RU2407789C2 - Способ получения живой клеточной вакцины для профилактики рака молочных желез - Google Patents
Способ получения живой клеточной вакцины для профилактики рака молочных желез Download PDFInfo
- Publication number
- RU2407789C2 RU2407789C2 RU2008130673/13A RU2008130673A RU2407789C2 RU 2407789 C2 RU2407789 C2 RU 2407789C2 RU 2008130673/13 A RU2008130673/13 A RU 2008130673/13A RU 2008130673 A RU2008130673 A RU 2008130673A RU 2407789 C2 RU2407789 C2 RU 2407789C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- mice
- passages
- tumor
- vitro
- Prior art date
Links
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 title claims description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims description 5
- 229940030156 cell vaccine Drugs 0.000 title claims description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 title claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 45
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims abstract description 34
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 29
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims abstract description 19
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 claims abstract description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims abstract description 4
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 claims abstract description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 239000002356 single layer Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 claims description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 2
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000001919 adrenal effect Effects 0.000 claims 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 14
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 7
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 abstract description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 abstract description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 abstract description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 abstract 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 abstract 1
- 238000012786 cultivation procedure Methods 0.000 abstract 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 13
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 9
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 8
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 5
- 201000008274 breast adenocarcinoma Diseases 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 241000208140 Acer Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000700626 Cowpox virus Species 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 208000035472 Zoonoses Diseases 0.000 description 1
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 244000037640 animal pathogen Species 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 201000003740 cowpox Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 238000002689 xenotransplantation Methods 0.000 description 1
- 206010048282 zoonosis Diseases 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/00119—Melanoma antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5152—Tumor cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
- A61K2039/812—Breast
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Культивируют клетки доброкачественной спонтанной опухоли молочной железы мыши. Сначала in vitro в среде DMEM/RPMI-1640 с 10% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота до 20 пассажей. Затем in vivo до 22 пассажей. Потом опять in vitro до 25 пассажей. После чего вводят 10 тысяч - 1 миллион полученных клеток в соединительнотканную капсулу, образованную у мышей линии Balb/c после введения им биосовместимого геля. Обеспечивают рост опухоли. Инкапсулированную опухоль асептически извлекают и подвергают трипсинизации с получением первичных эпителиальных культур клеток. Полученные клетки в концентрации 10 тысяч - 1 миллион вводят в капсулу, образованную гелем под кожей мышей линии Balb/c. Снова обеспечивают рост опухоли, предназначенной для вакцинации. При этом при культивировании in vitro клетки перевивают 1 раз в неделю, рассеивая в соотношении 1:3 - 1:4, дважды споласкивая монослой раствором ЕДТА и снимая его 0,25% раствором трипсина за 2-3 мин при комнатной температуре, а трипсинизацию останавливают добавлением 10% фетальной сыворотки к.р.с. Изобретение позволяет создавать противоопухолевую вакцину, применение которой основано на принципе прививки человеку живого патологического материала от животного со сходным заболеванием. 3 ил.
Description
Изобретение относится к иммуноонкологии и представляет собой способ получения перевиваемой линии опухолевых клеток мыши, обладающих свойствами вакцины против аденокарциномы молочных желез. Являясь доброкачественной опухолью мышей линии Balb/c, полученная линия клеток предназначена для трансплантации на сингенных животных только при условии введения клеток в предварительно созданную соединительно тканую капсулу. При ксенотрансплантации человеку полученная таким образом линия клеток, называемая BBCV, может быть предложена как безопасный иммуногенный препарат для профилактики аденокарциномы молочной железы у женщин (Линия BBCV депонирована в Специализированной коллекции культур клеток позвоночных Российской коллекции клеточных культур и сохраняется в банке культур клеток МНИИМЭ, см. Приложение, Паспорт линии клеток BBCV).
Уровень техники.
В основу изобретения положена известная вакцина Дженнерра, вызывающая у человека сходный с болезнью патологический процесс, но ограниченный местом введения и создающий иммунитет против ангигенно родственного патологического начала.
