RU2308969C1 - LIVE TULAREMIA VACCINE Nik-sp. Francisella tularensis - Google Patents

LIVE TULAREMIA VACCINE Nik-sp. Francisella tularensis Download PDF

Info

Publication number
RU2308969C1
RU2308969C1 RU2006121120/15A RU2006121120A RU2308969C1 RU 2308969 C1 RU2308969 C1 RU 2308969C1 RU 2006121120/15 A RU2006121120/15 A RU 2006121120/15A RU 2006121120 A RU2006121120 A RU 2006121120A RU 2308969 C1 RU2308969 C1 RU 2308969C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
tularensis
strain
nik
vaccine
niieg
Prior art date
Application number
RU2006121120/15A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Николай Николаевич Кисличкин (RU)
Николай Николаевич Кисличкин
Ольга Ивановна Кисличкина (RU)
Ольга Ивановна Кисличкина
Original Assignee
Общество С Ограниченной Ответственностью "Биотэк"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество С Ограниченной Ответственностью "Биотэк" filed Critical Общество С Ограниченной Ответственностью "Биотэк"
Priority to RU2006121120/15A priority Critical patent/RU2308969C1/en
Priority to PCT/RU2007/000330 priority patent/WO2007149012A1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2308969C1 publication Critical patent/RU2308969C1/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/36—Adaptation or attenuation of cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/0208—Specific bacteria not otherwise provided for
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

FIELD: medicine, vaccines, infections.
SUBSTANCE: invention relates to creature of preparations of bacterial origin. Vaccine strain Nik-sp. F. tularensis is prepared by selection by microbiological method from pure line of bacteria of R-form of the strain 15 NIIEG Francisella tularensis. The strain represents S-form with maximal immunizing dose for laboratory animals from 1 x 104 to 1 x 108 microbial cells in subcutaneous administration and it is able to protect their against infection with Francisella tularensis subsp. tularensis 503. The strain is deposited in All-Russian collection of industrial microorganisms FGUP GosNIIGenetics at number VKPM B-9311. The strain shows low reactogenicity, high stability, possibility in using standard media and technologies in culturing, storage and preparing that allows its using as live tularemia vaccine instead the existing vaccine 15 NIIEG F. tularensis. Invention can be used in public health, medicine and veterinary science.
EFFECT: improved and valuable properties of vaccine.
2 tbl, 4 ex

Description

Изобретение относится к области создания препарата микробиологического происхождения и может найти применение в здравоохранении, медицине и ветеринарии.The invention relates to the field of creating a drug of microbiological origin and may find application in healthcare, medicine and veterinary medicine.

Известен вакцинный штамм 75 НИИЭГ F. tularensis и его прототип - LVS F. tularensis, используемый на Западе, в США и Канаде против возбудителя туляремии голарктической разновидности - Francisella tularensis subsp. tularensis, в частности F. tularensis subsp. tularensis 503.Known vaccine strain 75 NIIEG F. tularensis and its prototype LVS F. tularensis, used in the West, in the USA and Canada against the causative agent of tularemia of the Holarctic variety - Francisella tularensis subsp. tularensis, in particular F. tularensis subsp. tularensis 503.

Вакцинный штамм 75 НИИЭГ F. tularensis получен путем аттенуации (адаптации) вирулентного штамма F. tularensis subsp. tularensis 503 в 1932-36 гг. Б.Я.Эльбертом и Н.А.Гайским. Показав эффективность вакцинного штамма на лабораторных животных, Н.А.Гайский в 1941-42 гг. проверил созданную им подкожную туляремийную вакцину в очагах инфекции. В 1945 г. Б.Я.Эльберт предложил накожный метод вакцинации, что упростило проведение прививок. С 1949 г. была введена массовая противотуляремийная вакцинация сельского населения в неблагополучных по туляремии районах, приведшая к резкому снижению заболеваемости. В начале 50-х годов вакцинный штамм 75 НИИЭГ F. tularensis был передан в США, после чего через несколько лет появился его прототип LVS F. tularensis, который по своим биологическим, биохимическим, культурально-морфологическим и другим свойствам не отличается от штамма 75 НИИЭГ F. tularensis.Vaccine strain 75 NIIEG F. tularensis obtained by attenuation (adaptation) of the virulent strain F. tularensis subsp. tularensis 503 in 1932-36 B.Ya. Elbert and N.A. Gaysky. Having shown the effectiveness of the vaccine strain in laboratory animals, N.A. Gaysky in 1941-42. checked the subcutaneous tularemia vaccine he created in the foci of infection. In 1945, B.Ya. Elbert proposed a cutaneous vaccination method, which simplified vaccination. Since 1949, mass anti-tularemia vaccination of the rural population was introduced in areas unfavorable for tularemia, which led to a sharp decrease in the incidence. In the early 50s, the vaccine strain 75 NIIEG F. tularensis was transferred to the United States, after which several years later its prototype LVS F. tularensis appeared, which in its biological, biochemical, cultural, morphological and other properties does not differ from strain 75 NIIEG F. tularensis.

Живая туляремийная вакцина 75 НИИЭГ F. tularensis считается одной из лучших в мире бактериальных вакцин, однако имеет ряд недостатков:Live tularemia vaccine 75 NIIEG F. tularensis is considered one of the best bacterial vaccines in the world, but it has several disadvantages:

1. Использование в постоянной практике живой туляремийной вакцины 75 НИИЭГ F. tularensis и ее прототипа LVS F. tularensis более 50-ти лет привело не только к изменению свойств первоначально полученной вакцины, но и в значительной степени увеличило риск утраты вакцинного штамма.1. The use of live tularemia vaccine 75 NIIEG F. tularensis and its prototype LVS F. tularensis for more than 50 years has led not only to a change in the properties of the original vaccine, but also significantly increased the risk of losing the vaccine strain.

2. Высокая остаточная вирулентность туляремийной вакцины на лабораторных животных (Значение LD50 для мышей линии Balb/c составляет 1×103 микробных клеток на животное) прямо связана с высоким процентом осложнений, возникающих при массовой иммунизации населения.2. The high residual virulence of the tularemia vaccine in laboratory animals (LD 50 for Balb / c mice is 1 × 10 3 microbial cells per animal) is directly related to the high percentage of complications arising from mass immunization of the population.

3. При выращивании туляремийного вакцинного штамма на питательных средах популяция получаемых бактерий способна к диссоциации в авирулентную для лабораторных животных и не формирующую защитного иммунитета R-форму F. tularensis (Западный прототип - LVSR F. tularensis). При высоком проценте бактерий R-формы F. tularensis в популяции живой туляремийной вакцины последняя непригодна к использованию, так как не способна формировать у человека длительный напряженный иммунитет против вирулентных штаммов туляремии.3. When growing the tularemia vaccine strain on nutrient media, the population of the resulting bacteria is capable of dissociation into avirulent for laboratory animals and not forming protective immunity R form F. tularensis (Western prototype LVSR F. tularensis). With a high percentage of bacteria of the R-form F. tularensis in the population of live tularemia vaccine, the latter is unsuitable for use, since it is not able to form a long-lasting intense immunity in humans against virulent strains of tularemia.

