RU2451937C2 - Способ диагностики рака молочной железы по уровню рнк интерлейкинов il-8 и/или il-18 в плазме крови - Google Patents

Способ диагностики рака молочной железы по уровню рнк интерлейкинов il-8 и/или il-18 в плазме крови Download PDF

Info

Publication number
RU2451937C2
RU2451937C2 RU2010123021/15A RU2010123021A RU2451937C2 RU 2451937 C2 RU2451937 C2 RU 2451937C2 RU 2010123021/15 A RU2010123021/15 A RU 2010123021/15A RU 2010123021 A RU2010123021 A RU 2010123021A RU 2451937 C2 RU2451937 C2 RU 2451937C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
rna
level
breast cancer
blood plasma
hprt
Prior art date
Application number
RU2010123021/15A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2010123021A (ru
Inventor
Денис Владимирович Ребриков (RU)
Денис Владимирович Ребриков
Original Assignee
Закрытое акционерное общество "Научно-производственная фирма ДНК-Технология"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Закрытое акционерное общество "Научно-производственная фирма ДНК-Технология" filed Critical Закрытое акционерное общество "Научно-производственная фирма ДНК-Технология"
Priority to RU2010123021/15A priority Critical patent/RU2451937C2/ru
Publication of RU2010123021A publication Critical patent/RU2010123021A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2451937C2 publication Critical patent/RU2451937C2/ru

Links

Images

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области медицины, онкологии и молекулярной биологии и может быть использовано для диагностики рака молочной железы. Способ основан на измерении в плазме крови уровня РНК интерлейкинов IL-8 и/или IL-18 и сравнении уровня представленности РНК IL-8 и/или IL-18 с уровнем представленности референсных транскриптов. Для осуществления способа используют обратную транскрипцию и полимеразную цепную реакцию в «реальном времени». В качестве референсных транскриптов используют РНК ABL, и/или HPRT, и/или IL 1b. Результат исследования считают положительным при разнице уровней представленности РНК IL-8 и HPRT более десяти раз. Использование заявленного способа позволяет провести раннюю диагностику рака молочной железы. 3 з.п. ф-лы, 1 пр., 1 ил.

