RU2422831C1 - Экспресс-способ определения нарушения иммунного статуса организма человека - Google Patents
Экспресс-способ определения нарушения иммунного статуса организма человека Download PDFInfo
- Publication number
- RU2422831C1 RU2422831C1 RU2009138321/15A RU2009138321A RU2422831C1 RU 2422831 C1 RU2422831 C1 RU 2422831C1 RU 2009138321/15 A RU2009138321/15 A RU 2009138321/15A RU 2009138321 A RU2009138321 A RU 2009138321A RU 2422831 C1 RU2422831 C1 RU 2422831C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- inhibition
- nacl
- human
- immune status
- human immune
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской иммунологии. Для определения нарушения иммунного статуса человека проводят реакцию лизиса эритроцитов барана 25% сывороткой крови человека с использованием эндогенных гетерофильных антител при температуре 37,0±0,5°С в течение 10 мин в присутствии 0,288М NaCl в буферном растворе. При наличии ингибирования лизиса эритроцитов менее 35% оценивают повышенную реакцию иммунной системы организма человека, 35-70% нормальную, более 70% - пониженную. Использование способа позволяет повысить эффективность выявления доклинического состояния иммунодефицита, провести углубленное исследование патогенеза аутоиммунных заболеваний, дает возможность провести раннюю профилактику и позволяет контролировать эффективность проводимой терапии. 4 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской иммунологии, и может быть использовано для определения нарушений иммунного статуса человека.
Проблема оценки состояния иммунной системы организма человека остается в настоящее время актуальной в связи с тем, что многие соматические заболевания характеризуются иммунодефицитом и соответствующая иммунокорригирующая терапия позволит более рационально и эффективно проводить терапию этих состояний.
Известен способ определения нарушений иммунного статуса организма человека путем проведения лизиса эритроцитов барана 0,8% сывороткой крови человека с использованием эндогенных гетерофильных антител при 37,0±0,5°C в течение 30 мин с последующим выявлением степени лизиса эритроцитов по соответствующей формуле, а также титра гетерофильных антител. Определение нарушений иммунного статуса проводят сопоставлением коэффициента эффекторной функции гетерофильных антител с уровнем содержания циркулирующих иммунных комплексов [RU 2347381 C2, 27.02.2005].
Недостатком этого способа является длительность, трудоемкость, недостаточная точность в связи с тем, что не отражается участие компонента C1q, связывающего циркулирующие иммунные комплексы.
Техническим результатом предлагаемого способа является повышение точности способа за счет исследования функциональной активности субкомпонента C1q комплемента человека, сокращение длительности процедуры исследования, упрощение, удешевление.
Указанный результат достигается тем, что лизис эритроцитов барана проводят 25% сывороткой крови человека с использованием эндогенных гетерофильных антител при температуре 37,0±0,5°C в присутствии 0,288 М NaCl в буферном растворе в течение 10 мин, определяют степень ингибирования лизиса эритроцитов, при наличии ингибирования активности комплемента менее 35% оценивают повышенную реакцию иммунной системы организма человека: от 35 до 70% - нормальную, более 70% - пониженную.
Способ осуществляют следующим образом. Проводят забор крови, приготовление сыворотки, проведение гемолитического теста и расчет степени ингибирования лизиса. Гемолитический тест проводят с использованием стандартизованных эритроцитов барана (1,5×108 кл/мл) (Е) в вероналовом солевом буфере (VBS), содержащем 0,5 мМ MgCl2 и 0,15М CaCl2 (VBS2+). Время проведения экспресс-способа 25 мин (в прототипе - 1,5 часа).
Пример 1. Определение оптимальной концентрации NaCl для 50% ингибирования активации системы комплемента. К 200 мкл суспензии эритроцитов барана (Е) (1,5×108 кл/мл) добавляли 100 мкл пулированной сыворотки крови человека от 10 здоровых доноров и 5-50 мкл 1,5М NaCl (интервал концентрации от 0,17 М до 0,32 М NaCl в системе) и в общем объеме 400 мкл, доведенном буфером VBS2+, инкубировали 10 мин при 37°С. Одновременно ставили контроль на спонтанный (200 мкл Е+200 мкл VBS2+) и полный лизис Е (200 мкл Е+200 мкл H2O). После инкубации останавливали реакцию гемолиза добавлением 2,6 мл холодного 0,15 М раствора NaCl, центрифугировали 10 мин при 1500 об/мин и определяли степень гемолиза по величине А405 супернатанта. Степень лизиса эритроцитов (У) определяли по формуле:
У(%)=[(X-R)/(H-R)]×100,
где Н, R и X - величины оптической плотности А405 супернатанта в гемолитических системах при полном лизисе, в контроле спонтанного лизиса Е и в опытной пробе соответственно.