В качестве наиболее близкого аналога данного изобретения предлагается живая туляремийная вакцина на основе штамма 15 НИИЭГ F. tularensis (Олсуфьев Н.Г. Туляремия. Иммунология // Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней. - М., 1966. - Т.VII. - С.196-199). Данная вакцина выбрана в качестве прототипа, потому что она имеет то же назначение, что и заявляемое изобретение, а штамм 75 НИИЭГ F. tularensis используется в заявленном изобретении для получения вакцинного штаммаAs the closest analogue of the present invention, a live tularemia vaccine is proposed based on strain 15 NIIEG F. tularensis (Olsufiev N.G. Tularemia. Immunology // Guide to Microbiology, Clinic and Epidemiology of Infectious Diseases. - M., 1966. - T.VII - S.196-199). This vaccine is selected as a prototype, because it has the same purpose as the claimed invention, and strain 75 NIIEG F. tularensis is used in the claimed invention to obtain a vaccine strain

Технический результат изобретения заключается в получении микробиологическим способом селекционного мутанта R-формы F. tularensis, лишенного вышеперечисленных недостатков, а именно штамма Nik-sp. F. tularensis Nik-sp. Francisella tularensis, который является селекционным мутантом, полученным микробиологическим способом из чистой линии бактерий R-формы F. tularensis.The technical result of the invention is to obtain a microbiological method of a selection mutant of the R-form F. tularensis, devoid of the above disadvantages, namely the strain Nik-sp. F. tularensis Nik-sp. Francisella tularensis, which is a breeding mutant obtained by the microbiological method from a clean line of bacteria of the R-form F. tularensis.

Для решения поставленной задачи предложена живая туляремийная вакцина, отличающаяся тем, что она включает штамм Francisella tularensis Nik-sp., депонированный во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика за индексом VKPM В-9311, полученный путем селекции микробиологическим способом из чистой линии бактерий R-формы штамма 15 НИИЭГ Francisella tularensis, представляющий собой S-форму с максимальной иммунизирующей дозой для лабораторных животных при подкожном введении от 1×104 до 1×108 микробных клеток и способный защищать их от инфицирования Francisella tularensis subsp. tularensis 503.To solve this problem, a live tularemia vaccine is proposed, characterized in that it includes a strain of Francisella tularensis Nik-sp., Deposited in the All-Russian collection of industrial microorganisms of the Federal State Unitary Enterprise GosNII Genetics using the VKPM B-9311 index, obtained by microbiological selection from a clean line of R-form bacteria strain 15 NIIEG Francisella tularensis, which is an S-shape with a maximum dosage for immunising laboratory animals by subcutaneous injection of 1 × 10 4 to 1 × 10 August microbial cells and able to protect them from infecting Ania Francisella tularensis subsp. tularensis 503.

До настоящего времени во всем мире принято считать, что при последовательных пересевах живой туляремийной вакцины 15 НИИЭГ F. tularensis (или ее прототипа - LVS F. tularensis) возникающая в популяции диссоциация является естественной (природной) и носит необратимый характер. То есть возникшие в процессе диссоциации туляремийной вакцины бактерии R-формы F. tularensis, утратив остаточную вирулентность для лабораторных животных, способность формировать напряженный Т- и В-клеточный иммунитет, а также ряд других важных свойств (например, способность длительное время сохраняться и частично размножаться в организме чувствительных к туляремии лабораторных животных), являются стойкими природными мутантами. Эти мутантные бактерии ни при каких обстоятельствах не способны вновь полностью или частично восстанавливать свойства туляремийной вакцины, поэтому в разных лабораториях мира выделенную и охарактеризованную чистую линию бактерий R-формы F. tularensis считают «консервативной», «тупиковой» и так далее.Until now, it is generally accepted around the world that with successive transfers of live tularemia vaccine 15 NIIEG F. tularensis (or its prototype LVS F. tularensis), the dissociation that occurs in the population is natural (natural) and is irreversible. That is, the bacteria of the R-form F. tularensis that arose during the dissociation of the tularemia vaccine, having lost the residual virulence for laboratory animals, the ability to form intense T- and B-cell immunity, as well as a number of other important properties (for example, the ability to persist for a long time and partially reproduce in the body of laboratory animals sensitive to tularemia), are persistent natural mutants. Under no circumstances are these mutant bacteria capable of fully or partially restoring the properties of tularemia vaccine, therefore, in different laboratories around the world, the isolated and characterized pure line of F. tularensis R-form bacteria is considered “conservative”, “dead-end”, and so on.

Показано, что данное представление о R-форме F. tularensis является ошибочным. При частых последовательных пересевах популяции бактерий R-формы F. tularensis на питательных средах с изменением рН среды и ряда других параметров с низкой частотой возникают ее «мутантные» формы, которые частично восстанавливают свойства живой туляремийной вакцины 15 НИИЭГ F. tularensis. Чистая линия бактерий, возникшая в результате мутации бактерий R-формы F. tularensis, получила аббревиатуру Nik-sp. Francisella tularensis.It is shown that this idea of the R-form of F. tularensis is erroneous. With frequent successive passages of the bacterial population of the R-form F. tularensis on nutrient media with a change in pH and a number of other parameters with a low frequency, its “mutant” forms arise, which partially restore the properties of the live tularemia vaccine 15 NIIEG F. tularensis. A pure bacterial line resulting from a mutation of the bacteria of the R-form F. tularensis received the abbreviation Nik-sp. Francisella tularensis.

Заключение о видовой принадлежности штамма Nik-sp. с помощью анализа 16S РНК получено в ВКПМ ФГУП ГосНИИГенетика.Conclusion on the species affiliation of strain Nik-sp. using analysis of 16S RNA obtained in VKPM FSUE GosNIIGenetika.

Анализ последовательностей 16S рРНК показал, что исследуемый штамм, заявленный как Nik-sp., принадлежит к виду бактерий Francisella tularensis, причем со штаммами Francisella tularensis subsp. holarctica и Francisella tularensis var. tularemia гомология составляет 97%.The analysis of 16S rRNA sequences showed that the studied strain, declared as Nik-sp., Belongs to the bacteria species Francisella tularensis, moreover, with strains of Francisella tularensis subsp. holarctica and Francisella tularensis var. tularemia homology is 97%.

Основные свойства штамма Nik-sp. F. tularensis:The main properties of the strain Nik-sp. F. tularensis:

