RU2449788C2 - Комбинации терапевтических агентов для лечения рака - Google Patents

Abstract

Предложены комбинация для профилактики или лечения пролиферативного заболевания, включающая микротубулярный активный агент, эпотилон В, и фармацевтически активный агент, 1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амина, 3-(4-хлорфенил)-1-(1,1-диметилэтил)-(9СI); соответствующие фармацевтическая композиция, включающая указанную комбинацию, способы профилактики и лечения (варианты), коммерческая упаковка, включающая указанную комбинацию (варианты). В частности, пролиферативное заболевание может представлять собой рак яичников, карциному легких и меланому. Показан синергизм комбинации в подавлении роста немелкоклеточного рака легких по отношению к самостоятельному действию ее компонентов. 9 н. и 8 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл.

Description

Настоящее изобретение относится к комбинации, включающей микротубулярный активный агент и один или несколько фармацевтически активных агентов; фармацевтическим композициям, содержащим указанные комбинации; способам лечения, включающим указанную комбинацию; способам получения указанной комбинации и к коммерческой упаковке, содержащей указанную комбинацию.

Уровень техники

Рак все еще сохраняет основную неудовлетворенную потребность в медицине. Первичным лечением заболевания часто является хирургическое вмешательство, облучение или комбинация, но часто встречается рецидивное (метастатическое) состояние. Химиотерапевтические способы лечения для большинства видов рака обычно не являются исправляющими, а только останавливающими развитие заболевания. Эпотилоны проявляют широкий ряд биологических активностей, особенно в качестве микротубулярного активного агента. Также известно, что различные комбинации активных ингредиентов могут повышать противоопухолевое поведение. Следовательно, в настоящее время существует потребность в новых комбинациях производных эпотилона, особенно эпотилона В.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к комбинации, которая включает:

(а) микротубулярный активный агент и

(б) один или несколько фармацевтически активных агентов.

Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, включающим:

(а) микротубулярный активный агент;

(б) фармацевтически активный агент и

(в) фармацевтически приемлемый носитель.

Настоящее изобретение также относится к коммерческой упаковке или продукту, включающему:

(а) фармацевтический состав микротубулярного активного агента и

(б) фармацевтический состав фармацевтически активного агента для одновременного, параллельного, раздельного или последовательного применения.

Компоненты комбинации (а) и (б) могут вводиться вместе, один за другим или раздельно в одной объединенной единичной дозированной форме или в двух раздельных единичных дозированных формах. Единичная дозированная форма также может представлять собой фиксированную комбинацию.

Настоящее изобретение также относится к способу профилактики или лечения пролиферативных заболеваний или заболеваний, которые связаны или запускаются постоянным ангиогенезом у млекопитающего, конкретно человека, с помощью комбинации, включающей:

(а) микротубулярный активный агент и

(б) один или несколько фармацевтически активных агентов.

Краткое описание чертежей

На Фиг.1 показано процентное ингибирование для 81-точечной 9×9 матрицы доз для комбинации эпотилона В и 1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амина, 3-(4-хлорфенил)-1-(1,1-диметилэтил)-(9CI) в клетках А549.

На Фиг.2 показан синергизм для каждого значения дозы по сравнению с моделью аддитивности Луи для комбинации эпотилона В и 1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амина, 3-(4-хлорфенил)-1-(1,1-диметилэтил)-(9CI) в клетках А549.

На Фиг.3 показан контур изоболограммы при 30% ингибировании для комбинации эпотилона В и 1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амина, 3-(4-хлорфенил)-1-(1,1-диметилэтил)-(9CI) в клетках А549.

Подробное описание изобретения

I. Микротубулярный активный агент

Термин "микротубулярный активный агент" относится к микротубулярным стабилизирующим и микротубулярным дестабилизирующим агентам и к соединениям, которые действуют путем разрушения микротубулярной сетки, которая является существенной для митотической и межфазной клеточной функции. Примеры микротубулярного связывающего агента включают, но не ограничиваются ими, сульфат винбластина; сульфат винкристина; виндезин; винорелбин; доцетаксель; паклитаксель; винорелбин; дискодермолиды; кохицин и эпотилоны и их производные, например эпотилон В или его производное. Эпотилоны, особенно эпотилоны А и В, представляют собой класс микротубулярных стабилизирующих цитотоксических агентов (см. публикации Gerth, K. и др., J. Antibiot., 1996, 49, сс.560-3, или Hoefle и др., DE 4138042), например, формулы

где R представляет собой водород (эпотилон А) или метил (эпотилон В).

II. Фармацевтически активные агенты

Термин "фармацевтически активные агенты" покрывает многочисленные фармацевтически активные агенты, имеющие различные механизмы действия. Комбинации некоторых из них с микротубулярными активными агентами могут приводить к улучшениям при раковой терапии. Обычно фармацевтически активные агенты классифицируют в соответствии с механизмом действия. Многие из доступных агентов являются антиметаболитами развития путей различных опухолей или реагируют с ДНК опухолевых клеток. Существуют также агенты, которые ингибируют ферменты, такие как топоизомераза I и топоизомераза II, или которые являются антимиотическими агентами.

Под термином "фармацевтически активный агент" особенно подразумевается любой фармацевтически активный агент, отличный от микротубулярных активных агентов. Он включает, но не ограничиваясь ими:

I. ингибитор аденозинкиназы;

II. адъювант;

III. антагонист коры надпочечников;

IV. ингибитор пути АКТ;

V. алкилирующий агент;

VI. ингибитор ангиогенеза;

VII. антиандроген;

VIII. антиэстроген;

IX. агент против гиперкальциемии;

X. антиметаболит;

XI. индуктор апоптоза;

XII. ингибитор киназы аврора;

XIII. ингибитор тирозинкиназы Брутона (ВТК);

XIV. ингибитор кальциневрина;

XV. ингибитор киназы СаМ II;

XVI. ингибитор тирозинфосфатазы CD45;

XVII. ингибитор фосфатазы CDC25;

XVIII. ингибитор киназы СНК;

XIX. контролирующий агент для регулирования генистеина, оломуцина и/или тирфостинов;

XX. ингибитор циклооксигеназы;

XXI. ингибитор киназы cRAF;

XXII. ингибитор циклин-зависимой киназы;

XXIII. ингибитор цистеинпротеазы;

XXIV. интеркалятор ДНК;

XXV. разрушитель цепи ДНК;

XXVI. ингибитор лигазы Е3;

XXVII. эндокринный гормон;

XXVIII. соединения, связывающие, понижающие или ингибирующие активность семейства эпидермального фактора роста;

XXIX. ингибитор тирозинкиназы EGFR, PDGFR;

XXX. ингибитор фарнезилтрансферазы;

XXXI. ингибитор киназы Flk-1;

XXXII. ингибитор гликогенсинтазакиназы-3 (GSK3);

XXXIII. ингибитор гистондеацетилазы (HDAC);

XXXIV. ингибитор HSP90;

XXXV. ингибитор I-каппа В-альфа киназы (IKK);

XXXVI. ингибитор тирозинкиназы рецептора инсулина;

XXXVII. ингибитор киназы c-Jun N-концевой киназы (JNK);

XXXVIII. ингибитор киназы митогенактивируемого белка (MAP);

XXXIX. ингибитор MDM2;

XL. ингибитор МЕК;

XLI. ингибитор матричной металлопротеиназы (ММР);

XLII. ингибитор тирозинкиназы NGFR;

XLIII. ингибитор киназы р38 MAP, включая ингибитор киназы SAPK2/p38;

XLIV. ингибитор тирозинкиназы р56;

XLV. ингибитор тирозинкиназы PDGFR;

XLVI. ингибитор фосфатидилинозитол 3-киназы;

XLVII. ингибитор фосфатазы;

XLVIII. платиновый агент;

XLIX. ингибитор протеинфосфатазы, включая ингибитор РР1 и РР2 и ингибитор тирозинфосфатазы;

L. ингибитор РКС и ингибитор РКС дельта киназы;

LI. ингибитор синтеза полиамина;

LII. ингибитор протеосомы;

LIII. ингибитор РТР1В;

LIV. ингибитор протеинтирозинкиназы, включая ингибитор семейства тирозинкиназы SRC; ингибитор тирозинкиназы Syk и ингибитор тирозинкиназы JAK-2 и/или JAK-3;

LV. ретиноид;

LVI. ингибитор удлинения РНК полимеразы II;

LVII. ингибитор серин/треонинкиназы;

LVIII. ингибитор биосинтеза стерола;

LIX. ингибитор топоизомеразы;

LX. ингибитор тирозинкиназы VEGFR.

Термин "ингибитор аденозинкиназы", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует метаболизм нуклеооснования, нуклеозида, нуклеотида и нуклеиновой кислоты. Пример ингибитора аденозинкиназы включает, но не ограничивается ими, 5-лодотуберцидин, который также известен как 7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-амин, 5-йод-7-β-D-рибофуранозил-(9CI).

Термин "адъювант", как здесь используется, обозначает соединение, которое усиливает связывание 5-FU-TS, а также соединение, которое связывает, понижает или ингибирует щелочную фосфатазу. Примеры адъюванта включают, но не ограничиваются ими, лейковорин и левамизол.

Термин "антагонист коры надпочечников", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует активность коры надпочечников и изменяет периферийный механизм кортикостероидов, что приводит к снижению 17-гидроксикортикостероидов. Пример антагониста коры надпочечников включает, но не ограничивается им, митотан.

Термин " ингибитор пути АКТ", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует клеточную пролиферацию. Akt, также известный как протеинкиназа В (РКВ), серин/треонинкиназа, является основным ферментом в некоторых путях передачи сигнала, участвующих в диабете. Принципиальной ролью Akt в клетке является облегчение опосредованного фактором роста клеточного выживания и блокирование апоптозной гибели клеток. Мишень ингибитора пути АКТ включает, но не ограничивается им, Pi3K/AKT. Примеры ингибитора пути АКТ, включают, но не ограничиваются ими, дегуелин, который также известен как 3Н-бис[1]бензопирано[3,4-b:6',5'-е]пиран-7(7аН)-он, 13, 13а-дигидро-9,10-диметокси-3,3-диметил-, (7aS, 13aS)-(9Cl), и трцирибин, также известный как 1,4,5,6,8-пентаазааценафтилен-3-амин, 1,5-дигидро-5-метил-1-β-D-рибофуранозил-(9CI).

Термин "алкилирующий агент", как здесь используется, относится к соединению, которое вызывает алкилирование ДНК и приводит к поломке молекул ДНК, а также к перекрестному сшиванию двойной цепочки, тем самым препятствуя репликации ДНК и транскрипции РНК. Примеры алкилирующего агента включают, но не ограничиваются ими, хлорамбуцил, циклофосфамид, дакарбазин, ломустин, прокарбазин, тиотепа, мелфалан, темозоломид (TEMODAR), кармустин, ифосфамид, митомицин, алтретамин, бусульфан, гидрохлорид махлорэтамина, нитрозомочевина (BCNU или глиадель), стрептозоцин и эстрамустин. Циклофосфамид может вводиться, например, в производимой форме, например, под товарным знаком CYCLOSTIN; и ифосфамид как HOLOXAN.

Термин "ингибитор ангиогенеза", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует образование новых кровеносных сосудов. Мишени ингибитора ангиогенеза включают, но не ограничиваются ими, метионинаминопептидаза-2 (MetAP-2), макрофаговый воспалительный белок-1 (MIP-1 alpha), CCL5, TGF-бета, липоксигеназа, циклооксигеназа и топоизомераза. Косвенные мишени ингибитора ангиогенеза включают, но не ограничиваются ими, р21, р53, CDK2 и синтез коллагена. Примеры ингибитора ангиогенеза включают, но не ограничиваются ими, фумагиллин, известный как 2,4,6,8-декатетраендионовая кислота, моно[(3R,4S,5S,6R)-5-метокси-4-[(2R,3R)-2-метил-3-(3-метил-2-бутенил)оксиранил]-1-оксаспиро[2.5]окт-6-иловый] эфир, (2Е,4Е,6Е,8Е)-(9CI); шиконин, известный как 1,4-нафталендион, 5,8-дигидрокси-2-[(1R)-1-гидрокси-4-метил-3-пентенил]-(9CI); траниласт, также известный как бензойная кислота, 2-[[3-(3,4-диметоксифенил)-1-оксо-2-пропенил]амино]-(9CI); урсоловая кислота; сурамин и талидомид.

Термин "антиандроген", как здесь используется, относится к соединению, которое блокирует действие андрогенов надпочечников и яичек, которое стимулирует рост нормальных и злокачественных тканей простаты. Примеры антиандрогена включают, но не ограничиваются ими, нилутамид; бикалутамид (CASODEX), который может быть получен, например, как описано в патенте US 4636505.

Термин "антиэстроген", как здесь используется, относится к соединению, которое антагонизирует действие эстрогенов на уровне рецептора эстрогена. Примеры антиэстрогена включают, но не ограничиваются ими, торемифен; летрозол; тестолактон; анастрозол; бикалутамид; флутамид; цитрат тамоксифена; экземестан; фулестрант; тамоксифен; фулвестрант; ралоксифен и гидрохлорид ралоксифена. Тамоксифен может вводиться в выпускаемой форме, например, NOLVADEX; гидрохлорид ралоксифена выпускается под товарным знаком EVISTA. Фулвестрант может быть получен, как описано в патенте US 4659516, и выпускается под товарным знаком FASLODEX. Комбинация по изобретению, включающая фармацевтически активный агент, который представляет собой антиэстроген, конкретно полезна для лечения опухолей, позитивных к эстрогеновому рецептору, например опухолей груди.

