RU2323001C1 - Фармацевтическая композиция, обладающая фибринолитическим действием - Google Patents

Abstract

Фармацевтическая композиция обладает фибринолитическим действием и содержит в качестве действующего вещества модифицированный активатор плазминогена урокиназного типа мАПУТ22, маннитол и натрия хлорид при следующем соотношении компонентов, мас.%: мАПУТ22 2,8-4,2, маннитол 31,1-38,8, натрий хлорид до 100. Фармацевтическая композиция может быть использована в нейрохирургии для лечения внутримозговых гематом, возникающих при геморрагических инсультах. Композиция обладает высокой специфической фибринолитической активностью и не вызывает опасных побочных эффектов при удалении внутримозговых гематом. 1 з.п. ф-лы, 6 ил., 8 табл.

Description

Изобретение относится к медицине, химико-фармацевтической промышленности и биотехнологии и касается новой фармацевтической композиции, обладающей фибринолитическим действием, которая может быть использована в нейрохирургии для лечения внутримозговых гематом, в первую очередь внутримозговых гипертензивных гематом, возникающих при геморрагических инсультах. Кроме того, новая фармацевтическая композиция может использоваться в нейрохирургии для лечения внутримозговых травматических гематом и хронических травматических субдуральных гематом.

Внутримозговые гематомы, возникающие как осложнение геморрагического инсульта, занимают одно из первых мест по причинам летальности и инвалидизации населения среди сосудистых заболеваний головного мозга. Частота инсультных внутримозговых гематом в России составляет, в среднем, 0,5 на 1000 человек населения в год (Варакин Ю.Я. Автореф. дисс. докт. мед. наук. - М., 1994. с.1-30; Гусев Е.И. и соавт. - Ж. невропат, и психиатр, им. С.С.Корсакова, 1995 г., Т.95, с.4-7). Согласно данным тех же авторов средний показатель летальности при консервативном лечении инсульта превышает 60%, а показатель тяжелой и умеренной инвалидизации среди лиц, перенесших кровоизлияние в мозг, составляет в России 0,32 на 1000 человек населения, к трудовой деятельности после инсульта возвращается не более 10%.

Применение хирургических способов лечения больных с инсультными внутримозговыми гематомами позволяет заметно снизить летальность, особенно в группе тяжелых больных. Однако показатели летальности и инвалидизации при хирургическом лечении, тем не менее, остаются на уровне 30-52% и 50-55% соответственно (Переседов В.В. Дисс. докт. мед. наук. - М., 1990, с.10-150; Сарибекян А.С. и соавт. - Ж. невропатол. психиатр, им. С.С.Корсакова, 1998; №8, с.23).

Недостатками традиционных хирургических методик удаления инсультных гематом являются: необходимая энцефалотомия и ретракция мозга, высокий риск повреждения внутримозговых сосудов и функционально значимых зон мозга при удалении глубоко расположенных гематом. Все это приводит к дополнительной травматизации мозга, развитию послеоперационной ишемии и отека. В связи с этим был разработан сравнительно малоинвазивный метод стереотаксическо-пункционного удаления инсультных гематом. Этот метод считается показанным для эвакуации гематом латеральной, смешанной и медиакальной локализации, гематом ствола мозга, полушарий и червя мозжечка, интерперпедункулярных гематом.

Активно применяются и совершенствуются две методики стереотаксическо-пункционного удаления внутримозговых гематом:

- методика механического разрушения сгустков крови, основанная на принципе «винта Архимеда»,

- аспирационная методика в сочетании с локальным фибринолизом гематомы фибринолитическими препаратами.

По данным ряда авторов, через несколько часов после кровоизлияния внутримозговая гематома состоит на 80% из плотных сгустков и на 20% из жидкой части. Однако использование стереотаксическо-пункционной методики с целью механического разрушения сгустков сопряжено с опасностью повреждения окружающей мозговой ткани и внутримозговых сосудов, что может вызвать серьезное интраоперационное кровотечение.