Культурально-морфологические. Бактерии представляют собой мелкие кокковидные и палочковидные клетки размерами 0,2-0,7 мкм, неподвижны, грамотрицательны, образуют капсулу. Бактерии Nik-sp. обладают полиморфизмом. Штамм Nik-sp. аэроб, не растет на простых средах, ауксотроф, культивируется при +37°С в средах, богатых витаминами. Посев культуры на питательные среды выдерживают в термостате от двух до семи суток. Штамм Nik-sp. можно выращивать на средах с мозговой, селезеночной, печеночной тканями, экстрактами сердца, гемоглобином или черным альбумином. На плотных питательных средах бактерии Nik-sp. F. tularensis после высева из внутренних органов чувствительных лабораторных животных методом мазков-отпечатков находятся в S-форме и образуют колонии серо-белого цвета. Белый цвет колоний усиливается, если чашки с посевом выдержать 2-3-е суток в холодильнике (+4°С). При пассировании на лабораторных животных с последующим выделением культуры из внутренних органов колонии штамма Nik-sp. F. tularensis приобретают белый цвет и становятся практически неотличимы от колоний вакцинного штамма 15 НИИЭГ F. tularensis.Cultural and morphological. Bacteria are small cocciform and rod-shaped cells 0.2-0.7 microns in size, motionless, gram-negative, form a capsule. Bacteria Nik-sp. possess polymorphism. Strain Nik-sp. aerob, does not grow on simple environments, auxotroph, cultivated at + 37 ° C in environments rich in vitamins. Sowing the culture on nutrient medium is kept in a thermostat from two to seven days. Strain Nik-sp. can be grown on media with brain, splenic, hepatic tissue, heart extracts, hemoglobin or black albumin. On solid nutrient media, bacteria Nik-sp. F. tularensis, after seeding from the internal organs of sensitive laboratory animals by the method of fingerprints, are in the S-form and form colonies of gray-white color. The white color of the colonies is enhanced if the cups with sowing can withstand 2-3 days in the refrigerator (+ 4 ° C). When passaged in laboratory animals, followed by isolation of the culture from the internal organs of the colony of strain Nik-sp. F. tularensis become white and become almost indistinguishable from the colonies of the vaccine strain 15 NIIEG F. tularensis.

Стабильность популяции. При пересевах на плотных питательных средах культура Nik-sp. очень стабильна и практически не диссоциирует в другие формы. При частых пересевах (более 20 раз), а также после длительного хранения в лиофильно высушенном состоянии возможно появление мутантов R-формы F. tularensis, с частотой 10-7-10-8.Population stability. When reseeding on solid nutrient media culture Nik-sp. very stable and practically does not dissociate into other forms. With frequent reseeding (more than 20 times), as well as after prolonged storage in a freeze-dried state, the appearance of mutants of the R-form F. tularensis is possible, with a frequency of 10 -7 -10 -8 .

Биохимические. Клетки штамма Nik-sp. F. tularensis расщепляют белки с выделением сероводорода, на среде Даунса ферментируют глюкозу и мальтозу, не ферментируют глицерин, сахарозу и лактозу, непостоянно ферментируют декстрозу и фруктозу. Нечувствительны к эритромицину, олеандомицину, полимиксину, пенициллину, стрептомицину, не обладает цитруллинуреидазной активностью. Все биохимические свойства селекционного мутанта до конца не изучены.Biochemical. Cells of strain Nik-sp. F. tularensis break down proteins with the release of hydrogen sulfide, on the Downs medium they ferment glucose and maltose, do not ferment glycerin, sucrose and lactose, and dextrose and fructose are constantly fermented. Insensitive to erythromycin, oleandomycin, polymyxin, penicillin, streptomycin, does not have citrullinureidase activity. All biochemical properties of the selection mutant are not fully understood.

Иммунохимические и серологические. Штамм Nik-sp. F. tularensis легко агглютинирует с коммерческой лошадиной сывороткой по типу агглютинации вакцинного штамма 15 НИИЭГ F. tularensis, а в реакциях иммунодиффузии (РИД) и иммуноэлектрофореза с коммерческой сывороткой формирует линии преципитации, характерные для антигенов вакцинного штамма. Экспериментальные сыворотки, полученные против штамма Nik-sp. F. Tularensis, бедны специфическими антителами в сравнении с коммерческой и экспериментальной кроличьей сыворотками, полученными против штамма 75 НИИЭГ F. tularensis.Immunochemical and serological. Strain Nik-sp. F. tularensis easily agglutinates with commercial horse serum according to the type of agglutination of vaccine strain 15 NIIEG F. tularensis, and in the reactions of immunodiffusion (RID) and immunoelectrophoresis with commercial serum forms precipitation lines characteristic of vaccine strain antigens. Experimental sera obtained against strain Nik-sp. F. Tularensis, are poor in specific antibodies in comparison with commercial and experimental rabbit serums obtained against strain NIIEG F.I. tularensis.

Отношение к фагам данного вида. Штамм Nik-sp. F. tularensis, как и все семейство Francisella, собственных фагов не имеет.Relation to phages of this species. Strain Nik-sp. F. tularensis, like the entire Francisella family, has no phages of its own.

Генетические особенности. Клетки штамма Nik-sp. F. tularensis обладают природной устойчивостью к пенициллинам, полимиксинам, макролидам. Для удобства работы с селекционным мутантом Nik-sp. он маркирован хромосомной устойчивостью к стрептомицину (SmR).Genetic features. Cells of strain Nik-sp. F. tularensis are naturally resistant to penicillins, polymyxins, and macrolides. For the convenience of working with the breeding mutant Nik-sp. it is marked by chromosomal resistance to streptomycin (Sm R ).

Продуктивность. Селекционный мутант Nik-sp. F. tularensis является продуцентом фактора вирулентности гликопротеиновой природы F. tularensis subsp. tularensis 503, который локализован во внешней мембране клетки и капсульном веществе. Данный комплекс способен формировать у лабораторных животных длительный напряженный В- и Т-клеточный иммунитет против F. tularensis subsp. tularensis 503.Productivity. Selection mutant Nik-sp. F. tularensis is a producer of the virulence factor of the glycoprotein nature F. tularensis subsp. tularensis 503, which is localized in the outer membrane of the cell and capsular substance. This complex is capable of forming in laboratory animals long-term intense B- and T-cell immunity against F. tularensis subsp. tularensis 503.

Патогенность для лабораторных животных. Штамм Nik-sp. F. tularensis обладает низкой остаточной вирулентностью для беспородных мышей и хомяков в сравнении с вакцинным штаммом 75 НИИЭГ F. tularensis (Согласно «Заключения по проверке лиофильно высушенной культуры Nik. F. tularensis на остаточную вирулентность», проведенную в НИЦ Токсикологии и гигиенической регламентации биопрепаратов, значение LD50 для линейных мышей Balb/c составило 5,6×105 микробных клеток на мышь, значение LD50 для золотистых хомяков составило 9,2×10 микробных клеток на мышь). Штамм Nik-sp. F. tularensis авирулентен для морских свинок и кроликов (значение LD50>1×l09 микробных клеток на животное). Заметно сниженная остаточная вирулентность вакцинного штамма Nik-sp. F. tularensis дает основание полагать, что его реактогенность при массовой иммунизации населения будет также снижена, что является безусловным преимуществом перед существующей вакциной 75 НИИЭГ F. tularensis.Pathogenicity for laboratory animals. Strain Nik-sp. F. tularensis has a low residual virulence for outbred mice and hamsters in comparison with the vaccine strain 75 NIIEG F. tularensis (According to the “Conclusions on the test of lyophilized dried culture Nik. F. tularensis for residual virulence”, conducted at the Research Center of Toxicology and hygienic regulation of biological products, the LD 50 value for linear Balb / c mice was 5.6 × 10 5 microbial cells per mouse; the LD 50 value for golden hamsters was 9.2 × 10 microbial cells per mouse). Strain Nik-sp. F. tularensis is avirulent for guinea pigs and rabbits (LD 50 > 1 × l0 9 microbial cells per animal). Markedly reduced residual virulence of the vaccine strain Nik-sp. F. tularensis gives reason to believe that its reactogenicity during mass immunization of the population will also be reduced, which is an absolute advantage over the existing vaccine 75 NIIEG F. tularensis.