Термин "агент против гиперкальциемии", как здесь используется, обозначает соединения, которые используются для лечения гиперкальциемии. Примеры агента против гиперкальциемии включают, но не ограничиваются ими, гидрат нитрата галлия (III) и памидронат динатрия.

Термин "антиметаболит", как здесь используется, относится к соединению, которое ингибирует или нарушает синтез ДНК, что приводит к гибели клеток. Примеры антиметаболита включают, но не ограничиваются ими, 6-меркаптопурин; цитарабин; флударабин; флексуридин; фторурацил; капецитабин; ралтитрексед; метотрексат; кладрибин; гемцитабин; гидрохлорид гемцитабина; тиогуанин; гидроксимочевину; деметилирующие ДНК агенты, такие как 5-азацитидин и децитабин; эдатрексат; и антагонисты фолиевой кислоты, такой как, но не ограничиваясь им, пеметрексед. Капецитабин может вводиться, например, в выпускаемой форме, например, под товарным знаком XELODA; гемцитабин как GEMZAR.

Термин "индуктор апоптоза", как здесь используется, относится к соединению, которое индуцирует ряд нормальных реакций в клетках, что приводит к их гибели. Индуктор апоптоза настоящего изобретения может селективно индуцировать Х-связанный ингибитор апоптоза белка XIAP млекопитающего. Индуктор апоптоза настоящего изобретения может дисрегулировать BCL-xL. Примеры индуктора апоптоза включают, но не ограничиваются ими, этанол, 2-[[3-(2,3-дихлорфенокси)пропил]амино]-(9CI); гамбогиевую кислоту; эмбелин, также известный как 2,5-циклогексадиен-1,4-дион, 2,5-дигидрокси-3-ундецил-(9CI) и триоксид арсения.

Термин "ингибитор киназы аврора", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует последние стадии клеточного цикла от точки G2/M всего пути вплоть до митотической точки и позднего митоза. Пример ингибитора киназы аврора включает, но не ограничивается им, бинуклеин 2, также известный как метанимидамид, N'-[l-(3-хлор-4-фторфенил)-4-циано-1Н-пиразол-5-ил]-N,N-диметил-(9CI).

Термин "ингибитор тирозинкиназы Брутона (ВТК)", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует развитие В-клеток человека и мыши. Пример ингибитора ВТК включает, но не ограничивается им, терревую кислоту.

Термин "ингибитор кальциневрина", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует Т-клеточную активацию. Мишень ингибитора кальциневрина включает протеинфосфатазу 2В. Примеры ингибитора кальциневрина включают, но не ограничиваются ими, циперметрин, также известный как циклопропанкарбоновая кислота, 3-(2,2-дихлорэтенил)-2,2-диметилциано(3-феноксифенил)метиловый эфир (9CI); дельтаметрин, также известный как циклопропанкарбоновая кислота, 3-(2,2-дибромэтенил)-2,2-диметил-(S)-циано(3-феноксифенил)метиловый эфир, (1R,3R)-(9CI); фенвалерат, также известный как бензолуксусная кислота, 4-хлор-α-(1-метилэтил)-, циано(3-феноксифенил)метиловый эфир (9CI), и тирфостин 8.

Термин "ингибитор киназы СаМ II", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует киназу СаМ. Киназа СаМ составляет семейство структурно близких ферментов, которые включают киназу фосфорилазу, киназу легкой цепи миозина и киназы СаМ I-IV. Киназа СаМ II, один из хорошо исследованных многофункциональных ферментов, обнаружен в высоких концентрациях в неврональных синапсах, и в некоторых областях головного мозга он может составлять до 2% общего содержания белка. Активация киназы СаМ II связана с памятью и процессами обучения в нервной системе позвоночных. Мишени ингибитора киназы СаМ II включают киназу СаМ II. Примеры ингибитора киназы СаМ II включают, но не ограничиваются ими, 5-изохинолинсульфоновую кислоту, 4-[(2S)-2-[(5-изохинолинилсульфонил)метиламино]-3-оксо-3-(4-фенил-1-пиперазинил)пропил]фениловый эфир (9CI) и бензолсульфонамид, N-[2-[[[3-(4-хлорфенил)-2-пропенил]метил]амино]метил]фенил]-N-(2-гидроксиэтил)-4-метокси-(9CI).

Термин "ингибитор тирозинфосфатазы CD45", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует дефосфорилирование регулирующих pTyr остатков в Src-семействе протеинтирозинкиназ, которые служат для лечения различных воспалительных и иммунных нарушений. Пример ингибитора тирозинфосфатазы CD45 включает, но не ограничивается им, фосфоновую кислоту, [[2-(4-бромфенокси)-5-нитрофенил]гидроксиметил]-(9CI).

Термин "ингибитор фосфатазы CDC25", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует сверхэкспрессию дефосфорилатциклин-зависимых киназ в опухолях. Пример ингибитора фосфатазы CDC25 включает 1,4-нафталендион, 2,3-бис[(2-гидроксиэтил)тио]-(9CI).

Термин "ингибитор киназы СНК", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует сверхэкспрессию антиапоптозного белка Bcl-2. Мишенями ингибитора киназы CHK являются CHK1 и/или CHK2. Пример ингибитора киназы CHK включает, но не ограничивается им, дебромгимениалдизин.

Примеры "контролирующего агента для регулирования генистеина, оломуцина и/или тирфостинов" включают, но не ограничиваются ими, дайдзеин, также известный как 4Н-1-бензопиран-4-он, 7-гидрокси-3-(4-гидроксифенил)-(9CI); изооломоуцин и тирфостин 1.

Термин "ингибитор циклооксигеназы", как здесь используется, включает, но не ограничивается им, например, ингибиторы Сох-2. Термин "ингибитор СОХ-2", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует фермент сох-2 (циклооксигеназа-2). Примеры ингибитора СОХ-2, включают, но не ограничиваются ими, 1H-индол-3-ацетамид, 1-(4-хлорбензоил)-5-метокси-2-метил-N-(2-фенилэтил)-(9CI); 5-алкилзамещенную 2-ариламинофенилуксусную кислоту и ее производные, такие как целекоксиб (CELEBREX), рофекоксиб (VIOXX), эторикоксиб, валдекоксиб или 5-алкил-2-ариламинофенилуксусная кислота, например 5-метил-2-(2'-хлор-6'-фторанилино)фенилуксусная кислота, лумиракоксиб и целекоксиб.

Термин "ингибитор киназы cRAF", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует сверхрегулирование Е-селектина и васкулярной адгезионной молекулы-1, индуцируемой TNF. Киназы Raf играют важную роль в качестве внеклеточных сигнал-регулирующих киназ в клеточной дифференциации, пролиферации и апоптозе. Мишень ингибитора киназы cRAF включает, но не ограничивается, RAF1. Примеры ингибитора киназы cRAF включают, но не ограничиваются ими, 3-(3,5-дибром-4-гидроксибензилиден)-5-йод-1,3-дигидроиндол-2-он и бензамид, 3-(диметиламино)-N[[3-[(4-гидроксибензоил)амино]-4-метилфенил]-(9CI).

Термин "ингибитор циклин-зависимой киназы", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует циклин-зависимую киназу, которая играет роль в регулировании клеточного цикла млекопитающего. Прогрессия клеточного цикла регулируется рядом последовательных реакций, которые включают активацию и последующую инактивацию циклин-зависимых киназ (Cdk) и циклинов. Cdk представляют собой группу серин/треонинкиназ, которые образуют активные гетеродимерные комплексы путем связывания с их регулирующими субъединицами, циклинами. Примеры мишеней ингибитора циклин-зависимой киназы включают, но не ограничиваются ими, CDK, AHR, CDK1, CDK2, CDK5, CDK4/6, GSK3beta и ERK. Примеры ингибитора циклин-зависимой киназы включают, но не ограничиваются ими, N9-изопропилоломоуцин; оломоуцин; пурваланол В, также известный как бензойная кислота, 2-хлор-4-[[2-[[(1H)-1-(гидроксиметил)-2-метилпропил]амино]-9-(1-метилэтил)-9Н-пурин-6-ил]амино]-(9CI); роасковитин; индирубин, также известный как 2Н-индол-2-он, 3-(1,3-дигидро-3-оксо-2Н-индол-2-илиден)-1,3-дигидро-(9CI); кенпауллон, также известный как индоло[3,2-d][1]бензазепин-6(5Н)-он, 9-бром-7,12-дигидро-(9CI); пурваланол А, также известный как 1-бутанол, 2-[[6-[(3-хлорфенил)амино]-9-(1-метилэтил)-9Н-пурин-2-ил]амино]-3-метил-(2R)-(9CI) и индирубин-3'-монооксим.

Термин "ингибитор цистеинпротеазы", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует цистеинпротеазу, которая играет существенную роль в клеточном перевороте и апоптозе млекопитающего. Пример ингибитора цистеинпротеазы включает, но не ограничивается им, 4-морфолинкарбоксамид, N-[-[(1S)-3-фтор-2-оксо-1-(2-фенилэтил)пропил]амино]-2-оксо-1-(фенилметил)этил]-(9CI).

Термин "интеркалятор ДНК", как здесь используется, относится к соединению, которое связывается с ДНК и ингибирует ДНК, РНК и синтез белка. Примеры интеркалятора ДНК включают, но не ограничиваются ими, пликамицин и дактиномицин.

Термин "разрушитель цепи ДНК", как здесь используется, относится к соединению, которое вызывает расщепление цепи ДНК и приводит к ингибированию синтеза ДНК, ингибированию РНК и синтеза белка. Пример разрушителя цепи ДНК включает, но не ограничивается им, блеомицин.

Термин "ингибитор лигазы Е3", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует лигазу Е3, которая ингибирует перенос цепей убихитина в белках, помечая их для дегидратации в протеасоме. Пример ингибитора лигазы Е3 включает, но не ограничивается им, N-((3,3,3-трифтор-2-трифторметил)пропионил)сульфаниламид.

Термин "эндокринный гормон", как здесь используется, относится к соединению, которое, действуя главным образом на питуитарную железу, вызывает подавление гормонов у особей мужского пола, результирующим эффектом является снижение тестостерона до уровней кастрации. У особей женского пола ингибируется синтез в яичниках эстрогена и андрогена. Пример эндокринного гормона включает, но не ограничивается им, леупролид и ацетат мегестрола.

Термин "соединения, связывающие, понижающие или ингибирующие активность семейства эпидермального фактора роста", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует активность рецепторных тирозинкиназ семейства эпидермального фактора роста (EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4 как гомо- или гетеродимеры), такие как соединения, которые связывают, понижают или ингибируют активность семейства рецептора эпидермального фактора роста, особенно соединения, белки или антитела, которые ингибируют члены семейства рецептора тирозинкиназы EGF, например рецептора EGF, ErbB2, ErbB3 и ErbB4, или связываются с EGF или EGF-родственными лигандами, и представляют собой конкретно соединения, белки или моноклональные антитела, в общем и конкретно описанные в международной заявке WO 97/02266, например соединения из патентов ЕР 0564409, WO 99/03854, ЕР 0520722, ЕР 0566226, ЕР 0787722, ЕР 0837063, US 5747498, WO 98/10767, WO 97/30034, WO 97/49688, WO 97/38983 и особенно WO 96/30347, например соединение, известное как CP 358774, WO 96/33980, например соединение ZD 1839; и WO 95/03283, например соединение ZM 105180, например трастузумаб (HERCEPTIN^®), цетуксимаб, иресса, OSI-774, CI-1033, EKB-569, GW-2016, Е1,1, Е2,4, Е2,5, Е6,2, Е6,4, Е2,11, Е6,3 или Е7,6,3, и 7Н-пирроло[2,3-d]пиримидиновые производные, которые описаны в международной заявке WO 03/013541, эрлотиниб и гефитиниб. Эрлотиниб может вводиться в выпускаемой форме, например, под товарным знаком TARCEVA, и гефитиниб как IRESSA, человеческие моноклональные антитела против рецептора эпидермального фактора роста, включая ABX-EGFR. Мишени ингибитора киназы EGFR включают, но не ограничиваются ими, гуанилинциклазу (GC-C) и HER2. Другие примеры ингибитора киназы EGFR включают, но не ограничиваются ими, тирфостин 23, тирфостин 25, тирфостин 47, тирфостин 51 и тирфостин AG 825. Мишени ингибитора тирозинкиназы EGFR включают EGFR, РТК и тубулин. Другие примеры ингибитора тирозинкиназы EGFR включают, но не ограничиваются ими, 2-пропенамид, 2-циано-3-(3,4-дигидроксифенил)-N-фенил-(2Е)-(9CI); тирфостин Ag 1478; лавендустин А и 3-пиридинацетонитрил, α-[(3,5-дихлорфенил)метилен]-(αZ)-(9CI). Пример ингибитора тирозинкиназы EGFR, PDGFR включает, но не ограничивается им, тирфостин 46.