Иммунопрофилактика в онкологии в настоящее время развивается по нескольким направлениям. Наиболее привлекательной для клиницистов является постхирургическая профилактика метастазирования и генерализации опухолевого процесса. Препараты, применяемые в этой области, именуются вакцинами, в том смысле, что они действуют как активные специфические стимуляторы противоопухолевого иммунитета. В определенном смысле их воздействие должно быть более терапевтическим, чем профилактическим, что принципиально отличает большинство разрабатываемых онкологических вакцин от классических профилактических вакцин, успешно применяемых в инфекционной патологии. Профилактика заболевания путем искусственного воспроизведения сходного, но доброкачественного процесса, была той исходной вакцинацией, которую сэр Эдвард Дженнер ввел в медицинскую практику более 200 лет назад. Прививка коровьей оспы, vaccinia, vacca - корова (лат.), по Дженерру начала борьбу с вирусом оспы человека задолго до появления самого слова вирус и описания вируса оспы
Инфекции, общие для человека и животных (зоонозы), и потенциальная опасность возникновения новых болезней при заражении человека вирусами животных препятствовала попыткам повторения схемы Дженнера - применению возбудителя болезни животного в качестве вакцины против болезни человека. Первая удачная пара такого рода - вирус оспы коров против оспы человека оказалась практически единственной. Но именно этот подход позволил ликвидировать оспу человека как заболевание во всем мире. При создании изобретения также принималось во внимание известное из уровня техники использование ангигенно модифицированных клеточных вакцин из раковых клеток для лечения онкологических заболеваний US 7094603, C12N 15/83, 08.22.2003 /1/.
Сущность изобретения.
Результатом, на который направлено изобретение, является создание противоопухолевой вакцины, применение которой основано на принципе прививки человеку живого патологического материала от животного со сходным заболеванием. При реализации заявленного способа получена вакцина, представляющая собой перевиваемую линию опухолевых клеток мыши, обладающих свойствами вакцины против аденокарциномы молочных желез. При этом были использованы принципы, раскрывающие возможность накопления кленовых линий клеток, описанные, например, в US 4003789, C12N 5/06, 18.01.1977 /2, 4/, а также принципы, подтверждающие возможность использование инертного геля для создания соединительнотканной капсулы, описанные в US 6972194, А61К 9/00, 06.12.2005 /3/.
В основу изобретения положена задача использования доброкачественной опухоли мышей Balb/c - линии клеток, перевиваемой при трансплантации на сингенных животных только при условии введения клеток в предварительно созданную соединительнотканую капсулу. При этом поскольку линия клеток может бесконечно долго культивироваться in vitro в питательной среде ДМЕМ/RPMI-1640 с 10% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота, что обеспечивает возможность накопления производственных количеств стандартного вакцинного материала.
Линия BBCV была получена из доброкачественной спонтанной опухоли молочной железы мыши линии Balb/c в лаборатории гибридомной биотехнологии МНИИМЭ и культивировалась в течение 7 лет in vitro и in vivo. Клетки BBCV культивировали in vitro 20 пассажей, затем прошли 22 пассажа in vivo на мышах линии Balb/c и далее культивировались in vitro 25 пассажей. Среда культивирования - DMEM/RPMI-1640 с 10% эмбриональной сыворотки к.р.с. Температура культивирования +37°С. Клетки перевивали 1 раз в неделю, рассевая 1:3-1:4. Монослой дважды споласкивали раствором ЕДТА и снимали 0.25% раствором трипсина за 2-3 мин при комнатной температуре.
Трансплантация опухоли не удавалась при введении 1.0 млн клеток внутривенно, внутрибрюшинно или подкожно сингенным мышам линии Balb/c. Животные оставались здоровы при сроке наблюдения двенадцать месяцев.
Было выявлено, что линия BBCV вызывает доброкачественную солидную опухоль при ведении 10 тыс. - 1.0 млн клеток в соединительнотканную капсулу, образованную у мышей линии Balb/c после введения биосовместимого геля (Матригель, Силикон, Агароза и Полиакриламидного геля, приведенного в US 6972194, А61К 9/00, 06.12.2005 /3/). Эта линия клеток также не вызывает опухолей при подкожном и внутрибрюшинном введении 100 тыс. клеток мышам линий С3Н, ДВА.2 и C57Black/6.
При культивировании in vivo инкапсулированную опухоль асептически извлекали и подвергали трипсинизации по стандартной методике получения первичных эпителиальных культур клеток: 2,5% трипсин, 20 мин, 37°С. Трипсинизацию останавливали добавлением 10% фетальной сыворотки к.р.с. Клетки осаждали центрифугированием при 1500 об/мин, ресуспендировали в среде RPMI-1640 до концентрации 1 млн/мл и вводили в дозе 10 тыс. - 1 млн в капсулу, образованную гелем под кожей мышей линии Balb/c. Рост опухолей начинается через 1-2 недели.