Степень ингибирования (CI) определяли как разность показателей лизиса в контрольной пробе и в опытных пробах, содержащих возрастающие концентрации NaCl, по формуле:
CI(%)=(100-У),
где 100 - степень лизиса в контрольной пробе, У - степень лизиса в опытных пробах. Полученные данные приведены ниже (таблица 1).
Таблица 1 | ||||||||
Ингибирование лизиса эритроцитов барана 0,25% пулированной сывороткой крови человека раствором NaCl | ||||||||
Концентрация NaCl в гемсистеме, моль/л | 0,150 | 0,248 | 0,260 | 0,274 | 0,288 | 0,293 | 0,310 | 0,320 |
Степень ингибирования, CI(%) | 0 | 0 | 8 | 17 | 50 | 56 | 90 | 100 |
Как видно из данных, представленных в таблице 1, гемолиз эритроцитов барана ингибируется при повышении ионной силы буфера, обусловленной соответствующей концентрацией NaCl. 50% ингибирование активности классического пути комплемента пулированной сыворотки крови наблюдается в присутствии 0,288 М NaCl.
Пример 2. Определение ингибирования гемолиза эритроцитов барана индивидуальной сывороткой человека в присутствии 0,288 MNaCl.
Исследования проведены аналогично вышеописанным условиям только при постоянной концентрации NaCl, равной 0,288 М в гемолитической системе. Вместо пулированной сыворотки крови человека использовали индивидуальные сыворотки доноров (контрольная группа). Полученные результаты представлены ниже в таблице 2.
Таблица 2 | ||||||||||
Показатели ингибирования лизиса эритроцитов барана сывороткой крови человека в присутствии 0,288 М NaCl | ||||||||||
№ сыворотки | ||||||||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | |
CI,% | 42 | 51 | 70 | 46 | 58 | 44 | 62 | 35 | 66 | 54 |
Как видно из данных, представленных в таблице 2, ингибирование лизиса эритроцитов барана сывороткой крови человека (контрольная группа) в присутствии 0,288 М NaCl в гемолитической системе наблюдалось на уровне 35-70%. Ингибирование комплемента 0,288М NaCl на уровне 35-70% у здоровых доноров контрольной группы нами принято за показатель, который характеризует нормальное состояние иммунной системы организма.
Пример 3. Определение ингибирования гемолиза в присутствии 0,288 М NaCl в сыворотках крови больных алкоголизмом. Предлагаемым способом были тестированы сыворотки крови 16 больных с хроническим алкоголизмом, характеризующихся пониженным иммунитетом. Результаты представлены в таблице 3.
Таблица 3 | ||||||||
Показатели ингибирования лизиса эритроцитов барана сывороткой крови больных хроническим алкоголизмом в присутствии 0,288 М NaCl | ||||||||
№ сыв | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
CI, % | 100 | 79 | 74 | 85 | 52 | 55 | 53 | 100 |
№ сыв | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 |
CI, % | 2 | 100 | 70 | 62 | 100 | 76 | 100 | 100 |
Как видно из данных, представленных в таблице 3, в 11 из 16 исследованных образцов сывороток больных хроническим алкоголизмом степень ингибирования составила от 70 до 100%, что свидетельствует о сниженной функции иммунной системы организма.
Исследование состояния иммунного статуса больных с хроническим алкоголизмом показало, что у 69% (p<0,05) больных наблюдается пониженная функция иммунного статуса, у 25% больных данный показатель был в пределах нормы и только у 5% наблюдается повышенная функция иммунного статуса. Полученные результаты свидетельствуют о необходимости иммуностимулирующей терапии у 70% больных с хроническим алкоголизмом. Коррекция иммунного статуса позволит у таких больных стимулировать регенеративные процессы в органах и тканях, особенно в печени. Эффективность иммунокорригирующей терапии также можно контролировать предлагаемым экспресс-способом.
Пример 4. Определение ингибирования гемолиза в присутствии 0,288 М NaCl в сыворотках крови женщин с воспалительными заболеваниями придатков. Предлагаемым способом были тестированы сыворотки крови 15 женщин с данной патологией, обычно сопровождающейся повышенной реакцией иммунитета. Результаты представлены в таблице 4.
Таблица 4 | ||||||||
Показатели ингибирования лизиса эритроцитов барана сывороткой крови женщин с воспалительными заболеваниями придатков в присутствии 0,288 М NaCl | ||||||||
№ сыв | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
CI,% | 0 | 25 | 34 | 21 | 15 | 29 | 33 | 0 |
№ сыв | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | |
CI,% | 3 | 40 | 60 | 62 | 0 | 46 | 30 |
Как видно из данных, представленных в таблице 4, в 11 из 15 исследованных образцов (73%), p<0,05 сывороток крови женщин с воспалительными заболеваниями придатков степень ингибирования составила от 0 до 34%, что свидетельствует о повышенной реакции иммунной системы организма, характерной для воспалительных процессов.
Таким образом, как показывают результаты проведенных исследований (примеры 2, 3 и 4), совпадение клинических и лабораторных данных имеет место в 71% случаев (p<0,05).
