RU2453849C1 - Способ определения метаболитов углеводного обмена в биологических тканях - Google Patents
Способ определения метаболитов углеводного обмена в биологических тканях Download PDFInfo
- Publication number
- RU2453849C1 RU2453849C1 RU2011109275/15A RU2011109275A RU2453849C1 RU 2453849 C1 RU2453849 C1 RU 2453849C1 RU 2011109275/15 A RU2011109275/15 A RU 2011109275/15A RU 2011109275 A RU2011109275 A RU 2011109275A RU 2453849 C1 RU2453849 C1 RU 2453849C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- acetone
- metabolites
- tissue
- liquid level
- piece
- Prior art date
Links
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения метаболитов углеводного обмена в биологических тканях. Для этого каждый кусочек биологической ткани перед исследованием помещают в отдельный флакон с плотно закрывающейся пробкой. Заливают ацетон в соотношении не менее 1:5, выдерживают в течение от 3-х суток и более. Далее достают кусочек ткани, проводят измерение объема ацетона и массы куска биологической ткани. Затем отбирают часть ацетона в фарфоровый тигель. Проводят испарение ацетона в вытяжном шкафу, после этого добавляют такое же количество дистиллированной воды. Тщательно перемешивают и определяют метаболиты углеводного обмена ферментными методами. Далее берут навеску ткани, гомогенизируют в 8% растворе трихлоруксусной кислоты. Гомогенизат сливают в мерные центрифужные пробирки, отмечают уровень жидкости, проводят гидролиз в течение 30 мин, при этом весь гликоген подвергают гидролизу до глюкозы, центрифугируют. Нейтрализуют 10% раствором NaOH до рН 7-8, доводят уровень жидкости до метки, центрифугируют. Определяют в надосадочной жидкости метаболиты углеводного обмена ферментными методами. Изобретение обеспечивает определение ряда метаболитов углеводного обмена в одной пробе биологического материала, возможность исследования объектов в течение длительного периода после забора материала. 1 пр.
Description
Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для изучения количественного определения метаболитов углеводного обмена (гликогена, глюкозы, лактата) в биологических тканях (печени, скелетной и сердечной мышцах) трупов человека и животных для изучения метаболизма углеводов в организме и дальнейшей диагностики патологических состояний и причины смерти.
Известен способ определения метаболитов углеводного обмена (гликогена, глюкозы, молочной кислоты) в биологических тканях (печени, миокарде, скелетной мышце): "Судебно-медицинская оценка некоторых показателей углеводного обмена при смерти от острого отравления этиловым алкоголем и ишемической болезни сердца: Метод. рекоменд. / №583/01-02 бюро главн. суд.-мед. эксперт. М., 1994. 28 с.", заключающийся в том, что исследуют свежие биологические ткани, определение суммарного содержания глюкозы и гликогена проводят по методу Kemp, Kits van Heijningen, определение лактата (молочной кислоты) колориметрическим методом с параоксифенилом по Н.И.Мешковой и С.Е.Северину.
Недостатки известного способа.
Способ рассчитан на проведение анализа в первые сутки после взятия объектов исследования (в течение нескольких часов). Для практических целей необходим больший срок. В постмортальном периоде даже при хранении образцов в холодильнике происходит изменение показателей углеводного обмена, поэтому рекомендуется замораживать объекты исследования до момента исследования. Транспортировка объектов исследования в данных условиях представляет определенные трудности. Способ позволяет определять отдельно суммарное содержание глюкозы и гликогена в тканях и отдельно содержание лактата, то есть используются две пробы биологического материла. Способ не позволяет определять раздельное содержание глюкозы и гликогена. Используются неспецифические химические методы определения метаболитов углеводного обмена, результаты которых недостоверны.
Технический результат: определение ряда метаболитов углеводного обмена в одной пробе биологического материала, возможность исследования объектов в течение длительного периода после забора материала - количественный результат не зависит от длительности периода между забором объекта и проведением лабораторного исследования.