Термин "ингибитор фарнезилтрансферазы", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует белок Ras, который является обычно ненормально активным при раке. Мишень ингибитора фарнезилтрансферазы включает, но не ограничивается им, RAS. Примеры ингибитора фарнезилтрансферазы включают, но не ограничиваются ими, а-гидроксифарнезилфосфоновую кислоту; бутановую кислоту, 2-[[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-амино-3-меркаптопропил]амино]-3-метилпентил]окси]-1-оксо-3-фенилпропил]амино]-4-(метилсульфонил)-1-метилэтиловый эфир (2S)-(9cl) и манумицин А.

Термин "ингибитор киназы Flk-1”, как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует активность Flk-1 тирозинкиназы. Мишень ингибитора киназы Flk-1 включает, но не ограничивается им, KDR. Пример ингибитора киназы Flk-1 включает, но не ограничивается им, 2-пропенамид, 2-циано-3-[4-гидрокси-3,5-бис(1-метилэтил)фенил]-N-(3-фенилпропил)-(2Е)-(9ClI).

Термин "ингибитор гликогенсинтазакиназы-3 (GSK3)”, как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует гликогенсинтазакиназу-3 (GSK3). Гликогенсинтазакиназа-3 (GSK-3; тау-протеинкиназа I), высококонсервативная, повсеместно экспрессируемая серин/треонинпротеинкиназа, участвует в каскадах передачи сигнала множественных клеточных процессов. Это протеинкиназа, которая, как было показано, участвует в регулировании различных клеточных функций, включая синтез белка, клеточную пролиферацию, клеточную дифференциацию, микротубулярную сборку/разборку и апоптоз. Пример ингибитора GSK3 включает, но не ограничивается им, индирубин-3'-монооксим.

Термин "ингибитор гистондеацетилазы (HDAC)", как здесь используется, относится к соединению, которое ингибирует гистондеацетилазу и которое обладает антипролиферативной активностью. Он включает, но не ограничивается им, соединения, описанные в международной заявке WO 02/22577, особенно N-гидрокси-3-[4-[[(2-гидроксиэтил)[2-(1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамид и N-гидрокси-3-[4-[[[2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамид и их фармацевтически приемлемые соли. Он также включает субероиланилидгидроксамовую кислоту (SAHA); пиридин-3-илметиловый эфир [4-(2-аминофенилкарбамоил)бензил]карбаминовой кислоты и ее производные; бутановую кислоту, пироксамид, трихостатин А, оксамфлатин, апицидин, депсипептид; депудецин и трапоксин. Другие примеры включают депудецин; НС токсин, также известный как цикло[L-аланил-D-аланил-(αS,2S)-α-амино-η-оксооксираноктаноил-D-пролил] (9CI); фенилбутират натрия, субероил бис-гидроксамовая кислота и трихостатин А.

Термин "ингибитор HSP90", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует внутреннюю активность АТФазы HSP90; разрушает, связывает, понижает или ингибирует белки HSP90 через убихитинпротеосомы. Потенциальные косвенные мишени ингибитора HSP90 включают FLT3, BCR-ABL, CHK1, CYP3A5*3 и/или NQ01*2. Соединения связывающие, понижающие или ингибирующие внутреннюю активность АТФазы HSP90 особенно представляют собой соединения, белки или антитела, которые ингибируют активность АТФазы HSP90, например 17-аллиламино,17-дезметоксигелданамицин (17AAG), производное гелданамицина; другие аналогичные гелданамицину соединения; радицикол и ингибиторы HDAC. Другие примеры ингибитора HSP90 включают гелданамицин,17-дезметокси-17-(2-пропениламино)-(9CI) и гелданамицин.

Термин "ингибитор I-каппа В-альфа киназы (IKK)", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует NF-каппаВ. Пример ингибитора IKK включает, но не ограничивается им, 2-пропеннитрил, 3-[(4-метилфенил)сульфонил]-(2Е)-(9CI).

Термин "ингибитор тирозинкиназы рецептора инсулина", как здесь используется, относится к соединению, которое модулирует активности фосфатидилинозитол 3-киназы, микротубулярного белка и киназ S6. Пример ингибитора тирозинкиназы рецептора инсулина включает, но не ограничивается им, гидроксил-2-нафталенилметилфосфоновую кислоту.

Термин "ингибитор киназы c-Jun N-концевой киназы (JNK)", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует Jun N-терминальную киназу. Jun N-терминальная киназа (JNK), сериннаправленная протеинкиназа, участвует в фосфорилировании и активации с-Jun и ATF2 и играет существенную роль в метаболизме, росте, клеточной дифференциации и апоптозе. Мишень для ингибитора киназы JNK включает, но не ограничивается им, DNMT. Примеры ингибитора киназы JNK включают, но не ограничиваются ими, пиразолантрон и/или эпигаллокатехингаллат.

Термин "ингибитор киназы митогенактивированного белка (MAP)", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует митогенактивированный белок. Киназы митогенактивированного белка (MAP) представляют собой группу белковых серин/треонинкиназ, которые активируются в ответ на различное внеклеточное стимулирование и медиируют передачу сигнала от клеточной поверхности к ядру. Они регулируют некоторые физиологические и патологические клеточные феномены, включая воспаление, апоптозную гибель клеток, онкогенную трансформацию, инвазию опухолевых клеток и метастазов. Пример ингибитора киназы MAP включает, но не ограничивается им, бензолсульфонамид, N-[2-[[[3-(4-хлорфенил)-2-пропенил]метил]амино]метил]фенил]-N-(2-гидроксиэтил)-4-метокси-(9CI).

Термин "ингибитор MDM2", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует взаимодействие MDM2 и подавляющего опухоль вещества р53. Пример ингибитора MDM2 включает, но не ограничивается им, транс-4-йод, 4'-боранилхалкон.

Термин "ингибитор MEK", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует активность киназы MAP, MEK. Мишень ингибитора МЕК включает, но не ограничивается им, ERK. Косвенная мишень ингибитора МЕК включает, но не ограничивается им, циклин D1. Пример ингибитора МЕК включает, но не ограничивается им, бутандинитрил, бис[амино[2-аминофенил)тио]метилен]-(9CI).

Термин "ингибитор ММР", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует класс фермента протеазы, который селективно катализирует гидролиз полипептидных связей, включая ферменты ММР-2 и ММР-9, которые участвуют в промотировании потери структуры ткани вокруг опухолей и облегчает рост опухоли, ангиогенез и метастазов. Мишень ингибитора ММР включает, но не ограничивается ею, полипептиддеформилазу. Пример ингибитора ММР включают, но не ограничиваются ими, актинонин, также известный как бутандиамид, N4-гидрокси-N1-[(1S)-1-[[(2S)-2-(гидроксиметил)-1-пирролидинил]карбонил]-2-метилпропил]-2-пентил-(2R)-(9CI); эпигаллокатехингаллат; коллагеновые ингибиторы, содержащие пептидомиметики и непептидомиметики; производные тетрациклина, например, гидроксаматный ингибитор пептидомиметика батимастат и его перорально-доступный аналог маримастат, приномастат, метастат, неовастат, таномастат, ТАА211, MMI270B или AAJ996.

Термин "ингибитор тирозинкиназы NGFR", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует зависимое от фактора роста нерва p140^c-trk фосфорилирование тирозина. Мишени ингибитора тирозинкиназы NGFR включают, но не ограничиваются ими, HER2, FLK1, FAK, TrkA и/или TrkC. Косвенная мишень ингибирует экспрессию RAF1. Пример ингибитора тирозинкиназы NGFR включает, но не ограничивается им, тирфостин AG 879.

Термин "ингибитор киназы р38 MAP", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует р38-МАРК, которая является членом семейства МАРК. Членом семейства МАРК является серин/треонинкиназа, активируемая фосфорилированием остатков тирозина и треонина. Эта киназа фосфорилируется и активируется многочисленными клеточными стрессами и воспалительными стимулированиями, участвуя в регулировании важных клеточных откликов, таких как апоптоз и воспалительные реакции. Пример ингибитора киназы р38 MAP включает, но не ограничивается им, фенол, 4-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-имидазол-2-ил]-(9CI). Пример ингибитора киназы SAPK2/p38 включает, но не ограничивается им, бензамид, 3-(диметиламино)-N-[3-[(4-гидроксибензоил)амино]-4-метилфенил]-(9CI).

Термин "ингибитор тирозинкиназы р56", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует тирозинкиназу р56, которая является ферментом, который принадлежит к лимфоид-специфичному src семейству тирозинкиназы, критическому для Т-клеточного развития и активации. Мишень ингибитора тирозинкиназы р5б включает, но не ограничивается им, Lck. Lck связан с цитоплазматическими доменами CD4, CD8 и бета-цепью рецептора IL-2, и, как полагают, участвует в ранних стадиях TCR-медиируемой Т-клеточной активации. Примеры ингибитора тирозинкиназы р56 включают, но не ограничиваются ими, дамнакантал, также известный как 2-антраценкарбоксальдегид, 9,10-дигидро-3-гидрокси-1 метокси-9,10-диоксо-(9CI) и/или тирфостин 46.

Термин "ингибитор тирозинкиназы PDGFR", как здесь используется, относится к соединениям, связывающим, понижающим или ингибирующим активность C-kit рецепторных тирозинкиназ (члена семейства PDGFR), таким как соединения, которые связывают, понижают или ингибируют активность семейства c-Kit рецепторной тирозинкиназы, особенно соединениям, которые ингибируют рецептор c-Kit. PDGF играет центральную роль в регулировании клеточной пролиферации, хемотаксисе и выживаемости в нормальных клетках, а также в различных заболеваниях, таких как рак, атеросклероз и фиброзная болезнь. Семейство PDGF состоит из димерных изоформ (PDGF-AA, PDGF-BB, PDGF-AB, PDGF-CC и PDGF-DD), которые оказывают свои клеточные действия путем дифференциального связывания с двумя рецепторными тирозинкиназами. PDGFR-α и PDGFR-β имеют молекулярные массы ~170 и 180 кДа соответственно. Примеры мишеней ингибитора тирозинкиназы PDGFR включают, но не ограничиваются ими, PDGFR, FLT3 и/или c-KIT. Примеры ингибитора тирозинкиназы PDGFR включают, но не ограничиваются ими, тирфостин AG 1296; тирфостин 9; 1,3-бутадиен-1,1,3-трикарбонитрил, 2-амино-4-(1H-индол-5-ил)-(9CI); иматиниб и IRESSA.

Термин "ингибитор фосфатидилинозитол 3-киназы", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует 3-киназу PI. Активность PI 3-киназы, как было показано, повышается в ответ на ряд гормональных стимулов и стимулов фактора роста, включая инсулин, тромбоцитарный фактор роста, инсулиноподобный фактор роста, эпидермальный фактор роста, колониестимулирующий фактор и фактор роста гепатоцитов, и участвует в процессах, связанных с клеточным ростом и трансформацией. Пример мишени для ингибитора фосфатидилинозитол 3-киназы включает, но не ограничивается им, Pi3K. Примеры ингибитора фосфатидилинозитол 3-киназы включают, но не ограничиваются ими, вортманнин, также известный как 3Н-фуро[4,3,2-de]индено[4,5-h]-2-бензопиран-3,6,9-трион, 11-(ацетилокси)-1,6b,7,8,9а,10,11,11b-октагидро-1-(метоксиметил)-9a,11b-диметил-(1S,6bR,9aS,11R,11bR)-(9CI); 8-фенил-2-(морфолин-4-ил)хромен-4-он и/или дигидрат кверцетина.

Термин "ингибитор фосфатазы", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует фосфатазу. Фосфатазы удаляют фосфорильную группу и возвращают белок в его первоначальное дефосфорилированное состояние. Следовательно, цикл фосфорилирование - дефосфорилирование может считаться как молекулярный выключатель "вкл-выкл". Примеры ингибитора фосфатазы включают, но не ограничиваются ими, кантаридиновую кислоту; кантаридин и L-лейцинамид, N-[4-(2-карбоксиэтенил)бензоил]глицил-L-α-глутамил-(Е)-(9CI).

Термин "платиновый агент", как здесь используется, относится к соединению, которое содержит платину и ингибирует синтез ДНК путем образования межцепочечного и внутрицепочечного поперечного сшивания молекул ДНК. Примеры платинового агента включают, но не ограничиваются ими, карбоплатин; цисплатин; оксалиплатин; цисплатин; сатраплатин и платиновые агенты, такие как ZD0473. Карбоплатин может вводиться, например, в выпускаемой форме, например, под товарным знаком CARBOPLAT; и оксалиплатин как ELOXATIN.

