RU2393816C1 - Способ подготовки спермы животных-производителей к ее использованию - Google Patents
Способ подготовки спермы животных-производителей к ее использованию Download PDFInfo
- Publication number
- RU2393816C1 RU2393816C1 RU2009105221/13A RU2009105221A RU2393816C1 RU 2393816 C1 RU2393816 C1 RU 2393816C1 RU 2009105221/13 A RU2009105221/13 A RU 2009105221/13A RU 2009105221 A RU2009105221 A RU 2009105221A RU 2393816 C1 RU2393816 C1 RU 2393816C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sperm
- medium
- granules
- carnitine
- freezing
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области животноводства. Способ включает смешивание углеводных, криогенно-протекторных и липидно-белковых компонентов в водной среде, смешивание со спермой и замораживание полученной смеси, затем при необходимости использования ее размораживание путем нагревания. При этом сперму со средой для разбавления смешивают в соотношении, равном 1:1. Последующее замораживание полученной смеси осуществляют на фторопластовой пластине, предварительно помещенной на 10 минут в жидкий азот, в который затем помещают полученные гранулы для хранения. Перед использованием размораживание гранул разбавленной спермы осуществляют в течение 5-10 минут при температуре 40°С в среде того же разбавителя, в состав которого дополнительно вводят карнитин в количестве 30 мг на 100 мл раствора. Соотношение разбавителя с картитином к размороженным гранулам спермы составляет 3:1. При этом в качестве разбавителя используют среду следующего состава, мас.%: лактоза - 2,17, лимонная кислота - 1,52 трис-(оксиметил)-аминометан - 0,27, глицерин - 2,0, бромид-N - 0,025, желток куриного яйца - 15,0, вода - остальное. Способ позволяет повысить оплодотворяемость животных за счет улучшения качества используемой спермы. 4 табл.
Description
Изобретение относится к сельскому хозяйству и предназначено для получения криоконсервированной спермы животных-производителей и ее использование путем размораживания в среде для разбавления, повышающей активность спермы.
Известен «Способ приготовления среды для разбавления спермы производителей», включающий смешивание углеводных, криогенно-протекторных и липидно-белковых компонентов в водной среде с последующей стерилизацией раствора разбавителя, при этом стерилизацию раствора разбавителя осуществляют в герметично закрытых емкостях электромагнитным полем определенной частоты, удельной энергоемкости при температуре нагрева 70-75°С. Патент РФ №1769422, МКИ: 6 A61D 19/02, публ. 1995.06.27.
Наиболее близким к предлагаемому техническому решению является «Способ приготовления среды для разбавления спермы животных-производителей», включающий смешивание углеводных, криогенно-протекторных и липидно-белковых компонентов в водной среде, при этом смесь компонентов герметизируют в емкостях, которые помещают в водную среду с температурой 18-20°С и воздействуют на смесь электромагнитным полем СВЧ-диапазона, затем данные емкости выдерживают в течение 16-20 часов, а потом осуществляют их нагрев до 58-60°С в течение 20-25 мин.
Патент РФ №2073499, МКИ: 6 A61D 19/02, публ. 1997.02.20.
Основными недостатками вышеописанных способов являются необходимость наличия сложной дорогостоящей техники, специального обученного персонала, следовательно высокую стоимость затрат на выполнение этих способов.
К техническому результату относится снижение затрат на получение замороженной спермы животных-производителей и среды для ее разбавления, а также повышение качества полученного состава для искусственного осеменения животных путем использования при размораживании спермы среды, в состав которой введен компонент, повышающий воспроизводительную способность сперматозоидов.
