 представлены последовательности набора 11 зондов, использованных для изготовления биочипа (SEQ ID NO: 21-31). Дискриминацию совершенных и несовершенных дуплексов проводили после отмывки биочипа, сравнивая интенсивность сигналов флуоресценции в соответствующих ячейках биочипа. Для этого биочип отмывали в буфере с добавлением соли: SSC 20Х: NaCl - 175, 3 г, Na3C6H5O7 - 88,2 г и деионизированной Н2О - 800 мл, доводили рН до 7,0 с помощью 10 N раствора NaOH и объем до 1 л, затем автоклавировали. Далее анализировали полученную флуоресцентную картину с помощью детектирующей системы, распознающей флуоресцентный сигнал - портативного анализатора биочипов, снабженного ПЗС-камерой и специальным программным обеспечением производства ООО «Биочип-ИМБ» (Россия), и делали вывод о генотипе опухоли в исследуемом образце.
Наличие транслокации ассоциировалось с чувствительностью рака легкого к противоопухолевой таргетной терапии. Схема биочипа для анализа транслокаций EML4-ALK представлена на фиг.1. Праймеры в первых двух ячейках верхнего ряда соответствовали контрольной последовательности. В ячейки нижнего ряда нанесли праймеры, соответствующие участку гена ALK, в первом, втором и третьем ряду - праймеры, соответствующие различным вариантам транслокаций EML4-ALK. Картина гибридизации образца опухоли, не несущей транслокаций EML4-ALK, представлена на фиг.2. Флуоресцентный сигнал наблюдается только в ячейках биочипа с праймерами, контрольными для ОТ-ПЦР, следовательно, анализируемый образец не содержит транслокациий EML4-ALK. Картина образца опухоли, несущей вариант транслокации EML4-ALK V3, представлена на фиг.3. Флуоресцентный сигнал наблюдается в ячейках с праймерами, соответствующими транслокации EML4-ALK (V3a), анализируемый образец содержит этот вариант транслокации. При сравнении картин гибридизации образцов опухолей без транслокаций и образцов опухолей с транслокациями показано, что чувствительность и специфичность заявляемого способа составляет не более 1% клеток с мутацией (транслокацией AML4-ALK) на 99% клеток, не несущих транслокацию.
Таблица 1 | |||||
Способ анализа транслокаций EML4-ALK, ассоциированных с чувствительностью рака легкого к противоопухолевой таргетной терапии | |||||
Название | SEQ | Последовательность, | Длина, | T | Размер |
праймеров | ID NO: | 5'-3' | пар оснований | отжига,°С | ампликона, пар оснований |
EML4-RT | 1 | GCTGCCCTCTTCAC | 14 | 40 | - |
ALK-RT | 2 | CGAATGAGGGTGATG | 15 | 42 | - |
Таблица 2 | ||||||
Способ анализа транслокаций EML4-ALK, ассоциированных с чувствительностью рака легкого к противоопухолевой таргетной терапии | ||||||
Вариант | Название | SEQ | Последовательность, | Длина, | Т | Размер |
праймеров | ID NО: | 5'-3' | пар оснований | отжига, °С | ампликона, пар оснований | |
