RU2404249C1 - Способ получения водорастворимых полисахаридов из плодового тела трутовика лекарственного, обладающих иммунотропной активностью - Google Patents
Способ получения водорастворимых полисахаридов из плодового тела трутовика лекарственного, обладающих иммунотропной активностью Download PDFInfo
- Publication number
- RU2404249C1 RU2404249C1 RU2009116059/13A RU2009116059A RU2404249C1 RU 2404249 C1 RU2404249 C1 RU 2404249C1 RU 2009116059/13 A RU2009116059/13 A RU 2009116059/13A RU 2009116059 A RU2009116059 A RU 2009116059A RU 2404249 C1 RU2404249 C1 RU 2404249C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vill
- soluble polysaccharides
- ethyl alcohol
- fruit body
- activity
- Prior art date
Links
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к способам получения водорастворимых полисахаридов из природного сырья. Способ получения водорастворимых полисахаридов из плодового тела трутовика лекарственного (Fomitopsis officinalis (Vill.) Bondartsev et Singer, сем. Polyporaceae, класса базидиомицетов - Basidiomycetes) предусматривает экстракцию измельченного сырья смесью хлороформ-спирт этиловый 95% в соотношении 1:2. Затем высушенное обезжиренное сырье трижды экстрагируют горячей водой при соотношениях сырья и экстрагента 1:20, 1:15, 1:10 и продолжительности экстрагирования в течение 6-ти часов. Объединенный экстракт упаривают. Далее фильтруют, осаждают спиртом этиловым 95%, центрифугируют, отделяют и очищают. Изобретение позволяет получить водорастворимые полисахариды трутовика лекарственного с иммунотропной активностью. 4 табл.
Description
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается получения субстанций, влияющих на иммунные процессы в организме.
Известен способ получения бета-глюканов из клеточной стенки дрожжей воздействием ультразвуком (Патент RU №2216595). Недостатком данного способа является использование дорогостоящего оборудования.
Известен способ выделения полисахаридного комплекса пектина и каррагинана из сырья растительного происхождения путем пропускания экстрагирующей жидкости через неподвижный слой полисахаридсодержащего сырья растительного происхождения с целью одновременного осуществления гидролиза и экстракции полисахарида из сырья растительного происхождения и отделения раствора, содержащего полисахарид, от остающегося твердого материала растительного происхождения (заявка на изобретение №95109852).
Известен способ получения «Бефунгина» (экстракт наростов березового гриба чаги), обладающего иммуномодулирующим действием (Трутнева И.А., Горовая Т.Л., Дудченко Л.Г. Высшие базидиальные грибы - объект медицинских исследований: иммуномодулирующая активность. - Фитотерапия на Украине. - 2003. - №1. - С.32-36), который заключается в следующем: наросты чаги, раздробленные до размера частиц около 3 мм (±0,4 мм), экстрагируют водой по принципу противотока в диффузионной батарее из 6 диффузоров при последовательно повышающейся от 40 до 65°С температуре от головного диффузора до хвостового, при продолжительности настаивания в каждом диффузоре - 1 час. Соки, получаемые с головных диффузоров, фильтруют. В фильтрате определяют по удельному весу сухой остаток, а затем добавляют водный раствор кобальта хлорида или кобальта сульфата, в количествах, предусмотренных регламентом, после чего упаривают при температуре 50-55° при остаточном давлении 70 мм рт. ст. Концентрат охлаждают до 40°С до содержания сухих веществ не выше 20%. В целях консервирования добавляют спирт этиловый из расчета 10% от веса концентрата (Якимов Н.А., Андреева С.М., Алексеева Е.В. Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. - М.-Л., 1961. - С.129-137).