Протективные (защитные) свойства. Как показали исследования, при сниженной остаточной вирулентности бактерии Nik-sp. F. tularensis обладают высокой способностью длительное время (более 10 дней) не только сохраняться, но и частично размножаться в чувствительных лабораторных животных, формируя напряженный преимущественно Т-клеточный иммунитет.Protective (protective) properties. Studies have shown that with reduced residual virulence of the bacteria Nik-sp. F. tularensis have a high ability for a long time (more than 10 days) to not only survive, but also partially reproduce in sensitive laboratory animals, forming a predominantly intense T-cell immunity.

Другие свойства. Штамм Nik-sp. F. tularensis в высокой степени чувствителен к бактерицидному действию сыворотки крови и не способен к росту при +42°С.Other properties. Strain Nik-sp. F. tularensis is highly sensitive to the bactericidal action of blood serum and is not capable of growth at + 42 ° C.

Условия и состав сред для хранения и поддержания селекционного мутанта. Музейная культура штамма Nik-sp. F. tularensis хранится при температуре +4°С на косяках среды МакКоя до 6 месяцев, в лиофильно высушенном состоянии до 5 лет.The conditions and composition of the media for storage and maintenance of the selection mutant. Museum culture of strain Nik-sp. F. tularensis is stored at a temperature of + 4 ° C on jambs of McCoy's medium for up to 6 months, in freeze-dried state for up to 5 years.

Среда для культивирования. Штамм Nik-sp. F. tularensis культивируется на плотной среде с черным альбумином и жидкой среде Шерера.Cultivation medium. Strain Nik-sp. F. tularensis is cultivated in a dense medium with black albumin and Scherer's liquid medium.

Технологические особенности при культивировании. - Технологических особенностей при культивировании штамма Nik-sp. F. tularensis в сравнении с вакциной 15 НИИЭГ F. tularensis нет.Technological features during cultivation. - Technological features in the cultivation of strain Nik-sp. F. tularensis compared to vaccine 15 NIIEG F. tularensis no.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.

Пример 1. Изучение остаточной вирулентности селекционного мутанта Nik-sp. F. tularensis.Example 1. The study of the residual virulence of the selection mutant Nik-sp. F. tularensis.

На плотные питательные среды с гидролизованным гемоглобином (Состав среды: сердечно-мозговой агар, гемоглобин, цистеин, глюкоза) или FT-агар (Производство ФГУП ГНЦ ПМ, Оболенск, Россия)) петлей делают высев культуры Nik-sp. F. tularensis и инкубируют в термостате при +37°С в течение двух суток. Двухсуточную культуру Nik-sp. F. tularensis смывают физиологическим раствором и готовят суспензию бактерий в концентрации 5×109 микробных клеток (м.к.) в одном миллилитре. (По оптическому стандарту мутности). Далее готовят серию последовательных разведении суспензии бактерий из расчета, чтобы в 0,2 мл раствора на каждое животное (мыши линии Balb/c или золотистые хомяки) попало от 10 до 108 м.к. Для морских свинок подобные концентрации бактерий готовят в 0,5 мл раствора. Как правило, в каждой группе должно быть не менее 4 мышей или золотистых хомяков, морских свинок не менее двух. При заражении животных параллельно проводят определение количества живых микробных клеток методом высева разведении на питательные среды для получения единичных колоний.On solid nutrient media with hydrolyzed hemoglobin (Medium composition: cardiac agar, hemoglobin, cysteine, glucose) or FT-agar (Production of FSUE SSC PM, Obolensk, Russia)), Nik-sp. Culture is looped. F. tularensis and incubated in an incubator at + 37 ° C for two days. Two-day culture Nik-sp. F. tularensis is washed off with physiological saline and a suspension of bacteria is prepared at a concentration of 5 × 10 9 microbial cells (m.c.) in one milliliter. (According to the optical turbidity standard). Next, a series of serial dilutions of the bacterial suspension is prepared in such a way that in 10 ml of solution for each animal (mice of the Balb / c line or golden hamsters), 10 to 10 8 m.k. For guinea pigs, similar bacterial concentrations are prepared in a 0.5 ml solution. As a rule, in each group there should be at least 4 mice or golden hamsters, and at least two guinea pigs. When animals are infected, they simultaneously determine the number of living microbial cells by seeding dilution on culture media to obtain single colonies.

Для каждого вида животных в качестве контроля используют группу, которая не подвергалась заражению. Заражение проводят подкожно в паховую область задней лапки.For each animal species, a group that was not exposed to infection was used as a control. Infection is carried out subcutaneously in the inguinal region of the hind paw.

Срок наблюдения за экспериментальными и контрольными группами животных составил 35 дней.The observation period for the experimental and control groups of animals was 35 days.

В течение всего периода наблюдения был отмечен падеж животных (мышей линии Balb/c в экспериментальных группах от доз 2×108, 2×107 и 2×106 м.к.).During the entire observation period, the death of animals was observed (Balb / c mice in the experimental groups from doses of 2 × 10 8 , 2 × 10 7 and 2 × 10 6 mk).

В контрольных группах падежа не отмечено. Со второй недели наблюдения из групп линейных мышей и золотистых хомяков часть животных выводили из эксперимента и изучали персистенцию бактерий Nik-sp. F. tularensis (способность бактерий длительное время сохраняться и размножаться в животном), а также возможное поражение паренхиматозных органов (легкие, печень, почки, селезенка) путем выделения бактерий на плотных питательных средах методом мазков отпечатков, приготовления суспензии из паренхиматозных органов, приготовления гистологических препаратов.In the control groups, there was no case. From the second week of observation, from groups of linear mice and golden hamsters, some animals were removed from the experiment and the persistence of bacteria Nik-sp was studied. F. tularensis (the ability of bacteria to persist and multiply in an animal for a long time), as well as the possible damage to parenchymal organs (lungs, liver, kidneys, spleen) by isolating bacteria on solid nutrient media using fingerprint smears, preparing a suspension from parenchymal organs, preparing histological preparations .

По окончании эксперимента все животные (включая контроль) подвергались вскрытию и изучению паренхиматозных органов на возможное наличие бактерий Nik-sp. F. tularensis и поражение паренхиматозных органов.At the end of the experiment, all animals (including control) were opened and studied parenchymal organs for the possible presence of bacteria Nik-sp. F. tularensis and damage to the parenchymal organs.

В результате проведенных исследований установлено наличие остаточной вирулентности (патогенности) штамма Nik-sp. F. tularensis для мышей Balb/c и золотистых хомяков. Значение LD50 для линейных мышей Balb/c составило 5,6×105 м.к. на мышь. Значение LD50 для золотистых хомяков составило 9,2×106 м.к. на хомяка. Для морских свинок штамм Nik-sp. F. tularensis оказался авирулентным во всех проверяемых дозах.As a result of the studies, the presence of residual virulence (pathogenicity) of the strain Nik-sp. F. tularensis for Balb / c mice and golden hamsters. The LD 50 value for linear Balb / c mice was 5.6 × 10 5 MK on the mouse. The LD 50 value for golden hamsters was 9.2 × 10 6 m.k. on the hamster. For guinea pigs, strain Nik-sp. F. tularensis was avirulent at all tested doses.