Предлагаемый способ имеет преимущества по сравнению с известными, заключающиеся в повышении точности диагностики нарушений иммунного статуса, упрощении, сокращении длительности процедуры исследования до 25 минут (экспресс-способ), удешевлении, возможности использования в рутинных исследованиях. Реализация изобретения позволит контролировать эффективность проводимого лечения и выявлять доклинические состояния вторичных иммунодефицитов, аутоиммунных и опухолевых процессов.
Claims (1)
- Экспресс-способ определения нарушений иммунного статуса организма человека путем проведения реакции лизиса эритроцитов барана сывороткой крови человека с использованием эндогенных гетерофильных антител при температуре 37,0±0,5°С с последующим выявлением лизиса эритроцитов, отличающийся тем, что лизис эритроцитов барана проводят 25% сывороткой крови человека в присутствии 0,288 М NaCl в буферном растворе в течение 10 мин, определяют степень ингибирования лизиса эритроцитов, при наличии ингибирования активности комплемента менее 35% оценивают повышенную реакцию иммунной системы организма человека, от 35% до 70% - нормальную, более 70% - пониженную.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2009138321/15A RU2422831C1 (ru) | 2009-10-19 | 2009-10-19 | Экспресс-способ определения нарушения иммунного статуса организма человека |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2009138321/15A RU2422831C1 (ru) | 2009-10-19 | 2009-10-19 | Экспресс-способ определения нарушения иммунного статуса организма человека |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2009138321A RU2009138321A (ru) | 2011-04-27 |
RU2422831C1 true RU2422831C1 (ru) | 2011-06-27 |
Family
ID=44731197
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2009138321/15A RU2422831C1 (ru) | 2009-10-19 | 2009-10-19 | Экспресс-способ определения нарушения иммунного статуса организма человека |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2422831C1 (ru) |
-
2009
- 2009-10-19 RU RU2009138321/15A patent/RU2422831C1/ru active IP Right Revival
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2009138321A (ru) | 2011-04-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Ruddy et al. | The complement system in rheumatoid synovitis I. An analysis of complement component activities in rheumatoid synovial fluids | |
Boyle et al. | Serum uric acid levels in normal pregnancy with observations on the renal excretion of urate in pregnancy | |
Dale | Plasma levels of the calcium-binding Li leukocyte protein: standardization of blood collection and evaluation of reference intervals in healthy controls | |
RU2437098C1 (ru) | Способ экспресс-определения атерогенности крови (варианты) | |
RU2666957C1 (ru) | Способ определения функциональной активности с3-конвертазы альтернативного пути активации комплемента человека | |
RU2422831C1 (ru) | Экспресс-способ определения нарушения иммунного статуса организма человека | |
RU2452962C2 (ru) | Способ и тест-система определения циркулирующих иммунных комплексов | |
RU2465588C1 (ru) | Способ диагностики лейкоза крупного рогатого скота | |
RU2526824C1 (ru) | Способ определения функциональной активности ионизированного кальция в сыворотке крови человека | |
Selenkow et al. | Thyroid autoantibodies and a biologic false-positive reaction to the test for syphilis | |
RU2680848C1 (ru) | Способ оценки характера аутоиммунной реакции организма человека на множественно модифицированные липопротеины низкой плотности в литическом тесте | |
RU2179316C2 (ru) | Способ диагностики иммунодефицитного состояния | |
RU2343484C2 (ru) | Способ определения циркулирующих иммунных комплексов | |
RU2613908C1 (ru) | Способ определения активности патологического процесса у больных рассеянным склерозом | |
RU2538685C1 (ru) | Способ экспресс-определения холестерина в иммунных комплексах | |
RU2540908C2 (ru) | Способ диагностики анемического синдрома у детей | |
Cooper | Identification of the Serum Fraction Carrying Syphilitic Reagin by Electrophoresis. | |
RU2378650C1 (ru) | Способ оценки устойчивости эритроцитов | |
RU2152615C1 (ru) | Способ прогнозирования исхода острого периода ожоговой болезни | |
RU2415430C1 (ru) | Способ определения циркулирующих иммунных комплексов | |
RU2550664C1 (ru) | Способ индивидуальной оценки принадлежности пациентов к хронической сердечной недостаточности | |
SU1647404A1 (ru) | Способ дифференциальной диагностики идиопатической тромбоцитопенической пурпуры и гипопластической анемии | |
SU1469464A1 (ru) | Способ определени резистентности эритроцитов | |
RU2008676C1 (ru) | Способ оценки дисфункции полиморфно-ядерных лейкоцитов при гнойно-септической инфекции | |
RU2564437C2 (ru) | Способ определения общей окислительно-восстановительной активности фагоцитов в тесте восстановления нитросинего тетразолия при лейкозе крупного рогатого скота |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20111020 |
|
NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20130620 |