Термин "ингибитор протеинфосфатазы", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует протеинфосфатазу. Термин "ингибитор РР1 или РР2", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует протеинфосфатазы Ser/Thr. Фосфатазы типа I, которые включают РР1, могут ингибироваться двумя устойчивыми к нагреву белками, известными как ингибитор-1 (I-1) и ингибитор-2 (I-2). Они предпочтительно дефосфорилируют α-субъединицу фосфорилазакиназы. Фосфатазы типа II подразделяются на самостоятельно активные (РР2А), Са²⁺ - зависимые (РР2В) и Mg²⁺ - зависимые (РР2С) классы фосфатаз. Примеры ингибитора РР1 и РР2А включают, но не ограничиваются ими, кантаридиновую кислоту и/или кантаридин. Термин "ингибитор тирозинфосфатазы", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует тирозинфосфатазу. Протеинтирозинфосфатазы (РТР) относительно недавно были причислены к семейству фосфатаз. Они удаляют фосфатные группы из фосфорилированных тирозиновых остатков белка. РТР проявляют различные структурные особенности и играют важные роли в регулировании клеточной пролиферации, дифференциации, клеточной адгезии и подвижности, и цитоскелетной функции. Примеры мишеней ингибитора тирозинфосфатазы включают, но не ограничиваются ими, щелочную фосфатазу (ALP), гепараназу, РТРазу и/или простатическую кислотную фосфатазу. Примеры ингибитора тирозинфосфатазы включают, но не ограничиваются ими, оксалат L-P-бромтетрамизола; 2(5Н)-фуранон,4-гидрокси-5-(гидроксиметил)-3-(1-оксогексадецил)-(5R)-(9CI) и бензилфосфоновую кислоту.

Термин "ингибитор PKC", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует протеинкиназу С, а также ее изозимы. Протеинкиназа С (PKC), повсеместный фосфолипид-зависимый фермент, участвует в передаче сигнала, связанной с клеточной пролиферацией, дифференциацией и апоптозом. Примеры мишени ингибитора PKC включают, но не ограничиваются ими, МАРК и/или NF-каппаВ. Примеры ингибитора PKC включают, но не ограничиваются ими, 1-Н-пирроло-2,5-дион,3-[1-[3-(диметиламино)пропил]-1Н-индол-3-ил]-4-(1Н-индол-3-ил)-(9CI); бисиндолилмалеимид IX; сфингозин, также известный как 4-октадецен-1,3-диол, 2-амино-(2S,3R,4E)-(9CI); стауроспорин, также известный как 9,13-эпокси-1H,9H-дииндоло[1,2,3-gh:3',2',1'-lm]пирроло[3,4-j][1,7]бензодиазонин-1-он, 2,3,10,11,12,13-гексагидро-10-метокси-9-метил-11-(метиламино)-(9S,10R,11R,13R)-(9CI); тирфостин 51 и гиперицин, также известный как фенантро [1,10,9,8-opqra]перилен-7,14-дион, 1,3,4,6,8,13-гексагидрокси-10,11-диметил-, стереоизомер (6CI, 7CI, 8CI, 9CI).

Термин "ингибитор PKC киназы дельта", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует дельта-изозимы PKC. Дельта-изозим представляет собой обычные изозимы РКС и является Са²⁺ - зависимым. Пример ингибитора PKC киназы дельта включает, но не ограничивается им, роттлерин, также известный как 2-пропен-1-он, 1-[6-[(3-ацетил-2,4,6-тригидрокси-5-метилфенил)метил]-5,7-дигидрокси-2,2-диметил-2Н-1-бензопиран-8-ил]-3-фенил-, (2Е)-(9CI).

Термин "ингибитор синтеза полиамина", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует полиамины спермидина. Полиамины спермидина и спермина являются жизненно важными для клеточной пролиферации, хотя их точный механизм действия является неясным. Опухолевые клетки изменяют полиаминовый гомеостаз в ответ на повышенную активность биосинтетических ферментов и повышенные уровни полиамина. Примеры ингибитора синтеза полиамина включают, но не ограничиваются ими, DMFO, также известный как (-)-2-дифторметилорнитин; N1, N12-диэтилспермин 4HCl.

Термин "ингибитор протеосомы", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует протеасому. Примеры мишеней ингибитора протеосомы включают, но не ограничиваются ими, O(2)(-)-генерирующая NADPH оксидаза, NF-каппаВ и/или фарнезилтрансфераза, геранилтрансфераза I. Примеры ингибитора протеосомы включают, но не ограничиваются ими, аклациномицин А; глиотоксин; PS-341; MLN 341; бортезомиб или велкад.

Термин "ингибитор РТР1В", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует РТР1В, ингибитор протеинтирозинкиназы. Пример ингибитора РТР1В включает, но не ограничивается им, L-лейцинамид, N-[4-(2-карбоксиэтенил)бензоил]глицил-L-α-глутамил-(Е)-(9CI).

Термин "ингибитор протеинтирозинкиназы", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует протеинтирозинкиназы. Протеинтирозинкиназы (РТК) играют ключевую роль в регулировании клеточной пролиферации, дифференциации, метаболизме, миграции и выживаемости. Они классифицируются как рецепторные РТК и нерецепторные РТК. Рецепторные РТК содержат одиночную полипептидную цепь с трансмембранным сегментом. Внеклеточный конец этого сегмента содержит лиганд-связывающий домен с высоким сродством, тогда как цитоплазматический конец содержит каталитическое ядро и регулирующие последовательности. Примеры мишеней ингибитора тирозинкиназы включают, но не ограничиваются ими, ERK1, ERK2, тирозинкиназу Брутона (Btk), JAK2, ERK ½, PDGFR и/или FLT3. Примеры косвенных мишеней включают, но не ограничиваются ими, TNFальфа, NO, PGE2, IRAK, iNOS, ICAM-1 и/или Е-селектин. Примеры ингибитора тирозинкиназы включают, но не ограничиваются ими, тирфостин AG 126; тирфостин Ag 1288; тирфостин Ag 1295; гелданамицин и генистеин.

Нерецепторные тирозинкиназы включают члены семейств Src, Tec, JAK, Fes, Abl, FAK, Csk и Syk. Они локализованы в цитоплазме, а также в ядре. Они проявляют особое регулирование киназы, фосфорилирование и функционирование субстрата. Нарушенное регулирование этих киназ также связано с некоторыми заболеваниями человека.

Термин "ингибитор семейства тирозинкиназы SRC", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует SRC. Примеры ингибитора семейства тирозинкиназы SRC включают, но не ограничиваются ими, РР1, также известный как 1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин, 1-(1,1-диметилэтил)-3-(1-нафталенил)-(9CI); и РР2, также известный как 1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин, 3-(4-хлорфенил)-1-(1,1 -диметилэтил)-(9CI).

Термин "ингибитор тирозинкиназы Syk", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует Syk. Примеры мишеней для ингибитора тирозинкиназы Syk включают, но не ограничиваются ими, Syk, STAT3 и/или STAT5. Пример ингибитора тирозинкиназы Syk включает, но не ограничивается им, пицеатаннол, также известный как 1,2-бензолдиол, 4-[(1Е)-2-(3,5-дигидроксифенил)этенил]-(9CI).

Термин "ингибитор тирозинкиназы Janus (JAK-2 и/или JAK-3)", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует тирозинкиназу janus. Ингибитором тирозинкиназы Janus являются антилейкемические агенты с антитромботическими, антиаллергическими и иммунодепрессантными свойствами. Мишени ингибитора тирозинкиназы JAK-2 и/или JAK-3 включают, но не ограничиваются ими, JAK2, JAK3, STAT3. Косвенная мишень ингибитора тирозинкиназы JAK-2 и/или JAK-3 включает, но не ограничивается им, CDK2. Примеры ингибитора тирозинкиназы JAK-2 и/или JAK-3 включают, но не ограничиваются ими, тирфостин AG 490 и 2-нафтилвинилкетон.

Термин "ретиноид", как здесь используется, относится к соединениям, которые связывают, понижают или ингибируют ретиноид-зависимые рецепторы. Примеры включают, но не ограничиваются ими, изотретиноин и третиноин.

Термин "ингибитор удлинения РНК полимеразы II", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает или ингибирует стимулируемую инсулином ядерную и цитозольную киназу p70S6 в клетках СНО; связывает, понижает или ингибирует транскрипцию РНК полимеразы II, которая может зависеть от казеинкиназы II; и связывает, понижает или ингибирует распад зародышевых везикул в ооцитах теленка. Пример ингибитора удлинения РНК полимеразы II включает, но не ограничивается им, 5,6-дихлор-1-бета-D-рибофуранозилбензимидазол.

Термин "ингибитор серин/треонинкиназы", как здесь используется, относится к соединению, которое ингибирует серин/треонинкиназы. Пример мишени ингибитора серин/треонинкиназы включает, но не ограничивается ею, dsPHK-зависимую протеинкиназу (PKR). Примеры косвенных мишеней ингибитора серин/треонинкиназы включают, но не ограничиваются ими, МСР-1, NF-каппаВ, elF2альфа, СОХ2, RANTES, IL8, CYP2A5, IGF-1, CYP2B1, CYP2B2, CYP2H1, ALAS-1, HIF-1, эритропоэтин и/или CYP1A1. Пример ингибитора серин/треонинкиназы включает, но не ограничивается им, 2-аминопурин, также известный как 1H-пурин-2-амин (9CI).

Термин "ингибитор биосинтеза стерола", как здесь используется, относится к соединению, которое ингибирует биосинтез стеролов, таких как холестерин. Примеры мишеней для ингибитора биосинтеза стерола включают, но не ограничиваются ими, скваленэпоксидазу и CYP2D6. Пример ингибитора биосинтеза стерола включает, но не ограничивается им, тербинадин.

Термин "ингибитор топоизомеразы" включает ингибитор топоизомеразы I и ингибитор топоизомеразы II. Примеры ингибитора топоизомеразы I включают, но не ограничиваются ими, топотекан, гиматекан, иринотекан, камптотецин и его аналоги, 9-нитрокамптотецин и макромолекулярный конъюгат камптотецина PNU-166148 (соединение А1 в WO 99/17804); ацетатная соль 10-гидроксикамптотецина; этопозид; гидрохлорид идарубицина; гидрохлорид иринотекана; тенипозид; гидрохлорид топотекана; доксорубицин; гидрохлорид эпирубицина; гидрохлорид митоксантрона и гидрохлорид даунорубицина. Иринотекан может вводиться, например, в выпускаемой форме, например, под товарным знаком CAMPTOSAR. Топотекан может вводиться, например, в выпускаемой форме, например, под товарным знаком HYCAMTIN. Термин "ингибитор топоизомеразы II”, как здесь используется, включает, но не ограничивается ими, антрациклины, такие как доксорубицин, включая липосомальный состав, например, CAELYX, даунорубицин, включая липосомальный состав, например, DAUNOSOME, эпирубицин, идарубицин и неморубицин; антрахиноны митоксантрон и лозоксантрон; и подофиллотоксины этопозид и тенипозид. Этопозид выпускается под товарным знаком ETOPOPHOS; тенипозид выпускается под товарным знаком VM 26-BRISTOL; доксорубицин выпускается под товарным знаком ADRIBLASTIN или ADRIAMYCIN; эпирубицин выпускается под товарным знаком FARMORUBICIN; идарубицин выпускается под товарным знаком ZAVEDOS и митоксантрон выпускается под товарным знаком NOVANTRON.

Термин "ингибитор тирозинкиназы VEGFR", как здесь используется, относится к соединению, которое связывает, понижает и/или ингибирует известные ангиогенные факторы роста и цитокины, участвующие в модулировании нормального и патологического ангиогенеза. Семейство VEGF (VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D) и их соответствующие рецепторные тирозинкиназы [VEGFR-1(Flt-1), VEGFR-2 (Flk-1, KDR) и VEGFR-3 (Flt-4)] играют существенную и важную роль в регулировании множества аспектов ангиогенных и лимфангиогенных процессов. Пример ингибитора тирозинкиназы VEGFR включает, но не ограничивается им, 3-(4-диметиламинобензилиденил)-2-индолинон.

В каждом случае, когда цитируются заявки на патент или научные публикации, конкретно в отношении соответствующих пунктов формулы изобретения, относящихся к соединению, и конечных продуктов рабочих примеров, состава конечных продуктов, фармацевтических составов и пунктов формулы изобретения, они включены в настоящее описание в качестве ссылки на эти публикации. Включены также соответствующие стереоизомеры, а также соответствующие кристаллические модификации, например сольваты и полиморфы, которые здесь описаны. Соединения, использующиеся в качестве активных ингредиентов в описанных здесь комбинациях, могут быть получены и введены, как описано в указанных документах, соответственно.

Структура активных агентов, идентифицируемых кодовыми номерами, генерическими названиями или товарными знаками, могут быть взяты из действующего издания стандартного сборника "The Merck Index" или из баз данных, например, Patents International, например, IMS World Publications, или из публикаций, приведенных выше и далее. Соответствующее их содержание приведено здесь в качестве ссылки.

Следует понимать, что ссылки на компоненты (а) и (б) подразумевают также включение фармацевтически приемлемых солей любого из активных веществ. Если активные вещества, присутствующие в компоненте (а) и/или (б), содержат, например, по крайней мере один основный центр, они могут образовывать кислотные аддитивные соли. Соответствующие кислотные аддитивные соли также могут быть образованы при наличии, при необходимости, дополнительного основного центра. Активные вещества, содержащие кислотную группу, например СООН, могут образовывать соли с основаниями. Активные вещества, присутствующие в компонентах (а) и/или (б), или их фармацевтически приемлемые соли, также могут использоваться в форме гидрата или включают другие растворители, использующиеся для кристаллизации. Эпотилон В является наиболее предпочтительным партнером комбинации (а).

