RU2490648C2 - Применение гликозаминогликанов для снижения неспецифического связывания в иммунологических анализах - Google Patents

Применение гликозаминогликанов для снижения неспецифического связывания в иммунологических анализах Download PDF

Info

Publication number
RU2490648C2
RU2490648C2 RU2008135060/15A RU2008135060A RU2490648C2 RU 2490648 C2 RU2490648 C2 RU 2490648C2 RU 2008135060/15 A RU2008135060/15 A RU 2008135060/15A RU 2008135060 A RU2008135060 A RU 2008135060A RU 2490648 C2 RU2490648 C2 RU 2490648C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
sample
troponin
analyte
chondroitin sulfate
binding
Prior art date
Application number
RU2008135060/15A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2008135060A (ru
Inventor
Бануматхи САНКАРАН
Шерил С. САЛЛИВАН
Даррелл С. ХЕЙНС
Филип С. ХОСИМЕР
Грэхам ЙЕАРВУД
Original Assignee
Орто-Клиникал Дайэгностикс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=39967577&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RU2490648(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Орто-Клиникал Дайэгностикс, Инк. filed Critical Орто-Клиникал Дайэгностикс, Инк.
Publication of RU2008135060A publication Critical patent/RU2008135060A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2490648C2 publication Critical patent/RU2490648C2/ru

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6887—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids from muscle, cartilage or connective tissue
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Abstract

