RU2499046C2 - Полинуклеотидная последовательность, кодирующая сконструированный белок пертактин, вектор, включающий такую последовательность, и вакцинные композиции, содержащие белок пертактина или вектор - Google Patents
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая сконструированный белок пертактин, вектор, включающий такую последовательность, и вакцинные композиции, содержащие белок пертактина или вектор Download PDFInfo
- Publication number
- RU2499046C2 RU2499046C2 RU2010121646/10A RU2010121646A RU2499046C2 RU 2499046 C2 RU2499046 C2 RU 2499046C2 RU 2010121646/10 A RU2010121646/10 A RU 2010121646/10A RU 2010121646 A RU2010121646 A RU 2010121646A RU 2499046 C2 RU2499046 C2 RU 2499046C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- prn
- sequences
- polynucleotide sequence
- engineered
- prnx300
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 42
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 title claims abstract description 27
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 title claims abstract description 27
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 title claims abstract description 27
- 108010021711 pertactin Proteins 0.000 title claims abstract description 9
- 239000013598 vector Substances 0.000 title abstract description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title abstract description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 19
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 claims abstract description 17
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 claims abstract description 9
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 6
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 5
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 claims description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 3
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 claims description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 2
- 210000003578 bacterial chromosome Anatomy 0.000 claims description 2
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 claims 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 30
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 27
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract description 15
- 230000000625 opsonophagocytic effect Effects 0.000 abstract description 11
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 abstract description 4
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 abstract description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 9
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 9
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 6
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- 241000588779 Bordetella bronchiseptica Species 0.000 description 3
- 241000588780 Bordetella parapertussis Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 241001495147 Bordetella holmesii Species 0.000 description 1
- 208000018150 Bordetella infection Diseases 0.000 description 1
- 241001406043 Bordetella pertussis Tohama I Species 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 101100379080 Emericella variicolor andB gene Proteins 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 101100048413 Escherichia coli (strain K12) ulaC gene Proteins 0.000 description 1
- 101710177917 Fimbrial protein Proteins 0.000 description 1
- 101000935612 Gloydius halys Bradykinin-potentiating peptide 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 229940124915 Infanrix Drugs 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- SKICPQLTOXGWGO-GARJFASQSA-N Pro-Gln-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O SKICPQLTOXGWGO-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 208000031737 Tissue Adhesions Diseases 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 1
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 1
- 210000002821 alveolar epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 101150112048 apxIIIA gene Proteins 0.000 description 1
- 108010072041 arginyl-glycyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 229940030156 cell vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 229940001442 combination vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 238000000326 densiometry Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000013178 mathematical model Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 229940066827 pertussis vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000001050 pharmacotherapy Methods 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 101150103042 ptxA gene Proteins 0.000 description 1
- 101150098102 ptxC gene Proteins 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 1
- GMMSTIGHDDLCMI-UHFFFAOYSA-N zinc;imidazol-3-ide Chemical compound [Zn+2].C1=C[N-]C=N1.C1=C[N-]C=N1 GMMSTIGHDDLCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/099—Bordetella
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/235—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bordetella (G)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/522—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/523—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Virology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Представленные изобретения относятся к области биомедицины и касаются полинуклеотидной последовательности, кодирующей сконструированный белок пертактин (Prn), вектора, включающего такую последовательность, и композиций, содержащих белок или вектор. Охарактеризованная полинуклеотидная последовательность кодирует 300 первых аминокислот, ближайших к N-концу данного типа природного, зрелого Prn (PrnX300), и аминокислотную последовательность, включающую 620 последних аминокислот, ближайших к С-концу данного типа природного, зрелого Prn (PrnY620), с получением сконструированного пертактина PrnX300-PrnY620 из рода Bordetella. Сконструированные молекулы Prn включают в своей структуре полиморфизмы из различных штаммов B. pertussis и вызывают иммунные ответы с повышенной защитной способностью и опсонофагоцитирующей активностью, превышающими соответствующие показатели предшествующих вакцин. Получаемый по представленному изобретению белок может применяться в медицине и ветеринарии в качестве компонента противобактериальных вакцин против Bordetella pertusis. 5 н. и 7 з.п.ф-лы, 3 ил., 3 табл., 4 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к области биомедицины. Оно включает получение сконструированного белка Пертактина (Prn) и его применение в качестве части противобактериальных вакцин, а более конкретно, в качестве части бесклеточных вакцин против Bordetella pertusis. Сконструированные молекулы Prn включают в своей структуре полиморфизмы из различных штаммов B. pertussis и индуцируют иммунные ответы с повышенной защитной способностью и опсонофагоцитирующей активностью, при тестировании в качестве вакцин, превышающими соответствующие показатели предшествующих вакцин.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Коклюш или Pertussis является острым, крайне инфекционным заболеванием дыхательных путей, вызываемым бактерией Bordetella pertussis, микроорганизмом, впервые выделенным Борде и Жангу в 1906 году [Bordet, J. and O. Gengou. Ann Inst Pasteur (Paris), 1906. 20: p.731-41]. Недавно ежегодную заболеваемость данной инфекцией во всем мире оценивали на уровне 48,5 миллионов. Заболевание особенно тяжело протекает у детей младше шести месяцев, причем с данной возрастной группой связано 90% смертельных случаев (300000-400000) [Crowcroft, N.S., et al. Lancet Infect Dis, 2003. 3(7): p. 413-8].
Против B. pertussis доступно несколько вакцин, которые относятся к двум основным группам согласно их типу: клеточные вакцины и недавно появившиеся бесклеточные вакцины. Вакцинация существенно уменьшает частоту возникновения болезни, сдвигая ее от детей к подросткам и взрослым. В ряде исследований подростки указаны в качестве основного резервуара B. pertussis и главного источника для распространения данного заболевания среди частично защищенных детей. Таким образом, коклюш остается нерешенной проблемой здравоохранения, которая требует разработки новых вакцин для лучшего контроля эпидемий и внезапных вспышек, а также возможной ликвидации данного заболевания в эндемичных областях [Cherry, J.D. Pediatrics, 2005. 115(5): p. 1422-7; Singh, M. and K. Lingappan, Chest, 2006. 130(5): p. 1547-53].
Род Bordetella включает девять видов, четыре из которых ассоциированы с инфекциями у млекопитающих (B. holmesii, B. bronchiseptica, B. parapertussis и B. pertussis), причем последние два ответственны за инфекции у людей [Mattoo, S., et al. Front Biosci, 2001. 6: p. E168-86]. Большинство их факторов вирулентности регулируется на транскрипционном уровне двухкомпонентной системой, называемой BvgA/S (Активатор/Сенсор генов вирулентности Bordetella) [Stibitz, S., et al. Nature, 1989, 338(6212): p. 266-9]. Среди них наиболее важными факторами являются токсины коклюша (PT), фактор трахеальной колонизации, аденилатциклаза, а также адгезины - филаментозный фитогемагглютинин (PHA), фимбрии (Fim) и пертактин (Prn), причем последний является целью настоящего изобретения.