Указанные задачи достигаются путем предварительного фиксирования биологического материала в ацетоне с последующей пробоподготовкой и определением метаболитов углеводного обмена в фиксаторе (в ацетоне), при этом исследуют содержание метаболитов в межтканевой жидкости и самой ткани высокоспецифичными ферментными методами.
Способ осуществляют следующим образом: биологические ткани, например части печени, скелетной мышцы, миокарда и др. массой около 0,5-2,0 г, помещают в отдельные стеклянные или пластиковые флаконы с плотно закрывающимися пробками, заливают ацетоном для фиксирования объектов в объемном соотношении не менее 1:5. Исследования проводят через трое и более суток (для более полной фиксации).
Из флаконов аккуратно извлекают кусочки тканей, помещают на фильтровальную бумагу. Проводят измерение количества фиксатора (в мл). В предварительно маркированные фарфоровые тигли вносят фиксатор (по 0,5-1,0 мл) и проводят испарение в вытяжном шкафу. Для ускорения процесса используют электрический фен. Далее в тигли вносят соответствующий объем дистиллированной воды (0,5-1,0 мл) и тщательно перемешивают стеклянной палочкой. В полученном растворе определяют метаболиты углеводного обмена ферментными методами.
Кусочки тканей освобождают на фильтровальной бумаге от остатка фиксатора в вытяжном шкафу, помещают в термостат (37°C) на 10-15 мин, проводят взвешивание. Навески тканей растирают с небольшим количеством кварцевого песка в фарфоровых ступках с добавлением 8% раствора трихлоруксусной кислоты. Гомогенизат сливают в мерные центрифужные пробирки. Отмечают уровень жидкости. Пробирки, прикрытые резиновыми пробками, ставят в термоблок или на кипящую водяную баню на 30 минут (при этом весь гликоген подвергают гидролизу до глюкозы). После охлаждения центрифугируют 10 минут при 1600 g. Нейтрализуют до рН 7-8 10% NaOH и доводят уровень жидкости до метки дистиллированной водой. Вновь центрифугируют 15 минут при вышеуказанных условиях. В надосадочной жидкости определяют содержание метаболитов углеводного обмена ферментными методами.
Количественное определение глюкозы проводят стандартным унифицированным глюкозооксидазным методом [Балаховский И.С.в кн. «Лабораторные исследования в клинике» под ред. Меньшикова В.В., 1987 г., с.230-234] (набор реагентов «Фотоглюкоза» фирмы «Импакт» - Москва). Количественное определение молочной кислоты (лактата) проводят энзиматическим колоримертическим методом (набор реагентов "Lactic Acid" фирмы "Vital Diagnostics SPb" - Санкт-Петербург).
Расчет проводят по формуле:
С - концентрация метаболита в образце (мкмоль/г);
DОП - оптическая плотность образца при исследуемой длине волны;
DCT - оптическая плотность стандартного раствора исследуемого вещества;
CCT - концентрация стандартного раствора (ммоль/л);
М - масса фиксированного объекта или навески (г);
V - объем раствора (мл), в котором гомогенизировали ткань или объем фиксатора (мл);
Р - коэффициент дополнительного разведения.
Пример
Определение метаболитов углеводного обмена в фиксаторе позволяет выявлять их количественное содержание в межтканевой жидкости, а в фиксированной ткани - в самой ткани.