Изобретение представляет собой реагент иммунологического анализа, который включает связывающийся с анализируемым веществом агент в разбавителе и гликозаминогликан в количестве, достаточном для снижения неспецифического связывания в анализе пробы на анализируемое вещество. В предложенном реагенте иммунологического анализа анализируемое вещество является тропонином I, связывающимся с анализируемым веществом агентом является биотинилированное антитропонин I антитело, а гликозаминогликаном является хондроитинсульфат. Также изобретение представляет собой композицию, содержащую связывающийся с тропонином I агент и хондроитинсульфат в количестве, достаточном для снижения неспецифического связывания в анализе пробы на тропонин I. Также предлагается способ обнаружения анализируемого вещества в пробе, в которой неспецифическое связывание уменьшено путем использования гликозаминогликана. 3 н. и 9 з.п. ф-лы, 5 ил., 5 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к иммунологическим анализам, и, в частности, к использованию гликозаминогликанов с целью уменьшения неспецифического связывания в иммунологических анализах.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Биохимические анализы связывания широко используются для определения присутствия и концентрации анализируемых веществ в биологических образцах. Такие анализы основаны на концепции партнеров связывания. Интересующее анализируемое вещество связывается со связывающимся с анализируемым веществом агентом (таким как, например, антитело к анализируемому веществу или рецептор для анализируемого вещества). Таким образом, анализируемое вещество и связывающийся с анализируемым веществом агент называют "партнерами связывания". Когда один из партнеров связывания связан с твердой фазой, анализ называют гетерогенным. Такие гетерогенные анализы включают, например, сэндвич-метод, косвенный метод и конкурентный метод. Все эти термины используются в данной области техники.
Чувствительность анализа обычно означает наименьшую массу анализируемого вещества, которая обеспечивает статистически значительное изменение в сигнале, генерируемом анализом, по сравнению с сигналом, полученным при отсутствии анализируемого вещества. Увеличение чувствительности является желательным, поскольку это позволяет обнаружить меньшие количества анализируемого вещества, а также обеспечивает более высокую общую точность измерения анализируемого вещества.
Неспецифическое связывание означает неспецифическое взаимодействие партнеров связывания в гетерогенной системе анализа с твердой фазой. Неспецифическое связывание часто снижает чувствительность гетерогенных анализов, и поэтому желательно уменьшить такое неспецифическое связывание.
Известно много способов, используемых для этой цели. Например, белки, такие как бычий сывороточный альбумин (BSA), желатин и казеин, добавляют к реагентам анализа или предварительно адсорбируют на твердой фазе, чтобы заблокировать неспецифические участки адсорбции. Кроме того, в литературе описано применение различных поверхностно-активных веществ, часто - в высоких концентрациях.
Хотя эти способы могут помочь в некотором снижении неспецифической адсорбции, многие из них связаны с влиянием на желаемое специфическое взаимодействие партнеров связывания. Эти методы могут также привести к замещению комплекса, образующегося между партнерами связывания. Кроме того, несмотря на использование высоких концентраций белка и поверхностно-активного вещества, во многих гетерогенных анализах наблюдается значительное количество неспецифического связывания. Таким образом, существует потребность в альтернативных методах снижения неспецифического связывания в гетерогенных анализах.
Это особенно верно в случае анализов для определения сердечного тропонина I, где обнаруживаемые уровни анализируемого вещества являются очень малыми, и увеличенная чувствительность необходима для получения точных и полезных результатов анализа. Определение сердечного тропонина I помогает в точном диагностировании острого инфаркта миокарда и стратификации риска пациентов с острыми коронарными синдромами без повышения в сегменте ST в плане относительного риска смертности, инфаркта миокарда или увеличенной вероятности ишемических событий, требующих проведения срочных процедур реваскуляризации.
Тропонин I (TnI) является белком, обычно содержащимся в мышечной ткани, и вместе с Тропонином Т и Тропонином С регулирует кальций-зависимое взаимодействие актина и миозина (Tobacman, Annu Rev Physiol 58:447-481, 1996). Были идентифицированы три изотипа TnI: один - связанный с быстрым подергиванием скелетной мускулатуры, другой - с медленным подергиванием скелетной мускулатуры, и третий - с сердечной мышцей (Wilkinson and Grand, Nature 271:31-35, 1978; Bodor, J Clin Immunoassay 17(l):40-44, 1994). Сердечная форма имеет 31 дополнительный аминокислотный остаток на N-конце и является единственной изоформой тропонина, присутствующей в миокарде (Vallins et al., FEBS Letts 270(1,2):57-61, 1990).
Клинические исследования продемонстрировали, что сердечный тропонин I (cTnI) обнаруживается в кровотоке спустя 4-6 часов после острого инфаркта миокарда (AMI) и остается повышенным в течение нескольких дней после того (Mair et al., Clin Chem 41(9):1266-1272, 1995; Lame et al., Clin Chem 39(6):972-979, 1993). Таким образом, повышение уровня cTnI охватывает диагностические окна креатинкиназы-МВ (СК-МВ) и лактатдегидрогеназы (Bodor, J Clin Immunoassay 17(l):40-44, 1994). Дальнейшие исследования указали, что cTnI обладает более высокой клинической специфичностью к повреждению миокарда, чем СК-МВ (Adams et al., Circulation 88(1): 101-106, 1993; Apple et al., Clin Chim Acta 237:59-66, 1995).
Ввиду его сердечной специфичности и чувствительности TnI используется как надежный маркер при оценке пациентов с нестабильной стенокардией и острым коронарным синдромом без повышения сегмента ST (ACS). Предыдущие клинические исследования пациентов с ACS (Lindahl et al., J Am Coll Cardiol 38:1497-1498, 2001; Venge et al., Am J Cardiol 89:1035-1041, 2002) показали, что незначительное повышение значений cTnI предоставляет важную прогностическую информацию о близком и долгосрочном риске смерти (Galvani et al., Circulation 95:2053-2059, 1997; Antman et al., N Eng J Med 335:1342-1349, 1996; Ottani et al., Am Heart J 40:917-927, 2000; Heidenreich et al., J Am Coll Cardiol 38:478-485, 2001). В конечном счете, оценка прогноза может быть полезной для идентификации пациентов, для которых, наиболее вероятно, будут полезны те или иные терапевтические вмешательства.
Таким образом, желательно получить реагенты и способы для уменьшения неспецифического связывания в гетерогенных анализах на cTnI, a значит и повышения чувствительности анализов на cTnI.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Для указанной цели изобретение предлагает реагент иммунологического анализа, включающий связывающийся с анализируемым веществом агент в разбавителе и гликозаминогликан в количестве, достаточном для снижения неспецифического связывания в анализе пробы анализируемого вещества.
В одном предпочтительном в настоящее время варианте осуществления анализируемым веществом является тропонин, связывающимся с анализируемым веществом агентом - антитропонин I моноклональное антитело, а гликозаминогликаном - хондроитинсульфат.
Также предоставляется композиция пробы, которая включает пробу для анализа на присутствие анализируемого вещества, связывающийся с анализируемым веществом агент и гликозаминогликан, отличный от гепарина, в количестве, достаточном для снижения неспецифического связывания в анализе пробы на анализируемое вещество.
В одном предпочтительном в настоящее время варианте осуществления пробой является сыворотка или плазма EDTA, анализируемым веществом - тропонин, связывающимся с анализируемым веществом агентом - антитропонин I моноклональное антитело, а гликозаминогликаном - хондроитинсульфат.