Prn является наружным мембранным белком, принадлежащим к семейству аутотранспортных белков типа V. Он отличается тем, что катализирует свой собственный транспорт через наружную бактериальную мембрану [Henderson, I.R.Trends Microbiol, 2000, 8(12): p. 534-5]. Зрелый Prn представляет собой белок массой 68 кДа у B. bronchiseptica [Henderson, I.R. Trends Immun, 2001. 69 (3): p. 1231-43], 69 кДа у B. pertussis [Charles, I.G., et al. Proc Natl Acad Sci USA, 1989, 86(10): p. 3554-8] и 70 кДа у B. parapertussis [Li, L.J., et al. Mol Microbiol, 1991, 5(2): p. 409-17], соответственно. Его структура состоит из 16 параллельных нитей, формирующих β-спираль и поперечную секцию V-образной формы [Emsley, P., et al. Nature, 1996. 381(6577): p. 90-2]. Из данного геликоидального ядра выступают многочисленные петли. Одной из них является триплет Arg-Gly-Asp (RGD), мотив, ассоциируемый с адгезией к тканям [Leininger, E., et al. Infect Immun, 1992, 60(6): p. 2380-5; Emsley, P., et al. Nature, 1996, 381(6577): p.90-2]. Присутствие указанного мотива и многочисленных богатых пролином областей связано с функциями Prn в процессе адгезии. Эксперименты показали, что Prn может опосредовать адгезию к клеткам респираторного эпителия [Everest, P., et al. Microbiology, 1996, 142 (Pt 11): p. 3261-8]. Однако тесты на ингибирование при воздействии человеческой сыворотки адгезии B. pertussis к культивируемым клеткам A549 (альвеолярного эпителия человека) не подтвердили роль Prn как ключевого компонента в ходе указанного процесса в условиях теста [Rodriguez, M.E., et al. FEMS Immunol Med Microbiol, 2006, 46(1): p. 39-47].
Белок Prn является частью бесклеточных вакцин, состоящих из трех или более компонентов. Бесклеточные вакцины могут состоять из: 1) одного компонента - PT, 2) двух компонентов - PT и PHA, 3) трех компонентов - PT, PHA и Prn и 4) пяти компонентов, включая вышеуказанные три компонента, а также фимбриальные белки 2 (Fim2) и 3 (Fim3). У людей уровни антител к Prn, Fim2 и PT коррелируют с уровнями защиты против болезни [Cherry, J.D., et al. Vaccine, 1998, 16(20): p. 1901-6; Storsaeter, J., et al. Vaccine, 2003, 21(25-26): p. 3542-9].
Активная иммунизация с применением Prn B. pertussis и B. bronchiseptica вызывает специфичный иммунный ответ против Prn, обеспечивающий защиту в различных моделях на животных [Charles, I.G., et al. Eur J Immunol, 1991, 21(5): p. 1147-53; Roberts, M., et al. Vaccine, 1992, 10(1): p. 43-8]. Аналогично, пассивное введение моноклональных антител против Prn (mAbs) защищало мышей в модели респираторного заражения [King, A.J., et al. Microbiology, 2001, 147(Pt 11): p. 2885-95]. Уровни защиты у мышей, подвергнутых тесту с интраназальным заражением (INCA), были увеличены при добавлении Prn к вакцинам, содержащим PT и PHA [Guiso, N., et al. Vaccine, 1999, 17(19): p. 2366-76]. Недавно было показано, что Prn является единственным компонентом бесклеточных вакцин, который индуцирует выработку антител такого уровня, который коррелирует с опсонофагоцитирующей активностью [Hellwig, S.M., et al. J Infect Dis, 2003, 188(5): p. 738-42]. Несмотря на доступные эффективные вакцины и общепринятые программы вакцинации, коклюш все еще является эндемичным в некоторых областях Америки, Европы и Азии и рассматривается как повторно возникающее заболевание [Raguckas, S.E., et al. Pharmacotherapy, 2007, 27(1): p. 41-52]. Одна из гипотез, пытающихся объяснить это явление, основана на потере эффективности в результате появления резистентных штаммов [Mooi, F.R. et al. Emerg Infect Dis, 2001, 7(3 Suppl): p. 526-8]. Prn является одним из наиболее полиморфных белков в B. pertussis. Он содержит две вариабельные области, обозначенные как область 1 (R1) и 2 (R2), соответственно, которые содержат повторяющиеся аминокислотные последовательности, богатые пролинсодержащими мотивами Gly-Gly-X-X-Pro (GGXXP) и Pro-Gln-Pro (PQP). Область R1 расположена в выступающей петле, расположенной вблизи аминоконцевой последовательности (N-концевой) и рядом с RGD мотивом, тогда как область R2 расположена вблизи карбокси-конца (C-конца) [Hijnen, M., et al. Infect Immun, 2004, 72(7): p. 3716-23]. В B. pertussis идентифицировали до 12 различных вариантов Prn (Prn1, Prn2, Prn3...Prn12), которые можно найти в базе данных Национального центра биотехнологической информации Соединенных Штатов Америки (NCBI). Штаммы, несущие Prn1, Prn2 и Pm3, распространены во всем мире. В различных регионах Америки, Европы, Азии и Австралии проводили многочисленные исследования свойств штаммов или ретроспективные анализы штаммов, циркулирующих в настоящее время, которые показали тенденцию к прогрессирующей персистенции штаммов Prn2 по сравнению со штаммами Prn1, причем штаммы Prn2 преобладали в большинстве стран, в которых проводили исследования [Mooi, F.R., et al. Infect Immun, 1998, 66(2): p. 670-5; Cassiday, P et al. J Infect Dis, 2000, 182(5): p. 1402-8; Weber, С et al. J Clin Microbiol, 2001, 39(12): p. 4396-403; Hallander, H.O., et al. J Clin Microbiol, 2005, 43(6): p. 2856-65; van Amersfoorth, S.C., et al. J Clin Microbiol, 2005, 43(6): p. 2837-43; Byrne, S, et al. BMC Infect Dis, 2006, 6: p. 53].