В последние годы зарубежные нейрохирурги все чаще сочетают стереотаксическо-пункционное удаление внутримозговой гематомы с применением фибринолитических препаратов, таких как урокиназа, стрептокиназа, тканевой активатор плазминогена t-PA (Niizuma H. и соавт., Stereotactic and functional neurosurg., 1990, № 54-55, p.438-44; Schaller С. и соавт. J. Nervenarzt, 1995; Apr., 66 (4), p.275-281; Taskin M. и соавт., Clinical Neurology and Neurosnrgery, 1997, V.99, Supp.1, p.60; Busch С. и соавт., Clinical Neurology and Neurosurgery, 1997. V.99, Supp.1, p.60; Montes J. и соавт., Stroke, 2000 Apr; 31 (4), p.834-840; Rohde V. и соавт., Minim-Invasive-Neurosurg., 2000; Mar, 43/1, p.9-17).

Deinsberger W. и соавт. (Clinical Neurology and Neurosurgery, 1997, Volume Supp.99, p.60) изучали комбинированное влияние стереотаксическо-пункционной аспирации (далее СПА) и локального фибринолиза на скорость мозгового кровотока и темп уменьшения зоны перифокальных изменений. Авторы пришли к заключению, что применение фибринолитиков (урокиназы и тканевого активатора плазминогена) достоверно (р.<0.06) уменьшает зону перифокальных изменений, улучшает скорость мозгового кровотока при объеме гематомы 25-40 см³ латеральной локализации. По данным Schaefer D.W. и соавт. (Clinical Neurology and Neurosurgery, 1997, V.99, Supp.1, p.15) применение фибринолитиков позволяет в 2-3 раза ускорить темп восстановления сознания и регресс неврологического дефицита у больных с объемом гематомы 25-40 см³ латеральной локализации по сравнению с консервативным лечением (серия наблюдений из 80 больных).

Показанием к использованию фибринолитиков большинство авторов считают средний объем неаспирированной гематомы, составляющий от 40 до 60% ее исходного объема. По разным сообщениям количество введений фибринолитика на одного больного может достигать от 1-го до 4-х, средняя доза введения - от 5 до 16 мг, интервал между введениями составляет не менее 6-12 часов, к концу двух-четырех суток после введения фибринолитика от 67 до 92% оставшегося объема гематомы лизируется, эвакуируется через катетер и при КТ-контроле не визуализируется (Taskin M., 1997). Операции проводились в среднем на 3-и сутки, объем гематомы составлял от 20 до 65 см³ при уровне расстройства сознания - оглушение - кома. Показатель летальности при сочетании СПА-метода с введением фибринолитика в большинстве публикаций колеблется от 2 до 15%, что почти в 2-2,5 раза ниже по сравнению с традиционным способом удаления гематом. При этом повторные кровоизлияния регистрировались редко. Хорошее функциональное восстановление отмечено в 25-37% случаев, тяжелая степень инвалидизации в 20-30% наблюдений (Schaller С. и соавт., J.Neurosurg., 1995; Feb., 36 (2), p.328-333; Nguyen J.P. и соавт., J. Neurochir., 1991, 37 (1), p.50-57).

Таким образом, СПА-метод удаления внутримозговых гематом в сочетании с локальным фибринолизом, по сводным данным, является сравнительно малоинвазивным методом и позволяет снизить летальность по сравнению с открытым хирургическим методом и консервативным лечением в 2-2,5 раза, улучшить функциональные исходы операций и качество жизни на 30% и более.

Как было показано выше, в качестве фибринолитических препаратов для локального фибринолиза при геморрагических инсультах используют такие природные ферменты как урокиназа, стрептокиназа, активатор тканевого плазминогена.

Урокиназа и стрептокиназа относятся к тромболитическим ферментам первого поколения. Однако их применение может приводить к существенным нарушениям в системе свертывания крови.

Более перспективной представляется группа фибринолитиков следующего поколения, к которым относятся активаторы плазминогена, переводящие плазминоген (неактивный фермент системы фибринолиза крови) в протеолитический фермент плазмин. Плазмин является протеазой ограниченной специфичности и способен обеспечивать лизис фибриновых сгустков, лежащих в основе тромбов, и в меньшей степени разрушать белки, отличные от фибрина.