Description

1. Область техники.
Изобретение относится к области медицины, онкологии и молекулярной биологии и может быть использовано для малоинвазивной диагностики рака молочной железы.
Уровень техники
Рак молочной железы (РМЖ) является наиболее распространенным онкологическим заболеванием у женщин: он поражает каждую десятую жительницу развитых стран и занимает лидирующие позиции по смертности вследствие несовершенства ранней диагностики.
Циркулирующие в плазме крови внеклеточные РНК (внРНК) представляют собой информативный и легкодоступный источник генетического материала для медицинской диагностики. Особый интерес вызывает тот факт, что в составе внРНК обнаруживаются тканеспецифичные транскрипты [1, 2], указывая на возможность использования внРНК плазмы крови не только в качестве маркера опухолеобразования, но и как индикатора патологического процесса непосредственно в зоне пролиферации клеток.
В качестве генов, уровень представленности РНК которых в плазме крови мог бы адекватно отражать функциональное состояние организма и динамику развития патологии, могут быть выбраны гены некоторых цитокинов [3]. Цитокины являются медиаторами сложных взаимодействий между иммунной системой организма и растущей опухолью. С одной стороны, цитокины принимают участие в активации противоопухолевого иммунитета, направленного на уничтожение раковых клеток, с другой стороны, цитокины синтезируются самими опухолевыми клетками и участвуют в прогрессии и метастазировании опухолей [4].
При нормальном физиологическом состоянии организма в плазме крови существует определенный профиль представленности РНК цитокинов, отличающийся от цитокинового профиля клеточной фракции [6].
Из литературы известно, что интерлейкины IL-8 и IL-18 непосредственно вовлечены в патогенез РМЖ [18]. IL-18 - один из основных иммунорегуляторных цитокинов, принимающий участие в местном ответе организма на процессы опухолеобразования [7]. Провоспалительный цитокин IL-8 в больших количествах синтезируется клетками самой опухоли и привлеченными в зону роста опухоли клетками иммунной системы [81.
Цитокины, регулируя развитие местных реакций в тканях, характеризуются индуцируемым характером синтеза и локальной продукцией. Это означает, что для определения цитокинового профиля в плазме крови методы белковой химии практически неприменимы. В свою очередь, профиль представленности РНК питокинов в клетках крови не в состоянии отразить состояние этого параметра непосредственно в очаге опухолеобразования. Исследование же тканей опухоли, во-первых, является высокоинвазивным диагностическим методом, а во-вторых, не может быть использовано ни для выявления ранних стадий развития болезни, ни для мониторинга рецидивов.
Наиболее близким аналогом является способ выявления опухоли молочной железы и дифференцировки злокачественных и доброкачественных образований путем измерения 18S рРНК, RASSF8 и Ki-67 методом метилспецифичной ПЦР (Рытова Е.Ю. Циркулирующие внеклеточные ДНК и РНК крови в диагностике опухолей молочной железы. // Биоорганическая химия. 2008, т.54, №1, С.94-103).
Из данных отечественной и зарубежной литературы, патентов и патентных заявок не известно использование измерения уровня РНК интерлейкинов IL-8 и IL-18 в плазме крови для диагностики рака молочной железы.
Отличительным признаком изобретения является использование соотношения уровня РНК интерлейкинов IL-8 и/или IL-18 в сравнении с уровнем референсного транскрипта в плазме крови для диагностики рака молочной железы. Диагностическим маркером является соотношение представленности в плазме крови пациента РНК IL-8 и/или РНК IL-18 и любого другого транскрипта (или группы транскриптов), не меняющих уровень представленности в плазме крови при опухолеобразовании, например ABL, HPRT или IL 1b.
3. Описание изобретения
Предложен способ диагностики опухолей человека путем оценки уровня представленности отдельных РНК в плазме крови (внеклеточной фракции).
Техническим результатом изобретения является ранняя диагностика рака молочной железы на основе оценки и сопоставления уровня представленности РНК IL-8 и IL-18 с уровнем РНК ABL, и/или HPRT, и/или IL 1b в плазме периферической крови.
В плазме крови больных РМЖ (даже на ранних стадиях заболевания, например на стадии T1N0M0) существенно возрастает относительное количество РНК IL-8 и IL-18. Так, относительное количество РНК IL-8 и IL-18 существенно превышает относительное количество РНК этих питокинов в плазме крови здоровых индивидов при нормировке по уровню РНК стабильно представленных транскриптов (Рисунок 1). Кроме того, у больных с метастазирующим раком уровень РНК IL-8 в плазме периферической крови выше, чем у больных с ранним раком молочной железы (стадия T1N0M0).
Уровень представленности внеклеточных РНК цитокинов при развитии РМЖ может служить дополнительно исследуемым параметром при диагностике и оценке степени прогрессии заболевания. В частности, уровень РНК интерлейкинов IL-8 и IL-18 позволяет проводить раннюю диагностику РМЖ, делая ее малоинвазивной, а также позволяет осуществлять мониторинг течения заболевания.
Для оценки уровня представленности исследуемых РНК в плазме периферической крови можно использовать биохимические, генетические, молекулярно-биологические и иные методы, а также их сочетания.
В частности, для оценки уровня представленности исследуемых РНК в плазме периферической крови можно использовать методы обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции. В том числе метод полимеразной цепной реакции с регистрацией накопления продуктов реакции в режиме «реального времени».
Для клинической диагностики можно использовать определение уровня представленности в плазме крови пациента РНК IL-8 и/или РНК IL-18 относительно любого другого транскрипта (или группы транскриптов), не меняющих уровень представленности в плазме крови при опухолеобразовании.
В частности, можно использовать определение уровня представленности в плазме крови пациента РНК IL-8 и/или РНК IL-18 относительно уровня представленности РНК одного из белков «домашнего хозяйства» (например, ABL или HPRT) и/или РНК цитокина, для которого никаких изменений в случае развития заболевания показано не было (например, IL-lb).
В частности, при сравнении уровня представленности в плазме крови пациента РНК IL-8 относительно уровня представленности РНК HPRT результат исследования считают отрицательным (развитие опухоли не зарегистрировано) при разнице уровней представленности РНК IL-8 и HPRT менее пяти раз. Результат исследования считают положительным (развитие опухоли зарегистрировано) при разнице уровней представленности РНК IL-8 и HPRT более десяти раз. Результат исследования считают недостоверным при разнице уровней представленности РНК IL-8 и HPRT в диапазоне от пяти до десяти раз. Конкретные показатели разницы полученных значений для исследуемых РНК (например, IL-8 и HPRT) могут отличаться от приведенных в примере вследствие различий в методиках и для каждой конкретной методики должны быть подобраны экспериментально.
4. Реализация изобретения
Образцы венозной крови желательно забирать в пробирки с ЭДТА. Процедуру экстракции нуклеиновых кислот желательно начинать не позднее, чем через 2 часа с момента забора крови. Для получения плазмы пробирки с кровью центрифугируют (например, при 400g в течение 20 мин или сопоставимо). После центрифугирования верхнюю фракцию желательно перенести в новую пробирку и вновь центрифугировать при тех же условиях. Выделение РНК проводят методом фенольной экстракции или аналогичным. Полученные препараты РНК желательно сразу использовать для постановки реакции обратной транскрипции.
Для определения уровня представленности исследуемых РНК (например, IL-8 и HPRT) используют метод ПЦР «в реальном времени» в стандартных условиях с праймерами, специфичными к последовательности определяемых РНК. Для исключения коамплификации геномной ДНК желательно расположить праймеры на стыках зкзонов. Желательно, чтобы длины продуктов амплификации всех анализируемых генов отличались друг от друга незначительно и находились в диапазоне 100-300 п.н. Проявку накопления продуктов реакции можно вести как с помощью интеркалирующих красителей, так и с использованием флуоресцентно-меченых олигонуклеотидов (зондов). Нормированные значения, соответствующие уровню представленности транскриптов каждого гена, можно рассчитывать с помощью метода ΔΔCt или аналогичного.
ЛИТЕРАТУРА
1. Silva JM, Rodriguez R, Garcia JM, Muñoz C, Silva J, Dominguez G, Provencio M, España P, Bonilla F. // Gut. 2002. V.50. P.530-534.
2. Wong SC, Lo SF, Cheung MT, Ng КО, Tse CW, Lai BS, Lee КС, Lo YM. //Clin. Cancer Res. 2004. V.10. P.1613-1617.
3. Dranoff G. // Nat. Rev. Cancer. 2004. V.4. P.11-21.
4. Кетлинский С.А., Симбирцев А.С. Цитокины. Санкт-Петербург: Фолиант, 2008.
5. Турчанинова М.А., Ребриков Д.В. // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2009. Т.2. С.22-24.
6. Kurebayashi 1 // Breast Cancer. 2000. V.7. P. 24-129.
7. Merendino RA, Gangemi S, Ruello A, Bene A, Losi E, Lonbardo G, Purello-Dambrosio F. // Int. t Biol. Markers. 2001. V.16. P.126-129.
8. Kozlowski L, Zakrzewska I, Tokajuk P, Wojtukiewicz M. Z. // Rocz. Akad. Med. Bialymst. 2003. V.48. P.82-84.