Текущие различия в аминокислотной последовательности Prn между клеточными (DTPc) или бесклеточными вакцинами (DPTa) и циркулирующими штаммами служат одним из факторов, поддерживающих гипотезу потери эффективности доступных вакцин, обусловленной появлением новых штаммов. Исследования, проведенные в Нидерландах и Италии, в популяциях, вакцинированных DPTc или DTPa, а также в невакцинированных популяциях, показали, что данные типы вакцин защищают лучше против циркулирующих штаммов, аналогичных штамму, на основе которого получены вакцины [Mooi, F.R., et al. Infect Immun, 1998, 66(2): p. 670-5; Mastrantonio, P., et al. Microbiology, 1999, 145 (Pt 8): p. 2069-75]. В соответствии с указанными данными, в модели на мышах было показано, что вакцинация DPTc дифференцированно защищает против штаммов, несущих Prn1 и Prn2, что указывает на то, что изменения в R1 области Prn могут придавать резистентность [King, A.J., et al. Microbiology, 2001. 147(Pt 11): p. 2885-95]. Впрочем, обширные исследования с распределением штаммов B. pertussis в зависимости от страны происхождения, статуса вакцинации и типа вакцин (DPTc и DPTa) не выявили существенных различий в частоте аллелей prn, ptxC, ptxA или tcfA2 для циркулирующих штаммов и программ вакцинации [van Amersfoorth, S.C., et al. J Clin Microbiol, 2005, 43(6): p. 2837-43]. Высокий уровень распространения штаммов Prn2 во многих странах является показателем преимущественной передачи указанных штаммов все еще неизвестными путями, хотя полученные данные, упомянутые выше, едва ли связаны с возникновением новых вариантов вакцинации. Примечательно, что в вышеупомянутом исследовании [van Amersfoorth, S.C., et al. J Clin Microbiol, 2005, 43(6): p. 2837-43] три клинически выделенных штамма, несущих аллели, подобные аллелям в используемых вакцинах, были найдены лишь у невакцинированных детей. Является ли это случайным, или нет, это указывает, что Prn1 штаммы преобладают в нишах, лишенных специфического иммунитета. С другой стороны, недавняя идентификация фага, инфицирующего Bordetella (BPP-1) при использовании Prn в качестве первичного рецептора, позволяет предположить, что изменения в данном белке могли быть вызваны селективным прессом, отличным от воздействия иммунной системы [Liu, M., et al. Science, 2002, 295(5562): p. 2091-4]. Не исключены также возможные влияния обоих явлений в сочетании с другими неизвестными факторами, что ведет к согласованным изменениям в B. pertussis.
Развитие эпидемиологии коклюша моделировали с помощью математической модели, независимо объединяя частоту возникновения болезни и передачу патогена [Aguas, R., et al. Lancet Infect Dis, 2006, 6(2): p. 112-7]. Данная модель прогнозирует, что регулярные растущие дозы не способны к устранению тяжелых форм заболевания, наблюдаемых в текущих эпидемиях. Весьма вероятно, что это обусловлено короткой продолжительностью защиты, обеспечиваемой доступными бесклеточными вакцинами (4-12 лет), а также изменчивостью иммунного ответа и различными типами вакцин. Данная модель в наиболее оптимистическом сценарии прогнозирует, что если вакцины могут обеспечить иммунитет, превосходящий естественный, то доступные клеточные и бесклеточные вакцины эталона все еще не достигают.
Главная цель настоящего изобретения состоит в содействии разработке более эффективных бесклеточных вакцин против коклюша. Основная работа, предшествующая настоящему изобретению, была основана на введении иммуногенных препаратов, полученных посредством смешивания белков Prn (Nicole Guiso et al., WO 01/90143 A2 и US 2006/0008474 A1) или синтетических пептидов R1 области Prn (Frederik Mooi et al., WO 02/00695 A2). Таким образом, разработка более эффективных бесклеточных вакцин является важной проблемой, решение которой позволит предотвратить коклюш.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение способствует решению вышеперечисленных проблем и включает конструирование гена prnA, кодирующего наружный мембранный белок B. pertussis, называемый пертактином (Prn). Настоящее изобретение удовлетворяет потребности, существующие в уровне техники, делая возможным получение различных вариантов сконструированного Prn таким способом, что они включают в своей структуре две различных полиморфных домена R1 области Prn. Универсальность изобретения также охватывает создание новых молекул Prn, дополнительно включающих три или более различных полиморфных доменов R1 области Prn.
Предметом настоящего изобретения является полинуклеотидная последовательность, кодирующая сконструированный белок Prn, который включает до 300 первых аминокислот, ближайших к N-концу природного, зрелого Prn данного типа (PrnX300), и аминокислотную последовательность, включающую до 620 аминокислот, ближайших к C-концу природного, зрелого Prn данного типа (PrnY620), формирующие сконструированный белок PrnX300-PrnY620Prn.
В рамках настоящего изобретения термин "сконструированный Prn" относится к белку, получаемому в результате присоединения, с непосредственным примыканием или нет, фрагмента, включающего до 300 первых аминокислот, ближайших к N-концу данного природного, зрелого белка Prn, к другому фрагменту, включающему последние 620 аминокислот, ближайших к C-концу природного, зрелого белка Prn.
Новые сконструированные варианты Prn получены посредством молекулярного мутагенеза, путем непосредственного присоединения последовательностей, включающих до 300 первых аминокислот, ближайших к N-концу природного, зрелого Prn данного типа, к последовательностям, включающим до 620 последних аминокислот, ближайших к C-концу природного, зрелого Prn данного типа. Новые варианты сконструированного Prn включают последовательности из одного или из различных типов Prn в одной молекуле, без воздействия на защитный иммунный ответ.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения получают различные варианты сконструированного Prn, кодируемые последовательностями нуклеиновых кислот, определенных в SEQ ID NO:1 - SEQ ID NO:6. При иммунизации мышей различными вариантами сконструированного Prn были получены высокозначимые уровни защиты и опсонофагоцитирующей активности, превышающие соответствующие уровни, полученные с природными молекулами Prn, включенными в композицию отдельно или в виде смесей. Иммунный ответ, индуцированный сконструированным Prn, был одинаково эффективен против штаммов, экспрессирующих различные типы Prn.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения фрагмент, включающий первые 300 аминокислот, ближайших к N-концу природного, зрелого Prn данного типа, обозначенный PrnX300, соответствует Prn из рода Bordetella. В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения указанный фрагмент соответствует молекулам Prn из B. pertussis или B. parapertussis, предпочтительно Prn1, Prn2 и Prn3 вариантам B. pertussis.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения последние 620 аминокислот, ближайших к C-концу природного, зрелого Prn данного типа, обозначенного PrnY620, соответствуют Prn из рода Bordetella. В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения данный фрагмент соответствует молекулам Prn из B. pertussis или B. parapertussis, предпочтительно Prn1, Prn2 и Prn3 вариантам B. pertussis.
Полинуклеотидная последовательность настоящего изобретения кодирует полипептидную последовательность, включающую любую возможную комбинацию типов Prn в формате PrnX300-PrnY620.
Аминокислотные последовательности PrnX300 и PrnY620, кодируемые полинуклеотидной последовательностью настоящего изобретения, соединены непосредственно или с использованием аминокислотной последовательности IDNATWVMTDN или IDNATWVMTDNIDNATWVMTDN.