Также предлагаются способы обнаружения анализируемого вещества в пробе с использованием гликозаминогликана для снижения неспецифического связывания в способе. Способ включает объединение пробы, анализируемой на присутствие анализируемого вещества, с гликозаминогликаном и связывающимся с анализируемым веществом агентом для образования комплекса между анализируемым веществом в образце и связывающимся с анализируемым веществом агентом, причем гликозаминогликан снижает неспецифическое связывание в способе и обнаружение получающегося комплекса для определения анализируемого вещества. В данном способе предпочтительным анализируемым веществом является тропонин, более предпочтительно - тропонин I, a предпочтительным гликозаминогликаном является хондроитинсульфат.
Дополнительные особенности и преимущества данного изобретения станут понятны из последующего описания, которое следует рассматривать в связи с прилагаемыми чертежами.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На Фиг. 1 показаны результаты анализа TropI, когда различные сахара вводили в пробы TropI с неправильными результатами;
На Фиг. 2 показаны результаты анализа TropI, когда реагент BJ был подготовлен с хондроитинсульфатом в количестве 0, 1,2 и 4 мг/мл в присутствии или отсутствии EDTA;
На Фиг. 3 показаны результаты анализа TropI с добавлением 0,5 мг/мл CSC в реагент BJ и без такого добавления;
На Фиг. 4 показаны результаты анализа TropI, когда реактив BJ был приготовлен с различными изомерами хондроитинсульфата по сравнению с Kit Lot (без хондроитинсульфата); и
На Фиг. 5 показаны принципы анализа на сердечный тропонин I.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение предлагает реагент иммунологического анализа, который включает связывающийся с анализируемым веществом агент в разбавителе и гликозаминогликан в количестве, достаточном для снижения неспецифического связывания в анализе пробы на анализируемое вещество.
Как обсуждено выше, часто желательно определить присутствие и концентрацию анализируемых веществ в биологических образцах. Анализируемое вещество представляет собой вещество или химический компонент, который определяют в ходе аналитической процедуры (такой как иммунологический анализ). Иммунологические анализы основаны на концепции партнеров связывания. Представляющее интерес анализируемое вещество связывается со связывающимся с анализируемым веществом агентом (таким как, например, антитело к анализируемому веществу или рецептор для анализируемого вещества). Таким образом, анализируемое вещество и связывающийся с анализируемым веществом агент называют "партнерами связывания".
Во многих иммунологических анализах связывающимся с анализируемым веществом агентом является антитело. Такие антитела часто предоставляются в разбавителе, таком как калийфосфатный буфер. Антитело может быть из любого класса иммуноглобулинов, включая, например, IgG или IgM. Антитело может быть моноклональным антителом или поликлональным антителом. В сэндчич-иммуноанализе анализируемое вещество может быть захвачено антителом или антителами, иммобилизованными на твердой фазе. Такая иммобилизация может быть обеспечена с применением способов, известных из уровня техники, включая использование покрытой стрептавидином (SAC) твердой фазы, с которой связаны биотин-меченое антитело или антитела. Представляющее интерес анализируемое вещество, присутствующее в пробе, связывается с иммобилизованным антителом захвата или антителами, а затем меченное антитело или антитела, в свою очередь, связываются с захваченным анализируемым веществом. Метка может быть любой, известной из уровня техники, включая, например, пероксидазу хрена и щелочную фосфатазу. Детектируемый сигнал свидетельствует о количестве анализируемого вещества, присутствующего в образце. Метод обнаружения будет зависеть от типа выбранной метки, как известно из уровня техники, и может включать колориметрический, флуорометрический или хемилюминесцентный методы.
Предпочтительным в настоящее время гликозаминогликаном (GAG) является хондроитинсульфат, хотя также могут использоваться другие GAG. Другие GAG включают гиалуронат (также называемый гиалуроновой кислотой), гепарансульфат, гепарин, дерматансульфат и кератансульфат. Хондроитинсульфатом может быть хондроитинсульфат А, хондроитинсульфат В (также называемый дерматансульфат), хондроитинсульфат С или их смесь.
Гликозаминогликаны (GAG) или мукополисахариды являются длинными неразветвленными полисахаридами, содержащими повторившийся дисахаридный мотив. Дисахаридные мотивы содержат один или два модифицированных сахара, N-ацетилгалактозамин (GalNAc) или N-ацетилглюкозамин (GlcNAc) и уроновую кислоту, такую как глюкуронат или идуронат. Гиалуронаты состоят из D-глюкуроната и GlcNAc. Дерматансульфаты состоят из D-глюкуроновой кислоты (GlcA) или L-идуроната (IdoA) и GalNAc-сульфата. Гетерогенность в дерматансульфате является результатом различных степеней О-сульфатации и присутствия двух уроновых кислот. Хондроитинсульфаты состоят из D-глюкуроната и GalNAc-6 (или 4)-сульфата. Гепарин и гепарансульфаты состоят из D-глюкуронат-2-сульфата и N-сульфо-В-глюкозамин-6-сульфата (гепараны содержат меньше сульфата, чем гепарины). Кератансульфаты состоят из галактозы и галактоза-6-сульфата и GlcNAc-6-сульфата.
Хондроитинсульфат (CS) является сульфатированным гликозаминогликаном (GAG). В цепи хондроитина может быть более чем 100 отдельных сахаров, каждый из которых может быть сульфатирован в различных положениях и количествах. Хондроитинсульфат А означает CS преимущественно сульфатированный по углероду 4 сахара GalNAc (хондроитин-4-сульфат). Хондроитинсульфат В называют дерматансульфатом. Хондроитинсульфат С означает CS, преимущественно сульфатированный по углероду 6 сахара GalNAc (хондроитин-6-сульфат). Хондроитинсульфат D означает CS, преимущественно сульфатированный по углероду 2 GlcA и 6 сахара GalNAc (хондроитин-4,6-сульфат).
Гликозаминогликан обеспечивается в количестве, достаточном для снижения неспецифического связывания в анализе пробы на анализируемое вещество. Если GAG является хондроитинсульфатом, это количество предпочтительно составляет от приблизительно 0,25 мг/мл до приблизительно 4 мг/мл (эквивалентно от приблизительно 0,025% до приблизительно 0,4%). В одном конкретном варианте осуществления хондроитинсульфат присутствует в количестве 1 мг/мл (эквивалентно 0,1%). Следующие примеры подробно иллюстрируют выбор подходящего количества GAG для использования в соответствии с данным изобретением.
Анализируемая на присутствие анализируемого вещества проба может быть любой подходящей пробой, предпочтительно пробой крови, такой как проба сыворотки или плазмы. Плазма крови - жидкий компонент крови, в которой суспендированы клетки крови. Центрифугирование представляет собой простой способ отделения плазмы от клеток крови в пробе крови. Сыворотка представляет собой плазму крови, из которой факторы свертывающей системы крови были удалены естественным путем, позволяя крови свернуться до выделения жидкого компонента. Пробы плазмы получают из пробирок с кровью, которые содержат антикоагулянты, такие как гепарин натрия, цитрат натрия, фторид натрия и оксалат калия или калий EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота). В случае пробы плазмы согласно данному изобретению плазму предпочтительно получают, используя антикоагулянт, отличный от гепарина.
В одном варианте осуществления реагент иммунологического анализа согласно данному изобретению содержит моноклональное антитело, специфическое к сердечному тропонину I в разбавителе и 0,1% хондроитинсульфата. Подходящие антитела к сердечному тропонину I известны из уровня техники, и конкретные пары или сочетания антител часто рекомендуют как партнеры для анализа. В частности, могут использоваться моноклональные антитела, обозначаемые 19С7 и 24-40 как двойные антитела захвата, меченые биотином, для присоединения к покрытой стрептавидином лунке, и антитело 16А11, в качестве антитела обнаружения, меченное пероксидазой хрена. Эти антитела коммерчески доступны (см. упомянутые ниже источники) и обсуждаются в литературе в связи с анализами на сердечный тропонин I, а процедуры биотинилирования и мечения также известны из уровня техники.