V1 | EML13-1 | 3 | GCCAAAATTTGTGCAGTGTTT | 21 | 63 | 249 |
EML13-2 | 4 | GTGGAGTCATGCTTATATGG | 20 | 58 | 137 | |
V2 | EML20-1 | 5 | CACACACCTTGACTGGTCC | 19 | 62 | 195 |
EML20-2 | 6 | CTAACTCGGGAGACTATGAATTG | 23 | 58 | 101 | |
V4 | EML15-1 | 7 | GGGATGTTATTAACTGGAGGA | 21 | 62 | 167 |
EML15-2 | 8 | ATCTGAATCCTGAAAGAGAAG | 21 | 57 | 59 | |
V7 | EML15-1 | 9 | GGGATGTTATTAACTGGAGGA | 21 | 63 | 191 |
EML15-2 | 10 | ATCTGAATCCTGAAAGAGAAAT | 22 | 58 | 83 | |
V3 | EML6-1 | 11 | CACATAATTCTTGGGAAAATTCA | 23 | 62 | 250 |
EML6-2 | 12 | CACCCAAATTAATACCAAAAGT | 22 | 57 | 137 | |
V5 | EML2-1 | 13 | GCTGATGTTTTGAGGCGTCTTG | 22 | 62 | 197 |
EML2-2 | 14 | GAAGATCATGTGGCCTCAG | 19 | 57 | 114 | |
ALK | ALKR-1 | 15 | CAAAGCAGTAGTTGGGGTTGT | 21 | 62 | |
ALKR-2 | 16 | GCTCAGCTTGTACTCAGGGC | 20 | 62 | ||
EML4 | K23F1 | 17 | CCCTGCTCCAAAGCAAAG | 18 | 64 | 349 |
K23R1 | 18 | CACTTGGCTCCACAGTTTGTT | 21 | 63 | ||
K23F2 | 19 | GGTGGAAAAGACATGAGCA | 19 | 56 | 194 | |
K23R2 | 20 | CTTATTCTACTTTCCTCTTCAG | 20 | 56 |
Таблица 3 | |||
Способ анализа транслокаций EML4-ALK, ассоциированных с чувствительностью рака легкого к противоопухолевой таргетной терапии | |||
Вариант | SEQ | Последовательность зонда | Длина, |
слияния | ID NO: | 5'-3' | п.о. |
VI | 21 | CTACTGTAGAGCCCACACCT | 20 |
V2 | 22 | ATGAAATATTGTACTTGTAC | 20 |
V4 | 23 | AAATAGAGATATGCTGGATG | 20 |
V7 | 24 | CACACTTTGTCAGATGAGAA | 20 |
V3 | 25 | GTTACCAAAACTGCAGAC (V3a) | 18 |
26 | CCAAGCAAAAATGTCAACT (V3b) | 19 | |
V5 | 27 | GAAAAAATCAGTCTCAAGTA | 20 |
ALK К | 28 | AGCCATGCAGATGGA | 15 |
29 | CAGGAGCTGCAAGCC | 15 | |
EML4K | 30 | TGAGACTGTAGCGGATAC | 18 |
31 | CACTGAAAGTGTCATCCAAT | 20 |
Claims (3)
1. Способ анализа транслокаций EML4-ALK, ассоциированных с чувствительностью рака легкого к противоопухолевой таргетной терапии, включает: получение кДНК EML4-ALK с помощью реакции ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) на матрице РНК EML4-ALK со специфичными праймерами (SEQ ID NO: 1-2); амплификацию фрагментов гена EML4-ALK методом мультиплексной ПЦР на матрице кДНК с наборами специфичных праймеров (SEQ ID NO: 3-20); получение флуоресцентно-меченого ПЦР-продукта на втором этапе ОТ-ПЦР; создание биочипа для анализа 6 вариантов транслокаций EML4-ALK (V2, V3, V5, V4, V7, V1), содержащего набор иммобилизованных дифференцирующих зондов (SEQ ID NO: 21-31); гибридизацию флуоресцентно-меченого ПЦР-продукта с зондами в ячейках биочипа; регистрацию и интерпретацию результатов гибридизации.
2. Способ по п.1, в котором для идентификации транслокаций EML4-ALK, амплифицированных с помощью набора специфичных праймеров, используют биочип, представляющий собой пластиковую подложку с гелевыми ячейками, содержащими набор иммобилизованных зондов, комплементарных анализируемым участкам гена EML4-ALK.
