KR20220085656A - 레시틴을 포함하는 정자의 동결보존용 조성물 - Google Patents

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KR20220085656A
KR20220085656A KR1020200175891A KR20200175891A KR20220085656A KR 20220085656 A KR20220085656 A KR 20220085656A KR 1020200175891 A KR1020200175891 A KR 1020200175891A KR 20200175891 A KR20200175891 A KR 20200175891A KR 20220085656 A KR20220085656 A KR 20220085656A
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조상래
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대한민국(농촌진흥청장)
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Abstract

본 발명은 레시틴을 포함하는 정자의 동결보존용 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로 본 발명은 레시틴을 포함하는 정자의 동결보존용 조성물, 상기 조성물을 이용하여 정자를 동결보존하는 방법, 상기 조성물을 이용하여 정자의 활성을 향상시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 정자 동결보존용 조성물은 동결보존 상태에서 정액의 안정성을 향상시키며, 가축의 정자를 동결 및 융해시킬 경우 정자의 손상을 최소화 할 수 있어 해동 이후 정자의 운동성이 향상되므로, 동결보존에 의한 저장방식을 사용하여도 정자의 생존율을 증진시키고 향상된 생존성을 갖는 정자로 인해 수태율을 증진시킬수 있어 소를 비롯한 다양한 가축의 번식에 널리 활용될 수 있을 것으로 기대된다.

Description

레시틴을 포함하는 정자의 동결보존용 조성물{omposition for cryopreservating sperm comprising lecithin}
본 발명은 레시틴을 포함하는 정자의 동결보존용 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로 본 발명은 레시틴을 포함하는 정자의 동결보존용 조성물, 상기 조성물을 이용하여 정자를 동결보존하는 방법, 상기 조성물을 이용하여 정자의 활성을 향상시키는 방법에 관한 것이다.
동결보존 과정은 콜드 쇼크(cold shock), 삼투압 탈수 및 원형질막 변화와 같이 정자에 유해한 영향을 미칠 수 있기 때문에, 정액의 동결보존을 위해 다양한 동결보존제가 개발되고 있으며, 트리스-[히드록시메틸]-아미노메탄, 시트르산, 소듐 포스페이트 시트르산(sodium phosphate citric acid) 및 글리세롤이 기본적인 동결보존제로 사용되고 있다.
그러나, 동결-융해된 정자는 신선 정자(fresh sperm)와 같은 동일한 수정능(fertilizing potential)을 가지지 못하는데, 이는 22℃에서 1℃로 냉각되는 동안 냉각 과정이 세포막 내 지질 및 단백질 재배열을 유도하기 때문이다. 이러한 변이는 저온에서 액상에서 겔상으로 변화하는 막에 의해 유도된다. 이는 동결보존 시 정자의 생존력 및 수정능을 감소시키는 주된 원인 중 하나이다. 그 중에서도 정자 막의 콜레스테롤/인지질 비율은 동결보존 시 막 유동성 및 안정성에 있어서 주요 결정인자이다. 인간 및 토끼 정자와 같은, 매우 높은 콜레스테롤/인지질 비율을 가지는 종에서 얻은 정자는 냉각될 때 이러한 막 손상을 겪지 않음이 보고되었다.
통상적으로, 막의 손상은 세포사멸에 대한 주요 원인 중 하나로 여겨지고 있다. 막의 주요 구성 요소인, 인지질은 막 기능의 조절과 같은 중요한 역할을 하고, 세포막에서 인지질은 막 유동성 및 투과성의 주요 결정 인자로 알려져 있으며, 이러한 인지질은 정자 막의 안정화에 중요한 역할을 한다. 정자가 냉각 또는 동결되면, 막들은 상전이가 일어나는데, 이는 막 지질과 단백질의 재배열 및 막으로부터 지질의 소실을 초래하고, 차례로, 막내 단백질과 지질 응집 및 막-선택적 투과성의 소실을 유발함으로써, 정자의 조숙한 수정능획득이 일어나게 하고, 이러한 조숙한 수정능 획득은 정자의 수정 및 수명의 감소를 초래한다고 알려져 있다. 이에, 정자의 막 안정성을 개선시키면서도 정자의 생존율 및 수태율을 증진시킬 수 있는 새로운 동결보존제의 개발이 요구되고 있다.