Приведенное выше описание относится к реагенту иммунологического анализа, который включает гликозаминогликан в количестве, достаточном для снижения неспецифического связывания. GAG может присутствовать в разбавителе, содержащем антитело. Альтернативно, GAG может быть добавлен к композиции пробы, в которую затем добавляют связывающийся с анализируемым веществом агент. Порядок составления может меняться, но GAG должен добавляться до наступления неспецифического связывания любого анализируемого вещества, присутствующего в пробе, со связывающимся с анализируемым веществом агентом.
Таким образом, также предоставляется композиция пробы, которая включает пробу для анализа на присутствие анализируемого вещества, связывающийся с анализируемым веществом агент и гликозаминогликан, отличный от гепарина, в количестве, достаточном для снижения неспецифического связывания в анализе пробы на анализируемое вещество.
В одном предпочтительном в настоящее время варианте осуществления пробой является сыворотка или плазма EDTA, анализируемым веществом - тропонин, связывающимся с анализируемым веществом агентом - антитропонин I моноклональное антитело, а гликозаминогликаном - хондроитинсульфат.
Также предлагается способ обнаружения анализируемого вещества в пробе, включающий: объединение анализируемой на присутствие анализируемого вещества пробы с гликозаминогликаном и связывающимся с анализируемым веществом агентом для образования комплекса между анализируемым веществом, присутствующим в пробе, и связывающимся с анализируемым веществом агентом, причем гликозаминогликан снижает неспецифическое связывание в способе; и обнаружение получающегося комплекса для определения анализируемого вещества. В одном варианте осуществления пробу объединяют с гликозаминогликаном и полученную пробу затем объединяют со связывающимся с анализируемым веществом агентом. В другом варианте осуществления пробу объединяют со связывающимся с анализируемым веществом агентом, и полученную пробу затем объединяют с гликозаминогликаном. В еще одном варианте осуществления связывающийся с анализируемым веществом агент получен как реагент иммунологического анализа, включающий связывающийся с анализируемым веществом агент в разбавителе и гликозаминогликан, и реагент иммунологического анализа объединяют с образцом. В каждом из этих способов предпочтительное анализируемое вещество - тропонин, более предпочтительно - тропонин I, а предпочтительным гликозаминогликаном является хондроитинсульфат.
В композиции пробы и способах согласно данному изобретению различные подходящие связывающиеся с анализируемым веществом агенты, разбавитель, гликозаминогликаны, пробы и анализируемые вещества являются такими, как описано выше в связи с реагентами для иммунологических анализов.
Реагенты, композиции и способы данного изобретения особенно полезны в иммунологическом анализе на сердечный тропонин I. Подробности данного варианта осуществления приведены в следующих примерах.
Пример I. Влияние добавления гепарина к реагентам захвата (BJ) и обнаружения (CJ) сердечного тропонина I (cTnI или TropI) в анализе
Цель этого эксперимента состояла в том, чтобы определить, обеспечивает ли добавление гепарина к реагентам TropI BJ и/или CJ уменьшение ложных положительных результатов TropI. Были получены многочисленные отчеты о воспроизводимых ложных результатах повышенного Тропонина I в пробах сыворотки. Также было получено несколько отчетов о ложно повышенном уровне TropI в плазме EDTA. В некоторых случаях соответствующие пробы плазмы с гепарином, взятые у тех же пациентов, не давали ложных результатов повышенного уровня TropI.
Эксперимент включал введение гепарина в реагенты BJ и CJ и анализ с применением этих реагентов проб TropI, которые ранее давали ложные положительные результаты TropI.
Результаты показывают, что при введении гепарина в TropI CJ и немедленном проведении анализа наблюдается сильное ослабление полученного сигнала. При всего лишь 10 единицах на мл CJ полученный сигнал Cal 2 (калибрация 2) оказался менее 50% от номинального. Уровни гепарина в плазме, напротив, составляют обычно 25-50 единиц/мл. Для обеспечения эквивалентной концентрации гепарина, обеспечиваемой реагентом CJ, потребовалось бы присутствие гепарина на уровне 50-100 единиц/мл. На основании этих откликов не представляется возможным добавление гепарина к CJ при уровнях, которые были бы эквивалентными гепаринизированной плазме.
Группу проб сыворотки, которые ранее давали ложноположительные результаты на TropI, проверили с использованием раствора CJ, содержащего 10 единиц гепарина на мл. Эти дававшие ложные результаты пробы продемонстрировали значительное снижение в определяемой концентрации cTnI (сердечного тропонина I). Результаты были в диапазоне 8-35% для проб, которые без обработки показывали концентрации cTnI 0,7-7,0 нг/мл. Однако ни один из этих образцов не удалось полностью скорректировать до уровня ниже Верхнего справочного предела (URL) для сыворотки.
Результаты этого эксперимента приводят к выводу о том, что добавление гепарина к композиции CJ приводит к значительному снижению общей способности реагентов генерировать сигнал. При концентрациях гепарина 10 единиц на мл сигнал составлял всего лишь 50% от номинального. Однако дававшие ложные результаты пробы пациентов были частично скорректированы путем добавления указанного количества гепарина к CJ. Тем не менее, более полное исправление указанного влияния потребовало бы более высоких уровней гепарина, которые, вероятно, снизили бы сигнал анализа до уровней, несовместимых с принципами анализа.
Пример II. Влияние сахаров как факторов корректировки пробы в реагенте BJ
Цель данного эксперимента состояла в том, чтобы оценить способность сахаров, таких как сахаров, присутствующих в гликозаминогликанах и обычно связанных с боковыми цепочками углевода пероксидазы хрена (HRP), снижать влияние в ложноположительных пробах TropI при добавлении к реагентам BJ.
Как описано в Примере I, добавление гепарина к ложноположительным пробам уменьшило ложные положительные результаты. Гепарин входит в гетерогенную группу анионных мукополисахаридов с неразветвленной цепочкой, называемых гликозаминогликанами (GAG), которые обладают антикоагулянтными свойствами. Хотя могут присутствовать и другие сахара, основными сахарами в гепарине являются: α-L-идуроновой кислоты 2-сульфат; 2-деокси-2-сульфамино-α-D-глюкозы 6-сульфат; β-D-глюкуроновая кислота; 2-ацетамидо-2-деокси-α-D-глюкоза; и α-L-идуроновая кислота.
В качестве первоначального изучения возможных факторов корректировки пробы в ложноположительные пробы на TropI вводили указанные ниже сахара (для достижения конечной концентрации 2 мг/мл тестируемого вещества), чтобы оценить эффективность блокирования ложных положительных реакций: N-ацетил-глюкозамин (Sigma A8625); N-ацетил-галактозамин (Sigma A2795); глюкозамин (Sigma G4875); N-ацетилнейраминовая кислота (NANA, сиаловая кислота)(Sigma A0812); хондроитинсульфат С (Sigma C4384); хитин (гомополимер N-ацетил-глюкозамина) (Sigma C9752); муцин (полимер NANA)(Sigma M3895); и манноза (Sigma M8296). В этом первоначальном исследовании было обнаружено, что хондроитинсульфат С (CSC) значительно уменьшает ложные положительные результаты (см. Фиг. 1). Полученные результаты TropI были в целом подавлены до уровня ниже URL в ложноположительных пробах, кроме одной. Мы считаем, что эта последняя проба положительна на гетерофильные антитела.
На основании этих первоначальных отборочных исследований были проведены дополнительные эксперименты, в которых хондроитинсульфат С (CSC) добавляли непосредственно к реагенту BJ в серии увеличивающихся уровней (0,25, 0,5, 1, 2, 3 и 4 мг/мл), с и без EDTA (5,58 мг/мл) в реагенте BJ (см. Фиг. 2 и 3). Эффективность композиций была основана на блокировании ложноположительных проб TropI в сочетании с оценкой изменения в откликах справочного калибратора. Самая низкая концентрация CSC, которая эффективно подавляла ложноположительные пробы TropI, составляла 0,25 мг/мл; при немного более высоких уровнях CSC (0,5 мг/мл) наблюдалось некоторое возрастающее улучшение блокирования. Эффект, связанный с присутствием или отсутствием EDTA с дополнительными добавками реагентов, не был значительным.