Свойство иммуногенности проявлялось следующим образом.
При аллогенной трансплантации 10 млн клеток в соединительную капсулу мышам линии C57Black/6 клетки BBCV не вызывают образования опухоли, но создают протективный иммунитет, защищающий мышей от развития сингенной аденокарциномы Са-755, введенной подкожно в дозе 100 млн клеток. На фиг.1 представлены суммарные результаты эксперимента по оценке вакцинирующего эффекта клеток BBCV для мышей C57Black/6. Три группы по 4 мыши были вакцинированы введением клеток в соединительнотканые капсулы, образованные под кожей в области лопатки предварительным введением 0.5 мл одного из следующих инертных гелей: 2% полиакриламидного, 2% агарозного и жидкого силиконового (наполнителя протезов груди), по 4 животных на каждый гель. Все гели были оценены по способности образовывать соединительнотканные капсулы и поддерживать рост клеток BBCV у сингенных мышей Balb/c в отдельном эксперименте. Гели были одинаково эффективны в поддержании роста сингенной опухоли, достигавшей размера 4-6 см2 через 20-30 дней после введения в них клеток BBCV мышам Balb/c. У мышей линии C57Black/6 клетки BBCV не вызывали образования опухолей и через месяц после их введения, вакцинированным таким образом мышам, вводили по 100 млн клеток сингенной аденокарциномы Са-755 (5, 6). У 10 контрольных животных опухоли появились на 6-7 день и развивались до состояния несовместимого с жизнью до 14-15 дня. У вакцинированных животных опухоли появлялись на 5-7 дней позже и вообще не образовались у 20% мышей (фиг.1).
Подкожное введение аллогенных клеток BBCV мышам линии C57Black/6, без использования соединительно тканной капсулы, не вызывало образования у животных протективного иммунитета против сингенной опухоли Са-755.
При использовании для трансплантации сингенной аденокарциномы меньшей дозы клеток Са-755 эффект вакцинации аллогенными клетками BBCV достигал 100%, при удлинении срока жизни животных в контроле до 45 дней (фиг.2).
Из проведенных экспериментов следует, что доброкачественная опухолевая линия BBCV, сингенная для мышей линии Balb/c, может служить профилактической аллогенной вакциной против аденокарциномы Са-755 у мышей линии C57Black/6.
Вакцинация животных клетками BBCV приводила к нарастанию в их сыворотках антител к клеткам опухоли молочных желез мыши Са-755 и человека MCF-7, культивируемых in vitro.
Исследования показали, что аденокарцинома молочной железы BBCV является трансплантируемой опухолью, сингенной для мышей линии Balb/c при условии трансплантации опухолевых клеток в соединительнотканную капсулу и, как следствие, был сделан вывод о том, что линия клеток BBCV может быть применена как живая аллогенная вакцина против аденокарциномы мышей.
Принципиальная возможность профилактической вакцинации при раке молочных желез ксеногенными опухолевыми клетками была нами показана в эксперименте по вакцинации мышей человеческой аденокарциномой MCF-7. В этом эксперименте четырем мышам С57Вlаск/6, с предварительно сформированной у них под кожей соединительнотканной капсулой, были введены клетки MCF-7, выращенные в условиях in vitro. Клетки осаждали центрифугированием и вводили в капсулу в объеме 0,25 мл в дозе 10 млн клеток на мышь. Через 30 дней четырем контрольным и четырем вакцинированным мышам под кожу было введено по 10 млн клеток сингенной аденокарциномы Са-755 (фиг.3).
Эффект ксеногенной вакцинации проявился в более позднем, на 8-10 дней, появлении опухолей у вакцинированных животных и в достоверном увеличении продолжительности их жизни на 14 дней. Несмотря на то, что у всех вакцинированных человеческой аденокарциномой мышей в конце концов развилась опухоль Са-755, защитный эффект вакцинации был достоверным. В момент гибели контрольных мышей все вакцинированные мыши были живы и их опухоли только начинали расти.
Невысокая эффективность ксеногенной вакцинации на модели MCF-7 - Са755 может объясняться, в первую очередь тем, что использованная человеческая аденокарцинома - это культура клеток с многолетней историей жизни in vitro, успевшая сильно измениться по сравнению с опухолью в живом организме. Опухоли мыши и человека, растущие в одинаковых условиях in vivo, могут иметь большее антигенное родство и, следовательно, могут служить более эффективными ксеногенными вакцинами.