한편, 막 안정성의 개선을 위한 동결보존제가 연구되고 있으나(대한민국 공개특허 10-2011-0020066호), 동결보존제의 성분 및 함량에 따라 정액의 동결 보존 후 융해 시 정자의 운동성 및 생존율이 저하되는 문제점이 존재하는 문제점이 발생되어 이를 개선하기 위한 연구가 필요하다.
상기와 같은 문제점을 개선하기 위해, 본 발명자들은 가축의 정자를 보다 효율적으로 동결보존할 수 있는 방법에 대해 예의 연구노력한 결과, 레시틴을 포함하는 정자의 동결보존용 조성물을 이용할 경우, 종래의 동결보존제에 비해 적은 농도로 사용하더라도 가축의 정자를 효율적으로 동결보존할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
이에, 본 발명은 0.05 내지 0.2%(v/v)의 레시틴을 포함하는, 정자의 동결보존용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 (a) 상기 정자의 동결보존용 조성물과 정자를 혼합하여 동결보존 혼합물을 수득하는 단계; 및 (b) 상기 혼합물을 동결 및 보존하는 단계를 포함하는, 정자의 동결보존방법을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 (a) 상기 정자의 동결보존용 조성물과 정자를 혼합하여 동결보존 혼합물을 수득하는 단계; 및 (b) 상기 혼합물을 동결 및 보존하는 단계를 포함하는, 정자의 활성을 향상시키는 방법을 제공하는 것을 또 다른 목적으로 한다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 0.05 내지 0.2%(v/v)의 레시틴을 포함하는, 정자의 동결보존용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일구현예로, 상기 조성물은 정자의 활성을 향상시킬 수 있으며, 상기 정자의 활성은 정자의 운동성, 생존율, 수태율, 정자 세포막 온전성 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 일구현예로, 상기 조성물은 동결보존제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 동결보존제는 시트르산염, 바이카보네이트염, 트리스-[히드록시메틸]-아미노메탄, 타우린, 하이포타우린, 트레할로스, 글리세롤, 글루코스, 수크로스, 에틸렌글리콜, 프로필렌 글리콜, 프럭토스, 덱스트란, 히알루론산, 시트르산, 아세트산, 부티르산, 팔미트산, 옥살산, 타타르산, 스트렙토마이신, 페니실린, 앰피실린, 카나마이신, 난황단백질, 아미노산 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 정자는 마우스, 햄스터, 랫트, 모르모트, 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 소, 양, 돼지 및 염소로 구성된 군으로부터 선택되는 가축의 정자일 수 있다.
또한, 본 발명은 (a) 상기 정자의 동결보존용 조성물과 정자를 혼합하여 동결보존 혼합물을 수득하는 단계; 및 (b) 상기 혼합물을 동결 및 보존하는 단계를 포함하는, 정자의 동결보존방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 (a) 상기 정자의 동결보존용 조성물과 정자를 혼합하여 동결보존 혼합물을 수득하는 단계; 및 (b) 상기 혼합물을 동결 및 보존하는 단계를 포함하는, 정자의 활성을 향상시키는 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현예로, 상기 정자의 활성은 정자의 운동성, 생존율, 수태율, 정자 세포막 온전성 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 정자 동결보존용 조성물은 동결보존 상태에서 정액의 안정성을 향상시키며, 가축의 정자를 동결 및 융해시킬 경우 정자의 손상을 최소화 할 수 있어 해동 이후 정자의 운동성이 향상되므로, 동결보존에 의한 저장방식을 사용하여도 정자의 생존율을 증진시키고 향상된 생존성을 갖는 정자로 인해 수태율을 증진시킬 수 있어 소를 비롯한 다양한 가축의 번식에 널리 활용될 수 있을 것으로 기대된다.
도 1은 인공질법을 이용한 씨수소 정액 채취방법 및 상기 방법으로 인해 회수된 정액을 나타낸 것이다.