Добавление CSC в количестве 0,25-0,5 мг/мл к композиции BJ оказывало небольшое, но заметное влияние на отрицательные или положительные контрольные пробы сыворотки. Кроме того, отклики справочного калибратора демонстрировали небольшое изменение при низких уровнях CSC. При уровнях CSC свыше 1 мг/мл обычно наблюдали 10-30% уменьшение откликов.
Результаты данного эксперимента приводят к выводу о том, что хондроитинсульфат С является эффективным блокирующим агентом, снижающим неспецифические фоновые реакции (неспецифическое связывание), которые демонстрируют некоторые образцы сыворотки и плазмы EDTA. В то время как самый низкий протестированный уровень (0,25 мг/мл) продемонстрировал значительные снижения наблюдаемых ложноположительных реакций, несколько более высокие уровни (0,5 мг/мл) могут обеспечить дополнительные защитные меры для образцов, которые могут содержать более высокие уровни влияющих веществ. Уровень EDTA в присутствии CSC не оказывал значительного влияния на ложноположительные пробы.
Добавление CSC к реагенту BJ оказывало минимальное вредное влияние на общую зависимость между дозой и откликом при использовании справочных калибраторов Tropl. По данным всех восьми калибраторов изменения, вызванные концентрациями CSC до 1 мг/мл, были в целом меньше 10%. Поэтому добавление CSC к композиции BJ в концентрациях 0,25-0,50 мг/мл, как можно ожидать, будет иметь малое влияние на справочную калибровку или вообще не будет оказывать такого влияния.
Пример III. Ложноположительные образцы с 0,05% CSC в BJ
Цель данного эксперимента состояла в том, чтобы проверить ложноположительные пробы, используя 0,5 мг/мл (0,05%) CSC в BJ. Ложноположительные образцы давали положительные результаты без добавления CSC и отрицательные при добавлении 0,05% CSC к биотиновому разбавителю. Добавление 0,05% CSC не оказывало влияния на предсказание положительного или отрицательного результата пробы. Эти результаты показаны на Фиг. 3.
Пример IV. Сравнительные показатели хондроитина А, В и С
Цель этого эксперимента состояла в том, чтобы определить, может ли какой-либо изомер хондроитинсульфата обеспечить защиту от получения ложных результатов пробы. Хондроитинсульфат С, который использовался в вышеупомянутых экспериментах, представлял собой смесь хондроитинсульфата С и некоторого количества хондроитинсульфата А. Наименьшее количество хондроитинсульфата С в смеси составляло 85%. Поскольку может присутствовать до 15% изомера А, на эффективность были протестированы изомеры А, В и С.
Полученные результаты показали, что все изомеры хондроитинсульфата успешно снижали наблюдаемые концентрации в ложноположительных пробах, и не наблюдалось значительного различия между изомерами в отношении подавления ложноположительных реакций (см. Фиг. 4). Это приводит к выводу о том, что процентная чистота хондроитинсульфата в связи с концентрациями изомеров А и В не влияет на подавление ложноположительных откликов.
Пример V. Проба на сердечный тропонин I
Использовали метод иммунометрического иммунологического анализа (см. Фиг. 5), включающий одновременную реакцию сердечного тропонина I, присутствующего в пробе, с биотинилированными антителами (мышиное моноклональное анти-cTnI: клон 19С7, узнающий аминокислоты 41-49 Тропонина I, и второй клон, специфичный к участку Тропонина I, включающему аминокислоты 24-40) и конъюгатом антитела, меченным пероксидазой хрена (HRP) (мышиное моноклональное анти-cTnI: клон 16А11, узнающий аминокислоты 87-91 Тропонина I). Биотинилированные тропониновые Mab специфично реагируют с тропонином I в пробе с образованием комплекса, связывающимся со стрептавидином лунки SAC. Несвязанные материалы удаляют путем промывания, и комплекс тропонина обнаруживают, используя HRP меченый Mab (который специфично связывается с эпитопом тропонина I, отличающимся от эпитопа, с которым связываются биотинилированные Mab). Связанный конъюгат HRP измеряется люминесцентной реакцией. Реагент, содержащий люминогенные субстраты (производную люминола и соль перкислоты) и агент переноса электронов, добавляют в лунки. HRP в связанных конъюгатах катализирует окисление производной люминола, производя свет. Агент переноса электронов (замещенный ацетанилид) увеличивает уровень произведенного света и продлевает его излучение. Световые сигналы считываются иммунодиагностической системой VITROS™ (Ortho-Clinical Diagnostics, Inc., Раритан, Нью-Джерси). Количество связанного HRP конъюгата прямопропорционально концентрации присутствующего cTnI.
Протокол анализа был таким: 1) в лунку SAC добавляли 80 мкл пробы, 35 мкл биотинового реагента (BJ) и 35 мкл реагента конъюгата (CJ); 2) Инкубирование в течение 10 минут 40 секунд; 3) Промывка ячейки SAC; 4) Добавление 200 мкл реагента сигнала и измерение излучаемого света.
Лунки SAC готовили путем покрытия полистироловых лунок стрептавидином. Вкратце, полистироловые лунки вначале облучали 3,5 Мрад для оптимизации адсорбции белков. Биотинилированный бычий сывороточный альбумин (B-BSA), полученный путем химического соединения биотина с BSA, используя коммерчески доступный активизированный сложный эфир (биотин-ХХ-NHS, Calbiochem, Ноттингем, Великобритания), наносили на полистироловые лунки. Покрытие наносили путем инкубирования лунок с раствором B-BSA в течение 10 минут. B-BSA физически адсорбировался и не связывался ковалентно с поверхностью полистирола. Лунки промывали перед нанесением покрытия из стрептавидина. Стрептавидин наносили на лунки путем инкубирования стрептавидинового раствора с покрытой биотином поверхностью в течение 50 минут. Взаимодействие между стрептавидином и биотином является нековалентным, но очень прочным (1015 л/моль). Лунки промывали еще раз, а затем сушили и хранили.
Стрептавидин имеет четыре участка связывания с биотином, поэтому после иммобилизации стрептавидина на поверхности имеются свободные участки связывания с биотином. Эти участки связывания могут реагировать с биотинилированными компонентами анализа.
Реагент конъюгата (CJ) включает следующие компоненты:
Компонент Количество г/л
Компонент Количество г/л
Вода 849,3
К2НРО4 13
КН2РО4 17
Kathon 20
BSA 30% 100
HRP-меченый mab 16A11 клон 4 мг/л
рН 6,6
Реагент анализа или захвата (BJ) включает следующие компоненты:
Компонент Количество г/л
Вода  
К2НРО4 13
КН2РО4 17
Kathon 20
Бычий сывороточный альбумин 30% 100
EDTA (эквимолекулярный двунатриевый и тринатриевый) 15 мМ
Хондроитинсульфат С 1
Биотинилированный mab 24-40aa специфический клон 5,5 мг/л
Биотинилированный mab 19C7 клон 3 мг/л
рН 6,6
Моноклопальные антитела доступны коммерчески. HyTest, Ltd (Itainen Pitkakatu 4C, Pharma City, Торку, Финляндия 20520) является поставщиком клона 19С7 мышиного моноклонального антитела, специфического к области тропонина I, включающей аминокислоты 41-49. Это Mab биотинилировано, как описано ниже. HyTest также поставляет клон 16А11 мышиного моноклонального антитела, специфического к области тропонина I, включающей аминокислоты 87-91. Это Mab метят HRP, как описано ниже. Strategic BioSolutions (111 Pencader Dr., Newark, Делавэр, США 19702) поставляет клон мышиного моноклонального антитела, специфического к области тропонина I, включающей аминокислоты 24-40. Это Маb биотинилировано, как описано ниже.
Процедура биотинилирования включает следующее. Клон 19С7 и направленный клон Strategic BioSolutions 24-40 конъюгируют с биотином по отдельности посредством хорошо известной область-специфической химии.
Процедура мечения HRP включает следующее. Клон 16А11 от HyTest конъюгируют с HRP с использованием следующей методики: 1) Mab активируют малеимидными группами путем проведения реакции с сульфо-SMCC [сульфосукцинимидил 4-(М-малеимидометил) циклогексан-1-карбоксилат]; 2) HRP активируют тиольными группами путем проведения реакции с NHS-SATA [N-гидроксисукцинимида s-ацетилтиоуксусной кислоты]; З) Оба активированных реагента очищают, а затем проводят их реакцию с образованием 16А11-HRP, который затем очищают.
Хотя здесь описаны конкретные варианты осуществления изобретения, следует понимать, что изобретение не ограничено ими, и специалист в данной области техники может внести различные изменения, в частности, в свете приведенного описания. В приведенное описание можно внести разумные изменения и модификации, не выходя за рамки изобретения.