Claims (4)

1. Способ диагностики рака молочной железы, основанный на измерении в плазме крови уровня РНК интерлейкинов IL-8 и/или IL-18 и сравнении уровня представленности РНК IL-8 и/или IL-18 с уровнем представленности референсных транскриптов.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве метода определения уровня РНК интерлейкинов IL-8 и/или IL-18 и РНК референсных транскриптов используют обратную транскрипцию и полимеразную цепную реакцию в «реальном времени».
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве референсных транскриптов используют РНК ABL, и/или HPRT, и/или IL lb.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что результат исследования считают положительным (развитие опухоли зарегистрировано) при разнице уровней представленности РНК IL-8 и HPRT более десяти раз.
RU2010123021/15A 2010-06-07 2010-06-07 Способ диагностики рака молочной железы по уровню рнк интерлейкинов il-8 и/или il-18 в плазме крови RU2451937C2 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2010123021/15A RU2451937C2 (ru) 2010-06-07 2010-06-07 Способ диагностики рака молочной железы по уровню рнк интерлейкинов il-8 и/или il-18 в плазме крови

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2010123021/15A RU2451937C2 (ru) 2010-06-07 2010-06-07 Способ диагностики рака молочной железы по уровню рнк интерлейкинов il-8 и/или il-18 в плазме крови

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2010123021A RU2010123021A (ru) 2011-12-20
RU2451937C2 true RU2451937C2 (ru) 2012-05-27

Family

ID=45403668

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2010123021/15A RU2451937C2 (ru) 2010-06-07 2010-06-07 Способ диагностики рака молочной железы по уровню рнк интерлейкинов il-8 и/или il-18 в плазме крови

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2451937C2 (ru)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2742209C1 (ru) * 2019-12-30 2021-02-03 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПО УРОВНЮ мРНК TGEβ и TNFα В ПЛАЗМЕ КРОВИ
RU2745424C1 (ru) * 2020-09-04 2021-03-25 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И РАКА ЯИЧНИКОВ ПО УРОВНЮ мРНК ММР-9 В ПЛАЗМЕ КРОВИ
RU2752971C1 (ru) * 2020-09-18 2021-08-11 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПО УРОВНЮ ЭКСПРЕССИИ мРНК IL-10 И/ИЛИ IL-17 В ПЛАЗМЕ КРОВИ