Технический результат достигается путем того, что «СПОСОБ ПОДГОТОВКИ СПЕРМЫ ЖИВОТНЫХ-ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ К ЕЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЮ» включает смешивание углеводных, криогенно-протекторных и липидно-белковых компонентов в водной среде. Затем полученный состав разбавителя смешивают со спермой и замораживают полученную смесь. При необходимости использования смесь спермы с разбавителем размораживают путем нагревания. Сперму со средой для разбавления смешивают в соотношении, равном 1:1. Последующее замораживание полученной смеси осуществляют на фторопластовой пластине, предварительно помещенной на 10 минут в жидкий азот. В полученные гранулы для хранения также помещают в жидкий азот. Перед использованием размораживание гранул разбавленной спермы осуществляют в течение 5-10 минут при температуре 40°С в среде того же разбавителя, в состав которого дополнительно введен карнитин в количестве 30 мг на 100 мл раствора при соотношении разбавителя с карнитином к размороженным гранулам спермы, равным 3:1, при этом в качестве разбавителя используют среду следующего состава: мас.%:
| Лактоза | 2,17 |
| Лимонная кислота | 1,52 |
| Трис-(оксиметил)-аминометан | 0,27 |
| Глицерин | 2 |
| Бромид-N | 0,025 |
| Желток куриного яйца | 15 |
| Вода | остальное. |
Примеры осуществления способа: криоконсервация спермы животных-производителей проводилась в подсобном хозяйстве института, расположенного в поселке Горки Ленинские Московской обл. и на индивидуальных фермах. Отбор спермы животных производился два раза в неделю дуплетно (второе взятие через 10-15 мин). Пробы спермы помещались на исскуственную вагину, температура которой находилась в пределах 38-40°С. Сперму разбавляли средой, состав которой указан в таблице 1, в соотношении 1:1.
| Таблица 1 | ||
| № п/п | Состав криоконсервирующей среды | Мас.% |
| 1 | Лактоза | 2,17 |
| 2 | Лимонная кислота | 1,52 |
| 3 | Трис-(оксиметил)-аминометан | 0,27 |
| 4 | Глицерин | 2 |
| 5 | Бромид-N | 0,025 |
| 6 | Желток куриного яйца | 15 |
| 7 | Вода | остальное |
| При рН, равной 7-7,05 | ||
При этом бромид-N представляет собой соединение N-диметил-N-децил-4-окси-3,5-ди-трет-бутил-бензиламина.
Затем сперму переносили в инкубатор CO2 при температуре 37-38°С и оценивали под микроскопом «Аксиоверт». Замораживание спермы производили на фторопластовой пластине, предварительно поместив ее в жидкий азот на 10 мин. Автоматической пипеткой, объемом 0,15-0,2 мл, отбирали разбавленную сперму и наносили на охлажденную фторопластовую пластину, гранулы опускали в жидкий азот и переносили в контейнер с жидким азотом в сосуд Дъюара для хранения. Размораживание спермы проводили в растворе, который содержит ингредиенты среды из табл.1, с дополнительно введенными в ее состав 30 мг карнитина на 100 мл среды при соотношении разбавителя с карнитином к размороженным гранулам спермы, равным 3:1. Результаты сравнивались с двумя другими методами размораживания и сведены в таблицу 2.
| Таблица 2 | ||||||
| № п/п | Состав среды для размораживания спермы | Количество образцов | Время с момента размораживания, час | |||
| 0 | 0,5 | 1 | 3 | |||
| 1 | Среда см. табл.1) + 30 мг карнитина на 100 мл среды | 15 | 0,5 | 0,8 | 0,8 | 0,4 |
| 2 | Цитрат натрия | 15 | 0,4 | 0,6 | 0,6 | Подвижность не наблюдалась |
| 3 | Сухой метод | 15 | 0,5 | 0,7 | 0,6 | Подвижность не наблюдалась |
Как видно из табл.2, при размораживании спермы в среде с добавлением карнитина активность спермы выше, чем в других примерах 2 и 3 и находится в пределах от 0,4 до 0,8 баллов.
Наблюдалось увеличение активности сперматозоидов в среде 1 (табл.2) через 0,5-1 час при культивировании в термостате на 0,2 балла по сравнению со средами 2 и 3. Одновременно с повышением живучести спермы отмечалась визуальная активность сперматозоидов в среде 1.
С этой целью образцы размороженной спермы в средах 1, 2 и 3 из (табл.2) исследовали под микроскопом «Аксиоверт» через 0, 2, 6, 24, 48 часов предварительно поместив образцы в термостат при температуре 40°С на 5-10 мин.