Claims (12)

1. Реагент иммунологического анализа, включающий
связывающийся с тропонином I агент в разбавителе и хондроитинсульфат в количестве, достаточном для снижения неспецифического связывания в анализе пробы на тропонин I.
2. Реагент иммунологического анализа по п.1, отличающийся тем, что хондроитинсульфат присутствует в количестве от приблизительно 0,25 мг/мл до приблизительно 4 мг/мл.
3. Реагент иммунологического анализа по п.1, отличающийся тем, что хондроитинсульфат присутствует в количестве приблизительно 1 мг/мл.
4. Реагент иммунологического анализа по п.1, отличающийся тем, что связывающийся с тропонином I агент представляет собой антитело.
5. Композиция пробы для иммунологического анализа, включающая
пробу, анализируемую на присутствие тропонина I; связывающийся с тропонином I агент; хондроитинсульфат в количестве, достаточном для снижения неспецифического связывания в анализе пробы на тропонин I.
6. Композиция пробы по п.5, отличающаяся тем, что проба представляет собой пробу сыворотки.
7. Композиция пробы по п.5, отличающаяся тем, что проба представляет собой пробу плазмы, содержащую этилендиаминтетрауксусную кислоту.
8. Композиция пробы по п.5, отличающаяся тем, что связывающийся с тропонином I агент представляет собой антитело.
9. Способ обнаружения тропонина I в пробе, включающий объединение анализируемой на присутствие тропонина I пробы с хондроитинсульфатом и связывающимся с тропонином I агентом для образования комплекса между тропонином I, присутствующим в пробе, и связывающимся с тропонином I агентом, причем хондроитинсульфат снижает неспецифическое связывание в способе; и обнаружение полученного комплекса для определения тропонина I.
10. Способ п.9, отличающийся тем, что пробу объединяют с хондроитинсульфатом и полученную пробу затем объединяют со связывающимся с тропонином I агентом.
11. Способ по п.9, отличающийся тем, что пробу объединяют со связывающимся с тропонином I агентом и полученную пробу затем объединяют с хондроитинсульфатом.
12. Способ по п.9, отличающийся тем, что связывающийся с тропонином I агент получен как реагент иммунологического анализа, включающий связывающийся с тропонином I агент в разбавителе и хондроитинсульфат, и тем, что реагент иммунологического анализа объединяют с пробой.
RU2008135060/15A 2007-08-28 2008-08-27 Применение гликозаминогликанов для снижения неспецифического связывания в иммунологических анализах RU2490648C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11/846,390 2007-08-28
US11/846,390 US8617820B2 (en) 2007-08-28 2007-08-28 Use of glycosaminoglycans to reduce non-specific binding in immunoassays