Активаторы плазминогена - проурокиназа и тканевой активатор плазминогена характеризуются высокой специфичностью действия: они активируют плазминоген преимущественно в области тромба, в меньшей степени вызывают неспецифическую активацию плазминогена, истощение антиплазмина и разложение плазминогена в крови. В результате снижается риск возникновения осложнений, связанных с возможными кровотечениями и геморрагиями. Механизм этой специфической активности разъяснен исследованиями Lijnen H.R. и соавт., (J. Biol. Chem., v.261 (1986) 1253-1258) и Pannel и соавт., (Blood, 1986, v.67, p.1215-1223). Они обнаружили, что проурокиназа преимущественно активирует фибринсвязанный плазминоген, имеющий другую конформацию, чем свободно циркулирующий. Кроме того, указанными авторами показано, что в области тромба проурокиназа не ингибируется специфическими ингибиторами, присутствующими в плазме крови. Благодаря указанным преимуществам активаторы плазминогена находят все более широкое применение в качестве фибринолитических средств для лечения инфаркта миокарда, легочной тромбоэмболии, тромбозов вен, ряда тромболитических поражений глаз.

В то же время, применение препаратов на основе тканевого активатора плазминогена (альтеплаза, тенектеплаза и др.) в неврологии, как и при любом контакте с нервной тканью (при инсультах, нейрохирургических процедурах) требует особой осторожности, т.к. может провоцировать нарушение Са⁺⁺-проводимости и даже деградацию и апоптоз нервной ткани (Kumada М. и соавт., Invest Ophthalmol Vis Sci., 2005 Apr; 46(4):1504-7); Nagai N. и соавт., Circulation, 1999, 2440-2444; Yepes М. и соавт., J. Clin. Invest, 2002, 109(12):1571-1578; Fernandez-Monreal М. и соавт., JBC 279, 2002, 50850-50854 и др.).

Безопасность проурокиназы выше, чем у тканевого активатора и его производных, так как тканевой активатор, в отличие от проурокиназы, не является истинным зимогеном и его ферментативная активность в «неактивированом» состоянии сравнима с его активностью в «активированой» форме (степень активации tPA составляет всего около 1,5 порядков величины). Проурокиназа же по существу активируется только в области фибринового сгустка и диапазон между ферментативной активностью ее «неактивной» (одноцепочной) и «активной» (двухцепочной) формами составляет около 4 порядков величины.

Однако не всегда препараты, аналогичные природным продуктам, являются оптимальными для клинического применения. Так, природная проурокиназа содержит на N-конце домен, гомологичный эпидермальному ростовому фактору, что может приводить к побочным эффектам, связанным с активизацией регуляторных процессов, контролирующих деление и миграцию клеток.

Поэтому в настоящее время ведется работа над созданием тромболитических препаратов третьего поколения, которые представляют собой различные модификации активаторов плазминогена.

Таким образом, основная задача изобретения состояла в создании такой фармацевтической композиции для целей локального фибринолиза при геморрагическом инсульте, которая, обладая высокой специфической фибринолитической активностью, не вызывала бы опасных побочных эффектов при удалении внутримозговых гематом.

Предлагаемая лиофилизированная фармацевтическая композиция обладает высокой специфической фибринолитической активностью и при этом является максимально безопасной в плане осложнений при ее применении.

Описываемая фармацевтическая композиция содержит в качестве действующего вещества модифицированный активатор плазминогена урокиназного типа мАПУТ22, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID №1, маннитол и натрия хлорид при следующем соотношении, мас.%:

мАПУТ22	2,8-4,2
Маннитол	31,1-38,8
Натрия хлорид	остальное

Модифицированный АПУТ22 представляет собой рекомбинантную проурокиназу, которая отличается от природной проурокиназы заменой первых 24 аминокислот N-концевого домена, гомологичного эпидермальному ростовому фактору, на 15 чужеродных аминокислот. Вследствие этой модификации мАПУТ22 неспособен взаимодействовать с урокиназным рецептором и, следовательно, создавать какие-либо потенциально возможные побочные эффекты, связанные с активизацией регуляторных процессов, контролирующих деление и миграцию клеток. В связи с этим применение мАПУТ22 в лечебной практике обладает существенными преимуществами по сравнению с природной проурокиназой. При этом удельная активность мАПУТ22 соответствует удельной активности природной проурокиназы.

В патенте РФ №2140453 описана рекомбинантная плазмидная ДНК pUABC22, кодирующая модифицированный активатор плазминогена урокиназного типа мАПУТ22, штамм Escherichia coli ВКПМ В-7666- продуцент мАПУТ22 и способ получения мАПУТ22. В патенте РФ №2216348 приводится аминокислотная последовательность мАПУТ22.

