RU2374649C1 - Тест-система для иммуноферментного определения токсикантов - Google Patents
Тест-система для иммуноферментного определения токсикантов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2374649C1 RU2374649C1 RU2008117724/15A RU2008117724A RU2374649C1 RU 2374649 C1 RU2374649 C1 RU 2374649C1 RU 2008117724/15 A RU2008117724/15 A RU 2008117724/15A RU 2008117724 A RU2008117724 A RU 2008117724A RU 2374649 C1 RU2374649 C1 RU 2374649C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- toxicants
- test system
- test
- determination
- immunoenzymometric
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к аналитической химии и может использоваться при мониторинге загрязнений окружающей среды и контроле качества пищевых продуктов. Поставленная задача достигается тем, что тест-система для иммуноферментного определения токсикантов, содержащая колонку, внутри которой размещен тестовый слой в виде иммуноаффинного геля с привитыми специфическими к токсиканту антителами, зафиксированный сверху и снизу пористыми фильтрами, согласно решению дополнительно содержит контрольный слой в виде иммуноаффинного геля с привитыми специфическими к ферментной метке антителами, зафиксированный сверху и снизу пористыми фильтрами. Технический результат заключается в упрощении интерпретации результатов анализа без усложнения процедуры пробоподготовки, концентрирования и иммуноферментного определения токсикантов. 1 з.п. ф-лы, 2 ил.
Description
Изобретение относится к аналитической химии и может использоваться при мониторинге загрязнений окружающей среды и контроле качества пищевых продуктов.
В современной практике для качественного определения токсикантов различного происхождения широко применяются различные тест-методы анализа.
Наиболее распространенными форматами тест-методов являются иммунохроматографические стрипы (С.Paepens, S.De Saeger, L.Sibanda, I.Bama-Vetro, I.Leglise, F.Van Hove, C.Van Peteghem. A flow-through enzyme immunoassay for the screening of fumonisins in maize Analytica Chimica Acta 523 (2004) 229-235; A.Y.Kolosova, S.De Saeger, L.Sibanda, R.Verheijen, C.Van Peteghem. Development of a colloidal gold-based lateral-flow immunoassay for the rapid simultaneous detection of zearalenone and deoxynivalenol Anal Bioanal Chem (2007) 389:2103-2107) и иммунофильтрационные тесты (D.Saha, D.Acharya, D.Roy, D.Shrestha, Т.К.Dhar. Simultaneous enzyme immunoassay for the screening of aflatoxin Bl and ochratoxin A in chili samples Analytica Chimica Acta 584 (2007) 343-349). Оба типа тестов основаны на использовании мембран, содержащих тестовую зону, окраска которой зависит от концентрации определяемого вещества в образце, и контрольную зону, окраска которой появляется всегда. Контрольная зона служит для двух целей:
1. На основе сравнения интенсивности окраски тестовой и контрольной полос можно сделать вывод о концентрации определяемого вещества.
2. Развитие окраски контрольной зоны указывает на валидность (работоспособность) теста.
Недостатком данных тест-методов является не всегда достаточная чувствительность и необходимость проведения пробоподготовки при использовании интенсивно окрашенных матриц.
Известна тест-система для определения токсикантов в виде колонки с детектирующим иммунослоем, который представляет собой иммуноаффинный гель с привитыми специфическими антителами (см. патент ЕР №0893690, МПК G01N 33/543K; G01N 33/569F).
Данная система позволяет существенно повысить чувствительность определения в сравнении с мембранными тестами, однако не содержит контрольной зоны.
Наиболее близким к предлагаемому изобретению является тест-система для определения пирена в воде. Тест-система представляет собой колонку, на дне которой размещен иммуноаффинный гель с привитыми специфическими антителами, зафиксированный сверху и снизу пористыми фильтрами. Исследуемую воду (природная, питьевая вода, снег) пропускают через колонку, затем вводят конъюгат с ферментной меткой. Для удаления излишков конъюгата используется стадия промывки. Затем в колонку добавляют субстрат, катализирующий развитие окраски. В случае появления окраски - результат считают отрицательным образцом, в случае отсутствия окраски - образец положительный (Goryacheva I.Yu., Beloglazova N.V., Eremin S.A., Mikhirev D.A., Niessner R., Knopp D. Gel-based immunoassay for non-instrumental detection of pyrene in water samples // Talanta 2008. Vol.75. N 2. P.517-522).