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2008135060A RU2008135060A (ru) 2010-03-10
RU2490648C2 true RU2490648C2 (ru) 2013-08-20

Family

ID=39967577

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2008135060/15A RU2490648C2 (ru) 2007-08-28 2008-08-27 Применение гликозаминогликанов для снижения неспецифического связывания в иммунологических анализах

Country Status (13)

Country Link
US (1) US8617820B2 (ru)
EP (1) EP2031392B1 (ru)
JP (1) JP5274934B2 (ru)
KR (1) KR101557034B1 (ru)
CN (1) CN101377488B (ru)
AR (1) AR068043A1 (ru)
AU (1) AU2008207454B2 (ru)
BR (1) BRPI0803650A2 (ru)
CA (1) CA2639196C (ru)
CL (1) CL2008002525A1 (ru)
ES (1) ES2525330T3 (ru)
HK (1) HK1130089A1 (ru)
RU (1) RU2490648C2 (ru)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104991075A (zh) * 2008-12-22 2015-10-21 皇家飞利浦电子股份有限公司 使用磁性标记进行的肌钙蛋白i 测定
DK2739975T3 (en) * 2011-08-03 2015-08-17 Quidel Corp N-acetyl-D-glucosamine to INCREASED SPECIFICITY OF STREP-A-immunoassay.
US10527615B2 (en) 2012-04-27 2020-01-07 Konica Monolta, Inc. Antigen detection method which uses lectin and comprises enzyme treatment step
EP2940473B1 (en) * 2012-12-28 2018-08-01 Konica Minolta, Inc. Immunoassay method less affected by impurities
EP3088895A4 (en) 2013-12-27 2017-08-09 Konica Minolta, Inc. Method for analyzing information for diagnosis and kit therefor
JP6414078B2 (ja) 2013-12-27 2018-10-31 コニカミノルタ株式会社 診断用情報の分析方法およびそのためのキット
WO2015194350A1 (ja) 2014-06-20 2015-12-23 コニカミノルタ株式会社 標識化レクチンを用いるサンドイッチ型アッセイおよびそのためのキット
JP6651794B2 (ja) * 2015-11-05 2020-02-19 富士レビオ株式会社 心筋トロポニンｉ測定試薬及び方法
EP3444612B1 (en) * 2016-04-13 2022-03-23 LSI Medience Corporation Immunoassay employing sulfated polysaccharide
CN110392831B (zh) 2017-01-27 2023-09-05 豪夫迈·罗氏有限公司 用于在相互作用测定中调节信号强度的方法
EP3593122A4 (en) * 2017-03-07 2021-01-06 Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. METHOD OF DETECTION OF ANALYTES
EP3605089A1 (en) * 2017-03-22 2020-02-05 FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation Method for forming complex of substance having sugar chain and lectin
CN113671195A (zh) * 2021-09-13 2021-11-19 迈克生物股份有限公司 抗双链dna抗体检测试剂盒及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996010076A1 (en) * 1994-09-28 1996-04-04 Spectral Diagnostics Inc. A monoclonal antibody to human cardiac troponin i
RU2122736C1 (ru) * 1996-01-31 1998-11-27 Научно-технический центр "Лекбиотех" Набор для выявления сенсибилизирующих аллергенов методом твердофазного иммуноферментного анализа
US6376206B1 (en) * 1989-04-25 2002-04-23 Roche Diagnostics Gmbh Specific antibodies to troponin T, their production and use in a reagent for the determination of myocardial necrosis
JP2002340899A (ja) * 2001-05-21 2002-11-27 Azwell Inc 免疫測定方法およびそのための試薬

