KR20220085656A - 레시틴을 포함하는 정자의 동결보존용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 레시틴을 포함하는 정자의 동결보존용 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로 본 발명은 레시틴을 포함하는 정자의 동결보존용 조성물, 상기 조성물을 이용하여 정자를 동결보존하는 방법, 상기 조성물을 이용하여 정자의 활성을 향상시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 정자 동결보존용 조성물은 동결보존 상태에서 정액의 안정성을 향상시키며, 가축의 정자를 동결 및 융해시킬 경우 정자의 손상을 최소화 할 수 있어 해동 이후 정자의 운동성이 향상되므로, 동결보존에 의한 저장방식을 사용하여도 정자의 생존율을 증진시키고 향상된 생존성을 갖는 정자로 인해 수태율을 증진시킬수 있어 소를 비롯한 다양한 가축의 번식에 널리 활용될 수 있을 것으로 기대된다.
Description
본 발명은 레시틴을 포함하는 정자의 동결보존용 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로 본 발명은 레시틴을 포함하는 정자의 동결보존용 조성물, 상기 조성물을 이용하여 정자를 동결보존하는 방법, 상기 조성물을 이용하여 정자의 활성을 향상시키는 방법에 관한 것이다.
동결보존 과정은 콜드 쇼크(cold shock), 삼투압 탈수 및 원형질막 변화와 같이 정자에 유해한 영향을 미칠 수 있기 때문에, 정액의 동결보존을 위해 다양한 동결보존제가 개발되고 있으며, 트리스-[히드록시메틸]-아미노메탄, 시트르산, 소듐 포스페이트 시트르산(sodium phosphate citric acid) 및 글리세롤이 기본적인 동결보존제로 사용되고 있다.
그러나, 동결-융해된 정자는 신선 정자(fresh sperm)와 같은 동일한 수정능(fertilizing potential)을 가지지 못하는데, 이는 22℃에서 1℃로 냉각되는 동안 냉각 과정이 세포막 내 지질 및 단백질 재배열을 유도하기 때문이다. 이러한 변이는 저온에서 액상에서 겔상으로 변화하는 막에 의해 유도된다. 이는 동결보존 시 정자의 생존력 및 수정능을 감소시키는 주된 원인 중 하나이다. 그 중에서도 정자 막의 콜레스테롤/인지질 비율은 동결보존 시 막 유동성 및 안정성에 있어서 주요 결정인자이다. 인간 및 토끼 정자와 같은, 매우 높은 콜레스테롤/인지질 비율을 가지는 종에서 얻은 정자는 냉각될 때 이러한 막 손상을 겪지 않음이 보고되었다.
통상적으로, 막의 손상은 세포사멸에 대한 주요 원인 중 하나로 여겨지고 있다. 막의 주요 구성 요소인, 인지질은 막 기능의 조절과 같은 중요한 역할을 하고, 세포막에서 인지질은 막 유동성 및 투과성의 주요 결정 인자로 알려져 있으며, 이러한 인지질은 정자 막의 안정화에 중요한 역할을 한다. 정자가 냉각 또는 동결되면, 막들은 상전이가 일어나는데, 이는 막 지질과 단백질의 재배열 및 막으로부터 지질의 소실을 초래하고, 차례로, 막내 단백질과 지질 응집 및 막-선택적 투과성의 소실을 유발함으로써, 정자의 조숙한 수정능획득이 일어나게 하고, 이러한 조숙한 수정능 획득은 정자의 수정 및 수명의 감소를 초래한다고 알려져 있다. 이에, 정자의 막 안정성을 개선시키면서도 정자의 생존율 및 수태율을 증진시킬 수 있는 새로운 동결보존제의 개발이 요구되고 있다.
한편, 막 안정성의 개선을 위한 동결보존제가 연구되고 있으나(대한민국 공개특허 10-2011-0020066호), 동결보존제의 성분 및 함량에 따라 정액의 동결 보존 후 융해 시 정자의 운동성 및 생존율이 저하되는 문제점이 존재하는 문제점이 발생되어 이를 개선하기 위한 연구가 필요하다.