В настоящем изобретении аминокислотные последовательности PrnX300 и PrnY620 могут быть лишены повторяющихся последовательностей, предпочтительно GGXXP, и последовательностей PQP из областей R1 и R2. Основания, подтверждающие данную конструкцию, являются следующими: Область 1 (R1), включающая повторяющуюся последовательность GGXXP, слабо узнается человеческой и кроличьей сыворотками, что указывает на то, что данная область не является антигенной детерминантой [Hijnen, M., F. R. Mooi, et al. (2004), Infect Immun 72(7): 3716-23]. С другой стороны, в недавно опубликованной работе сообщали о мутантах Prn, в которых повторяющиеся последовательности GGXXP и PQP, или области, содержащие указанные последовательности, были делетированы. Делеции GGXXP не затрагивали физико-химические свойства полученных мутантных молекул Prn, как свидетельствуется в подобных методах, используемых для экспрессии и очистки мутантных и немутантных белков Prn [Hijnen, M., P. G. van Gageldonk, et al. (2005), Protein Expr Purif 41(1): 106-12]. Аналогичным образом, делеции последовательностей GGXXP существенно не затрагивали структурные свойства, так как молекулы Prn, мутированные в R1, хорошо узнавались mAbs, индуцированными против конформационных эпитопов в природных молекулах Prn, а также не узнавались mAbs к GGXXP, направленными против линейных эпитопов GGXXP. Кроме того, наблюдали, что некоторые мутации внутри R1 могут увеличивать способность связывания с некоторыми mAbs против конформационных эпитопов. Наконец, были свидетельства, указывающие, что R1 (GGXXP) и R2 (PQP) формируют один эпитоп [Hijnen, M., R. de Voer, et al. (2007), Vaccine 25(31): 5902-14].
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения указанные полинуклеотидные последовательности кодируют сконструированный Prn, где указанные аминокислотные последовательности PrnX300 и PmY620 включают гетерологичные пептиды, способные функционировать как эпитопы для T-хелперных клеток, выделенные из дифтерии, столбняка, вируса гепатита B (HBV), полиовирусов, осповакцины, вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) или вируса гриппа человека. Специалистам, квалифицированным в данной области, известно, что иммунный ответ против данного антигена может быть усилен при включении в него эпитопов указанного типа.
Дополнительный предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения включает полинуклеотидные последовательности по п. 1, которые могут быть оптимизированы по оптимальному применению кодонов с целью повышения экспрессии кодируемого белка в бактериях, дрожжах, клетках насекомых или млекопитающих. Достигаемое с помощью генно-инженерных методов повышение экспрессии кодируемых молекул хорошо известно специалистам, квалифицированным в данной области техники. В другом предпочтительном варианте осуществления новый белок, являющийся объектом настоящего изобретения, может являться одним из многих компонентов новой комбинированной вакцины, подчеркивая, что ни одно из предшествующих изобретений, не включало получение минимального количества молекулярных объектов, удовлетворяющих существующим требованиям в данной области техники.
Наконец, потребность в препаратах вакцин, способных обеспечивать перекрестный иммунитет между B. pertussis и B. parapertussis, более чем очевидна в уровне техники. Настоящее изобретение также включает создание сконструированных молекул Prn, включающих в одной структуре различные полиморфные области различных видов Bordetella, на основании высокого уровня гомологии, существующих между белками Prn различных видов Bordetella.
Неожиданно, сконструированный Prn, являющийся объектом настоящего изобретения, не только способен индуцировать эффективный иммунный ответ против различных Prn1- и Prn2-экспрессирующих штаммов B. pertussis, но также индуцирует иммунные ответы, более эффективные по сравнению с иммунными ответами, индуцируемыми другими, не сконструированными рекомбинантными белками Prn, о чем свидетельствует модель респираторного заражения на мышах и анализ опсонофагоцитирующей активности. Неожиданно, иммунный ответ, индуцированный сконструированным Prn, превосходил иммунный ответ, индуцированный эквимолярной смесью Prn1 и Prn2 (Prn1+Prn2).
Вакцинные композиции, полученные путем смешивания различных белков Prn одних и тех же или различных видов, охватывая также полиморфизмы, приводят к техническим сложностям, связанным с новыми способами производства, таким как повышение концентрации нежелательных примесей и производственное различие между партиями. Существенным аспектом является разработка комбинированных вакцин, состоящих из множества антигенов с совершенно разными свойствами, которые могут ухудшить системную иммуногенность композиции. С другой стороны ожидается, что стратегии, основанные на синтетических пептидах R1 области, могут привести к вакцинам, обладающим меньшей эффективностью, чем вакцины, доступные в настоящее время, в результате исключения других эпитопов, присутствующих в природном Prn, из антигена, подходящего для развития иммунного ответа.
Для выполнения указанного нерешенного требования в данной области техники, настоящее изобретение включает фармацевтическую композицию, включающую один или более сконструированных Prn, кодируемых полинуклеотидными последовательностями по пп. 1-13, в количествах, достаточных для развития гуморального и клеточного иммунных ответов, эффективных против видов Bordetella, при введении, с применением методик иммунизации, млекопитающим и предпочтительно, людям. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтическая композиция, включающая сконструированные варианты одного или более Prn, индуцирует гуморальный и клеточный иммунные ответы, эффективные против B. pertussis. Кроме того, целью настоящего изобретения является живая или атенуированная вакцина, включающая один или более сконструированных вариантов Prn, кодируемых последовательностями по пп.1-13, где указанные сконструированные варианты Prn экспрессируются в наружной мембране живого или атенуированного организма. В указанной живой или атенуированной вакцине указанные полинуклеотидные последовательности по пп. 1-13 включены в плазмидный вектор или бактериальную хромосому.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения указанные полинуклеотидные последовательности по пп. 1-13, которые кодируют сконструированные варианты Prn, включены в вектор для экспрессии в клетках млекопитающих. В другом варианте осуществления настоящего изобретения указанный вектор экспрессии, который содержит полинуклеотидные последовательности по пп. 1-13, является основой для вакцины, содержащей нуклеиновые кислоты.
В другом варианте осуществления изобретения полипептидные последовательности, кодируемые указанными полинуклеотидными последовательностями по пп. 1-13, могут применяться для обнаружения инфекции Bordetella. Кроме того, целью настоящего изобретения также является диагностический набор, предназначенный для обнаружения присутствия или отсутствия антител против Bordetella, который включает полипептидные последовательности, кодируемые полинуклеотидными последовательностями, по пп. 1-13.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР
Фигура 1. Тест на защитные антитела в мышах Balb/c, вакцинированных различными вариантами сконструированного Prn. При заражении использовали штаммы B. pertussis Tohama I (Prn1) и клинический изолят CH53 (Prn2). Столбцы представляют средний логарифм снижения жизнеспособных бактериальных клеток в легких.
Фигура 2. Опсонофагоцитоз, опосредованный сыворотками из мышей Balb/c, вакцинированных различными сконструированными вариантами Prn. На диаграмме показано различие во флуоресценции (фикоэритрин, PE) в относительных единицах (AU) клеток, окрашенных флуоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ) при двух режимах инкубирования (PE 4°C-PE 37°C).