В качестве наполнителей описываемая фармацевтическая композиция содержит маннитол и хлорид натрия.

Маннитол является низкомолекулярным осмотическим диуретиком и в этом качестве используется как самостоятельное лекарственное средство. В тоже время маннитол широко используется в фармацевтике в качестве наполнителя и стабилизатора различных лекарственных форм: таблеток, лиофилизатов, сиропов и т.п. В описываемой новой фибринолитической композиции маннитол оказывает специфическое действие и повышает эффект от использования мАПУТ22 как фибринолитика в послеоперационном локальном фибринолизе при геморрагическом инсульте.

Осмотическое давление, которое создает маннитол при использовании описываемой композиции, некоторое время препятствует оттоку продуктов фибринолиза, образующихся в результате воздействия композиции на гематому. Известно, что высокая концентрация продуктов фибринолиза вызывает сильный ангиошок сосудов головного мозга, поэтому крайне необходимо снижать их концентрацию во внутримозговой жидкости. В данном случае эту задачу решает сочетание периодической аспирации продуктов фибринолиза и избыточного осмотического давления в рассасываемой гематоме, создаваемого маннитолом, что позволяет сделать процесс аспирации более эффективным.

Описываемая фармацевтическая композиция хорошо растворима в воде и изотоническом растворе хлорида натрия, образуя прозрачный бесцветный раствор с рН 5,0-7,0.

Новую фармацевтическую композиция используют при локальном фибринолизе после удаления внтримозговой гематомы СПА-методом однократно в количестве 45000-110000 ME, преимущественно, в эффективной терапевтической дозе 45000-55000 ME). Общее количество композиции на курс локального фибринолиза составляет от 45000 до 300000 ME.

Технология получения описываемой фармацевтической композиции включает в себя размораживание раствора мАПУТ22, хранящегося при -70°С, добавление к субстанции раствора маннитола, физраствора и стерильной апирогенной воды, дозированный розлив стерильного раствора в стеклянные флаконы вместимостью 4-10 мл и лиофильную сушку.

Содержание воды в лиофилизате не превышает 10% и совместимо с сохранением активности фермента при хранении.

В свою очередь получение субстанции мАПУТ22 включает в себя: культивирование штамма-продуцента Escherichia coli в ферментере на оптимизированной среде при температуре +37°С в течение 6-8 часов и сепарацию клеточной массы; разрушение клеточных стенок френч-прессом и ультразвуком, отделение и промывку телец включения, содержащих мАПУТ22, центрифугирование; солюбилизацию мАПУТ22 гуанидин-хлоридом; реконструкцию третичной структуры мАПУТ22 в присутствии окисленной и восстановленной форм глутатиона; концентрирование мАПУТ22 путем высаливания сульфатом аммония; выделение мАПУТ22 сорбцией на аффинном сорбенте, приготовленном на основе моноклональных антител к проурокиназе; обессоливание раствора и концентрирование фермента; стерилизующую фильтрацию через мембрану 0.22 мкм и дозированный розлив стерильного фильтрата во флаконы. Субстанцию мАПУТ хранят при температуре -70°С.

Перечень последовательностей аминокислот, характеризующих настоящее изобретение, включает следующую последовательность:

SEQ ID NO:1 представляет собой полную аминокислотную последовательность мАПУТ22.

Фиг.1 демонстрирует положительную динамику неврологического статуса в течение двух недель после введения препарата пуроплазан (кружками обозначены значения стандартных отклонений).

На фиг.2 приведены дооперационные МРТ больного М. (34 лет) с гематомой латерального типа объемом 60 см³.

На фиг.3 приведены МРТ того же больного через 7 дней после начала фибринолиза пуроплазаном (слева) и на 14 сутки (справа).

На фиг.4 приведены дооперационные МРТ больной Л. (63 лет) с диагнозом: гематома латерального типа слева (45 см³). А - режим Т1; Б - режим Т2.

На фиг.5 приведены МРТ той же больной. А - на 8-й день после операции и 7-й день от начала лечения пуроплазаном; Б - через 15 дней после операции и 6 дней после окончания лечения пуроплазаном.

Фиг.6 представляет собой график, отражающий динамику температуры тела в течение 42 часов после введения препарата. Кружками обозначены значения стандартных отклонений.