Недостатком данной системы является отсутствие контрольного слоя, что усложняет интерпретацию результатов и оценку работоспособности теста.
Задачей заявляемого изобретения является разработка иммуноферментной тест-системы определения токсикантов в продуктах питания и объектах окружающей среды.
Технический результат заключается в упрощении интерпретации результатов анализа без усложнения процедуры пробоподготовки, концентрирования и иммуноферментного определения токсикантов.
Поставленная задача достигается тем, что тест-система для иммуноферментного определения токсикантов, содержащая колонку, внутри которой размещен тестовый слой в виде иммуноаффинного геля с привитыми специфическими к токсиканту антителами, зафиксированный сверху и снизу пористыми фильтрами, согласно решению дополнительно содержит контрольный слой в виде иммуноаффинного геля с привитыми специфическими к ферментной метке антителами, зафиксированный сверху и снизу пористыми фильтрами.
Изобретение поясняется чертежами, на фиг.1 схематически изображена тест-система, на фиг.2 - схема проведения иммуноферментного определения токсиканта, где: 1 - колонка; 2 - пористые фильтры (фриты); 3 - иммуноаффинный гель с привитыми антителами, специфическими к токсикантам; 4 - иммуноаффинный гель с привитыми антителами, специфическими к ферментной метке; 5 - проба; 6 - конъюгат, 7 - промывочный буфер; 8 - субстрат.
Тест-система для иммуноферментного определения токсикантов содержит колонку 1, внутри которой размещен тестовый слой в виде иммуноаффинного геля 3 с привитыми специфическими к токсиканту антителами, зафиксированный сверху и снизу пористыми фильтрами 2, и на расстоянии 1-10 мм контрольный слой в виде иммуноаффинного геля 4 с привитыми специфическими к ферментной метке антителами, зафиксированный сверху и снизу пористыми фильтрами 2.
Тест-система работает следующим образом.
Пробу 5 пропускают через колонку 1 сверху вниз, затем вводят конъюгат 6, который представляет собой токсикант или его аналог, ковалентно связанный с ферментом, играющим роль метки. Для удаления излишков конъюгата 6 используется стадия промывки, с помощью промывочного буфера 7. Затем в колонку 1 добавляют субстрат 8, развитие окраски которого катализирует фермент, и наблюдают развитие окраски. В случае появления окраски иммуноаффинного геля 3 с привитыми антителами, специфическими к токсину, результат считают отрицательным образцом, в случае отсутствия окраски - образец положительным. Окраска иммуноаффинного геля 4 с привитыми антителами, специфическими к ферментной метке, должна развиваться в любом случае. Отсутствие окраски указывает на нерабочее состояние тест-системы.
Рассмотрим пример конкретного использования предложенной тест-системы для иммуноферментного определения токсикантов на примере определения бензо[а]пирена, пирена и 2,4,6-тринитротолуола в природной и питьевой воде.
Для определения токсикантов использовали колонку емкостью 1 мл, в которую помещали детектирующий иммунослой, представляющий собой гель с привитыми специфическими к пирену (для определения бензо[а]пирена или пирена) или к 2,4,6-тринитротолуолу (для определения 2,4,6-тринитротолуола) антителами, и контрольный слой, представляющий собой гель с привитыми специфическими к ферменту антителами.