При ксенотрансплантации человеку линия клеток BBCV может быть предложена как безопасный иммуногенный препарат для профилактики аденокарциномы молочной железы у женщин.
Реализация заявленного способа получения живой клеточной вакцины обеспечила создание линии клеток мыши, не вызывающей опухоли у сингенных мышей при обычных методах трансплантации. При этом данная линия клеток мыши, трансплантируемая как доброкачественная опухоль, не метастазирует при условии введения в соединительнотканную капсулу сингенной мыши. Данная линия клеток мыши, вызывающая защитный иммунитет (вакцина), может быть трансплантирована в соединительнотканную капсулу аллогенным и ксеногенным реципиентам. При этом аллогенным реципиентом является любая мышь, не линии Balb/c, a ксеногенным реципиентом является человек.
Литература
1. US 7034603, A61K 38/16, 08.22.2003.
2. US 4003789, C12N 5/06, 18.01.1977.
3. US 6972194, A61K 9/00, 06.12.2005.
4. A.D.Borowsky, R.Namba, L.J.T.Young, K.W.Hunter, J.G.Hadgson, C.G.Tepper, E.T.McGoldrick, W.J.Muller, R.D.Cardiff, J.P.Gregg. Syngeneic mouse mammary carcinoma cell lines: Two closely related cell lines with divergent metastatic behavior. Clinical & Experimental Metastasis. 22, 47-58, 2005.
5. Liautaud-Roger F., Desoize В., Mili H., Carpenter Y., Delvicourt C., Conix P. Serum enzymes and triglycerides in mice with a mammary tumor (Ca-755 adenocarcinoma), Pathol.Biol. (Paris), 1987, Oct, 35(8): 1119-22.
6. Niimura К., Furisho Т., Fujii M., Takahashi N., Matsunaga K., Sugita N., Toshikumi C., Kawai Y. Tumor and tissue distribution of 1251 - labeled natural and anti-tumor antibodies in murine experimental tumor systems. Anticancer Res. 1988, jul-Aug, 8(4); 589-93.
Приложение: Паспорт линии клеток BBCV на 3 л.
Claims (1)
- Способ получения живой клеточной вакцины для профилактики рака молочной железы, включающий культивирование клеток добракачественной спонтанной опухоли молочной железы мыши:
in vitro в среде DMEM/RPMI-1640 с 10% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота до 20 пассажей;
in vivo до 22 пассажей;
in vitro до 25 пассажей;
вводят 10 тысяч-1 миллион полученных клеток в соединительнотканную капсулу, образованную у мышей линии Balb/c после введения им биосовместимого геля;
обеспечивают рост опухоли;
инкапсулированную опухоль асептически извлекают и подвергают трипсинизации с получением первичных эпителиальных культур клеток;
полученные клетки в концентрации 10 тысяч-1 миллион вводят в капсулу, образованную гелем под кожей мышей линии Balb/c;
обеспечивают рост опухоли, предназначенной для вакцинации;
при этом при культивировании in vitro клетки перевивают 1 раз в неделю, рассеивая в соотношении 1:3 - 1:4, дважды споласкивая монослой раствором ЕДТА и снимая его 0,25%-ным раствором трипсина за 2-3 мин при комнатной температуре, а трипсинизацию останавливают добавлением 10% фетальной сыворотки к.р.с.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008130673/13A RU2407789C2 (ru) | 2008-07-25 | 2008-07-25 | Способ получения живой клеточной вакцины для профилактики рака молочных желез |
| PCT/RU2009/000368 WO2010011161A1 (ru) | 2008-07-25 | 2009-07-24 | Способ получения живой клеточной вакцины для профилактики рака молочных железы |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008130673/13A RU2407789C2 (ru) | 2008-07-25 | 2008-07-25 | Способ получения живой клеточной вакцины для профилактики рака молочных желез |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2008130673A RU2008130673A (ru) | 2010-02-10 |
| RU2407789C2 true RU2407789C2 (ru) | 2010-12-27 |
Family
ID=41570481
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008130673/13A RU2407789C2 (ru) | 2008-07-25 | 2008-07-25 | Способ получения живой клеточной вакцины для профилактики рака молочных желез |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2407789C2 (ru) |