상기와 같은 문제점을 개선하기 위해, 본 발명자들은 가축의 정자를 보다 효율적으로 동결보존할 수 있는 방법에 대해 예의 연구노력한 결과, 레시틴을 포함하는 정자의 동결보존용 조성물을 이용할 경우, 종래의 동결보존제에 비해 적은 농도로 사용하더라도 가축의 정자를 효율적으로 동결보존할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
이에, 본 발명은 0.05 내지 0.2%(v/v)의 레시틴을 포함하는, 정자의 동결보존용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 (a) 상기 정자의 동결보존용 조성물과 정자를 혼합하여 동결보존 혼합물을 수득하는 단계; 및 (b) 상기 혼합물을 동결 및 보존하는 단계를 포함하는, 정자의 동결보존방법을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 (a) 상기 정자의 동결보존용 조성물과 정자를 혼합하여 동결보존 혼합물을 수득하는 단계; 및 (b) 상기 혼합물을 동결 및 보존하는 단계를 포함하는, 정자의 활성을 향상시키는 방법을 제공하는 것을 또 다른 목적으로 한다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 0.05 내지 0.2%(v/v)의 레시틴을 포함하는, 정자의 동결보존용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일구현예로, 상기 조성물은 정자의 활성을 향상시킬 수 있으며, 상기 정자의 활성은 정자의 운동성, 생존율, 수태율, 정자 세포막 온전성 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 일구현예로, 상기 조성물은 동결보존제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 동결보존제는 시트르산염, 바이카보네이트염, 트리스-[히드록시메틸]-아미노메탄, 타우린, 하이포타우린, 트레할로스, 글리세롤, 글루코스, 수크로스, 에틸렌글리콜, 프로필렌 글리콜, 프럭토스, 덱스트란, 히알루론산, 시트르산, 아세트산, 부티르산, 팔미트산, 옥살산, 타타르산, 스트렙토마이신, 페니실린, 앰피실린, 카나마이신, 난황단백질, 아미노산 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 정자는 마우스, 햄스터, 랫트, 모르모트, 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 소, 양, 돼지 및 염소로 구성된 군으로부터 선택되는 가축의 정자일 수 있다.
또한, 본 발명은 (a) 상기 정자의 동결보존용 조성물과 정자를 혼합하여 동결보존 혼합물을 수득하는 단계; 및 (b) 상기 혼합물을 동결 및 보존하는 단계를 포함하는, 정자의 동결보존방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 (a) 상기 정자의 동결보존용 조성물과 정자를 혼합하여 동결보존 혼합물을 수득하는 단계; 및 (b) 상기 혼합물을 동결 및 보존하는 단계를 포함하는, 정자의 활성을 향상시키는 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현예로, 상기 정자의 활성은 정자의 운동성, 생존율, 수태율, 정자 세포막 온전성 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 정자 동결보존용 조성물은 동결보존 상태에서 정액의 안정성을 향상시키며, 가축의 정자를 동결 및 융해시킬 경우 정자의 손상을 최소화 할 수 있어 해동 이후 정자의 운동성이 향상되므로, 동결보존에 의한 저장방식을 사용하여도 정자의 생존율을 증진시키고 향상된 생존성을 갖는 정자로 인해 수태율을 증진시킬 수 있어 소를 비롯한 다양한 가축의 번식에 널리 활용될 수 있을 것으로 기대된다.
도 1은 인공질법을 이용한 씨수소 정액 채취방법 및 상기 방법으로 인해 회수된 정액을 나타낸 것이다.
도 2는 레시틴을 포함하는 동결보존액에서 동결한 정자를 융해시킨 후 현미경으로 관찰한 결과 및 정자의 활력을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 레시틴을 포함하는 동결보존액에서 동결한 정자를 융해시킨 후 현미경으로 관찰한 결과 및 정자의 활력을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
본 발명자들은 가축의 정자를 보다 효율적으로 동결보존할 수 있는 방법을 개발하기 위하여 예의 연구노력한 결과, 레시틴을 포함하는 정자의 동결보존용 조성물을 이용할 경우, 종래의 동결보존제에 비해 적은 농도로 사용할 경우보다도 가축의 정자를 효율적으로 동결보존 할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
이에, 본 발명은 0.05 내지 0.2%(v/v)의 레시틴을 포함하는, 정자의 동결보존용 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어, “레시틴(lecithin)”은 인산, 콜린, 지방산, 글리세롤, 당지질, 트라이글리세라이드, 등을 포함하는 생체막 구성 인지질의 일종으로, 물과 기름을 섞게하는 유화작용이 있어 혈관벽에 들러붙은 지방을 녹여 동맥경화를 예방할 수 있고, 콜린과 이노시톨을 함유하고 있어 고혈압 및 동맥경화를 예방할 수 있다고 알려져 있다.