Для работы тест-системы водные образцы не требуют проведения пробоподготовки, т.к. примеси в воде остаются на поверхности верхнего пористого фильтра. Для проведения определения аликвоту (10 мл) анализируемой речной, озерной, питьевой воды, растаявшиего снега пропускали через колонку с тестовым и контрольным слоями с помощью шприца, затем пропускали раствор конъюгата бензо[а]пиренбутановой кислоты с пероксидазой хрена (для определения бензо[а]пирена) или раствор конъюгата пиренбутановой кислоты с пероксидазой хрена (для определения пирена) или раствор конъюгата 2,4,6-тринитробензойной кислоты с пероксидазой хрена (для определения 2,4,6-тринитротолуола). Конъюгат оставляли в колонке на 3-5 минут, затем удаляли промыванием колонки 5-10 мл фосфатно-солевого буфера с добавкой Твин 20. Последним шагом определения являлось добавление в колонку субстрата на основе тетраметилбензидина, после чего в течение нескольких минут наблюдалось развитие синей окраски обоих слоев (при отсутствии токсиканта в пробе). При присутствии токсиканта выше предела обнаружения, тестовый слой остается белым, развивается окраска лишь контрольного слоя. Развитие окраски фиксировали визуально.
Claims (2)
1. Тест-система для иммуноферментного определения токсикантов, содержащая колонку, внутри которой размещен тестовый слой в виде иммуноаффинного геля с привитыми специфическими к токсиканту антителами, зафиксированный сверху и снизу пористыми фильтрами, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит контрольный слой в виде иммуноаффинного геля с привитыми специфическими к ферментной метке антителами, зафиксированный сверху и снизу пористыми фильтрами.
2. Тест-система по п.1, отличающаяся тем, что контрольный слой размещен на расстоянии 1-10 мм от тестового.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008117724/15A RU2374649C1 (ru) | 2008-05-04 | 2008-05-04 | Тест-система для иммуноферментного определения токсикантов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008117724/15A RU2374649C1 (ru) | 2008-05-04 | 2008-05-04 | Тест-система для иммуноферментного определения токсикантов |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2374649C1 true RU2374649C1 (ru) | 2009-11-27 |
Family
ID=41476848
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008117724/15A RU2374649C1 (ru) | 2008-05-04 | 2008-05-04 | Тест-система для иммуноферментного определения токсикантов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2374649C1 (ru) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2506586C1 (ru) * | 2012-10-01 | 2014-02-10 | Павел Сергеевич Шмелин | Способ определения уровня токсикантов в воде, продуктах питания или физиологических жидкостях и тест-система |
| RU2508553C1 (ru) * | 2012-10-01 | 2014-02-27 | Евгений Петрович Гребенников | Способ определения уровня токсикантов в воде, продуктах питания или физиологических жидкостях и тест-система |
| CN103675256A (zh) * | 2012-09-12 | 2014-03-26 | 天津科技大学 | 氯霉素免疫亲和凝胶检测柱 |
| RU2538707C1 (ru) * | 2013-08-21 | 2015-01-10 | Евгений Петрович Гребенников | Способ определения уровня токсикантов в воде, продуктах питания или физиологических жидкостях и тест-система |
| RU2547577C1 (ru) * | 2013-11-12 | 2015-04-10 | Павел Сергеевич Шмелин | Способ определения уровня токсикантов в воде, продуктах питания или физиологических жидкостях и тест-система |
| CN112505026A (zh) * | 2020-11-23 | 2021-03-16 | 深圳大学 | 一种大豆过敏原可视化凝胶检测装置和方法 |
-
2008