3. Способ по п.1, в котором регистрацию результатов гибридизации проводят с помощью портативного устройства, регистрирующего и записывающего сигналы флуоресценции.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2012150939/10A RU2509153C1 (ru) | 2012-11-28 | 2012-11-28 | Способ анализа транслокаций eml4-alk, ассоциированных с чувствительностью рака легкого к противоопухолевой таргетной терапии |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2012150939/10A RU2509153C1 (ru) | 2012-11-28 | 2012-11-28 | Способ анализа транслокаций eml4-alk, ассоциированных с чувствительностью рака легкого к противоопухолевой таргетной терапии |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2509153C1 true RU2509153C1 (ru) | 2014-03-10 |
Family
ID=50192147
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2012150939/10A RU2509153C1 (ru) | 2012-11-28 | 2012-11-28 | Способ анализа транслокаций eml4-alk, ассоциированных с чувствительностью рака легкого к противоопухолевой таргетной терапии |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2509153C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2814710C1 (ru) * | 2023-12-03 | 2024-03-04 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Онкобокс" | Способ детекции транслокаций генов тирозинкиназных рецепторов в образцах опухолевой ткани с использованием данных рнк-секвенирования |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010132888A2 (en) * | 2009-05-15 | 2010-11-18 | Insight Genetics, Inc. | Methods and compositions relating to fusions of alk for diagnosing and treating cancer |
US20110110923A1 (en) * | 2008-02-12 | 2011-05-12 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Fish assay for eml4 and alk fusion in lung cancer |
US20120237930A1 (en) * | 2011-03-14 | 2012-09-20 | Hiro Nitta | Method of analyzing chromosomal translocations and a system therefore |
-
2012
- 2012-11-28 RU RU2012150939/10A patent/RU2509153C1/ru active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20110110923A1 (en) * | 2008-02-12 | 2011-05-12 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Fish assay for eml4 and alk fusion in lung cancer |
WO2010132888A2 (en) * | 2009-05-15 | 2010-11-18 | Insight Genetics, Inc. | Methods and compositions relating to fusions of alk for diagnosing and treating cancer |
US20120237930A1 (en) * | 2011-03-14 | 2012-09-20 | Hiro Nitta | Method of analyzing chromosomal translocations and a system therefore |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2814710C1 (ru) * | 2023-12-03 | 2024-03-04 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Онкобокс" | Способ детекции транслокаций генов тирозинкиназных рецепторов в образцах опухолевой ткани с использованием данных рнк-секвенирования |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6093436B2 (ja) | 遺伝子定量・配列解析用2次元セルアレイデバイスおよび装置 | |
AU2012236880A1 (en) | Telomere length measurement in formalin-fixed, paraffin embedded (FFPE) samples by quantitative PCR | |
CN111712580A (zh) | 用于扩增双链dna的方法和试剂盒 | |
CA2893941A1 (en) | Method for detecting helicobacter pylori dna in a stool sample | |
JP7392048B2 (ja) | 分析方法及びキット | |
EP3008182A2 (en) | Improved ngs workflow | |
US10975440B2 (en) | Experimentally validated sets of gene specific primers for use in multiplex applications | |
CN106460060B (zh) | Hnf4g-rspo2融合基因及其在癌症治疗中的用途 | |
US20170137807A1 (en) | Improved ngs workflow | |
EP2492356B1 (en) | Method of detecting methylated DNA in sample | |
RU2509153C1 (ru) | Способ анализа транслокаций eml4-alk, ассоциированных с чувствительностью рака легкого к противоопухолевой таргетной терапии | |
TWI567202B (zh) | 檢測酒精代謝基因之方法及套組 | |
KR101595016B1 (ko) | 닭의 성별을 감별하기 위한 등온증폭반응용 프라이머 조성물 및 이를 이용하여 닭의 성별을 감별하는 방법 | |
KR102118180B1 (ko) | 차세대 염기서열 분석법을 이용한 체성돌연변이 검출방법 | |
US20060014174A1 (en) | Method for the detection and identification of circulating micrometastatic cancer cells | |
JP6244439B2 (ja) | 遺伝子定量・配列解析用2次元セルアレイデバイスおよび装置 | |
KR101677952B1 (ko) | 연쇄구균 감염증 원인세균인 락토코카스 가비에의 판별 및 검출용 유전자 마커, 및 이를 이용한 원인세균의 판별 및 검출 방법 | |
KR101700622B1 (ko) | 개의 품종 식별을 위한 dna 마커 및 이를 이용한 개 품종 식별방법 | |
GB2580220A (en) | Detection of epigenetic modifications | |
JP2014187934A (ja) | 標的核酸の検出方法 | |
EP4079850A1 (en) | Analytical method and kit | |
US20220389514A1 (en) | Biomarker, method, kit and array for predicting therapeutic effects of bcg intravesical infusion therapy in treating bladder cancer | |
Bansal et al. | Extraction of DNA from human saliva and blood and genetic analysis of STR markers-A Comparative study | |
RU2282852C1 (ru) | Способ прогнозирования течения множественной миеломы | |
KR101677948B1 (ko) | 연쇄구균 감염증 원인세균인 스트렙토코카스 이니애의 판별 및 검출용 유전자 마커, 및 이를 이용한 원인세균의 판별 및 검출 방법 |