Фигура 3. Гуморальный иммунный ответ IgG против Prn1 и Prn2CCPrn1, индуцированный в мышах, иммунизированных плазмидами, экспрессирующими сконструированные варианты Prn1, Prn2, Prn2CCPrn1 и Prn2CLPrn1.
Подробное описание вариантов осуществления/Примеры
Пример 1. Конструирование векторов для внутриклеточной экспрессии в Escherichia coli различных сконструированных вариантов Prn и их очистка
Гены prnA1 и pmA2 из штамма Bordetella B. pertussis Tohoma I (Prn1) и CH53 (Prn2) амплифицировали с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) из геномной ДНК с использованием олигонуклеотидов, описанных ранее 1 и 2 [Hijnen, M., P. G. van Gageldonk, et al. (2005), Protein Expr Purif 41(1): 106-12].
Полученные фрагменты клонировали в вектор pET-28a (Novagen) по сайтам NdeI и BamHI. Сконструированные варианты Prn получали с использованием метода ПЦР с обратной транскрипцией, описанного ранее Imai и сотрудниками в 1991 [Imai, Y., et al. Nucleic Acids Res, 1991, 19(10): p. 2785]. Нуклеотиды, используемые для амплификации различных полинуклеотидных последовательностей, представлены в Таблице 1. Пару олигонуклеотидов 1,2 использовали при линеаризации векторов pET28aprn1 и pETaprn2, соответствующих Prn1 и Prn2, соответственно. Фрагменты DomR1 получали посредством амплификации с олигонуклеотидами 3 и 4. Кроме того, указанную область амплифицировали с использованием нуклеотидных пар 3,5 и 3,6 для добавления последовательностей, кодирующих короткие и длинные линкеры, соответственно. Условия, используемые для амплификации ПЦР фрагментов, используемых в настоящем изобретении, приведены в Таблице 2.
Таблица 1 Олигонуклеотиды, использованные для амплификации различных последовательностей |
|||
Номер | Название олигонуклеотида | Последовательность 5'→3' | Результат ПЦР амплификации |
1 | pET28aprn1 1401-30 LinVect | AGCGTGGAGCTCGCCCA GTCGATCGTCGAG | Линеаризовавший вектор с тупыми концами |
2 | pET28aprn1 1431-60 LinVect | GGAGCCCGATACGTCCA CGCCATACCAGCC | |
3 | pET28aprn1 1975-97 DomR1 | GTCAAGGCCGGCAAGCT GGTCGC | Домен R1 (DomR1) любого типа Prn |
4 | pET28aprn1 1431-53 DomR1 | GGAGCCCGATACGTCCA CGCCAT | |
5 | pET28aprn1 1431-53 DomR1 CC-Nt | ATCGACAACGCCACCTG GGTCATGACGGACAACG TCAAGGCCGGCAAGCTG GTCGC | Амплифицирует DomR1 из любого типа Prn, а также добавляет линкер из 11 аминокислот к N-концу |
6 | pET28aprn1 1431-53 DomR1 CL-Nt | ATCGACAACGCCACCTG GGTCATGACGGACAACA TCGACAACGCCACCTGG GTCATGACGGACAACGT CAAGGCCGGCAAGCTG | Амплифицирует DomR1 из любого типа Prn, а также добавляет линкер из 22 аминокислот к N-концу |
Таблица 2 Условия ПЦР-амплификации различных фрагментов, используемых в настоящем изобретении |
|||||||
Пара олигов | Темп. гибридизации (°C). | Матрица ДНК (мкг) | Время элонгации (мин) | Полимераза (Единицы) | Кол-во циклов | Продукт амплиф. | Размер амплиф. продукта (пн) |
1,2 | 65 | pET28aprn1 (1) | 7,5 | Pfx (2,5) | 5 | Линейный вектор | 7370 |
1,2 | 65 | pET28aPrn2 (1) | 7,5 | Pfx (2,5) | 5 | Линейный вектор | 7385 |
3,4* | 67 | pET28aprn1 (0,1) | 0,6 | Pfu (2,5) | 30 | DomR1 prnl | 567 |
3,4* | 67 | pET28aprn2 (0,1) | 0,6 | Pfu (2,5) | 30 | DomR1 prn2 | 582 |
3,5* | 67 | DomR1 prn1 (0,1) | 0,6 | Pfu (2,5) | 30 | CC- DomR1 Prn1 |
600 |
3,6* | 67 | DomR1 prnl (0,1) | 0,6 | Pfu (2,5) | 30 | CL- DomR1 Prn1 |
633 |
3,5* | 67 | DomR1 prn2 (0,1) | 0,6 | Pfu (2,5) | 30 | CC- DomR1 prn2 |
620 |
3,6* | 67 | DomR1 prn2 (0,1) | 0,6 | Pfu (2,5) | 30 | CL- DomR1 prn2 |
648 |
* фосфорилированные олигонуклеотиды, СС: Короткий линкер, CL: Длинный линкер |
Линеаризованные векторы pET28aprn1 и pET28aprn2, полученные обратным ПЦР, лигировали с различными фрагментами, кодирующими домены, содержащие область 1 из Prn1 и Prn2. В данных векторах новые сконструированные гены находятся под транскрипционным контролем индуцируемого T7 промотора. Клоны, несущие правильные последовательности, вводили в штамм E. coli BL21-Codonplus (DE3)-RP для экспрессии соответствующих белков в виде телец включения [Hijnen, M., et al. Protein Expr Purif, 2005, 41(1): p. 106-12].
Уровни экспрессии рекомбинантных Prn1 и Prn2, также как и других вариантов, достигали 15-20% от количества суммарного белка, что подтверждали денситометрией в полиакриламидных гелях, окрашенных Кумасси синим.
Различные белки очищали суспендированием бактериальной пасты для каждого варианта в буфере для разрушения (при концентрации клеток 100 мг/мл), после чего клетки разрушали ультразвуком. Осадки разрушенных клеток растворяли в 8 М мочевине и фракционировали с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (ДСН-ПААГ, 12,5%). Гель окрашивали обратным цинк-имидазольным окрашиванием, затем вырезанную полоску геля, содержащую полосу, соответствующую целевому белку, пропускали через сито из нержавеющей стали с ячейками 100 мкм в присутствии экстракционного буфера. Затем белок экстрагировали, ренатурировали и концентрировали с помощью ультрафильтрации через концентратор Amicon с мембраной 50 кДа, и определяли конечную концентрацию с помощью бихинолинового кислотного метода. При анализе 15 мкг каждого белка, очищенного из гелей аналитического ДСН-ПААГ, окрашенных Кумасси синим, примесей не обнаружили, что свидетельствует о том, что препараты белков были чистыми более чем на 95%. Характеристики различных конструкций и полученных сконструированных вариантов Prn представлены в Таблице 3.