Влияние карнитина на активность и живучесть сперматозоидов показано в таблице 3.
| Таблица 3 | |||||||
| №/п | Состав среды | Количество образцов | Время использования образцов, час | ||||
| 0 | 2 | 6 | 24 | 48 | |||
| 1 | Среда (табл.1) | 15 | 0,8 | 0,8 | 0,7 | 0,5 | 0,2 |
| 2 | Среда (табл.1) + карнитин | 15 | 0,9 | 0,9 | 0,8 | 0,6 | 0,5 |
Данные в таблице 3 показывают, что введение карнитина в среду для размораживания спермы оказывает положительное влияние на активность и живучесть сперматозоидов, даже в начальный период активность их на 0,1 балл выше чем в среде без карнитина, и даже через 48 часов выживаемость сперматозоидов на 0,3 балла выше чем в среде без карнитина.
Опыты по использованию полученной и размороженной спермы в среде разбавителя с добавкой карнитина проводились в крольчатнике, где осеменялись подготовленные крольчихи.
Для осеменения использовали шприцы, предназначенные для искусственного осеменения овец, узкий конец которых обрезали и оплавляли для получения на конце изгиба, длиной 1,5-2 см. Длина вводимой части шприца составляла 14 см. Для стимуляции и овуляции использовали хорионический гонадотропин в дозе 25И.Е., который вводили внутривенно. Осеменение крольчих проводили через 2-3 часа после введения хорионического гонадотропина.
Результаты осеменения крольчих при использовании различных способов получения сред для криоконсервации и размораживания представлены в таблице 4.
| Таблица 4 | |||||||
| № п/п | Состав среды | Время стимуляции и овуляции при осеменении | Оплодотворяемость | Получено крольчат | Плодовитость на одну самку | ||
| Кол-во самок | Из них сукрольных | % | |||||
| 1 | Среда (табл.1) | ХГ через 2-3 часа | 10 | 8 | 80 | Самки - 27 Самцы - 29 Всего - 56 | 5,6 |
| 2 | Среда (табл.1) + карнитин | ХГ через 2-3 часа | 10 | 9 | 90 | Самки - 40 Самцы - 21 Всего - 61 | 6,1 |
Анализ данных, сведенных в таблицы 1, 2 и 3 и 4, показал оптимальность предложенного способа получения криоконсервированной спермы животных-производителей и ее размораживания в среде для разбавления, в состав которой введен компонент, повышающий воспроизводительную способность сперматозоидов.
Claims (1)
- Способ подготовки спермы животных-производителей к ее использованию, включающий смешивание углеводных, криогенно-протекторных и липидно-белковых компонентов в водной среде, смешивание со спермой и замораживание полученной смеси, затем при необходимости использования ее размораживание путем нагревания, отличающийся тем, что сперму со средой для разбавления смешивают в соотношении, равном 1:1, последующее замораживание полученной смеси осуществляют на фторопластовой пластине, предварительно помещенной на 10 мин в жидкий азот, в который затем помещают полученные гранулы для хранения, а перед использованием размораживание гранул разбавленной спермы осуществляют в течение 5-10 мин при температуре 40°С в среде в того же разбавителя, в состав которого дополнительно вводят карнитин в количестве 30 мг на 100 мл раствора при соотношении разбавителя с картитином к размороженным гранулам спермы, равным 3:1, при этом в качестве разбавителя используют среду следующего состава, мас.%:
Лактоза 2,17 Лимонная кислота 1,52 Трис-(оксиметил)-аминометан 0,27 Глицерин 2,0 Бромид-N 0,025 Желток куриного яйца 15,0 Вода Остальное
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009105221/13A RU2393816C1 (ru) | 2009-02-17 | 2009-02-17 | Способ подготовки спермы животных-производителей к ее использованию |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009105221/13A RU2393816C1 (ru) | 2009-02-17 | 2009-02-17 | Способ подготовки спермы животных-производителей к ее использованию |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2393816C1 true RU2393816C1 (ru) | 2010-07-10 |
Family
ID=42684538