Бефунгин (полугустой экстракт плодового тела чаги) имеет горький вкус, помимо полисахаридов содержит полифенолкарбоновый комплекс, чаговые кислоты и др. В связи с недостаточной высокой онкостатической активностью бефунгин применяют длительно, в комплексной терапии, что вызывает дискенетические явления и аллергические реакции у больных. Кроме того, бефунгин содержит соли тяжелого металла - кобальта. Недостатком данного способа полисахаридов является низкий коэффициент использования сырья, которое заключается в извлечении только водорастворимых (ВРПС) компонентов чаги, не предусматривающем дальнейшую переработку сырья.
Данный способ получения полисахаридов является наиболее близким к предлагаемому и поэтому взят нами за прототип.
Технической задачей предлагаемого изобретения является получение водорастворимых полисахаридов из трутовика лекарственного безотходным способом, обладающих повышенной иммунотропной активностью. Технический результат достигается при использовании предложенного способа, который состоит в следующем.
Плодовое тело трутовика лекарственного (Fomitopsis officinalis (Vill.) Bondartsev & Singer), сем. Polyporaceae, класса базидиомицетов - Basidiomycetes), измельченное до размеров не более 3 мм, экстрагируют в аппарате Сокслета смесью хлороформ-спирт этиловый 95% (1:2) до полного истощения сырья. Полученное извлечение упаривают при температуре 50-60°С до состояния густой массы, затем высушивают при температуре 100°С до остаточной влажности 5%. Полученный экстракт используют для получения липидной фракции и агарициновой кислоты; обезжиренное сырье высушивают до удаления запаха растворителей, взвешивают и экстрагируют трижды горячей водой на кипящей водяной бане с обратным холодильником (при суммарном соотношении сырья и экстрагента 1:20, 1:15, 1:10). Суммарная продолжительность трех экстрагирований - 6 часов. Полученные водные экстракты объединяют и упаривают на роторно-пленочном испарителе при температуре 50°С до 1/5 первоначального объема, фильтруют. Из полученного концентрата водорастворимые полисахариды выделяют добавлением четырехкратного объема спирта этилового 95% и выдерживанием при температуре -5°С в течение 12-ти часов. После центрифугирования осадок отделяют, промывают спиртом этиловым 95% и ацетоном на стеклянном фильтре, сушат при температуре 30°С и взвешивают.
Пример конкретного выполнения способа.
100,0 г сырья плодового тела трутовика лекарственного, измельченного до размера частиц не более 3 мм, экстрагируют в аппарате Сокслета смесью хлороформ-спирт этиловый 95% (1:2) до полного истощения сырья. Полученное извлечение упаривают при температуре 50-60°С до состояния густой массы, затем высушивают при температуре 100°С до остаточной влажности 5%. Полученный экстракт используют для получения агарициновой кислоты и липидной фракции; обезжиренное сырье высушивают до удаления запаха растворителей, взвешивают и экстрагируют трижды горячей водой на кипящей водяной бане с обратным холодильником (при суммарном соотношении сырья и экстрагента 1:20, 1:15, 1:10). Суммарная продолжительность трех экстрагирований - 6 часов. Полученные водные экстракты объединяют и упаривают на роторно-пленочном испарителе при температуре 50°С до 1/5 первоначального объема, фильтруют. Из полученного концентрата водорастворимые полисахариды выделяют добавлением четырехкратного объема спирта этилового 95% и выдерживанием при температуре -5°С в течение 12-ти часов. После центрифугирования осадок отделяют, промывают спиртом этиловым 95% и ацетоном на стеклянном фильтре, сушат при температуре 30°С. Взвешивают. Выход составляет 6,5% в пересчете на абсолютно сухое сырье.
Выявляя влияние водорастворимых полисахаридов трутовика лекарственного на иммунную систему животных, изучают как специфические, так и неспецифические факторы иммунного ответа. Эксперимент проводят на белых беспородных крысах обоего пола, содержащихся в общевиварийном режиме, массой 200-220 г. Животных для исследования получают из питомника лабораторных животных «Рапполово» АМН РФ и содержат в условиях вивария ПятГФА при одинаковых условиях и на стандартном рационе питания. Все травматические манипуляции на животных проводят под эфирным наркозом. Животных делят на три группы: 1) контроль-1;
2) контроль-2; 3) опытная группа.