본 발명에 있어서, 레시틴은 0.05 내지 0.2%(v/v)로 포함될 수 있으며, 바람직하게는 0.1%(v/v)로 포함될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물에서 레시틴이 0.05%(v/v) 미만으로 포함되는 경우 동결보존 활성이 저해될 수 있으며, 0.2%(v/v)를 초과하여 포함되는 경우, 정자의 운동성 및 세포막 기능을 저해할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, “정자”란 정충이라고도 호칭되며, 웅성 동물의 고환에서 생산되는 성세포를 의미하는데, 길이는 약 0.02㎜이며, 머리, 경부 및 긴 꼬리의 세 부분으로 구성된다. 머리 부분에는 웅성 동물의 DNA가 들어 있고, 머리 부분의 맨 앞쪽에 존재하는 첨체에는 난자의 난막을 녹일 수 있는 효소가 포함되어 있고; 상기 경부에는 에너지 저장고인 당분을 함유한 미토콘드리아가 포함되어 있으며; 상기 꼬리는 가는 실 묶음으로 되어 있는데, 가는 실 묶음이 교묘하게 신축하여 꼬리를 움직이게 한다.
본 발명에 있어서, 상기 정자는 특별히 이에 제한되지 않으나, 일 예로서, 포유동물의 성숙정자가 될 수 있고, 바람직하게는 마우스, 햄스터, 랫트, 모르모트, 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 소, 양, 돼지, 및 염소로 구성된 군으로부터 선택되는 가축의 정자일 수 있고, 더욱 바람직하게는 소의 성숙정자일 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, “동결보존”이란 냉동을 통해 장기간에 걸쳐 세포를 안정하게 유지시키는 행위를 의미한다. 본 발명의 목적상 상기 동결보존은 정자의 동결보존을 의미하는 것으로 해석될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 정자의 활성을 향상시키는 것일 수 있으며, 상기 정자의 활성은 정자의 운동성, 생존율, 수태율, 정자 세포막 온전성 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용되는 용어, “정자의 생존율”은 동결보존 후 융해된 정자가 생존할 수 있는 확률로서, 본 발명에서 융해 후에도 운동성이 유지되는 정자 및 세포막 기능을 유지하는 정자가 많이 존재하는 것을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어, “정자의 수태율”은 동결보존 후 융해된 정자를 교배 또는 수정하여 수태된 비율로서, 본 발명에서 융해 후에도 생존율이 우수하여 수태율을 증진시킬 수 있는 정자가 많이 존재하는 것을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "동결보존제(cryoprotectant)"란, 동결보호제라고도 하고, 생물세포를 동결상태에서 산채로 보존할 경우, 동해를 경감할 목적으로 매액(媒液)에 첨가시키는 물질을 의미한다. 본 발명의 목적상 상기 동결보존제는 가축의 정자를 동결보존하기 위하여 사용되며, 본 발명의 동결보존용 조성물에 더하여 상기 동결보존제를 희석액으로써 추가로 포함하여 구성할 수 있다. 상기 희석액은 원 정액의 농도를 저하시켜서, 동결보존 시 정자 간의 충돌로 인하여 발생할 수도 있는 손상을 방지하기 위하여 사용된다. 상기 동결보존제 또는 희석액은 특별히 이에 제한되지 않으나, 당류, 유기산, 난황, 항생제 등을 포함하는 완충액이 될 수 있는데, 바람직하게는 시트르산염, 바이카보네이트염, 트리스-[히드록시메틸]-아미노메탄, 타우린, 하이포타우린, 트레할로스, 글리세롤, 글루코스, 수크로스, 에틸렌글리콜, 프로필렌 글리콜, 프럭토스, 덱스트란, 히알루론산, 시트르산, 아세트산, 부티르산, 팔미트산, 옥살산, 타타르산, 스트렙토마이신, 페니실린, 앰피실린, 카나마이신, 난황단백질, 아미노산 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상이 포함된 완충액이 될 수 있고, 이들 각성분은 당업자가 필요에 따라 조합하여 사용할 수 있다.