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2009105221/13A RU2393816C1 (ru) | 2009-02-17 | 2009-02-17 | Способ подготовки спермы животных-производителей к ее использованию |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2393816C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2446772C1 (ru) * | 2011-03-24 | 2012-04-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева" | Способ улучшения подвижности сперматозоидов |
| RU2611826C1 (ru) * | 2016-02-12 | 2017-03-01 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии - МВА имени К.И. Скрябина" (ФГБОУ ВО МГАВМиБ - МВА имени К.И. Скрябина) | Состав среды для разбавления и хранения спермы кобелей |
-
2009
- 2009-02-17 RU RU2009105221/13A patent/RU2393816C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Инструкция по организации и технологии работы станций и предприятий по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных. - М.: Колос, 1981. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2446772C1 (ru) * | 2011-03-24 | 2012-04-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева" | Способ улучшения подвижности сперматозоидов |
| RU2611826C1 (ru) * | 2016-02-12 | 2017-03-01 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии - МВА имени К.И. Скрябина" (ФГБОУ ВО МГАВМиБ - МВА имени К.И. Скрябина) | Состав среды для разбавления и хранения спермы кобелей |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Singh et al. | New approaches in buffalo artificial insemination programs with special reference to India | |
| Swelum et al. | Comparing ethylene glycol with glycerol for cryopreservation of buffalo bull semen in egg-yolk containing extenders | |
| JP6932893B2 (ja) | 精子用希釈液及びそれを用いた精子の保存方法 | |
| Tsutsui et al. | Artificial insemination with canine semen stored at a low temperature | |
| Beltran et al. | Optimized extenders for cryopreservation of buck semen for artificial insemination. | |
| Rahman et al. | Effect of skim milk and tris-citrate extenders to preserve the semen of indigenous ram of Bangladesh | |
| RU2393816C1 (ru) | Способ подготовки спермы животных-производителей к ее использованию | |
| AU4435100A (en) | Compositions for freezing dog sperm, method of freezing the dog sperm utilizing the compositions and artificial insemination method employing the frozen dog sperm | |
| Almadaly et al. | Effect of different cryoprotectants on the post-thaw sperm characteristics and in vivo fertility of buffalo (Bubalus bubalis) bull semen. | |
| Abe et al. | Artificial insemination with canine spermatozoa frozen in a skim milk/glucose-based extender | |
| JP2015171346A (ja) | 精子の希釈液及びそれを用いた精子の保存方法 | |
| DA et al. | Effect of different concentrations of sodium dodecyl sulfate, egg yolk and glycerol on the freezability and DNA integrity of Arabian stallion spermatozoa | |
| KR102226182B1 (ko) | 난황추출물과 유단백추출물을 포함하는 정자의 동결보존용 조성물 | |
| Pérez-Garnelo et al. | Post-thaw viability of European bison (Bison bonasus) semen frozen with extenders containing egg yolk or lipids of plant origin and examined with a heterologous in vitro fertilization assay | |
| Munyai | Cryopreservation of South African indigenous ram semen | |
| Tibary et al. | Challenges in the development of artificial insemination in the dromedary camel | |
| Aisen et al. | Spermatozoa obtained from alpaca vas deferens. Effects of seminal plasma added at post-thawing | |
| JP2557778B2 (ja) | 家畜雌雄の産み分け方法およびこれに用いる処理剤 | |
| Da Paz | Wildlife cats reproductive biotechnology | |
| CN111867373A (zh) | 使用slo3钾通道抑制剂提高动物精子寿命和运动力的方法 | |
| KR20220085656A (ko) | 레시틴을 포함하는 정자의 동결보존용 조성물 | |
| KR101821545B1 (ko) | 앙콜 소 정자 동결보존용 조성물 및 이의 용도 | |
| WO2001052640A1 (fr) | Procede de production de betail avec selection du sexe et agent de traitement utilise a cette fin | |
| da Silva | Artificial insemination and cryopreservation of boar semen: Current state and problematics | |
| Cseh et al. | 12 PREDICTION OF BULL FERTILITY BY COMPUTER ASSISTED SEMEN ANALYSIS |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110218 |