도 2는 레시틴을 포함하는 동결보존액에서 동결한 정자를 융해시킨 후 현미경으로 관찰한 결과 및 정자의 활력을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
본 발명자들은 가축의 정자를 보다 효율적으로 동결보존할 수 있는 방법을 개발하기 위하여 예의 연구노력한 결과, 레시틴을 포함하는 정자의 동결보존용 조성물을 이용할 경우, 종래의 동결보존제에 비해 적은 농도로 사용할 경우보다도 가축의 정자를 효율적으로 동결보존 할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
이에, 본 발명은 0.05 내지 0.2%(v/v)의 레시틴을 포함하는, 정자의 동결보존용 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어, “레시틴(lecithin)”은 인산, 콜린, 지방산, 글리세롤, 당지질, 트라이글리세라이드, 등을 포함하는 생체막 구성 인지질의 일종으로, 물과 기름을 섞게하는 유화작용이 있어 혈관벽에 들러붙은 지방을 녹여 동맥경화를 예방할 수 있고, 콜린과 이노시톨을 함유하고 있어 고혈압 및 동맥경화를 예방할 수 있다고 알려져 있다.
본 발명에 있어서, 레시틴은 0.05 내지 0.2%(v/v)로 포함될 수 있으며, 바람직하게는 0.1%(v/v)로 포함될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물에서 레시틴이 0.05%(v/v) 미만으로 포함되는 경우 동결보존 활성이 저해될 수 있으며, 0.2%(v/v)를 초과하여 포함되는 경우, 정자의 운동성 및 세포막 기능을 저해할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, “정자”란 정충이라고도 호칭되며, 웅성 동물의 고환에서 생산되는 성세포를 의미하는데, 길이는 약 0.02㎜이며, 머리, 경부 및 긴 꼬리의 세 부분으로 구성된다. 머리 부분에는 웅성 동물의 DNA가 들어 있고, 머리 부분의 맨 앞쪽에 존재하는 첨체에는 난자의 난막을 녹일 수 있는 효소가 포함되어 있고; 상기 경부에는 에너지 저장고인 당분을 함유한 미토콘드리아가 포함되어 있으며; 상기 꼬리는 가는 실 묶음으로 되어 있는데, 가는 실 묶음이 교묘하게 신축하여 꼬리를 움직이게 한다.
본 발명에 있어서, 상기 정자는 특별히 이에 제한되지 않으나, 일 예로서, 포유동물의 성숙정자가 될 수 있고, 바람직하게는 마우스, 햄스터, 랫트, 모르모트, 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 소, 양, 돼지, 및 염소로 구성된 군으로부터 선택되는 가축의 정자일 수 있고, 더욱 바람직하게는 소의 성숙정자일 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, “동결보존”이란 냉동을 통해 장기간에 걸쳐 세포를 안정하게 유지시키는 행위를 의미한다. 본 발명의 목적상 상기 동결보존은 정자의 동결보존을 의미하는 것으로 해석될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 정자의 활성을 향상시키는 것일 수 있으며, 상기 정자의 활성은 정자의 운동성, 생존율, 수태율, 정자 세포막 온전성 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용되는 용어, “정자의 생존율”은 동결보존 후 융해된 정자가 생존할 수 있는 확률로서, 본 발명에서 융해 후에도 운동성이 유지되는 정자 및 세포막 기능을 유지하는 정자가 많이 존재하는 것을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어, “정자의 수태율”은 동결보존 후 융해된 정자를 교배 또는 수정하여 수태된 비율로서, 본 발명에서 융해 후에도 생존율이 우수하여 수태율을 증진시킬 수 있는 정자가 많이 존재하는 것을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "동결보존제(cryoprotectant)"란, 동결보호제라고도 하고, 생물세포를 동결상태에서 산채로 보존할 경우, 동해를 경감할 목적으로 매액(媒液)에 첨가시키는 물질을 의미한다. 본 발명의 목적상 상기 동결보존제는 가축의 정자를 동결보존하기 위하여 사용되며, 본 발명의 동결보존용 조성물에 더하여 상기 동결보존제를 희석액으로써 추가로 포함하여 구성할 수 있다. 상기 희석액은 원 정액의 농도를 저하시켜서, 동결보존 시 정자 간의 충돌로 인하여 발생할 수도 있는 손상을 방지하기 위하여 사용된다. 상기 동결보존제 또는 희석액은 특별히 이에 제한되지 않으나, 당류, 유기산, 난황, 항생제 등을 포함하는 완충액이 될 수 있는데, 바람직하게는 시트르산염, 바이카보네이트염, 트리스-[히드록시메틸]-아미노메탄, 타우린, 하이포타우린, 트레할로스, 글리세롤, 글루코스, 수크로스, 에틸렌글리콜, 프로필렌 글리콜, 프럭토스, 덱스트란, 히알루론산, 시트르산, 아세트산, 부티르산, 팔미트산, 옥살산, 타타르산, 스트렙토마이신, 페니실린, 앰피실린, 카나마이신, 난황단백질, 아미노산 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상이 포함된 완충액이 될 수 있고, 이들 각성분은 당업자가 필요에 따라 조합하여 사용할 수 있다.