Специфичность развития заболевания животных двух видов была подтверждена наличием роста культуры Nik-sp. F. tularensis из мазков отпечатков паренхиматозных органов на питательных средах в проверяемые сроки от двух до пяти недель.The specificity of the development of the disease in animals of two species was confirmed by the presence of growth of culture Nik-sp. F. tularensis from smears of imprints of parenchymal organs on nutrient media at verifiable dates from two to five weeks.

Пример 2. Изучение персистенции селекционного мутанта Nik-sp. F. tularensis и формирование у животных Т-клеточного иммунитета.Example 2. The study of the persistence of the breeding mutant Nik-sp. F. tularensis and the formation of T-cell immunity in animals.

Выращивание культуры Nik-sp. F. tularensis и приготовление рабочих разведении проводили, как описано в Примере 1. Мышей Balb/c инфицировали подкожно в паховую область задней лапки суспензией бактерий в концентрациях, близких к значению LD50 - 1×105 и 1×106 м.к. на животное. К началу второй недели (8-й - 9-й день) и далее животных выводили из эксперимента путем эвтаназии и определяли способность бактерий длительное время сохраняться и размножаться в животном путем выделения их на плотных питательных средах методом мазков отпечатков, получения и высева суспензии из паренхиматозных органов. Визуально исследовали возможные изменения паренхиматозных органов (легкие, печень, почки, селезенка), изучали приготовленные из паренхиматозных органов гистологические препараты.Cultivation of culture Nik-sp. F. tularensis and the preparation of dilution workers were carried out as described in Example 1. Balb / c mice were infected subcutaneously in the inguinal region of the hind paw with a suspension of bacteria in concentrations close to LD 50 - 1 × 10 5 and 1 × 10 6 mk. per animal. By the beginning of the second week (8th – 9th day) and further, animals were removed from the experiment by euthanasia and the ability of bacteria to be stored and propagated in the animal for a long time was determined by isolating them on solid nutrient media using fingerprint smears, preparation and plating of suspension from parenchymal organs. Visually examined the possible changes in parenchymal organs (lungs, liver, kidneys, spleen), studied histological preparations prepared from parenchymal organs.

В результате проведенных исследований установлено, что при инфицировании мышей дозой клеток 1×106 м.к. на животное с помощью мазков отпечатков и высева суспензии паренхиматозных органов на 10-й день после инфицирования выделяли единичные колонии Nik-sp. F. tularensis из печени, почки и селезенки. На 14-й день после инфицирования мышей дозой клеток 1×106 м.к. на животное культура Nik-sp. F. tularensis из паренхиматозных органов не выделяется. Визуальное изучение внутренних органов показало увеличение размеров селезенки мышей в среднем в 1,5 раза, что косвенно говорит о наличии в ней пролиферативных процессов, направленных на формирование специфического Т-клеточного иммунитета. Наличие пролиферативных процессов в селезенке подтверждается при исследовании гистологических препаратов. Визуальное и гистологическое изучение печени, легких и почки не показало серьезных поражений этих органов.As a result of the studies, it was found that upon infection of mice with a dose of cells of 1 × 10 6 mk single animal Nik-sp colonies were isolated on the animal using smears of fingerprints and plating a suspension of parenchymal organs on the 10th day after infection. F. tularensis from the liver, kidney and spleen. On the 14th day after infection of mice with a dose of cells of 1 × 10 6 mk on animal culture Nik-sp. F. tularensis does not stand out from the parenchymal organs. A visual study of the internal organs showed an increase in the size of the spleen of mice by an average of 1.5 times, which indirectly indicates the presence of proliferative processes in it aimed at the formation of specific T-cell immunity. The presence of proliferative processes in the spleen is confirmed by the study of histological preparations. Visual and histological examination of the liver, lungs and kidneys showed no serious lesions of these organs.

Пример 3. Изучение биологической активности бактерий вакцинного кандидата Nik-sp. F. tularensis определяется по двум критериям:Example 3. The study of the biological activity of bacteria of the vaccine candidate Nik-sp. F. tularensis is determined by two criteria:

1. Остаточная вирулентность для чувствительных к туляремии животных (мыши, золотистые хомяки, морские свинки).1. Residual virulence for tularemia sensitive animals (mice, golden hamsters, guinea pigs).

Для этих животных одна микробная клетка (бактерия) возбудителя туляремии вызывает их гибель.For these animals, one microbial cell (bacterium) of the causative agent of tularemia causes their death.

Вакцинный кандидат Nik-sp. F. tularensis способен убивать мышей в дозе 5,6×105 микробных клеток на животное, золотистых хомяков - 9,2×106 микробных клеток на животное. Для морских свинок доза в 2×108 микробных клеток на животное не вызывала гибели, что указывает на авирулентность данных бактерий по отношению к морским свинкам. Это очень важно потому, что именно морская свинка считается моделью, адекватной для человека.Vaccine candidate Nik-sp. F. tularensis is able to kill mice at a dose of 5.6 × 10 5 microbial cells per animal, Golden hamsters - 9.2 × 10 6 microbial cells per animal. For guinea pigs, a dose of 2 × 10 8 microbial cells per animal did not cause death, which indicates the avirulence of these bacteria with respect to guinea pigs. This is very important because it is the guinea pig that is considered a model adequate for humans.

2. Способность к персистенции (сохранению и некоторому размножению бактерий в организме чувствительных животных).2. The ability to persistence (conservation and some reproduction of bacteria in the body of sensitive animals).

Этот показатель определяется следующим образом. Лабораторным животным вводится доза бактерий ниже той, которая способна вызвать их гибель. Затем через определенное время (как правило, на 7-й, 14-й и 21 день) животных эвтанизируют (умерщвляют) и из их внутренних органов выделяют введенные бактерии. Если изучаемый штамм (например, Nik-sp. F. tularensis) обладает вакцинными свойствами, то он будет выделяться из лабораторных животных до 14-18 дня после иммунизации, но не больше. Этого времени вполне достаточно, чтобы сформировался защитный клеточный иммунитет.This indicator is defined as follows. Laboratory animals are given a dose of bacteria below that which can cause their death. Then after a certain time (usually on the 7th, 14th and 21st day) the animals are euthanized (killed) and the introduced bacteria are isolated from their internal organs. If the studied strain (for example, Nik-sp. F. tularensis) has vaccine properties, then it will be isolated from laboratory animals until 14-18 days after immunization, but not more. This time is enough to form protective cellular immunity.

Таким образом, при определении защитных свойств вакцинного кандидата Nik-sp. F. tularensis для каждого вида животных определяется своя доза иммунизации, которая всегда должна быть ниже дозы остаточной вирулентности.Thus, in determining the protective properties of the vaccine candidate Nik-sp. F. tularensis for each animal species has its own dose of immunization, which should always be lower than the dose of residual virulence.

Для мышей максимальная доза может составлять 1×104 микробных клеток на животное, для золотистых хомяков - 1×10 микробных клеток на животное, для морских свинок - 1×10 микробных клеток на животное.For mice, the maximum dose can be 1 × 10 4 microbial cells per animal, for golden hamsters - 1 × 10 microbial cells per animal, for guinea pigs - 1 × 10 microbial cells per animal.