Пример 1

Фармацевтическая композиция состава, мас.%:

МАПУТ22	3,1
Маннитол	38,0
Натрия хлорид	58,9

Размораживают мАПУТ, хранящийся при температуре -70°С. К рассчитанному количеству (в мл) мАПУТ22 с концентрацией 2 мг мАПУТ22 в 1 мл добавляют рассчитанные количества 20% раствора маннитола и изотонического раствора натрия хлорида. Затем доводят объем стерильной апирогенной водой до 250 мл. Полученный раствор осторожно перемешивают круговыми движениями и фильтруют через мембрану с диаметром пор 0,22 мл. После фильтрации раствор помещают в дозатор разливочной машины и осуществляют розлив в стерильные ампулы вместимостью 1 мл. Доза для розлива - 0,25 мл. Лиофильную сушку проводят в сублимационной сушильной установке в течение 5 часов при температуре -40°С. Затем ампулы запаивают с продувкой азотом и хранят при температуре не выше +25°С.

Пример 2

Фармацевтическая композиция состава, мас.%:

МАПУТ22	4,0
Маннитол	31,5
Натрия хлорид	64,5

Фармкомпозицию получают аналогично примеру 1.

Пример 3

Фармацевтическая композиция состава, мас.%:

мАПУТ22	3,6
Маннитол	36,1
Натрия хлорид	60,3

Фармкомпозицию получают аналогично примеру 1.

Фармакологическое изучение предлагаемой фармацевтической композиции (препарат «Пуроплазан») показало ее высокую фибринолитическую активность. Пуроплазан обладает высокой специфической активностью (80000-100000 ME на 1 мг белка), максимальным сродством к нативным белкам организма, низкой токсичностью и хорошей переносимостью.

На стадии доклинических исследований эффективность лечебного действия и безопасность применения Пуроплазана изучались на модели геморрагического инсульта у кроликов в диапазоне доз от 1000 до 5000 ME на кролика с использованием, в том числе, композиций, описанных в примерах 1-3. Была показана высокая эффективность и безопасность применения Пуроплазана в ранние сроки развития геморрагического инсульта у кроликов. Установлены хорошая переносимость и отсутствие токсического действия Пуроплазана при его однократном введении в белое вещество головного мозга кроликов в условиях 2-месячного хронического эксперимента.

Проведенные клинические испытания Пуроплазана показали его высокую эффективность при лечении внутримозговых гематом, прежде всего гематом, возникающих в результате геморрагического инсульта. При проведении клинических испытаний использовалась фармацевтическая композиция следующего состава: мАПУТ22 - 3,4%, маннитол - 34,5%, натрия хлорид - 62,1%.

Клинические испытания препарата «Пуроплазан» были проведены в отделении нейрохирургии для больных с инсультами московской городской клинической больницы №15 им. О.М.Филатова. Целью исследований являлась оценка клинической эффективности препарата у пациентов с геморрагическим инсультом, осложненным гипертензивной внутримозговой гематомой (далее в тексте: внутримозговой гематомой или гематомой). Оценка клинической эффективности пуроплазана включала также исследования по выявлению переносимости препарата при его введении в полость гематомы.

Испытания произведены на 30 пациентах с геморрагическим инсультом, осложненным внутримозговой гематомой. Все пациенты страдали гипертонической болезнью на протяжении 5 и более лет до развития инсульта.

Распределение больных по полу, возрасту и форме гипертонической болезни (градация Чазова Е.И., 2003 г.) представлено в таблицах 1 и 2.

При распределении пациентов по локализации внутримозговых гематом использовалась отечественная классификация (НИИ неврологии РАМН, 1967), предусматривающая следующие типы гематом: лобарный, латеральный, смешанный, медиальный, гематома мозжечка. Объем гематомы определяли на основании данных МРТ или КТ, произведенных до и после операции. Распределение пациентов по локализации и объему гематом представлено в таблице 3.

Уровень сознания и неврологическая симптоматика пациентов до введения препарата и в динамике оценивались по шкале американского института неврологических расстройств и инсульта - NIH/NINDS. Неврологический статус пациента оценивался, как сумма баллов по симптомам, приведенным в таблице 4. В ней же представлено распределение пациентов по уровню нарушения сознания и неврологическим симптомам до начала лечения пуроплазаном.