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2340896C1 (ru) * 2007-05-17 2008-12-10 Негосударственное научно-исследовательское учреждение "Биомедицинский центр" Способ диагностики онкологических заболеваний

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2340896C1 (ru) * 2007-05-17 2008-12-10 Негосударственное научно-исследовательское учреждение "Биомедицинский центр" Способ диагностики онкологических заболеваний

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
РЫКОВА Е.Ю. Циркулирующие внеклеточные ДНК и РНК крови в диагностике опухолей молочной железы // Биомедицинская химия, 2008, т.54, №1, с.94-103. *
ТУРЧАНИНОВА М.А. и др. Профиль внеклеточных РНК цитокинов в плазме крови при нормальном физиологическом состоянии организма. 12-я международная Пущинская школа-конференция молодых ученых, 2008. Сборник тезисов, с.154, 155. BREMNES R.M. et al Circulating tumour-derived DNA and RNA markers in blood: a tool for early detection, diagnostics, and follow-up? Lung Cancer. 2005 Jul; 49(l):1-12, реф, Pub Med PMID: 15949585, найдено 06.06.2011. SILVA J.M. et al Detection of epithelial tumour RNA in the plasma of colon cancer patients is associated with advanced stages and circulating tumour cells. Gut. 2002, v. 50(4), p.530-4. *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2742209C1 (ru) * 2019-12-30 2021-02-03 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПО УРОВНЮ мРНК TGEβ и TNFα В ПЛАЗМЕ КРОВИ
RU2742209C9 (ru) * 2019-12-30 2021-06-24 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПО УРОВНЮ мРНК TGFβ и TNFα В ПЛАЗМЕ КРОВИ
RU2745424C1 (ru) * 2020-09-04 2021-03-25 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И РАКА ЯИЧНИКОВ ПО УРОВНЮ мРНК ММР-9 В ПЛАЗМЕ КРОВИ
RU2752971C1 (ru) * 2020-09-18 2021-08-11 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПО УРОВНЮ ЭКСПРЕССИИ мРНК IL-10 И/ИЛИ IL-17 В ПЛАЗМЕ КРОВИ

Also Published As

Publication number Publication date
RU2010123021A (ru) 2011-12-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109890394A (zh) 作为子宫内膜异位症的生物标志物的微小rna
CN106591438B (zh) 一种用于检测Her2基因的核酸组合、试剂盒及应用
CN107849606A (zh) 提高下一代测序灵敏度的方法
JP6092655B2 (ja) テスト体液サンプルの分類方法
RU2583871C1 (ru) Способ дифференциальной диагностики глиом головного мозга человека
CN107312770A (zh) 一种用于高通量测序检测的肿瘤brca1/2基因变异文库的构建方法及其应用
CN111172287A (zh) 外泌体lncRNA RN7SL5P作为内参基因在胃癌lncRNA检测中的应用
CN105176983A (zh) 一种用于检测食管鳞癌相关血清miRNAs基因的试剂盒
CN106555004B (zh) 缺血性脑卒中的lncRNA标志物
RU2451937C2 (ru) Способ диагностики рака молочной железы по уровню рнк интерлейкинов il-8 и/или il-18 в плазме крови
CN107519193A (zh) 食管鳞癌早期分子诊断标志物及其应用
CN104694623A (zh) 一种用于肺癌诊断的血浆miRNA标志物及应用
RU2760573C1 (ru) Набор олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченых зондов для выявления эпигенетических маркеров рака шейки матки
CN107312851A (zh) 心肌梗死生物标志物miR‑1283
CN110272981A (zh) 一种基于端粒酶扩增的miRNAs检测方法
CN111733242B (zh) lncRNA AK024561作为卵巢癌诊断标志物的应用
CN108165546A (zh) 一种miRNA生物标志物、组合物及其用途
CN107988370A (zh) 一种circRNA基因在制备诊断慢性粒细胞性白血病试剂中的应用
CN111534587B (zh) 分子标志物5-tRF-His、乳腺癌检测试剂盒及其应用
JP2007082433A (ja) 悪性脳腫瘍マーカー遺伝子およびその用途
CN102899390A (zh) 小细胞肺癌标志物及其检测
CN108085386B (zh) 骨肉瘤miRNA检测的内参基因的鉴定
CN107029238B (zh) Linc01094在诊治缺血性脑卒中的应用
CN101671728B (zh) 一种检测癌胚抗原mRNA表达量的方法及专用试剂盒
JP3901684B2 (ja) 神経芽腫の体液による検査方法

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20140608