본 발명자들은 실시예를 통해 레시틴을 포함하는 동결보존용 조성물을 정액 동결보존에 사용한 경우에, 융해 후 정자의 운동성 및 세포막 기능을 확인한 결과 특정 농도에서 유의적으로 정자 활력이 높게 나타나고 세포막의 기능이 증진되는 것을 확인하였다.
구체적으로 본 발명의 일실시예에서는 레시틴을 0%, 0.1%, 0.5% 포함하는 동결보존액 및 대조군(난황 20%)의 정자 활력을 측정한 결과, 레시틴을 0% 처리하거나 0.5% 처리한 군에 비해 0.1% 농도로 처리한 군에서 우수한 운동활성을 나타내는 것을 확인하였다(실시예 2 참조).
또한, 본 발명의 다른 실시예에서는 정자 미부의 팽창형태를 분석함으로써 정자막의 상태를 확인하고 세포막 기능을 측정한 결과, 0.1%의 레시틴을 포함하는 동결보존용 조성물을 처리하는 경우 레시틴 비 첨가 군과 유사한 세포막 기능성을 나타내는 것을 확인하였으며, 0.5%의 레시틴을 포함하는 동결보존용 조성물을 처리하는 경우 세포막 기능이 떨어지는 것을 확인하였다(실시예 3 참조).
상기 결과로부터, 본 발명에 따른 조성물을 처리하는 경우 낮은 농도에서도 효과적으로 정자의 동결보존이 가능하며, 융해 후에도 정자의 활력 및 세포막 기능을 보존시킬 수 있는 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 (a) 상기 정자의 동결보존용 조성물과 정자를 혼합하여 동결보존 혼합물을 수득하는 단계; 및 (b) 상기 혼합물을 동결 및 보존하는 단계를 포함하는, 정자의 동결보존방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 양태로서, 본 발명은 (a) 상기 정자의 동결보존용 조성물과 성숙정자를 혼합하여 동결보존 혼합물을 수득하는 단계; 및 (b) 상기 혼합물을 동결 및 보존하는 단계를 포함하는, 정자의 활성을 향상시키는 방법을 제공한다.
본 발명에 있어서 상기 정자의 활성은 정자의 운동성, 생존율, 수태율, 정자 세포막 온전성 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1. 재료 및 방법
1-1. 인공질법에 의한 정액채취
동일한 월령의 수소를 밑소로 사용하여 보정틀에 고정한 후, 밑소의 꼬리 및 항문 부위를 알콜로 깨끗하게 소독하고, 정액 채취 대상 씨수소의 포피와 귀두 부분을 깨끗한 물로 세척 후 건조시켰다. 약 55℃의 물을 인공질에 주입하여, 인공질 내피 온도가 약 42-44℃가 되도록 준비하였다. 정액 채취 대상 씨수소를 밑소에 2~3회 가 승가 시킨 후 미리 준비해둔 인공질을 사용하여 정액을 채취하였다.
1-2. 레시틴을 포함하는 동결보존액 제조
시트르산, 트리스-[히드록시메틸]-아미노메탄, 프럭토스, 글리세롤, 페니실린, 스트렙토마이신, 증류수(93ml) 및 레시틴을 포함하는 본 발명의 동결보존액을 제조하였다. 상기 동결보존액은 다른 동결보존제의 함량을 동일하게 첨가하고 레시틴의 함량을 각 0%, 0.1%, 0.5%로 포함시켜 조성이 다른 3개의 동결보존액을 제조하였다.