Оценка клинической эффективности и переносимости пуроплазана включала использование следующих методов:

- ежедневная оценка общего состояния и неврологического статуса,

- измерение АД 6 раз в сутки,

- измерение температуры тела 2 раза в день,

- коагулограмма на 7-е и 14-е сутки после первого введения препарата.

- МРТ: до операции, на 7-й и 14-й день после первого введения препарата.

После установления диагноза внутримозговой гематомы производилась операция наложения в проекции гематомы фрезевого отверстия диаметром 1,5 см. Далее производили пункцию гематомы специальным силиконовым катетером наружным диаметром 2,2 мм, через который аспирировали жидкую часть гематомы (обычно около 40-60% от ее исходного объема).

Наружный конец катетера выводили через кожную рану и фиксировали на коже головы. Кожную рану зашивали. Наружный конец катетера герметично закрывали и оставляли в стерильной повязке на голове. Через 12 часов в полость гематомы по катетеру вводили 50000 ME пуроплазана (разведенного в 3 мл физиологического раствора) и спустя еще 12 часов из этого же катетера производили удаление лизированной части гематомы. Подобная процедура с введением пуроплазана и аспирацией лизированных остатков гематомы производилась 1-3 раза. Второе и последующие введения пуроплазана производились, если расчетный объем остаточной гематомы превышал 10 см³ при гематомах лобарного, латерального или смешанного типов, или 5 см³ - при гематомах медиального типа и мозжечка. Расчетный объем гематомы определялся как разница между исходным объемом гематомы и объемом аспирированной жидкости. Критерием прекращения введения препарата являлся остаточный объем гематомы, определяемый при контрольных МРТ или КТ и не превышающий 10 см³ при гематомах лобарного, латерального или смешанного типов, или 5 см³ - при гематомах медиального типа и мозжечка.

Критериями оценки эффективности и переносимости препарата служили следующие:

- динамика сознания и неврологических симптомов (шкала NIH/NINDS),

- динамика объема гематомы по данным МРТ или КТ,

- динамика АД, температуры тела, частоты дыхания и ЧСС,

- динамика анализов крови (включая коагулограмму).

Переносимость препарата оценивали в соответствии со временем внешних аллергических проявлений, а также по динамике общих и биохимических показателей крови и мочи, степени изменения величины АД, ЧСС, дыхания, температуры тела по сравнению с течением послеоперационного периода при использовании традиционных методов удаления гематомы.

О данных, характеризующих эффективность препарата пуроплазан, можно сказать следующее.

В процессе лечения препаратом оценивали состояние неврологического статуса, включая состояние сознания. Динамика неврологического статуса по баллам шкалы NIH/NINDS иллюстрируется данными, представленными в таблице 5 и на графике, изображенном на фиг.1. В таблице приведены средние значения суммы баллов за день.

Большие значение суммы балов соответствуют более благоприятному состоянию больного и менее выраженному неврологическому дефициту.

Низкие значения суммы баллов соответствуют тяжелому состоянию и более выраженным неврологическим расстройствам. На фиг.1 представлен график, на котором видна положительная динамика неврологического статуса и уровня сознания в течение двух недель после начала введения препарата пуроплазан.

Одним из основных показателей эффективности методики является радикальность удаления остаточной гематомы. Этот показатель оценивали путем сравнения объема гематомы до введения препарата с объемом остаточной гематомы, выявляемой после окончания фибринолиза. Данные представлены в таблице 6.

Показатель радикальности удаления гематомы колебался от 80% до 100%, и в среднем составил 89,4%. На фиг.2-5 приведены МРТ пациентов, оперированных методом пункционного удаления гематомы в сочетании с фибринолизом пуроплазаном.

Приведенные клинические примеры демонстрирует высокую эффективность препарата пуроплазан, проявившуюся в полном лизисе остаточной гематомы. Кроме того, на контрольных МРТ отсутствуют такие остаточные явления как перифокальный отек и ишемия мозга, обычно наблюдающиеся после традиционных операций. Отсутствуют также признаки деструкции мозговой ткани вокруг щелевидной остаточной полости на месте удаленной гематомы, что может свидетельствовать об отсутствии побочных реакций мозговой ткани на введение пуроплазана в полость гематомы.