Время, необходимое для формирования защитного иммунитета, после которого возможна проверка вакцинных свойств штамма, должна составлять не менее четырех недель. После четырех недель возможно заражение иммунных животных вирулентным штаммом.The time required for the formation of protective immunity, after which it is possible to check the vaccine properties of the strain, should be at least four weeks. After four weeks, infection of immune animals with a virulent strain is possible.

Для существующего вакцинного штамма 15 НИИЭГ F. tularensis, имеющего более высокую остаточную вирулентность, максимальные иммунизирующие дозы для лабораторных животных значительно снижены: для мышей и золотистых хомяков они составляют не более 100 микробных клеток на животное (1×102 м.к. на животное), для морских свинок - 1×106 м.к. на животное.For the existing vaccine strain 15 NIIEG F. tularensis, which has a higher residual virulence, the maximum immunizing doses for laboratory animals are significantly reduced: for mice and golden hamsters, they amount to no more than 100 microbial cells per animal (1 × 10 2 MK per animal ), for guinea pigs - 1 × 10 6 m.k. per animal.

Сроки, необходимые для формирования защитного иммунитета, также составляют не менее четырех недель после иммунизации.The time required for the formation of protective immunity is also at least four weeks after immunization.

Для более ясного понимания постановки экспериментов по определению защитного эффекта штамма Nik-sp. F. tularensis в Таблицу из Примера 3 можно ввести дополнительную графу и тогда она будет выглядеть следующим образом.For a clearer understanding of the design of experiments to determine the protective effect of the strain Nik-sp. F. tularensis in the Table from Example 3, you can enter an additional column and then it will look as follows.

Таблица 1Table 1 Эффективность иммунизации морских свинок вакциной 15 НИИЭГ F. tularensis u Nik-sp. F. tularensis.The effectiveness of immunization of guinea pigs with vaccine 15 NIIEG F. tularensis u Nik-sp. F. tularensis. ШтаммыStrains nn ДозаDose ЗаражениеInfection ДозаDose лl ТT F. tularensis 15F. tularensis 15 55 106 10 6 F. tularensis 503F. tularensis 503 102 10 2 0/50/5 -- F. tularensis 15F. tularensis 15 55 106 10 6 F. tularensis 503F. tularensis 503 103 10 3 0/50/5 -- F. tularensis Nik-sp.F. tularensis Nik-sp. 55 108 10 8 F. tularensis 503F. tularensis 503 102 10 2 0/50/5 -- F. tularensis Nik-sp.F. tularensis Nik-sp. 55 108 10 8 F. tularensis 503F. tularensis 503 103 10 3 0/50/5 -- КонтрольThe control 55 -- F. tularensis 503F. tularensis 503 101 10 1 4/54/5 1010 КонтрольThe control 55 -- F. tularensis 503F. tularensis 503 102 10 2 5/55/5 99 КонтрольThe control 55 -- F. tularensis 503F. tularensis 503 103 10 3 5/55/5 77

Пример 4. Изучение протективных (защитных) свойств штамма Nik-sp. F. tularensis.Example 4. The study of the protective (protective) properties of the strain Nik-sp. F. tularensis.

Как описано в Примере 1, штаммы Nik-sp. F. tularensis и 15 НИИЭГ F. tularensis выращивали в течение 4-х суток и готовили рабочие концентрации суспензий бактерий 2×108 м.к. в объеме 0,5 мл. Иммунизацию морских свинок каждой вакциной проводили подкожно в паховую область задней лапки. При иммунизации животных параллельно проводили определение количества живых микробных клеток методом высева разведении до единичных колоний на питательные среды. Заражение животных суспензией бактерий вирулентного туляремийного штамма F. tularensis subsp. tularensis 503 проводили ипсилатерально в другую заднюю лапку через 21 день после иммунизации. Культуру выращивали в течение 2-х суток на плотной питательной среде и готовили рабочие концентрации растворов, как описано в примере 1. При заражении животных параллельно проводили определение живых микробных клеток методом высева до единичных колоний на питательные среды. Срок наблюдения за морскими свинками составил 30 дней. Контрольная (неиммунизированная) группа морских свинок представлена 15 животными. Результаты эксперимента представлены в Таблице 2.As described in Example 1, strains of Nik-sp. F. tularensis and 15 NIIEG F. tularensis were grown for 4 days and working concentrations of bacterial suspensions of 2 × 10 8 m.k. in a volume of 0.5 ml. Guinea pigs were immunized with each vaccine subcutaneously in the inguinal region of the hind paw. When animals were immunized, the number of living microbial cells was simultaneously determined by seeding dilution to single colonies on nutrient media. Infection of animals with a bacterial suspension of a virulent tularemia strain F. tularensis subsp. tularensis 503 was carried out ipsilaterally in the other hind paw 21 days after immunization. The culture was grown for 2 days on a solid nutrient medium and working solution concentrations were prepared as described in Example 1. When the animals were infected, live microbial cells were determined simultaneously by seeding to single colonies on nutrient media. Guinea pigs were observed for 30 days. The control (non-immunized) group of guinea pigs is represented by 15 animals. The results of the experiment are presented in Table 2.

Таблица 2table 2 Эффективность иммунизации морских свинок вакциной 15 НИИЭГ F. tularensis и Nik-sp. F. tularensis.The effectiveness of immunization of guinea pigs with vaccine 15 NIIEG F. tularensis and Nik-sp. F. tularensis. ШтаммыStrains nn ЗаражениеInfection ДозаDose лl ТT F. tularensis 15F. tularensis 15 55 F. tularensis 503F. tularensis 503 102 10 2 0/50/5 -- F. tularensis 15F. tularensis 15 55 F. tularensis 503F. tularensis 503 103 10 3 0/50/5 -- F. tularensis Nik-sp.F. tularensis Nik-sp. 55 F. tularensis 503F. tularensis 503 102 10 2 0/50/5 -- F. tularensis Nik-sp.F. tularensis Nik-sp. 55 F. tularensis 503F. tularensis 503 103 10 3 0/50/5 -- КонтрольThe control 55 F. tularensis 503F. tularensis 503 101 10 1 4/54/5 1010 КонтрольThe control 55 F. tularensis 503F. tularensis 503 102 10 2 5/55/5 99 КонтрольThe control 55 F. tularensis 503F. tularensis 503 103 10 3 5/55/5 77

Срок наблюдения за морскими свинками - 30 суток, n - количество животных в группе; л - летальность животных. В числителе - количество погибших, в знаменателе - количество инфицированных животных;The period of observation of guinea pigs is 30 days, n is the number of animals in the group; l - lethality of animals. In the numerator - the number of dead, in the denominator - the number of infected animals;

Т - время гибели животных (в сутках) в течение всего срока наблюдения.T - time of death of animals (in days) during the entire observation period.

Как видно из представленной таблицы 2, все неиммунизированные (контроль) морские свинки погибли. Срок гибели животных от десяти бактерий вирулентного штамма F. tularensis subsp. tularensis 503 составил в среднем 10 дней. Все морские свинки, предварительно иммунизированные живой туляремийной вакциной 15 НИИЭГ F. tularensis и штаммом Nik-sp. F. tularensis, остались живы при заражении их 1×103 м.к. на животное в течение всего срока наблюдения.As can be seen from table 2, all non-immunized (control) guinea pigs died. The term of death of animals from ten bacteria of the virulent strain F. tularensis subsp. tularensis 503 averaged 10 days. All guinea pigs previously immunized with live tularemia vaccine 15 NIIEG F. tularensis and strain Nik-sp. F. tularensis, remained alive when infected with 1 × 10 3 mk per animal during the entire observation period.