1-3. 난황을 포함하는 동결보존액 제조(대조군)
시트르산, 트리스-[히드록시메틸]-아미노메탄, 프럭토스, 글리세롤, 페니실린, 스트렙토마이신, 증류수(73ml) 및 난황을 포함하는 대조군 동결보존액을 제조하였다. 상기 대조군 동결보존액은 실시예 1-1에 개시된 동결보존제와 다른 성분의 조성을 동일하게 첨가하면서 증류수의 함량을 낮추고 레시틴 대신 난황의 함량을 20%로 포함하도록 제조하였다.
1-4. 정액 희석 및 동결
상기 실시예 1-1의 인공질법 또는 전기자극법으로 채취한 정액은 채취 직후 36℃의 이동식 챔버에 넣어 실험실로 운반한 후 34℃로 가온해 둔 희석액(상기 실시예 1-2 및 1-3에 개시된 동결보존액)을 이용하여 정자 농도를 40 × 106 cells/ml 로 조정하고 4℃의 냉장고에 3시간 이상 보관하여 정액 희석액의 온도를 하강시켰다. 4℃ 챔버에서 0.5 정액 스트로 내에 정액 희석액을 충진 및 밀봉시킨 후 액체질소 표면 3cm 위에서 14분 간 예비동결을 실시한 후, 액체질소에 침지 후 액체 질소통에 보관하였다. 동결정액은 실험에 사용하기 전까지 액체 질소통에 보관하였다.
1-5. 동결정액 융해
액체 질소통에 보관한 스트로를 37℃의 온수에 약 40초간 융해 후 사용하였다.
실시예 2. 레시틴 첨가에 따른 용해 후 정자의 활력 측정
한우로부터 수득한 정자를 실시예 1에 개시한 바와 같이 레시틴을 0%, 0.1%, 0.5% 포함하는 동결보존액으로 동결보존하였다.
상기 동결보존된 정자를 해동한 후, 정자의 운동성을 다양한 측정값(Fast progressive(%), Slow progressive(%), Non-progressive(%), Immotile(%), VCL, VSL, VAP, LIN, STR, WOB, ALH, BCF 및 Hyperactive)을 사용하여 평가하였다.
평가 결과를 하기 [표 1] 및 도 2에 나타냈으며, 이때 대조군으로는 실시예 1-2에 개시된 난황(Egg yolk)을 20% 포함하는 동결보존액을 사용하였다.
정자 활력
측정 항목		 레시틴(Lecithin)
0%		 레시틴(Lecithin)
0.1%		 레시틴(Lecithin)0.5% 난황(Egg yolk)
20%
빠른 직진 운동율, %
(Fast progressive)		 14.5±2.3 b 24.6±2.4 a 11.2±3.0 b 14.±1.6 b
느린 직진 운동율, %
(Slow progressive) 		22.6±3.6 ab 24.0±4.7 ab 14.7±3.4 b 29.9±5.9 a
비 진행성율, %
(Non-progressive) 		31.4±0.6 28.4±2.2 30.1±3.9 36.1±2.8
정지율(움직임 없음), %
(Immotile) 		31.5±4.9 ab 22.9±4.3 b 44.0±9.9 a 19.4±5.7 b
곡선속도 (VCL) 57.0±3.6 ab 78.2±11.4 a 47.6±6.3 b 65.4±5.8 ab
직선속도 (VSL) 23.0±2.7 b 32.0±3.0 a 17.1±3.1 b 20.5±1.2 b
평균통로속도 (VAP) 39.6±2.8 ab 49.3±5.7 a 27.0±4.5 b 36.7±3.0 ab
직선성 (LIN) 40.1±3.9 ab 42.1±3.0 a 34.5±2.9 ab 31.8±1.3 b
직진성 (STR) 57.4±4.4 65.6±2.6 62.0±2.6 56.4±1.7
흔들림 정도 (WOB) 69.5±2.2 a 63.9±2.3 a 55.3±2.8 b 56.3±0.8 b
측면머리진폭 (ALH) 2.3±0.1 b 3.0±0.3 a 2.5±0.1 b 3.1±0.2 a
머리진동빈도 (BCF) 11.6±0.6 ab 13.1±0.5 a 11.1±0.6 b 11.7±0.4 ab
과잉운동 (Hyperactive) 3.3±1.1 b 7.1±1.4 a 2.2±0.1 b 3.4±0.6 b
상기 [표 1]에 나타낸 바와 같이, Fast progressive, VCL, VSL, VAP, LIN, ALH, BCF 및 hyperactive 값의 경우, 레시틴 무처리군, 대조군(난황 20% 처리군), 0.5% 레시틴 처리군에 비해 0.1%의 레시틴을 첨가한 그룹에서 유의적으로 높은 결과(p<0.05)를 나타내는 것을 확인하였다. 특히 ast progressive, VCL, VSL, VAP, LIN, ALH, BCF 및 hyperactive 값은 레시틴을 0.5%로 포함하는 경우에 비해 0.1% 포함하는 경우에 정자 활력이 더 우수하게 나타나는 것을 확인할 수 있었다.