| WO (1) | WO2010011161A1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2500392C2 (ru) * | 2011-11-16 | 2013-12-10 | Виктор Владимирович Кешелава | Способ профилактики онкологических заболеваний |
| RU2759487C1 (ru) * | 2021-04-22 | 2021-11-15 | федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ усиления роста меланомы В16/F10 по сравнению с ростом меланомы В16/F10 при самостоятельной перевивке и замедления роста LLC (карциномы Льюиса) по сравнению с ростом LLC при самостоятельной перевивке при первично-множественных злокачественных опухолях на фоне первичного иммунодефицита |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4431401A1 (de) * | 1994-08-24 | 1996-02-29 | Max Delbrueck Centrum | Lebendvakzine gegen Tumorerkrankungen |
| US20030082136A1 (en) * | 2001-10-30 | 2003-05-01 | Bill Minshall | Anti-tumor vaccine |
| UA73671C2 (en) * | 2004-01-28 | 2005-08-15 | Kavetsky Inst Of Ex Pathology | Method for obtaining anticancer vaccine and method for treating cancer patients |
-
2008
- 2008-07-25 RU RU2008130673/13A patent/RU2407789C2/ru not_active IP Right Cessation
-
2009
- 2009-07-24 WO PCT/RU2009/000368 patent/WO2010011161A1/ru active Application Filing
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2500392C2 (ru) * | 2011-11-16 | 2013-12-10 | Виктор Владимирович Кешелава | Способ профилактики онкологических заболеваний |
| RU2759487C1 (ru) * | 2021-04-22 | 2021-11-15 | федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ усиления роста меланомы В16/F10 по сравнению с ростом меланомы В16/F10 при самостоятельной перевивке и замедления роста LLC (карциномы Льюиса) по сравнению с ростом LLC при самостоятельной перевивке при первично-множественных злокачественных опухолях на фоне первичного иммунодефицита |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2008130673A (ru) | 2010-02-10 |
| WO2010011161A1 (ru) | 2010-01-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wallis et al. | Novel approaches for the design, delivery and administration of vaccine technologies | |
| Mohsen et al. | Virus‐like particles for vaccination against cancer | |
| Crews et al. | Prophylactic cancer vaccines engineered to elicit specific adaptive immune response | |
| ES2703780T3 (es) | Preparación de una vacuna que contiene anticuerpos trifuncionales con propiedades potenciadoras de la inmunogenicidad del antígeno | |
| Schmidt-Wolf et al. | Cytokines and gene therapy | |
| US4108983A (en) | Viral oncolysate vaccine for stimulating the immune mechanism of mammals to species-specific tumors | |
| US8802113B2 (en) | Extracellular matrix cancer vaccine adjuvant | |
| CN105899217A (zh) | 癌症疗法中的番木瓜花叶病毒和病毒样颗粒 | |
| CA2667075C (en) | Extracellular matrix cancer vaccine adjuvant | |
| CN103800896A (zh) | 一种自体肿瘤疫苗的制备方法及其应用 | |
| JP2012021028A5 (ru) | ||
| CN109078180A (zh) | 用于增强免疫响应的复合物 | |
| ES2206696T3 (es) | Perlas de agarosa-colageno implantables que contienen celulas que producen un producto biologico difundible, y sus usos. | |
| RU2407789C2 (ru) | Способ получения живой клеточной вакцины для профилактики рака молочных желез | |
| Wang et al. | Development and applications of mRNA treatment based on lipid nanoparticles | |
| CN106867963A (zh) | 射线修饰脐带成体干细胞3d微球活制剂及其制备与应用 | |
| CN106456532A (zh) | 使用酵母细胞壁颗粒的疫苗递送系统 | |
| Ruzzi et al. | Virus-like particle (VLP) vaccines for cancer immunotherapy | |
| CN110124021A (zh) | 一种新型肿瘤疫苗的制备方法 | |
| CN103816535B (zh) | 一种肿瘤疫苗及其制备方法 | |
| ES2635516T3 (es) | Sensibilización para vacunación con TH1 para inmunoterapia activa | |
| CN103861107B (zh) | 一种药物组合物及其用途 | |
| Galili | Conversion of Tumors into Autologous Vaccines by Intratumoral Injection of α‐Gal Glycolipids that Induce Anti‐Gal/α‐Gal Epitope Interaction | |
| ES2335490T3 (es) | Vacunacion con celulas inmunoaisladas y productoras de un inmunomodulador. | |
| CN1887296B (zh) | 一种诱导抗肿瘤免疫的方法及其在制药中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190726 |