Таблица 3 Характеристики различных конструкций Prn и сконструированных вариантов Prn |
||||
Название плазмиды | Линкер между DomR1 |
Название сконструированного Prn | Тип Prn | Характеристики сконструированного Prn |
pET28aprn1 | Нет | Prn1 | 1 | - |
pET28aPrn2 | Нет | Prn2 | 2 | - |
pETprn DomR1 (1-2) | Нет | Prn1-Prn2 | 1,2 | Nt..DomR1(Prn1)- D-DomR1(Prn2)..Ct |
pETprn DomR1 (1-CC-2) | IDNATWVMTDN | Prn1-CC-Prn2 | 1,2 | Nt..DomR1(Prn1)-СС-DomR1(Prn2)..Ct |
pETprn DomR1 (1-CL-2) | IDNATWVMTDNIDNATWVMTDN | Prn1-CL-Prn2 | 1,2 | Nt..DomR1(Prn 1)- CL-DomR1(Prn2)..Ct |
pETprn DomR1 (2-1) | - | Prn2-Prn1 | 1,2 | Nt..DomR1(Prn 2)- DomR1 (Prn 1)..Ct |
pETprn DomR1 (2-CC-1) | IDNATWVMTDN | Prn2-CC-Prn1 | 1,2 | Nt..DomR1(Prn 2)- СС-DomR1(Prn1)..Ct |
pETprn DomR1 (2-CL-1) | IDNATWVMTDNIDNATWVMTDN | Prn2-CL-Prn1 | 1,2 | Nt..DomR1(Prn 2)- CL-DomR1(Prn1)..Ct |
Пример 2. Активная иммунизация, ответ антитела и защита в модели на мышах
Мышей иммунизировали 0,2 мкг или 0,02 мкг сконструированного Prn1 и Prn2, PBS, эквимолярной смесью Prn1 и Prn2 (Prn1+Prn2) и шестью сконструированными вариантами Prn (показанными в Таблице 3). Все белки вводили в форме препарата в квасцах. Дозы соответствовали 1/40 и 1/400 частям дозы, обычно применяемой на людях (Infanrix®, 8 мкг). Мышей иммунизировали подкожным введением в объеме 100 мкл. Сыворотки от иммунизированных мышей оценивали с помощью иммуноферментного анализа по типу ELISA. Титры антител достигали средних значений от 1,2×103 до 4,6×104. Средние значения титров, соответствующих максимальным дозам, значительно отличались от титров, достигнутых с минимальными использованными дозами во всех случаях (p<0,05, критерий Крускала-Уоллиса-Данна). В иммунном ответе, полученном с Prn1, Prn2 или эквимолярной смесью Prn1+Prn2, различий не наблюдали. Аналогично, не наблюдали каких-либо различий между средними титрами различных сконструированных вариантов Prn. Неожиданно, титры, полученные со сконструированными вариантами Prn, значительно превышали титры, полученные с не сконструированными рекомбинантными белками Prn (p<0,01, критерий Крускала-Уоллиса-Данна).
Штамм Tohama I (Prn1) и клинический изолят CH53 (Prn2) использовали для интраназального заражения. Бактерии культивировали на чашках, содержащих агар Борде-Жангу (Sigma) с добавкой 1% глицерина и 14% дефибринированной крови козы. Чашки инкубировали в течение 24 ч при 37°C, а полученные колонии суспендировали в среде Stainer-Scholte до концентрации 108 клеток/мл. Полученную суспензию использовали для интраназального заражения. Иммунизированных мышей заражали через 15 дней после последней иммунизации путем инстилляции 50 мкл бактериальной суспензии (5×106 клеток). Через пять дней после заражения мышей умерщвляли и в асептических условиях извлекали и гомогенизировали легкие с целью определения бактериальной массы [Denoel, P., et al. Vaccine, 2005, 23(46-47): p. 5333-41]. Различные варианты показали уровни защиты, значительно превышавшие уровни у невакцинированных контрольных животных (p<0,001). Неожиданно, сконструированные варианты Prn показали более высокие уровни защиты при сравнении с рекомбинантными белками Prn или эквимолярной смесью Prn1+Prn2 для обоих штаммов (p<0,001).
Сконструированные варианты Prn показали аналогичные уровни защиты против обоих штаммов при минимальной введенной дозе, эффект, не достигнутый с белками Prn1 или Prn2. Полученные результаты свидетельствуют, что указанные сконструированные варианты Prn обладают иммунологическими свойствами, отличными от свойств, показанных рекомбинантными белками Prn1 и Prn2, и превышающими их, при анализе обоих в отдельности, или в виде эквимолярной смеси (Фигура 1).
Пример 3. Опсонофагоцитирующая активность в сыворотках
Опсонофагоцитирующая активность, опосредуемая сыворотками против Prn, как было показано, является ключевым параметром в ответе людей, вакцинированных бесклеточными вакцинами [Hellwig, S.M., et al. J Infect Dis, 2003, 188(5): p. 738-42]. В настоящем изобретении показано, что различные сконструированные варианты Prn способны индуцировать антитела с подобными свойствами. Опсонофагоцитирующую активность анализировали с помощью ранее упомянутого метода, адаптированного к модели на мышах. Штаммы Tohama I и CH53 B. pertussis выращивали на агаре Борде-Жангу и окрашивали клетки с использованием ФИТЦ (2×106 колониеобразующих единиц). Затем меченые бактерии опсонизировали в течение 30 минут при 37°C в планшетном шейкере с сыворотками мышей, иммунизированных рекомбинантными Prn1, Prn2, Prn1+Prn2 и двумя вариантами сконструированных белков Prn (Prn2-CC-Prn1 и Prn2-CL-Prn1). В ходе стадии адгезии опсонизированные бактерии и неопсонизированный контроль инкубировали с полиморфноядерными клетками (ПМЯ). Затем образцы разделяли на две равные подгруппы клеток, одни инкубировали в течение еще 45 минут при 4°C, а другие - при 37°C. После этого все образцы инкубировали еще в течение 30 минут при 4°C с меченым PE козьим конъюгатом против антитела мыши. Образцы анализировали с помощью проточной цитометрии (PARTEC PAS III). Интенсивность флюоресценции окрашенных в зеленый и красный цвет клеток, инкубированных при 4°C, использовали в качестве контроля адгезии. Различие красной флюоресценции окрашенных в зеленый цвет клеток использовали для подтверждения фагоцитной активности, опосредованной сыворотками.