- 2008-05-04 RU RU2008117724/15A patent/RU2374649C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| GORYACHEVA IY, et al Gel-based immunoassay for non-instrumental detection of pyrene in water samples., Talanta. 2008 Apr 15; 75(2):517-22. Epub 2007 Nov 22. PMID:18371915 [PubMed]. GORYACHEVA IY, BASOVA EY et al Novel gel-based rapid test for non-instrumental detection of ochratoxin A in beer.: Anal Bioanal Chem. 2008 Jan; 390(2):723-7. Epub 2007 Nov 23. PMID: 18034338 [PubMed - indexed for MEDLINE]. WANG XH et al Enzyme-linked immunosorbent assay and colloidal gold immunoassay for ochratoxin A: investigation of analytical conditions and sample matrix on assay performance. Anal Bioanal Chem. 2007 Oct; 389(3):903-11. Epub 2007 Aug 1. PMID: 17668189 [PubMed - indexed for MEDLINE]. Cortez Diagnostics, Inc., OneStep BZD InstaStrip, Cat #121063, p.1-3, revision date: 28.11.06. * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103675256A (zh) * | 2012-09-12 | 2014-03-26 | 天津科技大学 | 氯霉素免疫亲和凝胶检测柱 |
| RU2506586C1 (ru) * | 2012-10-01 | 2014-02-10 | Павел Сергеевич Шмелин | Способ определения уровня токсикантов в воде, продуктах питания или физиологических жидкостях и тест-система |
| RU2508553C1 (ru) * | 2012-10-01 | 2014-02-27 | Евгений Петрович Гребенников | Способ определения уровня токсикантов в воде, продуктах питания или физиологических жидкостях и тест-система |
| RU2538707C1 (ru) * | 2013-08-21 | 2015-01-10 | Евгений Петрович Гребенников | Способ определения уровня токсикантов в воде, продуктах питания или физиологических жидкостях и тест-система |
| RU2547577C1 (ru) * | 2013-11-12 | 2015-04-10 | Павел Сергеевич Шмелин | Способ определения уровня токсикантов в воде, продуктах питания или физиологических жидкостях и тест-система |
| CN112505026A (zh) * | 2020-11-23 | 2021-03-16 | 深圳大学 | 一种大豆过敏原可视化凝胶检测装置和方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2374649C1 (ru) | Тест-система для иммуноферментного определения токсикантов | |
| KR100513216B1 (ko) | 바이오센서 | |
| JP3126383B2 (ja) | 簡易な分析装置 | |
| NO760233L (ru) | ||
| Larou et al. | High throughput cellular biosensor for the ultra-sensitive, ultra-rapid detection of aflatoxin M1 | |
| Darwish et al. | Immunofluorescence–based biosensor for the determination of dengue virus NS1 in clinical samples | |
| JPS63198969A (ja) | クラミジア・トラコマティスおよびネイセリア・ゴノリアエを検出するための分析装置および分析方法 | |
| RU2001132335A (ru) | Способ оценки наличия риска пептической язвы, включающий в себя этапы количественного определения концентрации пепсиногена i (pgi) и гастрин-17 в образце сыворотки | |
| JP4223163B2 (ja) | 免疫クロマトグラフィー試験片、及びクロマトグラフ分析方法 | |
| Paek et al. | Performance control strategies of one-step immuno-chromatographic assay system for Salmonella typhimurium | |
| KR20160110701A (ko) | 막 기반 다중튜브를 포함하는 생체 물질 분석 장치 | |
| US20170362631A1 (en) | Method and device for determining the presence of a micro-organism in stools with activated carbon pretreatment | |
| WO2002035216A1 (en) | Multilayer analytical element and method for determination of analytes in fluids containing interfering substances | |
| RU2361203C1 (ru) | Способ определения качества молока и молочных продуктов | |
| RU2364870C1 (ru) | Устройство для тест-определения аналита | |
| Phillipou et al. | Screening for microalbuminuria by use of a rapid, low-cost colorimetric assay. | |
| WO2017077392A1 (en) | Methods and devices for detecting methanol poisoning using formate oxidase | |
| CA2038360A1 (en) | Process for assaying free hemoglobin and reagent kit for assaying free hemoglobin | |
| Dankwardt et al. | Rapid immunofiltration assay for the determination of atrazine in water and soil samples | |
| JP2005337805A (ja) | 抗体または抗原の測定方法 | |
| CN112098652B (zh) | 一种基于共价键合法固定捕获抗体的纸基酶联免疫吸附法 | |
| CN103487590B (zh) | 一种血型抗体的间接Dot-ELISA检测方法与应用 | |
| Kaku et al. | Amperometric and colorimetric enzyme immunoassay for urinary human serum albumin using a plasma-treated membrane | |
| CN114578063A (zh) | 一种ELISA法检测人肿瘤坏死因子TNF-α的方法 | |
| RU2288472C1 (ru) | Способ определения концентрации антител в сыворотках крови к патогенным бактериям yersinia enterocolitica сероваров o:3, o:5 или o:6,30 с применением пьезогравиметрического иммуносенсора |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150505 |