Определение количественного содержания глюкозы в фиксаторе (ацетоне): Сст=1,25 ммоль/л; Dст=0,408
| Объект исследования | М (г) | V (мл) | Р | D | С (мкмоль/г) |
| Печень | 0,86 | 7,2 | 3 | 0,562 | 43,3 |
| Скелетная мышца | 0,55 | 7,1 | - | 0,087 | 3,4 |
| Миокард | 0,61 | 7,9 | - | 0,309 | 12,3 |
Определение количественного содержания лактата в фиксаторе (ацетоне): Сст=3,33 ммоль/л; Dст=0,369
| Объект исследования | М (г) | V (мл) | Р | D | С (мкмоль/г) |
| Печень | 0,86 | 7,2 | - | 0,244 | 18,4 |
| Скелетная мышца | 0,66 | 7,1 | - | 0,134 | 15,6 |
| Миокард | 0,61 | 7,9 | 3 | 0,180 | 63,1 |
Определение количественного содержания гликогена в тканях (в пересчете на глюкозу): Сст=1,25 ммоль/л; Dст=74
| Объект исследования | М г) | V (мл) | Р | D | С (мкмоль/г) |
| Печень | 0,25 | 6,0 | 3 | 0,380 | 91,4 |
| Скелетная мышца | 0,50 | 6,0 | - | 0,281 | 11,3 |
| Миокард | 0,50 | 6,0 | - | 0,385 | 15,4 |
Определение количественного содержания лактата в тканях: Сст=3,33 ммоль/л; Dст=0,280
| Объект исследования | М (г) | V(мл) | Р | D | С (мкмоль/г) |
| Печень | 0,25 | 6,0 | - | 0,077 | 22,0 |
| Скелетная мышца | 0,50 | 6,0 | - | 0,244 | 34,8 |
| Миокард | 0,50 | 6,0 | 3 | 0,196 | 83,9 |
Аналогично проводят исследования и других тканей, а также измерения других интересующих метаболитов, например пировиноградной кислоты.
Положительный эффект.
Способ определения метаболитов углеводного обмена в тканях позволяет проводить измерения ряда параметров в одном объекте исследования, результат не зависит от длительности периода между забором объекта и проведением лабораторного исследования.
Claims (1)
- Способ определения метаболитов углеводного обмена в биологических тканях путем гомогенизации биологической ткани, проведения гидролиза в растворе трихлоруксусной кислоты, центрифугирования и определения в супернатанте метаболитов углеводного обмена, отличающийся тем, что каждый кусочек биологической ткани перед исследованием помещают в отдельный флакон с плотно закрывающейся пробкой, заливают ацетоном в соотношении не менее 1:5, выдерживают в течение от 3-х суток и более, достают кусочек ткани, проводят измерение объема ацетона и массы кусочка биологической ткани, затем отбирают часть ацетона в фарфоровый тигель, проводят испарение ацетона в вытяжном шкафу, после этого добавляют такое же количество дистиллированной воды, тщательно перемешивают и определяют метаболиты углеводного обмена ферментными методами, далее берут навеску ткани, гомогенизируют в 8%-ном растворе трихлоруксусной кислоты, гомогенизат сливают в мерные центрифужные пробирки, отмечают уровень жидкости, проводят гидролиз в течение 30 мин, при этом весь гликоген подвергают гидролизу до глюкозы, центрифугируют, нейтрализуют 10%-ным раствором NaOH до рН 7, 8, доводят уровень жидкости до метки, вновь центрифугируют и определяют в надосадочной жидкости метаболиты углеводного обмена ферментными методами.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011109275/15A RU2453849C1 (ru) | 2011-03-11 | 2011-03-11 | Способ определения метаболитов углеводного обмена в биологических тканях |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011109275/15A RU2453849C1 (ru) | 2011-03-11 | 2011-03-11 | Способ определения метаболитов углеводного обмена в биологических тканях |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2453849C1 true RU2453849C1 (ru) | 2012-06-20 |
Family
ID=46681167
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011109275/15A RU2453849C1 (ru) | 2011-03-11 | 2011-03-11 | Способ определения метаболитов углеводного обмена в биологических тканях |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2453849C1 (ru) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2302001C1 (ru) * | 2006-02-26 | 2007-06-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Пермская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Способ диагностики механической асфиксии в результате сдавления органов шеи петлей |