Сконструированные варианты Prn демонстрировали опсонофагоцитирующую активность (Фигура 2). Неожиданно, наблюдали существенные различия только в группах, иммунизированных сконструированными вариантами Prn, при сравнении с мышами, которым вводили PBS (p<0,05, Крускал-Уоллис-Данн). Опсонофагоцитирующая активность сывороток, индуцированных рекомбинантным, несконструированным белком Prn, в отдельности или в комбинации, достигла значений, превышающих в 6 раз контроль PBS, хотя указанные различия не были существенными. Наконец, полученные результаты подтверждали, что сконструированные варианты Prn способны индуцировать антитела с существенной опсонофагоцитирующей активностью, независимо от типа Prn, присутствующего в бактерии.
Пример 4. Конструирование векторов для экспрессии в клетках млекопитающих сконструированных вариантов Prn и оценка полученного гуморального иммунного ответа
Гены prnA1 и prnA2, а также варианты генов prn2CCprn1 и prn2CLprn1 амплифицировали ПЦР из их соответствующих векторов экспрессии (см. таблицу 3) с использованием олигонуклеотидов 1 и 2, описанных ранее [Hijnen, M., P. G. van Gageldonk, et al. (2005), Protein Expr Purif 41(1): 106-12]. В данном случае олигонуклеотид 1 был модифицирован с заменой сайта рестрикции NdeI сайтом BamHI. Полученные фрагменты клонировали по сайтам рестрикции BamHI в плазмидный вектор pAEC-SPE3 [Herrera AM, Rodriguez EG, et al. (2000) BBRC, 279, 548-551]. Указанный вектор разработан для внеклеточной экспрессии антигенов в клетках млекопитающих. Полученные конструкции очищали с использованием коммерческого набора для очистки плазмидной ДНК Endo-free plasmid Giga (Qiagen). Группы 6-7-недельных самок мышей Balb/c иммунизировали трижды 100 мкг ДНК в 100 мкл PBS с трехнедельным интервалом, внутрибрюшинно. Контрольную группу иммунизировали пустым вектором без вставки (pAEC-SPE3). Через пятнадцать дней после последней иммунизации мышей умерщвляли и забирали кровь для анализа сывороток. Ответы с выработкой специфичных антител IgG оценивали методом ELISA в разведении 1/1000 на планшетах, покрытых эквимолярными количествами белков Prn1 (2 мкг/мл) и Prn2CCPrn1 (2,4 мкг/мл). Как показано на Фигуре 3, животные, иммунизированные различными плазмидами, экспрессирующими Prn1, Prn2, Prn2CCPrn1 и Prn2CLPrn1, вырабатывали специфичные антитела IgG со значительно более высоким уровнем (p<0,001), чем животные, иммунизированные пустым вектором pAEC-SPE3. Подобно сывороткам, полученным в мышах, иммунизированных белком и квасцами (данные не показаны), сыворотки иммунизированных мышей предпочтительно узнавали сконструированный вариант Prn Prn2CCPrn1 (p<0,05) в большей степени, чем природный белок Prn1, что могло быть обусловлено лучшей доступностью общих эпитопов в Prn2CCPrn1 по сравнению с Prn1.
Claims (12)
1. Полинуклеотидная последовательность, кодирующая сконструированный белок пертактин (Prn), где указанная полинуклеотидная последовательность кодирует 300 первых аминокислот, ближайших к N-концу данного типа природного, зрелого Prn (PrnX300), и аминокислотную последовательность, включающую 620 последних аминокислот, ближайших к С-концу данного типа природного, зрелого Prn (PrnY620), с получением сконструированного пертактина PrnX300-PrnY620 из рода Bordetella, и содержащая SEQ ID NO:1-6.
2. Полинуклеотидная последовательность по п.1, где указанные аминокислотные последовательности PrnX300 и PrnY620 включают последовательности Prn из рода B. pertussis.
3. Полинуклеотидная последовательность по п.2, где указанные аминокислотные последовательности PrnX300 и PrnY620 включают последовательности Prn из Prn1, Prn2 и Prn3 В. pertussis.
4. Полинуклеотидная последовательность по п.1, где указанная полинуклеотидная последовательность кодирует полипептид, включающий любую возможную комбинацию Prn любого типа в формате PrnX300-PrnY620.
5. Полинуклеотидная последовательность по п.1, где указанные аминокислотные последовательность PrnX300 и PrnY620 соединены непосредственно или через аминокислотные последовательности IDNATWVMTDN или IDNATWVMTDNIDNATWVMTDN.
6. Полинуклеотидная последовательность по п.5, где указанные аминокислотные последовательности PrnX300 и PrnY620 не содержат повторяющихся последовательностей, а более конкретно, не содержат повторяющихся последовательностей GGXXP и PQP из области R1 и R2 Prn.
7. Полинуклеотидная последовательность по п.1, оптимизированная по кодонам для оптимальной экспрессии в бактериях, дрожжах, клетках насекомых или млекопитающих.
8. Фармацевтическая композиция для генерации гуморального и клеточного иммунного ответа против бактерий В. pertussis, включающая один или более сконструированных вариантов Prn, где указанные варианты Prn кодируются полинуклеотидными последовательностями по п.1, вводимая согласно методике иммунизации млекопитающим и, предпочтительно, людям.
9. Живая или аттенуированная вакцина, обеспечивающая перекрестный иммунитет к В. pertussis, включающая один или более сконструированных Prn, где сконструированный Prn кодируется полинуклеотидными последовательностями по п.1.
10. Живая или аттенуированная вакцина по п.9, где указанные последовательности встроены в плазмидный вектор или бактериальную хромосому вектора экспрессии.
11. Вектор экспрессии в клетках млекопитающих, включающий одну или более полинуклеотидных последовательностей по п.1, где указанные последовательности кодируют сконструированные молекулы Prn.