III. Комбинации

Настоящее изобретение относится к комбинации, включающей:

(а) микротубулярный активный агент и

(б) фармацевтически активный агент.

В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации, включающей:

(а) микротубулярный активный агент и

(б) один или несколько фармацевтически активных агентов, выбранных из группы, состоящей из ингибитора аденозинкиназы; адъюванта; антагониста коры надпочечников; ингибитора пути AKT; алкилирующего агента; ингибитора ангиогенеза; антиандрогена; антиэстрогена; агента против гиперкальциемии; антиметаболита; индуктора апоптоза; ингибитора киназы аврора; ингибитора тирозинкиназы Брутона (BTK); ингибитора кальциневрина; ингибитора СаМ киназы II; ингибитора тирозинфосфатазы CD45; ингибитора фосфатазы CDC25; ингибитора киназы CHK; контролирующего агента для регулирования генистеина, оломуцина и/или тирфостинов; ингибитора циклооксигеназы; ингибитора киназы cRAF; ингибитора циклин-зависимой киназы; ингибитора цистеинпротеазы; интеркалятора ДНК; разрушителя цепи ДНК; ингибитора лигазы Е3; эндокринного гормона; соединений, связывающих, понижающих или ингибирующих активность семейства эпидермального фактора роста; ингибитора тирозинкиназы EGFR, PDGFR; ингибитора фарнезилтрансферазы; ингибитора киназы Flk-1; ингибитора гликогенсинтазакиназы-3 (GSK3); ингибитора гистондеацетилазы (HDAC); ингибитора HSP90; ингибитора I-каппа В-альфа киназы (IKK); ингибитора тирозинкиназы рецептора инсулина; ингибитора киназы c-Jun N-концевой киназы (JNK); микротубулярного связывающего агента; ингибитора киназы митогенактивированного белка (MAP); ингибитора MDM2; ингибитора МЕК; ингибитора матричной металлопротеиназы (ММР); ингибитора тирозинкиназы NGFR; ингибитора киназы р38 MAP, включая ингибитор киназы SAPK2/p38; ингибитора тирозинкиназы р56; ингибитора тирозинкиназы PDGFR; ингибитора фосфатидилинозитол 3-киназы; ингибитора фосфатазы; платинового агента; ингибитора протеинфосфатазы, включая ингибитор РР1 и РР2 и ингибитор тирозинфосфатазы; ингибитора РКС и ингибитора киназы PKC дельта; ингибитора синтеза полиамин; ингибитора протеосомы; ингибитора РТР1В; ингибитора протеинтирозинкиназы, включая ингибитор семейства SRC тирозинкиназы; ингибитора тирозинкиназы Syk и ингибитора тирозинкиназы JAK-2 и/или JAK-3; ретиноида; ингибитора удлинения РНК полимеразы II; ингибитора серин/треонинкиназы; ингибитора биосинтеза стерола; ингибитора топоизомеразы и ингибитора тирозинкиназы VEGFR.

В другом предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации, включающей:

(а) микротубулярный активный агент и

(б) один или несколько фармацевтически активных агентов, выбранных из группы, состоящей из 5-йодотуберцидина; лейковорина; левамизола; митотана; дегуелина; трцирибина; хлорамбуцила; циклофосфамида; дакарбазина; ломустина; прокарбазина; тиотепа; мелфалана; темозоломида; кармустина; ифосфамида; митомицина; алтретамина; бусульфана; гидрохлорида махлоретамина; нитрозомочевины; стрептозоцина; эстрамустина; фумагиллина; шиконина; траниласта; урсоловой кислоты; сумарина; талидомида; нилутамида; бикалутамида; торемифена; летрозола; тестолактона; анастрозола; бикалутамида; флутамида; цитрата тамоксифена; экземестана; фулестранта; фулвестранта; ралоксифена; гидрохлорида ралоксифена; гидрата нитрата галлия (III); памидроната динатрия; 6-меркаптопурина; цитарабина; флударабина; флексуридина; фторурацила; капецитабина; ралтитрекседа; метотрексата; кладрибина; гемцитабина; гидрохлорида гемцитабина; тиогуанина; гидроксимочевины; 5-азацитидина; децитабина; эдатрексата; пеметрекседа; этанола, 2-[[3-(2,3-дихлорфенокси)пропил]амино]-(9CI); гамбогиевой кислоты; эмбелина; триоксида арсения; бинуклеина 2; терревой кислоты; циперметрина; делтаметрина; фенвалерата; тирфостина 8; 5-изохинолинсульфоновой кислоты, 4-[(28)-2-[(5-изохинолинилсульфонил)метиламино]-3-оксо-3-(4-фенил-1-пиперазинил)пропил]фенилового эфира (9CI) и бензолсульфонамида, N-[2-[[[3-(4-хлорфенил)-2-пропенил]метил]амино]метил]фенил]-N-(2-гидроксиэтил)-4-метокси-(9CI); фосфоновой кислоты, [[2-(4-бромфенокси)-5-нитрофенил]гидроксиметил]-(9CI); 1,4-нафталендиона, 2,3-бис[(2-гидроэтил)тио]-(9CI); дебромгимениалдизина; дайдзеина; 1Н-индол-3-ацетамида, 1-(4-хлорбензоил)-5-метокси-2-метил-N-(2-фенилэтил)-(9CI); 5-алкилзамещенной 2-ариламинофенилуксусной кислоты и ее производных, таких как целекоксиб (CELEBREX), рофекоксиб (VIOXX), эторикоксиб, валдекоксиб; 5-метил-2-(2'-хлор-6'-фторанилино)фенилуксусной кислоты, лумиракоксиба; целекоксиба; 3-(3,5-дибром-4-гидроксибензилиден)-5-йод-1,3-дигидроиндол-2-она; и бензамида, 3-(диметиламино)-N-[3-[(4-гидроксибензоил)амино]-4-метилфенил]-(9CI); 1H-изопропилоломоуцина; оломоуцина; пурваланола В; роасковитина; индирубина; кенпауллона; пурваланола А; индирубин-3'-монооксима; 4-морфолинкарбоксамида, N-[(1S)-3-фтор-2-оксо-1-(2-фенилэтил)пропил]амино]-2-оксо-1-(фенилметил)этил]-(9CI); пликамицина; дактиномицина; блеомицина; N-((3,3,3-трифтор-2-трифторметил)пропионил)сульфаниламида; леупролида; ацетата мегестрола; трастузумаба; цетуксимаба; пресса; OSI-774; CI-1033; ЕКВ-569; GW-2016; эрлотиниба; гефитиниба; тирфостина 23; тирфостина 25; тирфостина 47; тирфостина 51; тирфостина AG 825; 2-пропенамида, 2-циано-3-(3,4-дигидроксифенил)-N-фенил-(2Е)-(9CI); тирфостина Ag 1478; лавендустина А; 3-пиридинацетонитрила, α-[(3,5-дихлорфенил)метилен]-(αZ)-(9CI); тирфостина 46; α-гидроксифарнезилфосфоновой кислоты; бутановой кислоты, 2-[[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-амино-3-меркаптопропил]амино]-3-метилпентил]окси]-1-оксо-3-фенилпропил]амино]-4-(метилсульфонил)-1-метилэтилового эфира, (2S)-(9СI); манумицина А; 2-пропенамида, 2-циано-3-[4-гидрокси-3,5-бис(1-метилэтил)фенил]-N-(3-фенилпропил)-(2Е)-(9CI); индирубина-3'-монооксима; N-гидрокси-3-[4-[[(2-гидроксиэтил)[2-(1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамида; N-гидрокси-3-[4-[[[2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамида; субероиланилидгидроксамовой кислоты (SAHA); пиридин-3-илметилового эфира [4-(2-аминофенилкарбамоил)бензил]карбаминовой кислоты и ее производных; бутановой кислоты; пироксамида; трихостатина А; оксамфлатина; апицидина; депсипептида; депудецина; трапоксина; цикло[L-аланил-D-аланил-(αS,2S)-α-амино-η-оксооксираноктаноил-О-пролил] (9CI); фенилбутирата натрия, субероилбисгидроксамовой кислоты; трихостатина А; 17-аллиламино, 17-деметоксигелданамицина (17AAG); радицикола; гелданамицина,17-деметокси-17-(2-пропениламино)-(9CI); гелданамицина; 2-пропененитрила, 3-[(4-метилфенил)сульфонил]-(2Е)-(9CI); гидроксил-2-нафталенилметилфосфоновой кислоты; пиразолантрона; галлата эпигаллокатехина; сульфата винбластина; сульфата винкристина; виндезина; винорелбина; доцетакселя; паклитакселя; винорелбина; дискодермолидов; кохицинэпотилонов и их производных; эпотилона В или его производного; бензолсульфонамида, N-[2-[[[3-(4-хлорфенил)-2-пропенил]метил]амино]метил]фенил]-N-(2-гидроксиэтил)-4-метокси-(9CI); транс-4-йода, 4'-боранилхалкона; бутандинитрила, бис[амино[2-аминофенил)тио]метилен]-(9CI); актинонина; галлата эпигаллокатехина; батимастата; маримастата; приномастата; метастата; BMS-2792511; BAY 12-9566; ТАА211; MMI270B; AAJ996; тирфостина AG 879; фенола, 4-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-имидазол-2-ил]-(9CI); бензамида, 3-(диметиламино)-N-[3-[(4-гидроксибензоил)амино]-4-метилфенил]-(9CI); 2-антраценкарбоксальдегид-9,10-дигидро-3-гидрокси-1 метокси-9,10-диоксо-(9CI), тирфостина 46; тирфостина AG 1296; тирфостина 9; 1,3-бутадиен-1,1,3-трикарбонитрила, 2-амино-4-(1Н-индол-5-ил)-(9Cl); иматиниба; IRESSA; вортманнина; дигидрата кверцетина; кантаридиновой кислоты; кантаридина; L-лейцинамида, N-[4-(2-карбоксиэтенил)бензоил]глицил-L-α-глутамил-(Е)-(9Cl); карбоплатина; цисплатина; оксалиплатина; цисплатинума; сатраплатина, ZD0473; L-P-бромтетрамизолоксалата; 2(5Н)-фуранона,4-гидрокси-5-(гидроксиметил)-3-(1-оксогексадецил)-(5R)-(9CI); бензилфосфоновой кислоты; 1-N-пирроло-2,5-диона, 3-[1-[3-(диметиламино)пропил]-1Н-индол-3-ил]-4-(1H-индол-3-ил)-(9CI); бисиндолилмалеимида IX; сфингозина; стауроспорина; тирфостина 51; гиперицина; роттлерина; DMFO; аклациномицина А; глиотоксина; PS-341; MLN 341; бортезомиба; велкада; L-лейцинамида, N-[4-(2-карбоксиэтенил)бензоил]глицил-L-α-глутамил-(Е)-(9CI); тирфостина AG 126; тирфостина Ag 1288; тирфостина Ag 1295; гелданамицина; генистеина; РР1; РР2; 1,2-бензолдиола, 4-[(1Е)-2-(3,5-дигидроксифенил)этенил]-(9CI); тирфостина AG 490; 2-нафтилвинилкетона; изотретиноина; третиноина; 5,6-дихлор-1-бета-D-рибофуранозилбензимидазола; 2-аминопурина; тербинадина; топотекана; гиматекана; иринотекана; 9-нитрокамптотецина; ацетата 10-гидроксикамптотецина; этопозида; гидрохлорида идарубицина; гидрохлорида иринотекана; тенипозида; гидрохлорида топотекана; доксорубицина; гидрохлорида эпирубицина; гидрохлорида митоксантрона; гидрохлорида даунорубицина; доксорубицина; эпирубицина; идарубицина; неморубицина; митоксантрона; лозоксантрона; этопозида; тенипозида и 3-(4-диметиламинобензилиденил)-2-индолинона.