Таким образом, можно считать, что защитный (протективный) эффект обоих штаммов составляет 1000 DCL (1000 безусловно смертельных доз), что является очень хорошим показателем напряженности специфического иммунитета.Thus, we can assume that the protective (protective) effect of both strains is 1000 DCL (1000 unconditionally lethal doses), which is a very good indicator of the intensity of specific immunity.

Культурально-морфологические, биологические и другие характеристики селекционного мутанта Nik-sp. F. tularensis как новой живой туляремийной вакцины до настоящего времени в литературе не опубликованы.Cultural, morphological, biological and other characteristics of the selection mutant Nik-sp. F. tularensis as a new live tularemia vaccine has not yet been published in the literature.

Как показал комплекс проведенных исследований, селекционный мутант Nik-sp. F. tularensis, полученный из чистой линии бактерий R-формы F. tularensis, только частично восстановил свойства живой туляремийной вакцины 75 НИИЭГ F. tularensis.As the complex of studies showed, the selection mutant Nik-sp. F. tularensis, obtained from a pure line of bacteria of the R-form F. tularensis, only partially restored the properties of the live tularemia vaccine 75 NIIEG F. tularensis.

Штамм Nik-sp. F. tularensis способен достаточно длительное время сохраняться и размножаться внутри клеток макроорганизма. Этого времени вполне достаточно для формирования напряженного, прежде всего Т-клеточного иммунитета, способного в дальнейшем защитить человека или животное от возбудителя туляремии.Strain Nik-sp. F. tularensis is able to persist and multiply within the cells of a macroorganism for a rather long time. This time is quite enough for the formation of intense, especially T-cell immunity, which can further protect a person or animal from the causative agent of tularemia.

Другого качества живой туляремийной вакцины 75 НИИЭГ F. tularensis - способности сохраняться и размножаться в крови в лабораторных животных, вызывая их быструю гибель, а у людей высокий процент осложнений, - у штамма Nik-sp. F. tularensis нет.Another quality of live tularemia vaccine 75 NIIEG F. tularensis - the ability to survive and multiply in the blood in laboratory animals, causing their rapid death, and in humans a high percentage of complications - in the strain Nik-sp. F. tularensis no.

Таким образом, штамм Nik-sp. F. tularensis имеет значительное преимущество перед уже существующей живой вакциной 15 НИИЭГ F. tularensis, которое дополняется его высокой стабильностью при выращивании на плотных и жидких питательных средах и использованием уже известных традиционных технологий хранения, культивирования и применения вакцины.Thus, the strain Nik-sp. F. tularensis has a significant advantage over the existing live vaccine 15 NIIEG F. tularensis, which is complemented by its high stability when grown on solid and liquid nutrient media and using the already known traditional technologies for storage, cultivation and use of the vaccine.

Очевидный низкий процент реактогенности вакцинного штамма Nik-sp. F. tularensis при иммунизации населения, его высокая стабильность, использование стандартных сред и технологий для культивирования хранения и приготовления открывает следующие возможности:The apparent low percentage reactogenicity of the vaccine strain Nik-sp. F. tularensis during immunization of the population, its high stability, the use of standard media and technologies for the cultivation of storage and preparation opens up the following possibilities:

1. Для здравоохранения и медицины - использование в качестве живой туляремийной вакцины Nik-sp. F. tularensis взамен существующей 15 НИИЭГ F. tularensis (или ее западного прототипа LVS F. tularensis} или сохранение ее как вакцины резерва. На основе штамма Nik-sp. F. tularensis разработка новых высокоэффективных биологических вакцин, высокоспецифичных диагностикумов, лечебных сывороток, а также иммуномодуляторов.1. For health and medicine - use of Nik-sp as a live tularemia vaccine. F. tularensis instead of the existing 15 NIIEG F. tularensis (or its western prototype LVS F. tularensis} or its preservation as reserve vaccines. On the basis of the strain Nik-sp. F. tularensis the development of new highly effective biological vaccines, highly specific diagnostics, treatment sera, and also immunomodulators.

2. Для ветеринарии - использование в качестве живой туляремийной вакцины Nik-sp. F. tularensis для иммунизации животных особо ценных и редких пород (при их разведении), а также животных в заповедниках, зоопарках и т.д.2. For veterinary medicine - use of Nik-sp as a live tularemia vaccine. F. tularensis for the immunization of animals of especially valuable and rare breeds (if bred), as well as animals in reserves, zoos, etc.

Вакцина 15 НИИЭГ F. tularensis (или ее западный прототип LVS F. tularensis) не могут использоваться для этих целей в силу их высокой остаточной вирулентности для большинства диких животных.Vaccine 15 NIIEG F. tularensis (or its western prototype LVS F. tularensis) cannot be used for these purposes due to their high residual virulence for most wild animals.

Учитывая свойства селекционного мутанта Nik-sp. F. tularensis, данный микроорганизм 29.11.05 года депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика за индексом VKPM В-9311.Given the properties of the selection mutant Nik-sp. F. tularensis, this microorganism was deposited on November 29, 2005 at the All-Russian Collection of Industrial Microorganisms (VKPM) FSUE GosNII Genetics for the VKPM B-9311 index.

Источники информацииInformation sources

1. Olsufjev, N.G. (1975) Taxonomy, Microbiology and Laboratory Diagnosis of Tularemia Pathogen, pp.192. Medicine, Moscow.1. Olsufjev, N.G. (1975) Taxonomy, Microbiology and Laboratory Diagnosis of Tularemia Pathogen, pp. 192. Medicine, Moscow.

2. Eigelsbach, H.T. and Downs, C.M. (1961) Prophylactic effectiveness of live and killed tularemia vaccines. I. Production of vaccine and evaluation in the white mouse and guinea pig. J. Immunol. 87, 415-425.2. Eigelsbach, H.T. and Downs, C.M. (1961) Prophylactic effectiveness of live and killed tularemia vaccines. I. Production of vaccine and evaluation in the white mouse and guinea pig. J. Immunol. 87, 415-425.

3. Cherwonogradzky, J.W., Knodel, M.H. and Spence, M.R. (1994) Increased encapsulation and virulence of Francisella tularensis live vaccine stain (LVS) by subculturing on synthetic medium. Vaccine 12, 773-775.3. Cherwonogradzky, J.W., Knodel, M.H. and Spence, M.R. (1994) Increased encapsulation and virulence of Francisella tularensis live vaccine stain (LVS) by subculturing on synthetic medium. Vaccine 12, 773-775.

4. Kormilitsyna, M.I. and Meshcheryakova, I.S. (1996) The new vaccine strains (or variants) of Francisella tularensis. FEMS Immunology and Medical Microbiology 13, 215-219.4. Kormilitsyna, M.I. and Meshcheryakova, I.S. (1996) The new vaccine strains (or variants) of Francisella tularensis. FEMS Immunology and Medical Microbiology 13, 215-219.