12. Вакцина для генерации гуморального иммунного ответа против бактерий видов Bordetella pertusis, включающая вектор экспрессии по п.11 в количестве 0,1-100 микрограмм.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CU20070240A CU23679A1 (es) | 2007-10-30 | 2007-10-30 | Variantes de pertactinas para uso vacunal |
CU2007-0240 | 2007-10-30 | ||
PCT/CU2008/000009 WO2009056076A1 (es) | 2007-10-30 | 2008-10-17 | Variantes ingenierizadas de pertactina para uso vacunal |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2010121646A RU2010121646A (ru) | 2011-12-10 |
RU2499046C2 true RU2499046C2 (ru) | 2013-11-20 |
Family
ID=40473455
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2010121646/10A RU2499046C2 (ru) | 2007-10-30 | 2008-10-17 | Полинуклеотидная последовательность, кодирующая сконструированный белок пертактин, вектор, включающий такую последовательность, и вакцинные композиции, содержащие белок пертактина или вектор |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US8569470B2 (ru) |
EP (1) | EP2216045A1 (ru) |
KR (1) | KR20100093548A (ru) |
CN (1) | CN101878038B (ru) |
AR (1) | AR069086A1 (ru) |
BR (1) | BRPI0817898A2 (ru) |
CA (1) | CA2702697A1 (ru) |
CU (1) | CU23679A1 (ru) |
MX (1) | MX2010004706A (ru) |
RU (1) | RU2499046C2 (ru) |
WO (1) | WO2009056076A1 (ru) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005032584A2 (en) * | 2003-10-02 | 2005-04-14 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Pertussis antigens and use thereof in vaccination |
US6964767B2 (en) * | 2000-05-25 | 2005-11-15 | Institut Pasteur | Polypeptides containing polymorphisms of the repeated regions of pertactin in bordetella pertussis, bordetella parapertussis, and bordetella bronchiseptica, their use in diagnostics, and in immunogenic compositions |
UA40596U (ru) * | 2006-05-16 | 2009-04-27 | Институт Проблем Безопасности Атомных Электростанций Национальной Академии Наук Украины | Энергоблок атомной электростанции |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1174505A1 (en) | 2000-06-30 | 2002-01-23 | De Staat Der Nederlanden Vertegenwoordigd Door De Minister Van Welzijn, Volksgezondheid En Cultuur | (Poly)peptides for the preparation of vaccines against Bordetella pertussis and/or Bordetella parapertussis, vaccines based upon such (poly)peptides, and antibodies against such peptides |
-
2007
- 2007-10-30 CU CU20070240A patent/CU23679A1/es not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-10-17 MX MX2010004706A patent/MX2010004706A/es active IP Right Grant
- 2008-10-17 BR BRPI0817898 patent/BRPI0817898A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2008-10-17 US US12/739,658 patent/US8569470B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2008-10-17 RU RU2010121646/10A patent/RU2499046C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2008-10-17 CN CN2008801141194A patent/CN101878038B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2008-10-17 WO PCT/CU2008/000009 patent/WO2009056076A1/es active Application Filing
- 2008-10-17 EP EP08845509A patent/EP2216045A1/en not_active Withdrawn
- 2008-10-17 KR KR1020107011928A patent/KR20100093548A/ko not_active Application Discontinuation
- 2008-10-17 CA CA2702697A patent/CA2702697A1/en not_active Abandoned
- 2008-10-28 AR ARP080104709A patent/AR069086A1/es unknown
-
2013
- 2013-08-14 US US13/966,948 patent/US20140011216A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6964767B2 (en) * | 2000-05-25 | 2005-11-15 | Institut Pasteur | Polypeptides containing polymorphisms of the repeated regions of pertactin in bordetella pertussis, bordetella parapertussis, and bordetella bronchiseptica, their use in diagnostics, and in immunogenic compositions |
US7314910B2 (en) * | 2000-05-25 | 2008-01-01 | Institut Pasteur | Polypeptides containing polymorphisms of the repeated regions of pertactin in Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis, and Bordetella bronchiseptica, their use in diagnostics, and in immunogenic compositions |
WO2005032584A2 (en) * | 2003-10-02 | 2005-04-14 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Pertussis antigens and use thereof in vaccination |
UA40596U (ru) * | 2006-05-16 | 2009-04-27 | Институт Проблем Безопасности Атомных Электростанций Национальной Академии Наук Украины | Энергоблок атомной электростанции |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
BRPI0817898A2 (pt) | 2015-05-05 |
CN101878038A (zh) | 2010-11-03 |
AR069086A1 (es) | 2009-12-30 |
RU2010121646A (ru) | 2011-12-10 |
US8569470B2 (en) | 2013-10-29 |
WO2009056076A1 (es) | 2009-05-07 |
CN101878038B (zh) | 2013-11-06 |
US20110070265A1 (en) | 2011-03-24 |
CU23679A1 (es) | 2011-07-11 |
CA2702697A1 (en) | 2009-05-07 |
MX2010004706A (es) | 2010-05-27 |
EP2216045A1 (en) | 2010-08-11 |
US20140011216A1 (en) | 2014-01-09 |
KR20100093548A (ko) | 2010-08-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Dorji et al. | Bordetella pertussis virulence factors in the continuing evolution of whooping cough vaccines for improved performance | |
JP4276670B2 (ja) | 微生物蛋白質と、この蛋白質を産生する微生物と、該蛋白質のワクチンおよび結核検出での利用 | |
Scheller et al. | Bordetella filamentous hemagglutinin and fimbriae: critical adhesins with unrealized vaccine potential | |
Wu et al. | Protective immunity conferred by recombinant Pasteurella multocida lipoprotein E (PlpE) | |
JP2008022856A (ja) | 肺炎連鎖球菌由来の核酸及びタンパク質 | |
JP2007502101A (ja) | スタフィロコッカス・アウレウスに対して防御免疫応答を誘導するポリペプチド | |
JPH10504444A (ja) | モラクセラ・カタルハリス(Moraxella catarrhalis)に対するワクチン | |
Stefanelli et al. | Molecular characterization of two Bordetella bronchiseptica strains isolated from children with coughs | |
HU218154B (hu) | Streptococcus suis fertőzés elleni vakcina | |
US11744884B2 (en) | Live Salmonella typhi vectors engineered to express heterologous outer membrane protein antigens and methods of use thereof | |
Hotomi et al. | A recombinant P4 protein of Haemophilus influenzae induces specific immune responses biologically active against nasopharyngeal colonization in mice after intranasal immunization | |
Puangpetch et al. | Comparison of the protective effects of killed Burkholderia pseudomallei and CpG oligodeoxynucleotide against live challenge | |
US7201912B2 (en) | Recombinant immunogenic compositions and methods for protecting against lethal infections from Bacillus anthracis | |
Stefanelli et al. | A natural pertactin deficient strain of Bordetella pertussis shows improved entry in human monocyte-derived dendritic cells. | |
Lo et al. | Characterization of two lipoproteins in Pasteurella multocida | |
JPH10290695A (ja) | アクチノバシラス・プレウロニューモニアの弱毒化生菌 | |
RU2499046C2 (ru) | Полинуклеотидная последовательность, кодирующая сконструированный белок пертактин, вектор, включающий такую последовательность, и вакцинные композиции, содержащие белок пертактина или вектор | |
JPH10510984A (ja) | 無細胞性抗ボルデテラワクチン | |
JP6401148B2 (ja) | 抗原および抗原の組み合わせ | |
Tatum et al. | Protection against fowl cholera conferred by vaccination with recombinant Pasteurella multocida filamentous hemagglutinin peptides | |
EP1518558B1 (en) | Vaccine against infection with Actinobacillus pleuropneumoniae comprising purified ApxIV toxin | |
Zhang et al. | Two Bordetella bronchiseptica attenuated vaccine candidates confer protection against lethal challenge with B. Bronchiseptica and Pasteurella multocida toxin in mouse models | |
WO1998046260A1 (en) | Pasteurella haemolytica vaccine | |
Guiso | Bordetella pertussis | |
Wang et al. | TLR4 agonist combined with trivalent protein JointS of Streptococcus suis provides immunological protection in animals. Vaccines (Basel). 2021; 9 (2): 184 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20151018 |