본 발명자들은 실시예를 통해 레시틴을 포함하는 동결보존용 조성물을 정액 동결보존에 사용한 경우에, 융해 후 정자의 운동성 및 세포막 기능을 확인한 결과 특정 농도에서 유의적으로 정자 활력이 높게 나타나고 세포막의 기능이 증진되는 것을 확인하였다.
구체적으로 본 발명의 일실시예에서는 레시틴을 0%, 0.1%, 0.5% 포함하는 동결보존액 및 대조군(난황 20%)의 정자 활력을 측정한 결과, 레시틴을 0% 처리하거나 0.5% 처리한 군에 비해 0.1% 농도로 처리한 군에서 우수한 운동활성을 나타내는 것을 확인하였다(실시예 2 참조).
또한, 본 발명의 다른 실시예에서는 정자 미부의 팽창형태를 분석함으로써 정자막의 상태를 확인하고 세포막 기능을 측정한 결과, 0.1%의 레시틴을 포함하는 동결보존용 조성물을 처리하는 경우 레시틴 비 첨가 군과 유사한 세포막 기능성을 나타내는 것을 확인하였으며, 0.5%의 레시틴을 포함하는 동결보존용 조성물을 처리하는 경우 세포막 기능이 떨어지는 것을 확인하였다(실시예 3 참조).
상기 결과로부터, 본 발명에 따른 조성물을 처리하는 경우 낮은 농도에서도 효과적으로 정자의 동결보존이 가능하며, 융해 후에도 정자의 활력 및 세포막 기능을 보존시킬 수 있는 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 (a) 상기 정자의 동결보존용 조성물과 정자를 혼합하여 동결보존 혼합물을 수득하는 단계; 및 (b) 상기 혼합물을 동결 및 보존하는 단계를 포함하는, 정자의 동결보존방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 양태로서, 본 발명은 (a) 상기 정자의 동결보존용 조성물과 성숙정자를 혼합하여 동결보존 혼합물을 수득하는 단계; 및 (b) 상기 혼합물을 동결 및 보존하는 단계를 포함하는, 정자의 활성을 향상시키는 방법을 제공한다.
본 발명에 있어서 상기 정자의 활성은 정자의 운동성, 생존율, 수태율, 정자 세포막 온전성 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1. 재료 및 방법
1-1. 인공질법에 의한 정액채취
동일한 월령의 수소를 밑소로 사용하여 보정틀에 고정한 후, 밑소의 꼬리 및 항문 부위를 알콜로 깨끗하게 소독하고, 정액 채취 대상 씨수소의 포피와 귀두 부분을 깨끗한 물로 세척 후 건조시켰다. 약 55℃의 물을 인공질에 주입하여, 인공질 내피 온도가 약 42-44℃가 되도록 준비하였다. 정액 채취 대상 씨수소를 밑소에 2~3회 가 승가 시킨 후 미리 준비해둔 인공질을 사용하여 정액을 채취하였다.
1-2. 레시틴을 포함하는 동결보존액 제조
시트르산, 트리스-[히드록시메틸]-아미노메탄, 프럭토스, 글리세롤, 페니실린, 스트렙토마이신, 증류수(93ml) 및 레시틴을 포함하는 본 발명의 동결보존액을 제조하였다. 상기 동결보존액은 다른 동결보존제의 함량을 동일하게 첨가하고 레시틴의 함량을 각 0%, 0.1%, 0.5%로 포함시켜 조성이 다른 3개의 동결보존액을 제조하였다.
1-3. 난황을 포함하는 동결보존액 제조(대조군)
시트르산, 트리스-[히드록시메틸]-아미노메탄, 프럭토스, 글리세롤, 페니실린, 스트렙토마이신, 증류수(73ml) 및 난황을 포함하는 대조군 동결보존액을 제조하였다. 상기 대조군 동결보존액은 실시예 1-1에 개시된 동결보존제와 다른 성분의 조성을 동일하게 첨가하면서 증류수의 함량을 낮추고 레시틴 대신 난황의 함량을 20%로 포함하도록 제조하였다.