За время наблюдения за пациентами в течение двух и более недель после первого введения препарата пуроплазан, аллергические реакции не отмечены ни в одном случае. Динамика АД, частоты дыхания и температуры тела приведена в таблице 7.

Данные, приведенные в таблице 7, показывают, что существенных изменений АД, пульса и частоты дыхания после начала лечения препаратом и в течение последующей недели, не отмечается.

Наблюдающаяся динамика АД, пульса и частоты дыхания характерна как для основной группы, так и контрольной.

Динамику температуры тела оценивали посредством анализа измерений температуры, произведенных в течение первых 42 часов после каждого введения препарата. Поскольку было выполнено всего 89 введений у 30 больных, были усреднены показатели температуры, полученные через каждые 12 часов после введения препарата.

Динамика температуры тела показана на графике (фиг.8). Поскольку выявленные колебания температуры незначительны и характерны для послеоперационного периода в подавляющем большинстве случаев операций по поводу геморрагического инсульта, то можно заключить, что значимого повышения температуры тела в течение первых 42 часов после введения препарата не наблюдается.

Было проведено также исследование влияния лечения пуроплазаном на показатели свертывания системы крови. В таблице 8 представлены показатели коагулограмм после сеансов фибринолиза. Существенных отклонений от нормы не выявлено.

Таким образом, результаты клинического испытания препарата пуроплазан показали, что при введении препарата в полость внутримозговой гематомы после предварительного удаления части этой гематомы, наблюдается эффект лизиса остаточной части гематомы, представляющей из себя сгустки различной плотности. Это позволяет удалять оставшуюся часть гематомы через катетер небольшого диаметра. Эффективность локального фибриолиза, достигаемая с помощью пуроплазана, позволяет в совокупности удалить от 80 до 100% от исходного объема гематомы минимально-инвазивным и относительно безопасным для больного способом. Это подтверждено МРТ-исследованиями, выполненными до операции, а также через 7 и 14 дней после начала локального фибринолиза пуроплазаном. При МРТ отрицательных эффектов в виде нарастания отека или ишемии мозга не выявлено.

Исследования основных физиологичесих параметров: АД, частоты пульса, частоты дыхания, температуры тела показали, что существенных отклонений трендов от типичных для данной категории больных не наблюдалось.

Оценка неврологического статуса по современной бальной системе, также не выявила отрицательных тенденций в процессе лечения пуроплазаном.

Исследования коагулограмм после введений пуроплазана показали, что существенных отклонений от нормы при этом не наблюдается.

Таким образом, можно заключить, что препарат пуроплазан является достаточно эффективным и безопасным препаратом, который можно применять для введения в полость внутримозговой гематомы с целью осуществления локального лизиса сгустков как этапа минимально инвазивной операции удаления гипертензивных внутримозговых гематом пункционно-аспирационным способом.

Таблица 1
Распределение больных по формам гипертонической болезни(приведены средние значения АД за период наблюдения)
Форма		Систолическое давление		Диастолическое давление		Всего больных (30)
Мягкая		154,3		95,3		2
Умеренная		171,5		106,2		16
Тяжелая		189,7		114,5		10
Очень тяжелая		215,6		126,3		2
Таблица 2
Пол	Возраст						Всего
	35-50		51-65		65-75
Женщины	3		8		2		13
Мужчины	2		11		4		17
Всего	5		19		6		30

Таблица 3
Распределение больных по локализации и дооперационному объему гематомы
Тип гематомы	Объем гематомы (см3)				Всего
	15-30	31-40	41-60	61-80
Лобарный			4		4
Латеральный		3	12	3	18
Смешанный			2		2
Медиальный	3	1			4
Мозжечковый	2				2
Всего	5	4	18	3	30

Таблица 4
Количественное распределение больных по баллам шкалы
Симптомы	Баллы
	0	1	2	3
Уровень сознания	7	14	9
Правильность ответов на два вопроса	7	8	15
Правильность выполнения двух команд	10	13	7
Объем движений глазных яблок	11	19
Зрение	17	10	3
Паралич мышц лица	5	12	13
Сила мышц правой руки	10	2	5	13
Сила мышц левой руки	4	2	14	10
Сила мышц правой ноги	10	2	9	9
Сила мышц левой ноги	4	1	15	8
Атаксия в конечностях	3	13	14
Чувствительность	9	21
Реакция на стимуляцию	17	13
Дизартрия	7	14	9
Афазия	12	3	10	5