Контрольной группе интактных животных (контроль-1) вводят физиологический раствор в тех же объемах и в те же сроки, что животным второй и третьей групп.
Контроль-2 составляют животные, получающие в качестве препарата сравнения официальный препарат «Бефунгин», вводимый в перерасчете на терапевтическую дозу в течение 5 дней.
Опытной группе животных вводят исследуемое вещество (фракцию ВРПС трутовика лекарственного) в дозе 100 мл/кг в течение 5 дней. Иммунизацию животных осуществляют внутрибрюшинным введением эритроцитов барана в дозе 2·108 клеток/мл.
Статистическая обработка материала осуществляется по Т-критерию Стьюдента.
Исследование иммунотропного действия ВРПС трутовика лекарственного проводят путем изучения неспецифических и специфических механизмов защиты, обусловленных клеточными и гуморальными факторами.
1. Гуморальные факторы неспецифической резистентности изучают по определению бактерицидной активности сыворотки (БАС) крови нефелометрическим методом [Бухарин О.В. Факторы естественного иммунитета. - Оренбург, 1979. - С.43-45]. Выраженность реакции определяют по разнице процента гибели суточной культуры Esherichia coli (штамм 011) в контрольной и опытной пробе, содержащей сыворотку. Процент активности вычисляют по формуле:
где
Ак - оптическая плотность контроля;
Aо - оптическая плотность опыта.
В результате проведенных исследований установлено, что под влиянием ВРПС трутовика происходит снижение бактерицидной активности сыворотки крови на 45,8%. Препарат сравнения не изменяет исходный интактный уровень БАС (табл.1).
2. Клеточные неспецифические факторы изучают на примере фагоцитоза путем добавления в цитратную кровь суточной культуры Esherichia coli (штамм 0 11) [Иванов А.И., Чухловин Б.А. К методике определения поглотительной и переваривающей способности нейтрофилов. - Лабораторное дело, 1967, №10, С. 108-110; 610-613]. В мазках крови подсчитывают показатели фагоцитарной активности нейтрофилов: фагоцитарную активность лейкоцитов (ФАЛ), фагоцитарный индекс лейкоцитов (ФИЛ), показатель завершенности фагоцитоза (ПЗФ). Показатели фагоцитарной активности опыта выше относительно контроля: ФАЛ - на 47%, ФИЛ - на 59%, ПЗФ - на 59% соответственно (табл.2).
3. Специфические механизмы защиты рассматривают на модели формирования первичного иммунного ответа по гуморальному типу методом безагарового локального гемолиза в монослое эритроцитов в модификации Каннингейма. Метод используют для оценки гуморального иммунитета [Иммунологические методы / Под ред. Фримеля Г. - М.: Медицина, 1987. - С.57-62]. Иммунный ответ оценивают после иммунизации путем подсчета количества антителообразующих клеток (АОК) кариоцитов в селезенке у крыс.
Под влиянием препарата «Бефунгин» наблюдают снижение АОК на 45,8%, а под влиянием ВРПС трутовика - на 39,8% (табл.3).
4. Специфические механизмы защиты по оценке клеточного иммунитета изучают на модели формирования первичного иммунного ответа путем определения розеткообразующих клеток (РОК) в селезенке у крыс. В мазке подсчитывают 200 лейкоцитов, определяя среди них РОК в пересчете на их процентное содержание [Иммунологические методы / Под ред. Фримеля Г. - М.: Медицина, 1987, - С.242-252]. Под влиянием препарата «Бефунгин» и ВРПС наблюдают значительное повышение уровня клеточного иммунитета относительно интактных животных. Бефунгин повышает активность клеточного иммунитета на 51,17%, а ВРПС трутовика - на 74,61% (табл.4).