| WO2010132440A2 (en) * | 2009-05-11 | 2010-11-18 | Cytotech Labs, Llc | Methods for treatment of oncological disorders using epimetabolic shifters, multidimensional intracellular molecules, or environmental influencers |
-
2011
- 2011-03-11 RU RU2011109275/15A patent/RU2453849C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2302001C1 (ru) * | 2006-02-26 | 2007-06-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Пермская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Способ диагностики механической асфиксии в результате сдавления органов шеи петлей |
| WO2010132440A2 (en) * | 2009-05-11 | 2010-11-18 | Cytotech Labs, Llc | Methods for treatment of oncological disorders using epimetabolic shifters, multidimensional intracellular molecules, or environmental influencers |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ГАЙФУЛИН Н.М. Судебно-медицинская оценка показателей углеводного обмена при некоторых видах гипоксической смерти у новорожденных и детей грудного возраста: Автореферат-диссертация кандидата медицинских наук. - М., 2005, 129 с. * |
| Судебно-медицинская оценка некоторых показателей углеводного обмена при смерти от острого отравления этиловым алкоголем и ишемической болезни сердца: Метод. рекоменд. // №583/01-02 Бюро главн. суд.-мед. эксперт. - М., 1994. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Belsey et al. | Postmortem biochemistry: Current applications | |
| Boulagnon et al. | Post-mortem biochemistry of vitreous humor and glucose metabolism: an update | |
| CN104316692B (zh) | 一种新生儿总半乳糖检测试剂盒、其使用方法及制备方法 | |
| Edwards et al. | Needle biopsy for muscle chemistry | |
| JPWO2011152012A1 (ja) | 病気の重症度の検査方法 | |
| CN106370855A (zh) | 基于BSaBA信号放大系统的绵羊过氧化物氧还酶6双抗夹心ELISA试剂盒 | |
| RU2453849C1 (ru) | Способ определения метаболитов углеводного обмена в биологических тканях | |
| Balasooriya et al. | The biochemical changes in pericardial fluid after death. An investigation of the relationship between the time since death and the rise or fall in electrolyte and enzyme concentrations and their possible usefulness in determining the time of death | |
| Gümüş et al. | Evaluation of the postmortem glucose and glycogen levels in hepatic, renal, muscle, and brain tissues: is it possible to estimate postmortem interval using these parameters? | |
| Marezza et al. | Diatom extraction: a new technique with heated H2O2. A technical note | |
| Laux | Development of biological standards for the quality assurance of presumptive testing reagents | |
| RU2665144C1 (ru) | Способ определения уровня стрессоустойчивости человека | |
| Acierno et al. | Evaluation of the agreement among three handheld blood glucose meters and a laboratory blood analyzer for measurement of blood glucose concentration in Hispaniolan Amazon parrots (Amazona ventralis) | |
| CN103235143A (zh) | 一种时间分辨免疫荧光法定量测定新生儿17α-OHP的试剂盒 | |
| Corion et al. | Insights and interpretation of the trends for in ovo sexing technologies in papers and patents | |
| Cole et al. | Assessment of a portable lactate meter for field use in the white rhinoceros (Ceratotherium simum) | |
| Nord et al. | A whole blood approach improves speed and accuracy when measuring mitochondrial respiration in intact avian blood cells | |
| Botía et al. | Gaining knowledge about biomarkers of the immune system and inflammation in the saliva of pigs: The case of myeloperoxidase, S100A12, and ITIH4 | |
| JPH04500912A (ja) | 乏精子症男性における受精能の客観的生化学的測定法 | |
| Chitty | Sample taking and basic clinical pathology | |
| Ponder | The inhibitory effect of blood serum on haemolysis | |
| CN105779568B (zh) | 一种体外获能后精子质量评估的试剂盒及其使用方法 | |
| CN109097434A (zh) | 一种唾液酸检测试剂盒 | |
| Kopytov et al. | The method of complex determining of biochemical composition of microalgae | |
| Naldo et al. | Plasma bile acids reference value in the gyr falcon (Falco rusticolus) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20130312 |