Таблица 5
Баллы по шкале NIH/NINDS с первого дня ведения препарата
№ пациента	1 день	2д	3д	4д	5д	6д	7д	8д	9д	10д	11д	12д	13д	14д
1	11	11	11	13	13	13	13	14	14	14	14	14	14	14
2	15	15	15	15	18	18	19	19	19	19	19	20	20	20
3	16	16	16	16	18	19	19	20	20	21	21	21	21	21
4	14	14	14	16	16	16	16	16	17	17	17	17	18	18
5	17	17	17	18	18	18	18	19	20	20	20	20	21	21
6	6	7	10	10	11	12	12	12	12	12	13	14	14	14
7	3	3	3	3	4	4	4	4	4	5	5	6	6	6
8	14	14	14	14	14	14	14	14	15	17	18	19	20	20
9	3	3	3	3	3	3	3	3	4	4	6	6	6	7
10	8	8	8	8	8	8	8	10	11	12	12	13	13	14
11	11	11	11	11	11	11	12	12	14	15	16	16	16	18
12	4	4	5	7	8	8	9	14	15	18	19	20	20	20
13	2	2	2	2	2	3	4	7	10	14	19	19	19	18
14	7	7	8	11	16	16	19	19	21	22	22	22	22	26
15	11	11	12	12	12	15	15	15	15	16	18	18	18	18
16	5	5	5	6	6	6	8	9	12	13	12	12	12	12
17	11	11	11	11	12	13	14	16	18	20	20	20	20	20
18	10	10	10	11	11	11	11	12	16	16	16	16	16	16
19	7	7	7	12	12	12	12	12	12	12	12	13	13	14
20	17	17	17	18	18	18	18	19	20	20	20	20	21	21
21	6	7	10	10	11	12	12	12	12	12	13	14	14	14
22	3	3	3	3	4	4	4	4	4	5	5	6	6	6
23	14	14	14	14	14	14	14	14	15	17	18	19	20	20
24	3	3	3	3	3	3	3	3	4	4	6	6	6	7
25	8	8	8	8	8	8	8	10	11	12	12	13	13	14
26	11	11	11	11	11	11	12	12	14	15	16	16	16	18
27	7	7	8	11	16	16	19	19	21	22	22	22	22	26
28	11	11	12	12	12	15	15	15	15	16	18	18	18	18
29	5	5	5	6	6	6	8	9	12	13	12	12	12	12
30	16	16	16	16	18	19	19	20	20	21	21	21	21	21

Таблица 6
Динамика объемов гематомы (в см3) и конечный показатель радикальности (%)
№ пациента	до операции	до введения препарата	через 7 дней	через 14 дней	% радикальности
1	20	10	0	0	100%
2	15	5	0	0	100%
3	60	15	3	3	80%
4	50	10	0	0	100%
5	60	15	5	2	86,7%
6	60	25	10	3	93%
7	50	30	5	0	100%
8	35	7	0	0	100%
9	16	11	3	2	81,5%
10	60	20	5	3	85%
11	40	20	5	0	100%
12	50	15	3	2	86,7%
13	20	10	3	2	80%
14	40	15	5	3	80%
15	60	20	7	2	90%
16	60	22	5	2	91%
17	50	20	3	0	100%
18	40	15	5	0	100%
19	50	28	8	3	89,3%
20	75	30	10	5	83,5%
21	20	8	2	0	100%
22	65	30	8	6	90,8%
23	45	20	5	0	100%
24	25	10	2	0	100%
25	55	25	5	3	94,5%
26	60	35	10	5	91,7%
27	50	20	4	0	100%
28	48	25	5	0	100%
29	18	9	3	2	89%
30	58	30	8	3	95%

Claims (2)

1. Фармацевтическая композиция, обладающая фибринолитическим действием, содержащая в качестве действующего вещества модифицированный активатор плазминогена урокиназного типа мАПУТ22, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID №1, а также маннитол и натрия хлорид при следующем соотношении компонентов, мас.%:

мАПУТ22 2,8-4,2 Маннитол 31,1-38,8 Натрия хлорид До 100%

2. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что эффективная терапевтическая доза при ее однократном использовании составляет 45000-55000 ME.

Images