1-4. 정액 희석 및 동결
상기 실시예 1-1의 인공질법 또는 전기자극법으로 채취한 정액은 채취 직후 36℃의 이동식 챔버에 넣어 실험실로 운반한 후 34℃로 가온해 둔 희석액(상기 실시예 1-2 및 1-3에 개시된 동결보존액)을 이용하여 정자 농도를 40 × 106 cells/ml 로 조정하고 4℃의 냉장고에 3시간 이상 보관하여 정액 희석액의 온도를 하강시켰다. 4℃ 챔버에서 0.5 정액 스트로 내에 정액 희석액을 충진 및 밀봉시킨 후 액체질소 표면 3cm 위에서 14분 간 예비동결을 실시한 후, 액체질소에 침지 후 액체 질소통에 보관하였다. 동결정액은 실험에 사용하기 전까지 액체 질소통에 보관하였다.
1-5. 동결정액 융해
액체 질소통에 보관한 스트로를 37℃의 온수에 약 40초간 융해 후 사용하였다.
실시예 2. 레시틴 첨가에 따른 용해 후 정자의 활력 측정
한우로부터 수득한 정자를 실시예 1에 개시한 바와 같이 레시틴을 0%, 0.1%, 0.5% 포함하는 동결보존액으로 동결보존하였다.
상기 동결보존된 정자를 해동한 후, 정자의 운동성을 다양한 측정값(Fast progressive(%), Slow progressive(%), Non-progressive(%), Immotile(%), VCL, VSL, VAP, LIN, STR, WOB, ALH, BCF 및 Hyperactive)을 사용하여 평가하였다.
평가 결과를 하기 [표 1] 및 도 2에 나타냈으며, 이때 대조군으로는 실시예 1-2에 개시된 난황(Egg yolk)을 20% 포함하는 동결보존액을 사용하였다.
정자 활력 측정 항목 |
레시틴(Lecithin) 0% |
레시틴(Lecithin) 0.1% |
레시틴(Lecithin)0.5% | 난황(Egg yolk) 20% |
빠른 직진 운동율, % (Fast progressive) |
14.5±2.3 b | 24.6±2.4 a | 11.2±3.0 b | 14.±1.6 b |
느린 직진 운동율, % (Slow progressive) |
22.6±3.6 ab | 24.0±4.7 ab | 14.7±3.4 b | 29.9±5.9 a |
비 진행성율, % (Non-progressive) |
31.4±0.6 | 28.4±2.2 | 30.1±3.9 | 36.1±2.8 |
정지율(움직임 없음), % (Immotile) |
31.5±4.9 ab | 22.9±4.3 b | 44.0±9.9 a | 19.4±5.7 b |
곡선속도 (VCL) | 57.0±3.6 ab | 78.2±11.4 a | 47.6±6.3 b | 65.4±5.8 ab |
직선속도 (VSL) | 23.0±2.7 b | 32.0±3.0 a | 17.1±3.1 b | 20.5±1.2 b |
평균통로속도 (VAP) | 39.6±2.8 ab | 49.3±5.7 a | 27.0±4.5 b | 36.7±3.0 ab |
직선성 (LIN) | 40.1±3.9 ab | 42.1±3.0 a | 34.5±2.9 ab | 31.8±1.3 b |
직진성 (STR) | 57.4±4.4 | 65.6±2.6 | 62.0±2.6 | 56.4±1.7 |
흔들림 정도 (WOB) | 69.5±2.2 a | 63.9±2.3 a | 55.3±2.8 b | 56.3±0.8 b |
측면머리진폭 (ALH) | 2.3±0.1 b | 3.0±0.3 a | 2.5±0.1 b | 3.1±0.2 a |
머리진동빈도 (BCF) | 11.6±0.6 ab | 13.1±0.5 a | 11.1±0.6 b | 11.7±0.4 ab |
과잉운동 (Hyperactive) | 3.3±1.1 b | 7.1±1.4 a | 2.2±0.1 b | 3.4±0.6 b |
상기 [표 1]에 나타낸 바와 같이, Fast progressive, VCL, VSL, VAP, LIN, ALH, BCF 및 hyperactive 값의 경우, 레시틴 무처리군, 대조군(난황 20% 처리군), 0.5% 레시틴 처리군에 비해 0.1%의 레시틴을 첨가한 그룹에서 유의적으로 높은 결과(p<0.05)를 나타내는 것을 확인하였다. 특히 ast progressive, VCL, VSL, VAP, LIN, ALH, BCF 및 hyperactive 값은 레시틴을 0.5%로 포함하는 경우에 비해 0.1% 포함하는 경우에 정자 활력이 더 우수하게 나타나는 것을 확인할 수 있었다.