Результаты показали, что введение ВРПС трутовика в организм влияет на формирование специфического ответа в организме у крыс и факторов неспецифической резистентности. Происходит стимулирование ответа по клеточному типу на формирование иммунного ответа в селезенке у крыс и повышение показателей фагоцитарной активности нейтрофилов крови. Однако при действии на гуморальное звено заявляемого объекта наблюдается угнетение формирования гуморального ответа в селезенке и снижение бактерицидной активности сыворотки у крыс.
Таблица 1 | |||
Влияние ВРПС трутовика на бактерицидную активность сыворотки крови (БАС) | |||
№ п/п | Исследуемые группы | БАС (% активности) | Процентное содержание относительно контроля |
1 | Контроль-1 (интактные) | 32,75±2,08 | - |
2 | Контроль-2 | 29,08±2,0 | |
(Бефунгин - препарат сравнения) | Р>0,05 | ||
3 | Опытная группа | 17,95±2,12 | 45,8↓ |
(ВРПС трутовика) | Р<0,001 | ||
Примечание: Р - (достоверность) относительно контроля-1 |
Таблица 2 | |||||||
Влияние ВРПС трутовика на показатели фагоцитарной активности нейтрофилов крови у крыс | |||||||
№ п/п | Исследуемые группы | ФАЛ (%) | ФИЛ, ед. | ПЗФ (%) | Процентное содержание относительно контроля | ||
ФАЛ | ФИЛ | ПЗФ | |||||
1 | Контроль (интактные) | 31,05±1,83 | 0,33±0,02 | 34,27±2,54 | - | - | - |
2 | Бефунгин | 47,12±2,47 | 0,49±0,02 | 26,25±2,77 | 52↑ | 48↑ | 30↑ |
Р<0,01 | Р<0,001 | Р<0,005 | |||||
3 | ВРПС трутовика | 45,5±2,18 | 0,47±0,02 | 54,63±2,5 | 47↑ | 42↑ | 59↑ |
Р<0,01 | Р<0,001 | Р<0,001 | |||||
Примечание: Р - (достоверность) относительно контроля - 1 |
Таблица 3 | |||
Влияние ВРПС трутовика на гуморальный иммунный ответ в селезенке у крыс | |||
№ п/п | Исследуемые группы | Количество АОК×106 спленоцитов | Процентное содержание относительно контроля |
1 | Контроль-1 (интактные животные) | 89,28±9,95 | |
2 | Контроль-2 | 48,34±4,62 | 45,8↓ |
(Бефунгин - препарат сравнения) | Р<0,01 | ||
3 | Опытная группа | 53,78±3,51 | 39,8↓ |
(ВРПС трутовика) | Р<0,01 | ||
Примечание: Р - (достоверность) относительно контроля-1 |
Таблица 4 | |||
Влияние ВРПС трутовика на клеточный иммунитет в селезенке у крыс | |||
№ п/п | Исследуемые группы | Количество РОК (%) в селезенке | Процентное содержание относительно контроля |
1 | Контроль (интактные) | 29,86±1,62 | - |
2 | Бефунгин | 45,14±3,21 | 51,17↑ |
Р<0,01 | |||
3 | ВРПС трутовика | 52,14±3,1 | 74,61↑ |
Р<0,001 | |||
Примечание: Р - (достоверность) относительно контроля-1 |
Claims (1)
- Способ получения средства, обладающего иммунотропной активностью, характеризующийся тем, что плодовое тело гриба трутовика измельчают до размеров частиц не более 3 мм, экстрагируют смесью хлороформа и спирта этилового 95%, которые берут в соотношении 1:2, высушенный шрот экстрагируют трижды горячей водой при соотношениях сырья и экстрагента 1:20, 1:15, 1:10 в течение 6 ч, объединенное извлечение упаривают при температуре 50°С до 1/5 первоначального объема, фильтруют, осаждают спиртом этиловым 95%, центрифугируют, отделяют и очищают.