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH02238361A (ja) 1989-03-10 1990-09-20 Sekisui Chem Co Ltd 免疫反応測定法および免疫反応測定用試薬
US5529985A (en) * 1990-04-23 1996-06-25 Akzo Nobel Nv Sulfated glycosaminoglycanoid derivatives of the dermatan sulfate and chondroitin sulfate type
EP0586590B1 (en) 1991-05-30 1999-07-07 Abbott Laboratories Reagents containing a nonspecific binding blocker in ion-capture binding assays
FR2718849B1 (fr) * 1994-04-14 1996-06-14 Pasteur Sanofi Diagnostics Procédé d'immunodosage de l'antithrombine III activée par un glycosaminoglycane, anticorps monoclonaux correspondants et leur procédé d'obtention.
JP2649016B2 (ja) 1994-07-15 1997-09-03 三洋化成工業株式会社 免疫反応干渉作用の除去方法
US5639626A (en) * 1994-11-15 1997-06-17 Chiron Diagnostics Corporation Reagents for specific binding assays
US6991907B1 (en) * 1995-04-18 2006-01-31 Biosite, Inc. Methods for the assay of troponin I and T and complexes of troponin I and T and selection of antibodies for use in immunoassays
US6627404B1 (en) * 1995-04-18 2003-09-30 Biosite, Inc. Methods for improving the recovery of troponin I and T in membranes, filters and vessels
US5616460A (en) * 1995-06-07 1997-04-01 Abbott Laboratories Buffer composition for reagents for immunoassay
US5922690A (en) * 1996-04-25 1999-07-13 Van Gorp; Cornelius L. Dermatan disulfate, an inhibitor of thrombin generation and activation
JP2000065837A (ja) * 1998-08-24 2000-03-03 Seikagaku Kogyo Co Ltd グリコサミノグリカン又はグリコサミノグリカン結合性分子の測定方法及びその測定用キット
IL142864A0 (en) * 1998-11-12 2002-03-10 Novolytics Inc Compositions and methods for producing vascular occlusion
JP4719669B2 (ja) * 2003-04-14 2011-07-06 カリパー・ライフ・サイエンシズ・インク． 移動度シフトアッセイ干渉の低減
US7172906B2 (en) * 2004-11-16 2007-02-06 Dade Behring Inc. Reduction of non-specific binding in assays
WO2007058654A1 (en) * 2005-11-17 2007-05-24 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Reduction of non-specific binding in assays

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6376206B1 (en) * 1989-04-25 2002-04-23 Roche Diagnostics Gmbh Specific antibodies to troponin T, their production and use in a reagent for the determination of myocardial necrosis
WO1996010076A1 (en) * 1994-09-28 1996-04-04 Spectral Diagnostics Inc. A monoclonal antibody to human cardiac troponin i
RU2122736C1 (ru) * 1996-01-31 1998-11-27 Научно-технический центр "Лекбиотех" Набор для выявления сенсибилизирующих аллергенов методом твердофазного иммуноферментного анализа
JP2002340899A (ja) * 2001-05-21 2002-11-27 Azwell Inc 免疫測定方法およびそのための試薬

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NICOLE Y.L. LAM et al. EDTA Is a Better Anticoagulant than Heparin or Citrate for Delayed Blood Processing for Plasma DNA Analysis. Clinical Chemistry January. 2004, vol.50, no.1 256-257. Найдено из БД Google: http://www.clinchem.org/content/50/1/256.full. *

Also Published As

Publication number Publication date
HK1130089A1 (en) 2009-12-18
BRPI0803650A2 (pt) 2009-05-05
RU2008135060A (ru) 2010-03-10
EP2031392A1 (en) 2009-03-04
CL2008002525A1 (es) 2009-01-16
CA2639196C (en) 2016-07-19
AU2008207454A1 (en) 2009-03-19
CA2639196A1 (en) 2009-02-28
EP2031392B1 (en) 2014-09-24
ES2525330T3 (es) 2014-12-22
US8617820B2 (en) 2013-12-31
US20090061455A1 (en) 2009-03-05
JP2009053195A (ja) 2009-03-12
AR068043A1 (es) 2009-10-28
CN101377488A (zh) 2009-03-04
JP5274934B2 (ja) 2013-08-28
AU2008207454B2 (en) 2015-03-26
CN101377488B (zh) 2015-04-01
KR20090023223A (ko) 2009-03-04
KR101557034B1 (ko) 2015-10-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2490648C2 (ru) Применение гликозаминогликанов для снижения неспецифического связывания в иммунологических анализах
RU2750035C2 (ru) Способы и наборы диагностики и стратификации риска пациентов с ишемией
US5948692A (en) Method and measurement kit for assay of normal agrecan, and method for evaluation of informations on the joint
EP2265950B1 (en) Detection of biomarkers and biomarker complexes
Goldmann et al. Implications of troponin testing in clinical medicine
KR20140015153A (ko) 심근세포 손상의 진단을 위한 검사
JP2012507005A (ja) 好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ｎｇａｌ）に対する単離されたヒト自己抗体、ならびにｎｇａｌに対するヒト自己抗体の検出のための方法およびキット
WO2009085883A1 (en) The accuracy of myeloperoxidase assays and the detection of myeloperoxidase autoantibodies
Collinson et al. Cardiac biomarkers-A short biography
EP2589962A1 (en) Highly sensitive method of assaying troponin i
WO2006120391A1 (en) Detection of myocardial infarction
CA2419295A1 (en) Methods and kits for separation and detection of proteins in biological samples
AU2015200977A1 (en) Use of glycosaminoglycans to reduce non-specific binding in immunoassays
US6150115A (en) Quantitative determination method for heparan sulfate and diagnostic method using the same
JP2002502979A (ja) ヘパリンによる干渉なしのトロポニンアッセイ
JP2007078705A (ja) ヘパラン硫酸の定量方法及び定量キット
US20130012603A1 (en) Methods for assessing the risk of cardiovascular disease
JP4124526B2 (ja) 正常アグリカン測定法とその応用
JP3936063B2 (ja) 糖尿病患者の状態の特定方法及びこの方法を用いる診断キット
EP1016865A2 (en) Macro-complexed ligand binders
US20020037536A1 (en) An assay surface that permits an analyte releasing step
Colom Sanmartí A Multiplexed diagnostic approach for cardiovascular disease biomarkers
WO2013017690A2 (en) Troponin based rule in and rule out algorithm of myocardial infarction
JPH11281644A (ja) 肝疾患又は慢性関節リウマチの検出方法並びにこれらの疾患の診断キット
JP2006250862A (ja) 妊娠中毒症の検知方法及び検知キット

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20150828