실시예 3. 레시틴 첨가에 따른 용해 후 정자의 세포막 기능 측정
정자의 세포막 기능은 Jeyendran 등(1984)의 방법을 변형하여 저삼투압 용액을 이용한 정자 미부의 팽창형태를 분석(Hypo-Osmetic Swelling Test: HOST)함으로써 평가하였다. 구체적으로, 37℃의 저장액(150mOsm/kg, 0.45% NaCl용액) 1㎖에 융해된 정액 100㎕를 가하고, 혼합한 다음 37℃에서 5분간 정치시켰으며, 이를 슬라이드 글라스에 도말하였다. 도말한 표본으로부터 각 표본당 200개의 정자 중에서 정자막이 정상상태인 것을 계수하고, 이의 비율을 측정하는 방식으로 정자의 세포막 기능을 측정하였으며, 그 결과를 하기 [표 2]에 나타내었다.
레시틴 (%) | swollen (%) |
0 | 53.1±6.5 |
0.1 | 53.4±5.9 |
0.5 | 44.4±5.8 |
대조군(난황 20%) | 49.5±5.5 |
상기 [표 2]에 나타낸 바와 같이 0.1%의 레시틴을 포함하는 그룹에서 정자 미부의 팽창형태가 크게 나타나 정자 세포막의 기능성이 높게 나타나는 것을 확인하였다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.
Claims (9)
- 0.05 내지 0.2%(v/v)의 레시틴을 포함하는, 정자의 동결보존용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 정자의 활성을 향상시키는 것을 특징으로 하는, 정자의 동결보존용 조성물. - 제2항에 있어서,
상기 정자의 활성은 정자의 운동성, 생존율, 수태율, 정자 세포막 온전성 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 정자의 동결보존용 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 조성물은 동결보존제를 추가로 포함하는 것인, 정자의 동결보존용 조성물. - 제4항에 있어서,
상기 동결보존제는 시트르산염, 바이카보네이트염, 트리스-[히드록시메틸]-아미노메탄, 타우린, 하이포타우린, 트레할로스, 글리세롤, 글루코스, 수크로스, 에틸렌글리콜, 프로필렌 글리콜, 프럭토스, 덱스트란, 히알루론산, 시트르산, 아세트산, 부티르산, 팔미트산, 옥살산, 타타르산, 스트렙토마이신, 페니실린, 앰피실린, 카나마이신, 난황단백질, 아미노산 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인, 정자의 동결보존용 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 정자는 마우스, 햄스터, 랫트, 모르모트, 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 소, 양, 돼지, 및 염소로 구성된 군으로부터 선택되는 가축의 정자인 것을 특징으로 하는, 정자의 동결보존용 조성물. - (a) 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 정자의 동결보존용 조성물과 정자를 혼합하여 동결보존 혼합물을 수득하는 단계; 및
(b) 상기 혼합물을 동결 및 보존하는 단계를 포함하는, 정자의 동결보존방법. - (a) 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 정자의 동결보존용 조성물과 정자를 혼합하여 동결보존 혼합물을 수득하는 단계; 및
(b) 상기 혼합물을 동결 및 보존하는 단계를 포함하는, 정자의 활성을 향상시키는 방법. - 제8항에 있어서,
상기 정자의 활성은 정자의 운동성, 생존율, 수태율, 정자 세포막 온전성 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 방법.
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CN117106691A (zh) * | 2023-10-20 | 2023-11-24 | 济南万泉生物技术有限公司 | 一种复苏洗涤剂在复苏冻存细胞过程中的应用、制备及使用方法 |
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2020
- 2020-12-15 KR KR1020200175891A patent/KR20220085656A/ko not_active Application Discontinuation
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CN117106691B (zh) * | 2023-10-20 | 2024-01-02 | 济南万泉生物技术有限公司 | 一种复苏洗涤剂在复苏冻存细胞过程中的应用、制备及使用方法 |
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