В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации, включающей:

(а) эпотилон В и

(б) один или несколько фармацевтически активных агентов, выбранных из группы, состоящей из ингибитора аденозинкиназы; адъюванта; антагониста коры надпочечников; ингибитора пути АКТ; алкилирующего агента; ингибитора ангиогенеза; антиандрогена; антиэстрогена; агента против гиперкальциемии; антиметаболита; индуктора апоптоза; ингибитора киназы аврора; ингибитора тирозинкиназы Брутона (BTK); ингибитора кальциневрина; ингибитора СаМ киназы II; ингибитора тирозинфосфатазы CD45; ингибитора фосфатазы CDC25; ингибитора киназы СНК; контролирующего агента для регулирования генистеина, оломуцина и/или тирфостинов; ингибитора циклооксигеназы; ингибитора киназы cRAF; ингибитора циклин-зависимой киназы; ингибитора цистеинпротеазы; интеркалятора ДНК; разрушителя цепи ДНК; ингибитора лигазы Е3; эндокринного гормона; соединений, связывающих, понижающих или ингибирующих активность семейства эпидермального фактора роста; ингибитора тирозинкиназы EGFR, PDGFR; ингибитора фарнезилтрансферазы; ингибитора киназы Flk-1; ингибитора гликогенсинтазакиназы-3 (GSK3); ингибитора гистондеацетилазы (HDAC); ингибитора HSP90; ингибитора I-каппа В-альфа киназы (IKK); ингибитора тирозинкиназы рецептора инсулина; ингибитора киназы c-Jun N-концевой киназы (JNK); микротубулярного связывающего агента; ингибитора киназы митогенактивированного белка (MAP); ингибитора MDM2; ингибитора МЕК; ингибитора матричной металлопротеиназы (ММР); ингибитора тирозинкиназы NGFR; ингибитора киназы р38 MAP, включая ингибитор киназы SAPK2/p38; ингибитора тирозинкиназы р56; ингибитора тирозинкиназы PDGFR; ингибитора фосфатидилинозитол 3-киназы; ингибитора фосфатазы; платинового агента; ингибитора протеинфосфатазы, включая ингибитор РР1 и РР2 и ингибитор тирозинфосфатазы; ингибитора РКС и ингибитора киназы РКС дельта; ингибитора синтеза полиамин; ингибитора протеосомы; ингибитора РТР1 В; ингибитора протеинтирозинкиназы, включая ингибитор семейства SRC тирозинкиназы; ингибитора тирозинкиназы Syk и ингибитора тирозинкиназы JAK-2 и/или JAK-3; ретиноида; ингибитора удлинения РНК полимеразы II; ингибитора серин/треонинкиназы; ингибитора биосинтеза стерола; ингибитора топоизомеразы и ингибитора тирозинкиназы VEGFR.

В другом предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации, включающей:

(а) эпотилон В и

(б) один или несколько фармацевтически активных агентов, выбранных из группы, состоящей из 5-йодотуберцидина; лейковорина; левамизола; митотана; дегуелина; трцирибина; хлорамбуцила; циклофосфамида; дакарбазина; ломустина; прокарбазина; тиотепа; мелфалана; темозоломида; кармустина; ифосфамида; митомицина; алтретамина; бусульфана; гидрохлорида махлоретамина; нитрозомочевины; стрептозоцина; эстрамустина; фумагиллина; шиконина; траниласта; урсоловой кислоты; сумарина; талидомида; нилутамида; бикалутамида; торемифена; летрозола; тестолактона; анастрозола; бикалутамида; флутамида; цитрата тамоксифена; экземестана; фулестранта; фулвестранта; ралоксифена; гидрохлорида ралоксифена; гидрата нитрата галлия (III); памидроната динатрия; 6-меркаптопурина; цитарабина; флударабина; флексуридина; фторурацила; капецитабина; ралтитрекседа; метотрексата; кладрибина; гемцитабина; гидрохлорида гемцитабина; тиогуанина; гидроксимочевины; 5-азацитидина; децитабина; эдатрексата; пеметрекседа; этанола, 2-[[3-(2,3-дихлорфенокси)пропил]амино]-(9CI); гамбогиевой кислоты; эмбелина; триоксида арсения; бинуклеина 2; терревой кислоты; циперметрина; делтаметрина; фенвалерата; тирфостина 8; 5-изохинолинсульфоновой кислоты, 4-[(2S)-2-[(5-изохинолинилсульфонил)метиламино]-3-оксо-3-(4-фенил-1-пиперазинил)пропил]фенилового эфира (9CI) и бензолсульфонамида, N-[2-[[[3-(4-хлорфенил)-2-пропенил]метил]амино]метил]фенил]-N-(2-гидроксиэтил)-4-метокси-(9CI); фосфоновой кислоты, [[2-(4-бромфенокси)-5-нитрофенил]гидроксиметил]-(9CI); 1,4-нафталендиона, 2,3-бис[(2-гидроэтил)тио]-(9CI); дебромгимениалдизина; дайдзеина; 1Н-индол-3-ацетамида, 1-(4-хлорбензоил)-5-метокси-2-метил-N-(2-фенилэтил)-(9CI); 5-алкилзамещенной 2-ариламинофенилуксусной кислоты и ее производных, таких как целекоксиб (CELEBREX), рофекоксиб (VIOXX), эторикоксиб, валдекоксиб; 5-метил-2-(2'-хлор-6'-фторанилино)фенилуксусной кислоты, лумиракоксиба; целекоксиба; 3-(3,5-дибром-4-гидроксибензилиден)-5-йод-1,3-дигидроиндол-2-она; и бензамида, 3-(диметиламино)-N-[3-[(4-гидроксибензоил)амино]-4-метилфенил]-(9CI); 1H-изопропилоломоуцина; оломоуцина; пурваланола В; роасковитина; индирубина; кенпауллона; пурваланола А; индирубин-3'-монооксима; 4-морфолинкарбоксамида, N-[(1S)-3-фтор-2-оксо-1-(2-фенилэтил)пропил]амино]-2-оксо-1-(фенилметил)этил]-(9Cl); пликамицина; дактиномицина; блеомицина; N-((3,3,3-трифтор-2-трифторметил)пропионил)сульфаниламида; леупролида; ацетата мегестрола; трастузумаба; цетуксимаба; пресса; OSI-774; CI-1033; ЕКВ-569; GW-2016; эрлотиниба; гефитиниба; тирфостина 23; тирфостина 25; тирфостина 47; тирфостина 51; тирфостина AG 825; 2-пропенамида, 2-циано-3-(3,4-дигидроксифенил)-N-фенил-(2Е)-(9Cl); тирфостина Ag 1478; лавендустина А; 3-пиридинацетонитрила, α-[(3,5-дихлорфенил)метилен]-(а2)-(9Cl); тирфостина 46; α-гидроксифарнезилфосфоновой кислоты; бутановой кислоты, 2-[[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-амино-3-меркаптопропил]амино]-3-метилпентил]окси]-1-оксо-3-фенилпропил]амино]-4-(метилсульфонил)-1-метилэтилового эфира, (2S)-(9с1); манумицина А; 2-пропенамида, 2-циано-3-[4-гидрокси-3,5-бис(1-метилэтил)фенил]-N-(3-фенилпропил)-(2Е)-(9CI); индирубина-3'-монооксима; N-гидрокси-3-[4-[[(2-гидроксиэтил)[2-(1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамида; N-гидрокси-3-[4-[[[2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамида; субероиланилидгидроксамовой кислоты (SAHA); пиридин-3-илметилового эфира [4-(2-аминофенилкарбамоил)бензил]карбаминовой кислоты и ее производных; бутановой кислоты; пироксамида; трихостатина А; оксамфлатина; апицидина; депсипептида; депудецина; трапоксина; цикло[L-аланил-D-аланил-(αS,2S)-α-амино-η-оксооксираноктаноил-D-пролил] (9CI); фенилбутирата натрия, субероилбисгидроксамовой кислоты; трихостатина А; 17-аллиламино, 17-деметоксигелданамицина (17AAG); радицикола; гелданамицина, 17-деметокси-17-(2-пропениламино)-(9CI); гелданамицина; 2-пропененитрила, 3-[(4-метилфенил)сульфонил]-(2Е)-(9CI); гидроксил-2-нафталенилметилфосфоновой кислоты; пиразолантрона; галлата эпигаллокатехина; сульфата винбластина; сульфата винкристина; виндезина; винорелбина; доцетакселя; паклитакселя; винорелбина; дискодермолидов; кохицинэпотилонов и их производных; эпотилона В или его производного; бензолсульфонамида, N-[2-[[[3-(4-хлорфенил)-2-пропенил]метил]амино]метил]фенил]-N-(2-гидроксиэтил)-4-метокси-(9CI); транс-4-йода, 4'-боранилхалкона; бутандинитрила, бис[амино[2-аминофенил)тио]метилен]-(9Cl); актинонина; галлата эпигаллокатехина; батимастата; маримастата; приномастата; метастата; BMS-2792511; BAY 12-9566; ТАА211; MMI270B; AAJ996; тирфостина AG 879; фенола, 4-[4-(4-фторфенил)-5-(4-пиридинил)-1Н-имидазол-2-ил]-(9CI); бензамида, 3-(диметиламино)-N-[3-[(4-гидроксибензоил)амино]-4-метилфенил]-(9CI); 2-антраценкарбоксальдегид-9,10-дигидро-3-гидрокси-1 метокси-9,10-диоксо-(9CI), тирфостина 46; тирфостина AG 1296; тирфостина 9; 1,3-бутадиен-1,1,3-трикарбонитрила, 2-амино-4-(1Н-индол-5-ил)-(9CI); иматиниба; IRESSA; вортманнина; дигидрата кверцетина; кантаридиновой кислоты; кантаридина; L-лейцинамида, N-[4-(2-карбоксиэтенил)бензоил]глицил-L-α-глутамил-(Е)-(9CI); карбоплатина; цисплатина; оксалиплатина; цисплатинума; сатраплатина, ZD0473; L-P-бромтетрамизолоксалата; 2(5Н)-фуранона,4-гидрокси-5-(гидроксиметил)-3-(1-оксогексадецил)-(5R)-(9CI); бензилфосфоновой кислоты; 1-N-пирроло-2,5-диона, 3-[1-[3-(диметиламино)пропил]-1Н-индол-3-ил]-4-(1Н-индол-3-ил)-(9Cl); бисиндолилмалеимида IX; сфингозина; стауроспорина; тирфостина 51; гиперицина; роттлерина; DMFO; аклациномицина А; глиотоксина; PS-341; MLN 341; бортезомиба; велкада; L-лейцинамида, N-[4-(2-карбоксиэтенил)бензоил]глицил-L-α-глутамил-(Е)-(9CI); тирфостина AG 126; тирфостина Ag 1288; тирфостина Ag 1295; гелданамицина; генистеина; РР1; РР2; 1,2-бензолдиола, 4-[(1Е)-2-(3,5-дигидроксифенил)этенил]-(9CI); тирфостина AG 490; 2-нафтилвинилкетона; изотретиноина; третиноина; 5,6-дихлор-1-бета-D-рибофуранозилбензимидазола; 2-аминопурина; тербинадина; топотекана; гиматекана; иринотекана; 9-нитрокамптотецина; ацетата 10-гидроксикамптотецина; этопозида; гидрохлорида идарубицина; гидрохлорида иринотекана; тенипозида; гидрохлорида топотекана; доксорубицина; гидрохлорида эпирубицина; гидрохлорида митоксантрона; гидрохлорида даунорубицина; доксорубицина; эпирубицина; идарубицина; неморубицина; митоксантрона; лозоксантрона; этопозида; тенипозида и 3-(4-диметиламинобензилиденил)-2-индолинона.

Любая из комбинаций компонентов (а) и (б), способ лечения теплокровного животного, включающий введение этих двух компонентов, фармацевтическая композиция, включающая эти два компонента для одновременного, раздельного или последовательного применения, применение комбинации для остановки развития или лечения пролиферативного заболевания или для изготовления фармацевтического состава для этих целей или коммерческий продукт, включающий такую комбинацию компонентов (а) и (б), как упомянуто или определено выше, далее будут также обозначаться как комбинация по изобретению (так что этот термин обозначает каждый из этих вариантов осуществлений, которые, в свою очередь, могут быть заменены этим термином, если это возможно).

IV. Введение

Одновременное введение, например, может осуществляться в форме одной фиксированной комбинации с двумя или более активными ингредиентами, или одновременным введением двух или более активных ингредиентов, которые вводят независимо. Последовательное применение (введение) предпочтительно обозначает введение одного (или более) компонентов комбинации в одно время, другие компоненты в другое время, хронически смещенным образом, предпочтительно так, что комбинация проявляет большую эффективность по сравнению с отдельными соединениями, вводимыми независимо (особенно проявляя синергизм). Раздельное применение (введение) предпочтительно обозначает введение компонентов комбинации независимо друг от друга в различное время, предпочтительно обозначая, что компоненты (а) и (б) вводят так, что отсутствует перекрывание измеримых уровней крови обоих соединений перекрывающимся образом (в одно время).

Также возможны комбинации двух или более последовательных, раздельных и одновременных введений, предпочтительно так, что комбинация компонент - лекарственные препараты проявляет совместное терапевтическое действие, которое превышает действие, проявляемое при использовании комбинации компонент - лекарственные препараты независимо с временными интервалами, настолько большими, что отсутствует совместное действие на их терапевтическую эффективность, причем синергетический эффект является особенно предпочтительным.

Термин "остановка развития", как здесь используется, обозначает введение комбинации пациентам, которые находятся на предварительной стадии или на ранней фазе, при первом проявлении или повторении излечиваемого заболевания, в котором пациенты, например, которым поставлен диагноз предварительной стадии соответствующего заболевания или в котором пациенты находятся в состоянии, например, медицинского лечения или состояния, после которого, вероятно, соответствующее заболевание будет развиваться.

"Совместный терапевтически активный" или "совместный терапевтический эффект" обозначает, что соединения могут вводиться раздельно (хронически смещенным образом, особенно последовательным способом) с такими временными интервалами, что они, предпочтительно у излечиваемого теплокровного животного, особенно человека, проявляют (предпочтительно синергетическое) взаимодействие (совместный терапевтический эффект). Является ли это таковым, inter alia может быть определено по уровням крови, показывая, что оба соединения присутствуют в крови излечиваемого человека по крайней мере в течение определенных временных интервалов.