실시예 3. 레시틴 첨가에 따른 용해 후 정자의 세포막 기능 측정
정자의 세포막 기능은 Jeyendran 등(1984)의 방법을 변형하여 저삼투압 용액을 이용한 정자 미부의 팽창형태를 분석(Hypo-Osmetic Swelling Test: HOST)함으로써 평가하였다. 구체적으로, 37℃의 저장액(150mOsm/kg, 0.45% NaCl용액) 1㎖에 융해된 정액 100㎕를 가하고, 혼합한 다음 37℃에서 5분간 정치시켰으며, 이를 슬라이드 글라스에 도말하였다. 도말한 표본으로부터 각 표본당 200개의 정자 중에서 정자막이 정상상태인 것을 계수하고, 이의 비율을 측정하는 방식으로 정자의 세포막 기능을 측정하였으며, 그 결과를 하기 [표 2]에 나타내었다.
레시틴 (%) swollen (%)
0 53.1±6.5
0.1 53.4±5.9
0.5 44.4±5.8
대조군(난황 20%) 49.5±5.5
상기 [표 2]에 나타낸 바와 같이 0.1%의 레시틴을 포함하는 그룹에서 정자 미부의 팽창형태가 크게 나타나 정자 세포막의 기능성이 높게 나타나는 것을 확인하였다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims (9)

  1. 0.05 내지 0.2%(v/v)의 레시틴을 포함하는, 정자의 동결보존용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 정자의 활성을 향상시키는 것을 특징으로 하는, 정자의 동결보존용 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 정자의 활성은 정자의 운동성, 생존율, 수태율, 정자 세포막 온전성 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 정자의 동결보존용 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 동결보존제를 추가로 포함하는 것인, 정자의 동결보존용 조성물.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 동결보존제는 시트르산염, 바이카보네이트염, 트리스-[히드록시메틸]-아미노메탄, 타우린, 하이포타우린, 트레할로스, 글리세롤, 글루코스, 수크로스, 에틸렌글리콜, 프로필렌 글리콜, 프럭토스, 덱스트란, 히알루론산, 시트르산, 아세트산, 부티르산, 팔미트산, 옥살산, 타타르산, 스트렙토마이신, 페니실린, 앰피실린, 카나마이신, 난황단백질, 아미노산 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인, 정자의 동결보존용 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 정자는 마우스, 햄스터, 랫트, 모르모트, 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 소, 양, 돼지, 및 염소로 구성된 군으로부터 선택되는 가축의 정자인 것을 특징으로 하는, 정자의 동결보존용 조성물.
  7. (a) 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 정자의 동결보존용 조성물과 정자를 혼합하여 동결보존 혼합물을 수득하는 단계; 및
    (b) 상기 혼합물을 동결 및 보존하는 단계를 포함하는, 정자의 동결보존방법.
  8. (a) 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 정자의 동결보존용 조성물과 정자를 혼합하여 동결보존 혼합물을 수득하는 단계; 및
    (b) 상기 혼합물을 동결 및 보존하는 단계를 포함하는, 정자의 활성을 향상시키는 방법.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 정자의 활성은 정자의 운동성, 생존율, 수태율, 정자 세포막 온전성 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN117106691B (zh) * 2023-10-20 2024-01-02 济南万泉生物技术有限公司 一种复苏洗涤剂在复苏冻存细胞过程中的应用、制备及使用方法

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