5. Мещерякова И.С. Антигены туляремийного микроба, их серологическая характеристика и применение в реакции гемагглютинации. Дисс. канд. 1968.5. Meshcheryakova I.S. Antigens of tularemia microbe, their serological characteristics and use in the hemagglutination reaction. Diss. Cand. 1968.

6. Мещерякова И.С. Таксономия, идентификация и иммунологическая диагностика туляремии. Дисс.докт. 1991.6. Meshcheryakova I.S. Taxonomy, identification and immunological diagnosis of tularemia. Diss.Doc. 1991.

7. Олсуфьев Н.Г. Туляремия. Иммунология // Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней. - М., 1966. - Т.VII. - С.196-1997. Olsufiev N.G. Tularemia. Immunology // Guide to microbiology, clinic and epidemiology of infectious diseases. - M., 1966. - T.VII. - S.196-199

Claims (1)

Живая туляремийная вакцина, отличающаяся тем, что она включает штамм Francisella tularensis Nik-sp., депонированный во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика за индексом VKPM В-9311, полученный путем селекции микробиологическим способом из чистой линии бактерий R-формы штамма 15 НИИЭГ Francisella tularensis, представляющий собой S-форму с максимальной иммунизирующей дозой для лабораторных животных при подкожном введении от 1·104 до 1·108 микробных клеток, и способный защищать их от инфицирования Francisella tularensis subsp. tularensis 503.Live tularemia vaccine, characterized in that it includes a strain of Francisella tularensis Nik-sp., Deposited in the All-Russian collection of industrial microorganisms of the Federal State Unitary Enterprise GosNII Genetics index VKPM B-9311, obtained by microbiological selection from a clean line of bacteria of the R form of strain 15 NIIEG Francisella tulareis , which is an S-form with a maximum immunizing dose for laboratory animals with subcutaneous injection of 1 · 10 4 to 1 · 10 8 microbial cells, and is able to protect them from infection by Francisella tularensis subsp. tularensis 503.
RU2006121120/15A 2006-06-16 2006-06-16 LIVE TULAREMIA VACCINE Nik-sp. Francisella tularensis RU2308969C1 (en)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2006121120/15A RU2308969C1 (en) 2006-06-16 2006-06-16 LIVE TULAREMIA VACCINE Nik-sp. Francisella tularensis
PCT/RU2007/000330 WO2007149012A1 (en) 2006-06-16 2007-06-15 Live tularemic vaccine nik-sp.f. tularensis

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2006121120/15A RU2308969C1 (en) 2006-06-16 2006-06-16 LIVE TULAREMIA VACCINE Nik-sp. Francisella tularensis

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2308969C1 true RU2308969C1 (en) 2007-10-27

Family

ID=38833659

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2006121120/15A RU2308969C1 (en) 2006-06-16 2006-06-16 LIVE TULAREMIA VACCINE Nik-sp. Francisella tularensis

Country Status (2)

Country Link
RU (1) RU2308969C1 (en)
WO (1) WO2007149012A1 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2460791C1 (en) * 2011-07-28 2012-09-10 Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) Method for attenuation of tularemia vaccine strain
RU2716505C1 (en) * 2019-06-24 2020-03-12 Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФКУЗ "РосНИПЧИ "Микроб" Роспотребнадзора) Method for producing tularemic live vaccine lyophilizate

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2221591C1 (en) * 2003-01-27 2004-01-20 Жемчугов Владислав Евгеньевич Method for preparing preparation for active immunization against tularemia

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ELLIS S. et al. Tularemia, Clin. Microbiol. Rev., 2003, vol.15, №4, pp.631-646. *
ОЛСУФЬЕВ Н.Г. Туляремия. Иммунология. Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней. - М., 1966, т.VII, с.196-199. АЛЕКСАНДРОВ Н.И. с соавт. Активная специфическая профилактика инфекционных заболеваний и пути ее усовершенствования. - М., 1982. с.102-121, 138-158. *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2460791C1 (en) * 2011-07-28 2012-09-10 Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) Method for attenuation of tularemia vaccine strain
RU2716505C1 (en) * 2019-06-24 2020-03-12 Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФКУЗ "РосНИПЧИ "Микроб" Роспотребнадзора) Method for producing tularemic live vaccine lyophilizate

Also Published As

Publication number Publication date
WO2007149012A1 (en) 2007-12-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KLIENEBERGER‐NOBEL Micro‐organisms of the pleuropneumonia group
Adlam et al. Natural and experimental staphylococcal mastitis in rabbits
RU2308969C1 (en) LIVE TULAREMIA VACCINE Nik-sp. Francisella tularensis
Hoque et al. Isolation, identification and production of Salmonella pullorum coloured antigen in Bangladesh for the rapid whole blood test
RU2425148C2 (en) Brucella abortus uf-1 strain for preparing biological preparations for diagnostics and specific prevention of brucellosis in farm animals
CN108018228B (en) Escherichia coli O157H 7 low virulent strain and application thereof
RU2717535C1 (en) Method for extracting pure culture of pasteurellosis activator pasteurella multocida
Meyer et al. A Disease in Wild Rats Caused by Pasteurella muricida, n. sp.: Plague Studies. 2
RU2316345C1 (en) Method for manufacturing associated vaccione against colibacteriosis, salmonellosis, streptococcosis and enterococcal infection in nutrias
RU2263143C2 (en) Strain of bacterium streptococcus pyogenes 289 used for preparing vaccine against streptococcosis in fur animal
RU2486916C2 (en) Method for producing brucellous l-antigen
RU2544951C1 (en) ATTENUATED STRAIN Bacillus anthracis FOR DEVELOPING MEANS OF SPECIFIC PREVENTION OF ANTHRAX
RU2217163C2 (en) Vaccine against candidosis in agriculture animals
RU2268933C1 (en) STRAIN Haemophilus parasuis SK-1 AS PATHOGEN OF SWINE HEMOPHILEOUS POLYSEROSITIS FOR PREPARING DIAGNOSTIC AND VACCINE PREPARATIONS
RU2269570C2 (en) Haemophilus parasuis strain as porcine haemophylic polyserositis agent for production of diagnostic and vaccine preparations
RU2406532C1 (en) Method of producing associated vaccine against streptococcosis and staphylococcosis of cattle
RU2252031C1 (en) Method for production of immune serum to virulent strain bacillus anthracis antigen
RU2145353C1 (en) Strain of bacterium moraxella bovis "g97-vnivi" used for preparing diagnostica and vaccines against infectious keratoconjunctivitis in cattle
Sen et al. Immunogenicity and duration of immunity of the polyvalent vaccine against chicken salmonellosis
RU2178713C2 (en) Method to prevent salmonella-caused abortion in mares
RAT Agriculture, Livestock and Fisheries
Akter et al. Immune Responses Induced in Chickens by Capsular Extract of P. Multocida Isolated From Farm Rat
RU2141522C1 (en) Test-infecting culture in assay of immunogenicity of anthrax vaccines, effectiveness of agents for emergency prophylaxis and treatment of patients with anthrax
SU1668389A1 (en) Bacterial race vibrio nag of 081 serovar type usable for preparing monovar diagnostic serum
Ilkhomovich et al. Diagnostic Methods And Measures For The Prevention Of Listeriosis

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20100617