"Фармацевтически эффективный" предпочтительно относится к количеству, которое является терапевтически или в более широком смысле также профилактически эффективным в отношении развития пролиферативного заболевания.

V. Коммерческая упаковка

Термин "коммерческая упаковка" или "продукт", как здесь используется, обозначает особенно "набор частей" в том смысле, что компоненты (а) и (б), как определено выше, могут вводиться в дозах независимо или путем использования различных фиксированных комбинаций с известными количествами компонентов (а) и (б), то есть одновременно или в различное время. Кроме того, эти термины включают коммерческую упаковку, включающую (особенно объединяя) активные ингредиенты компонентов (а) и (б), вместе с инструкциями для одновременного, последовательного (хронически смещенного, последовательного во времени, предпочтительно) или (менее предпочтительно) раздельного их применения для остановки развития или лечения пролиферативного заболевания. Части набора частей могут, например, вводиться одновременно или хронологически смещенным образом, в различное время и с равными или различными временными интервалами для любой части набора частей. Очень предпочтительно временные интервалы выбирают таким образом, что действие на излечиваемое заболевание при совместном применении частей является большим по сравнению с действием, которое будет получено при использовании только любого одного из партнеров комбинации (а) и (б) (что может быть определено в соответствии со стандартными способами. Соотношение общих количеств партнера комбинации (а) и партнера комбинации (б), вводимых в объединенном составе, может варьироваться, например, для того, чтобы покрыть потребность излечиваемого населения или потребность одного пациента, различные потребности которых могут быть связаны с конкретным заболеванием, возрастом, полом, весом тела и другими факторами пациентов. Предпочтительно присутствует по крайней мере один положительный эффект, например совместное усиление действия партнеров комбинации (а) и (б) конкретно более, чем суммарный эффект, который, следовательно, может достигаться низшими дозами каждого объединенного лекарственного препарата, соответственно, по сравнению с переносимой дозой в случае лечения только отдельными лекарственными препаратами без комбинации, получая дополнительные положительные эффекты, например, меньшие побочные эффекты или объединенный терапевтический эффект в неэффективной дозировке одного или обоих партнеров комбинации (компонентов (а) и (б)), и очень предпочтительно сильный синергизм партнеров комбинации (а) и (б).

Как в случае применения комбинации компонентов (а) и (б), так и в случае коммерческой упаковки любая комбинация одновременного, последовательного и раздельного применения также возможна, обозначая, что компоненты (а) и (б) могут вводиться в одно время одновременно, после введения только одного компонента с низшей токсичностью, или хронически, например, в течение более 3-4 недель суточного приема, позднее и в последующем другого компонента или комбинации обоих компонентов еще позднее (в последующем курсе лечения лекарственной комбинацией для оптимального противоопухолевого эффекта) или им подобными способами.

Комбинация по изобретению может также использоваться в комбинации с другими видами лечения, например хирургическим вмешательством, гипертермией и/или радиационной терапией.

VI. Фармацевтические композиции и составы

Фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением могут быть получены обычными способами и представляют собой композиции, подходящие для энтерального, такого как пероральное или ректальное, и парентерального введения млекопитающим, включая человека, содержащие терапевтически эффективное количество ингибитора VEGF и по крайней мере один фармацевтически активный агент отдельно или в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями, особенно носителями, подходящими для энтерального или парентерального применения.

Фармацевтические композиции включают от около 0,00002% до около 100%, особенно, например, в случае инфузионных растворов, готовых к применению, от 0,0001 до 0,02%, или, например, в случае инъекционных или инфузионных концентратов или особенно парентеральных составов, от около 0,1% до около 95%, предпочтительно от около 1% до около 90%, более предпочтительно от около 20% до около 60%, описанного активного ингредиента (по весу, в каждом случае). Фармацевтические композиции в соответствии с изобретением могут находиться, например, в единичной дозированной форме, такой как в форме ампул, сосудов, драже, таблеток, инфузионных емкостей или капсул.

Эффективная дозировка каждого из партнеров комбинации, присутствующих в составе настоящего изобретения, может варьироваться в зависимости от конкретного используемого соединения или фармацевтических композиций, способа введения, излечиваемого состояния и степени тяжести излечиваемого состояния. Врач, доктор или ветеринар может легко определить эффективное количество каждого из активных ингредиентов, необходимое для предотвращения, лечения или ингибирования развития состояния.

Фармацевтическими составами для комбинированной терапии для энтерального или парентерального введения являются, например, составы в единичных дозированных формах, такие как покрытые сахаром таблетки, капсулы или суппозитории, и, кроме того, ампулы. Если не указано иное, эти составы получают обычными способами, например обычными методами смешения, гранулирования, покрытия сахаром, растворения или лиофилизации. Следует понимать, что единичное содержание партнера комбинации, находящееся в отдельной дозе каждое единичной дозированной формы, само по себе не должно составлять эффективное количество, поскольку необходимое эффективное количество может достигаться введением нескольких дозированных единиц. Специалист в данной области техники способен определить подходящие фармацевтически эффективные количества компонентов комбинации.

Предпочтительно соединения или их фармацевтически приемлемые соли вводят в виде перорального фармацевтического состава в форме таблетки, капсулы или сиропа или в виде парентеральных инъекций, если это подходит.

Для получения композиций для перорального введения может использоваться любая фармацевтически приемлемая среда, такая как вода, гликоли, масла, спирты, отдушки, консерванты, красители. Фармацевтически приемлемые носители включают крахмалы, сахара, микрокристаллические целлюлозы, разбавители, гранулирующие агенты, лубриканты, связующие, разрыхлители.

Растворы активного ингредиента, а также суспензии особенно изотонические водные растворы или суспензии, являются полезными для парентерального введения активного ингредиента, возможно, например, для лиофилизованных композиций, которые содержат активный ингредиент отдельно или вместе с фармацевтически приемлемым носителем, например маннитом, для таких растворов или суспензий получение перед применением. Фармацевтические композиции могут быть стерилизованы и/или могут включать эксципиенты, например консерванты, стабилизаторы, увлажняющие и/или эмульгирующие агенты, солюбилизаторы, соли для регулирования осмотического давления и/или буферы, и получаются известными способами per se, например, с помощью обычных методов растворения или лиофилизации. Растворы или суспензии могут включать повышающие вязкость вещества, такие как натрийкарбоксиметилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, декстран, поливинилпирролидон или желатин. Суспензии в масле включают в качестве масляного компонента растительные, синтетические или полусинтетические масла, стандартные для инъекционных целей.

Изотонический агент может быть выбран из любых агентов, известных из предшествующего уровня техники, например маннита, декстрозы, глюкозы и хлорида натрия. Инфузионный состав может быть разбавлен водной средой. Количество водной среды, использующейся в качестве разбавителя, выбирают в соответствии с нужной концентрацией активного ингредиента в инфузионном растворе. Инфузионные растворы могут содержать другие эксципиенты, обычно использующиеся в составах, вводимых внутривенно, такие как антиоксиданты.

Настоящее изобретение также относится к "объединенному составу", который, как здесь используется, обозначает особенно "набор частей" в том смысле, что партнеры комбинации (а) и (б), как определено выше, могут вводиться в дозах независимо или с помощью различных фиксированных комбинаций с известными количествами партнеров комбинации (а) и (б), то есть одновременно или в различное время. Части набора частей могут, например, вводиться одновременно или хронологически смещенным образом, в различное время и с равными или различными временными интервалами для любой части набора частей. Соотношение общих количеств партнера комбинации (а) и партнера комбинации (б), вводимых в объединенном составе, может варьироваться, например, для того, чтобы покрыть потребность излечиваемого населения или потребность одного пациента, на основании степени тяжести любых побочных эффектов, которые возникают у пациента.

Настоящее изобретение особенно относится к объединенному составу, который включает:

(а) одну или несколько единичных дозированных форм ингибитора и

(б) одну или несколько единичных дозированных форм фармацевтически активного агента.

VII. Излечиваемые заболевания (рассматривается врачом)

Композиции настоящего изобретения являются полезными для лечения пролиферативных заболеваний или заболеваний, которые связаны или запускаются постоянным ангиогенезом.

Пролиферативное заболевание главным образом представляет собой опухолевое заболевание (или рак) (и/или любые метастазы). Композиции по изобретению конкретно полезны для лечения опухоли, которая представляет собой рак груди, рак мочеполового тракта, рак легких, желудочно-кишечный рак, плоскоклеточный рак, меланому, глиому, рак яичников, рак поджелудочной железы, нейробластому, рак головы и/или шеи или рак мочевого пузыря, или в более широком смысле рак почек, головного мозга или желудка.

Более конкретно, композиции по изобретению конкретно полезны для лечения:

(i) опухоли груди; опухоли легких, например опухоли малых клеток или немалых клеток легких; меланомы, или

(ii) пролиферативного заболевания, которое не поддается лечению другими химиотерапевтическими средствами, или

(iii) опухоли, которое не поддается лечению другими химиотерапевтическими средствами из-за устойчивости ко многим лекарственным средствам.

При указании опухоли, опухолевого заболевания, карциномы или рака, также подразумеваются метастазы в первичном органе или ткани и/или в любом другом месте, альтернативно или, кроме того, независимо от расположения опухоли и/или метастазов.

Композиции являются селективно токсичными или более токсичными в отношении быстро пролиферирующих клеток по сравнению с нормальными клетками, конкретно в раковых клетках человека, например раковых опухолях, соединение обладает существенными антипролиферативными эффектами и промотирует дифференциацию, например остановку клеточного цикла и апоптоза.

Следующие примеры иллюстрируют комбинации с эпотилоном В, которые обладают синергетическим действием. Все комбинации тестировали в трех (3) различных клеточных линиях как часть общего целого: А549, модель карциномы немалых клеток легких; SKOV-3, модель рака яичников; и SKMEL-28, модель злокачественной меланомы.

Один пример показывает синергетический эффект, наблюдаемый между эпотилоном В и 1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амином, 3-(4-хлорфенил)-1-(1,1-диметилэтил)-(9CI) в клетках А549. В этой комбинации наблюдали повышение максимального эффекта по сравнению только с отдельными агентами.

Все комбинации получали одним и тем же способом для тестирования.

Условия и методики анализа

День 1: получение клеток

Клетки культивировали в Т-175 планшетах в полной среде (RPMI-1640, 10% FBS, 1% Penn/Strep) при 37°С и 5% CO₂. Клетки удаляли из планшетов быстрой обработкой 0,25% трипсина. Трипсин инактивировали средой и содержание клеток подходящим образом корректировали. Клетки затем высаживали в 384-луночные микротитровальные планшеты (35 мкл) при 1500 (А549) или 3,000 (SKOV-3, SKMEL-28) клетки/лунка, используя микропипетку, за 16-24 часов до добавления соединения для общего скрининга. Высаженные планшеты инкубировали (37°С/5% СО₂) в течение ночи для восстановления и повторного связывания.

День 2: добавление соединения

Планшеты разбавления получали с помощью обработки полипропиленовых 384-луночных планшетов 100 мкл на лунку полной среды неклеточной культуры. Соединения добавляли в планшеты разбавления, используя Mini-Trak (добавление 1 мкл) для разбавления 1:101 с последующим перемешиванием. Для построения кривых зависимости от дозы одного агента 5 мкл аликвоты из планшетов разбавления добавляли в планшеты для анализа для получения 11 точек кривой зависимости от дозы (конечный объем 40 мкл). Конечное разбавление составляло ~1:808 с общей концентрацией растворителя ~0,1%. Для матриц комбинации 4,5 мкл аликвот из планшетов разбавления ортогонально-титровальных основных планшет добавляли в тот же планшет для анализа для получения матрицы зависимости от дозы (конечный объем 44 мкл). Конечное разбавление каждого соединения составляет ~1:988 при общей концентрации растворителя ~0,2%. После добавления соединения планшеты инкубировали при 37°С/5% CO₂ в течение 72 часов.

День 5: измерение жизнеспособности клеток

Раствор красителя для определения жизнеспособности 5% CellTiter-Blue (Promega) в полной среде распределяли в планшеты для анализа, используя мультипипетку или 384-луночное пипетирующее устройство. Подходящий объем добавляли до конечной концентрации красителя 2,5%. Смесь для определения жизнеспособности инкубировали в течение от 4 до 6 часов в зависимости от типа клеток при 37°С/5% СО₂ для снижения жизнеспособности красителя. Планшеты оставляли охлаждаться до комнатной температуры в течение одного часа, затем определяли интенсивность флуоресценции при 590 нм после возбуждения при длине волны 540 нм в планшетном счетчике Wallac Victor-V.

Таблица 1
Клеточные линии, среды и реагенты
	Источник	Каталог #	Lot#
Клеточные линии
А549	АТСС	CCL-185	3449902
SKMEL-28	АТСС	HTB-72	348832
SKOV-3	АТСС	HTB-77	3898710
Среды и реагенты
Основная среда: RPMI-1640‡	АТСС	30-2001
Пенициллин/стрептомицин	Cellgro	30-002-CI	30002098
Сыворотка зародыша теленка	Gibco	16000-044	1127751
Трипсин-EDTA (0.25%)	Cellgro	25-053-CI	25053103
L-глутамин	Gibco	25030-081	11150
Краситель жизнеспособности Celltiter-Blue	Promega	G8081	200719
‡Основную среду использовали для полной среды: 10% FBS,
Пенициллин/стрептомицин (1:100), нет необходимости добавлять L-глутамин, если АТСС среду использовали в течение 3 месяцев после выпуска.