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2009116059/13A RU2404249C1 (ru) | 2009-04-27 | 2009-04-27 | Способ получения водорастворимых полисахаридов из плодового тела трутовика лекарственного, обладающих иммунотропной активностью |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2009116059/13A RU2404249C1 (ru) | 2009-04-27 | 2009-04-27 | Способ получения водорастворимых полисахаридов из плодового тела трутовика лекарственного, обладающих иммунотропной активностью |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2404249C1 true RU2404249C1 (ru) | 2010-11-20 |
Family
ID=44058442
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2009116059/13A RU2404249C1 (ru) | 2009-04-27 | 2009-04-27 | Способ получения водорастворимых полисахаридов из плодового тела трутовика лекарственного, обладающих иммунотропной активностью |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2404249C1 (ru) |
-
2009
- 2009-04-27 RU RU2009116059/13A patent/RU2404249C1/ru not_active IP Right Cessation
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN103800390B (zh) | 具有增强免疫力及保肝功能的保健品及其制备方法与应用 | |
CN113004432B (zh) | 一种铁皮石斛寡糖、铁皮石斛寡糖衍生物及其制备方法和应用 | |
US11633443B2 (en) | Algal extract comprising sulphated and non-sulphated polyanionic polysaccharides and uses thereof | |
KR101140753B1 (ko) | 악액질 치료에서 라노스테인 및 복령 추출물의 용도 | |
CN103156193A (zh) | 一种辅酶q10软胶囊及其制备方法 | |
CN107647395A (zh) | 一种具有提高免疫力功能的保健食品及其制备方法 | |
CN103446166B (zh) | 肝功能改善剂 | |
CN105796587B (zh) | 竹茹多糖在免疫调节、抗肿瘤中的应用 | |
RU2404249C1 (ru) | Способ получения водорастворимых полисахаридов из плодового тела трутовика лекарственного, обладающих иммунотропной активностью | |
WO2023036203A1 (zh) | Cs-4发酵菌丝体杂聚多糖及其制备方法与用途 | |
US4629627A (en) | Antiviral substance and the manufacturing method thereof | |
CN101948549B (zh) | 一种绞股蓝多糖的硫酸化修饰方法 | |
CN113456661A (zh) | 一种降尿酸的复合多糖组合物及其应用 | |
CN113181173B (zh) | 药用组合物及其在制备用于预防和/或治疗肝癌的产品中的应用 | |
CN106728962B (zh) | 一种增强免疫力的药物组合物及其应用 | |
CN105249465A (zh) | 一种提高免疫力的保健食品及其制备方法 | |
CN105106950B (zh) | 一种兽用疫苗的免疫佐剂、制备方法及其应用 | |
CN109771454A (zh) | 桦树茸提取物在制备治疗和/或预防高脂饮食致肝损伤相关疾病的制剂中的用途 | |
CN105708845B (zh) | 一种苯丙素类化合物及其药学上可接受的盐在制备治疗炎症性疾病的药物中的应用 | |
GB2079150A (en) | Antiviral substance from Basidiomycetes | |
CN110038090A (zh) | 一种具有抗痛风作用的复合芹菜籽油自乳化软胶囊及其制备方法 | |
CN109294984A (zh) | 一种体内高效扩增nk细胞的香菇多糖胶囊及其制备方法 | |
CN115141288B (zh) | 知母活性多糖、知母粗多糖及制备方法和应用 | |
RU2779914C1 (ru) | Способ получения днк-содержащего препарата для перорального применения и препарат, полученный этим способом | |
CN101450110B (zh) | 治疗心脑血管疾病的木波罗提取物及其制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110428 |
|
NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20140110 |
|
PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20161018 |
|
PD4A | Correction of name of patent owner | ||
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190428 |