Критерии QC

Первичный статус планшета QC

Планшеты cHTS форматов, содержащие группы положительных и отрицательных внутрипланшетных контрольных лунок, которые использовали для автоматического контроля качества. Для всех планшетов для анализа определяли автоматические QC значения с помощью системы LIM, затем собирали данные. Проверки автоматического контроля качества делали на основании Z-фактора, рассчитанного с помощью внутрипланшетных контролей, используя стандартный фактор Z=1-3(_V+_U)/(V-U), где V, U представляют собой значение контрольных уровней для носителя (обработанный) и среды (необработанная), и _V,_U представляют собой соответствующие стандартные погрешности отклонения. Границы Z-фактора эмпирически определяли для группы планшетов из трех классов: автоматически принятые (Z>0,6), автоматически отклоненные (Z<0,4) и неопределяемые планшеты, которым нужна визуальная оценка (0,4<Z<0,6). При необходимости статус QC принятых планшетов может быть изменен на статус отклоненных на основании визуального наблюдения за качеством планшет, контролями переноса или другими вторичными критериями QC. Планшеты, отклоненные автоматически или путем визуального наблюдения, исключали из дальнейшего анализа и графика повторения.

Контроли переноса

Положительное контрольное соединение (Gentian Violet) включали во все основные планшеты. Это обеспечивало визуальную проверку скрининга для проверки соединения на перенос из обеих колонок и рядов в планшету для анализа.

Вторичный ОС

Вторичный QC включает дополнительные ручные проверки качества данных, включая визуальное наблюдение за качеством планшетов и контроли переноса, пометка пика данных и проверка подходящего для клеточных линий поведения отдельных агентов. Планшеты с принятым статусом из первичного QC, которые показали неприемлемый планшетный градиент, переводили в статус отклоненных и направляли на повтор. Планшеты также визуально оценивали на случайные плохие лунки, или "пики" со значениями данных, которые очень отличались от их средних соседних значений (в том же классе обработки). Эти пики данных отмечали в базе данных и исключали из последующих анализов. Наконец, матрицы зависимости от дозы, содержащие активность отдельного агента, несовместимую с последним экспериментом, переводили в статус отклоненных и направляли на повтор. Блоки данных, которые не достигали крайней границы, помечали в базе данных, исключая из последующего анализа и направляя на повтор при необходимости.

Измерение антипролиферативной активности

Измерением действия являлось ингибирование клеточной жизнеспособности, используя анализ на жизнеспособность с красителем alamar blue относительно необработанного уровня (только носитель). Для необработанных и обработанных уровней U и Т рассчитывали фракционное ингибирование I=1-T/U. Ингибирование составляло от 0% на необработанном уровне до 100% при Т=0.

Каждый обрабатываемый уровень Т сравнивали со средним необработанным уровнем U±σU, определенным для каждого планшета путем нахождения среднего уровня alamar blue (и его связывали неопределенно, описано выше) среди необработанных контрольных лунок, расположенных вдоль планшета. Используя правила определения стандартной накапливающейся ошибки для выражения I, оценивали стандартную ошибку σI~(σU/U) sqrt (1-I).

Оценки ошибки далее повышали с учетом вариантов между повторными блоками комбинации, а также минимально допущенной фракционной неопределенности _min~3%. Таким образом, для ингибирования стандартная ошибка составляла σI~sqrt{(σU/U)2(1-I)+σrep 2+σ_min ².

Оценки медианных значений и ошибки

Чаще использовали медианные значения по сравнению со средними значениями, чтобы снизить влияние случайных выбросов при согласовании. Хотя медианные значения являются более трудными для выбросов, они более чувствительны к статистическому шуму, получая на ~30% большие отклонения. Стандартные отклонения оценивали по среднему абсолютному отклонению (MAD), где для нормального распределения отклонение образца составляло σdat~1,5 MAD. Стандартная ошибка для медианного значения составляет тогда σmed~σdat/sqrt(N-1), вводя значения данных N.

Кривые дозы для отдельного агента

Активность отдельного агента характеризовали построением сигмоидальной функции формы I=I_max/[1+(C/EC₅₀)^σ], методом минимизации наименьших квадратов, используя уклонный симплексный алгоритм. В формуле С обозначает концентрацию, ЕС₅₀ обозначает эффективную концентрацию при 50% ингибировании, и σ обозначает сигмоидальность. Неопределенности каждого определяемого параметра оценивали из области, в которой изменение в пониженном хи-квадрате χ2 составляет менее единицы или менее минимального снижения χ2, если этот минимум превышает единицу, чтобы не переоценить ошибки σI. Для оценки оптимальной концентрации определяли значения ЕС₅₀ и максимально эффективный уровень в каждом предложенном анализе пролиферации. Использовали 384-луночные планшеты для получения дубликатов кривых зависимости от дозы в 12-стадийных разбавлениях с соотношением доз f=2, 3 или 4, для покрытия 3-7 порядков значений.

Выбор оптимальных концентраций

Использовали кривые данных отдельного агента для определения ряда разбавлений для каждого используемого соединения для скрининга комбинации. Используя фактор разбавления f 2, 3 или 4, в зависимости от сигмоидальности кривой отдельного агента, выбирали 5 уровней дозы с центральной концентрацией, близкой к определенному значению ЕС₅₀. Для соединений с неопределенной активностью отдельного агента использовали f=4 исходя из наибольшей достижимой концентрации.

Матрицы доз комбинации и ссылочные модели

Скрининг cHTS позволял получить матрицы доз, которые содержали все попарные комбинации двух отдельных агентов в рядах концентраций, включая ноль. Каждая матрица доз содержала внутренние копии кривых отдельного агента, которые использовали в качестве ссылки для эффектов комбинации. Дублерные матрицы доз могут быть соединены вместе путем определения медианных значений соответствующих точек данных, и когда серии концентрации отличаются, соответствующие значения определяли, используя метод билинейной интерполяции. Стандартные ошибки рассчитывали на компьютере для каждого значения ингибирования, используя описанные выше формулы. Эффекты комбинации наиболее легко характеризуются при сравнивании каждой точки данных ингибирования с точкой комбинации ссылочной модели, которая получена по кривым отдельного агента. Обычно использовали три модели: (1) наивысшая модель отдельного агента IHSA(CX, CY)=max(IX, IY) является простой ссылочной моделью, где CX, Y обозначают концентрации соединения X и Y, и IX, Y обозначают ингибирования отдельных агентов для CX, Y; (2) независимый Bliss IBliss(CX, CY)=IX+IY-IXIY представляет собой статистическое математическое ожидание для независимых конкурентных ингибиторов; (3) аддитивность Луи, где ILoewe(CX, CY) обозначает ингибирование, которое удовлетворяет (СХ/ЕСХ)+(CY/ECY)=1 и ECX,Y обозначают эффективные концентрации при ILoewe для кривых отдельного агента. Аддитивность Луи является общепринятой ссылкой для синергизма [4], поскольку она представляет собой отклик комбинации, в которой X и Y представляют собой одно и то же соединение. IHSA и IBliss легко рассчитываются из IX, Y, но определение ILoewe требует интерполяции и нахождения цифровых корней.

Выбор комбинаций для 9×9 повторного теста

Для выбора нужных онкологических комбинаций для повторных анализов, используя матрицы доз 9×9 высокого разрешения, оценивали три важных составляющих: (1) существенный синергизм по сравнению с аддитивной моделью; (2) основную активность, при которой проявляется синергизм, и (3) достаточное изменение эффективности. Использовали "величину синергизма", где S=log fX log fY_Idata (Idata-ILoewe), суммированную по всем парам концентраций неотдельных агентов, и где log fX,Y обозначают натуральный логарифм факторов разбавления, использующихся для каждого отдельного агента. Так эффективно рассчитывали объем между поверхностями измеренного и Луи суммарного отклика, измеряя в направлении к высокому ингибированию и корректируя для различных факторов разбавления. Это значение объема подчеркивает общий синергетический или антагонистический эффект комбинации, таким образом минимизируя эффекты выходящих за пределы пиков данных и идентифицируя комбинации с сильным синергизмом в широком ряду значений концентраций и при высоких уровнях эффекта. S является положительным главным образом для синергетических комбинаций и отрицательным для антагонизма. В случаях, когда синергизм и антагонизм присутствуют в различных концентрациях, преимущественно выбирают эффекты при высоких уровнях ингибирования. Неопределенность σS рассчитывали для каждой величины синергизма, основываясь на измеренных ошибках для значений Idata и стандартной ошибке воспроизводимости. Величину синергии и ее ошибку использовали для определения подходящей остановки выбора. Например, комбинации с S>2_S являются значимыми при конфиденциальности ~95%, предполагая нормальное распределение. Также, для обеспечения достаточной силы сдвига, индекс комбинации, CI=(СХ/ЕСХ)+(CY/ECY) при выбранном уровне эффекта является достаточно малым для представления полезного синергизма. Наблюдаемые измерения in vitro CI для используемых клинических комбинаций (CI~0,5-0,7) могут использоваться как руководство для размещения остановки.

В таблице 2 ниже представлены комбинации, проявляющие лучший синергизм с эпотилоном В.

Таблице 2
Комбинация	Величина синергизма	Клеточная линия
Эпотилон В+1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин, 3-(4-хлорфенил)-1-(1,1-диметилэтил)-(9CI)
CAS# 172889-27-9	0,807	А549
Бутандинитрил, бис[амино[(2-аминофенил)тио]метилен]-(9CI)	1,199	А549
CAS# 109511-58-2
1,4-Нафталендион, 2,3-бис[(2-гидроксиэтил)тио]-(9CI)
CAS# 93718-83-3	1,233	А549
5-(6-Амино-2-хлорпурин-9-ил)-2-(гидроксиметил)оксолан-3-ол	0,999	SKMEL28
CAS# 4291-63-8

Claims (17)

1. Комбинация для профилактики и лечения пролиферативного заболевания:
(а) микротубулярного активного агента и
(б) одного или нескольких фармацевтически активных агентов,
в которой микротубулярный активный агент представляет собой эпотилон В, а активный агент 1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амина, 3-(4-хлорфенил)-1-(1,1-диметилэтил)-(9СI).

2. Комбинация по п.1, для одновременного, параллельного, раздельного или последовательного применения.

3. Способ профилактики или лечения пролиферативного заболевания, включающий введение комбинации по п.1.

4. Способ по п.3, в котором пролиферативное заболевание представляет собой рак яичников, карциному легких и меланому.

5. Фармацевтическая композиция для профилактики и лечения пролиферативного заболевания, включающая:
(а) микротубулярный активный агент; и
(б) один или несколько фармацевтически активных агентов,
в которой микротубулярный активный агент представляет собой эпотилон В, а активный агент 1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амина, 3-(4-хлорфенил)-1-(1,1-диметилэтил)-(9СI).

6. Способ профилактики или лечения пролиферативного заболевания, включающий введение композиции по п.5.

7. Способ по п.6, в котором пролиферативное заболевание представляет собой рак яичников, карциному легких и меланому.

8. Способ профилактики или лечения пролиферативного заболевания, включающий введение комбинации:
(а) микротубулярного активного агента и
(б) одного или нескольких фармацевтически активных агентов,
в которой микротубулярный активный агент представляет собой эпотилон В, а активный агент 1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амина, 3-(4-хлорфенил)-1-(1,1-диметилэтил)-(9СI).

9. Способ по п.8, в котором пролиферативное заболевание представляет собой рак яичников, карциному легких и меланому.

10. Коммерческая упаковка для профилактики и лечения пролиферативного заболевания, включающая:
(а) фармацевтическую композицию микротубулярного активного агента;
(б) фармацевтические композиции фармацевтически активного агента,
в которой микротубулярный активный агент представляет собой эпотилон В, а активный агент 1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амина, 3-(4-хлорфенил)-1-(1,1-диметилэтил)-(9СI).

11. Коммерческая упаковка по п.10, в которой единичная дозированная форма представляет собой фиксированную комбинацию.

12. Способ профилактики или лечения пролиферативного заболевания, включающий введение комбинации по п.11.

13. Способ по п.12, в котором пролиферативное заболевание представляет собой рак яичников, карциному легких и меланому.

14. Коммерческая упаковка для профилактики и лечения пролиферативного заболевания, включающая:
(а) фармацевтическую композицию микротубулярного активного агента;
(б) фармацевтические композиции фармацевтически активного агента, в которой микротубулярный активный агент представляет собой эпотилон В, а активный агент 1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амина, 3-(4-хлорфенил)-1-(1,1-диметилэтил)-(9СI), где компоненты (а) и (б) вводят вместе, друг за другом или раздельно в одной совместной единичной дозированной форме или в двух раздельных единичных дозированных формах.

15. Коммерческая упаковка по п.14, в которой единичная дозированная форма представляет собой фиксированную комбинацию.

16. Способ профилактики или лечения пролиферативного заболевания, включающий введение комбинации по п.15.

17. Способ по п.16, в котором пролиферативное заболевание представляет собой рак яичников, карциному легких и меланому.

Images