Claims (36)
1. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты Corynebacterium glutamicum, содержащая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1. или комплементарную ей последовательность, где указанная молекула кодирует полипептид, обладающий диаминопимелат-эпимеразной активностью.1. An isolated Corynebacterium glutamicum nucleic acid molecule containing the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1. or a sequence complementary to it, wherein said molecule encodes a polypeptide having diaminopimelate-epimerase activity.
2. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 и обладающий диаминопимелат-эпимеразной активностью, или комплементарная ей последовательность.2. An isolated nucleic acid molecule that encodes a polypeptide containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 and having diaminopimelate-epimerase activity, or a sequence complementary thereto.
3. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, которая кодирует природный аллельный вариант полипептида, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, и обладающий диаминопимелат-эпимеразной активностью, или комплементарная ей последовательность.3. An isolated nucleic acid molecule that encodes a natural allelic variant of a polypeptide containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, and having diaminopimelate-epimerase activity, or a sequence complementary to it.
4. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична полноразмерной нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: I, или комплементарной ей последовательности, где указанная молекула нуклеиновой кислоты кодирует полипептид, обладающий диаминопимелат-эпимеразной активностью.4. An isolated nucleic acid molecule containing a nucleotide sequence that is at least 50% identical to the full-length nucleotide sequence of SEQ ID NO: I, or a sequence complementary to it, wherein said nucleic acid molecule encodes a polypeptide having diaminopimelate epimerase activity.
5. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая фрагмент по меньшей мере из 15 последовательно расположенных нуклеотидов нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 1, или комплементарной ей последовательности, где указанная молекула нуклеиновой кислоты кодирует пептид, обладающий диаминопимелат-эпимеразной активностью.5. An isolated nucleic acid molecule containing a fragment of at least 15 nucleotides of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 or a sequence complementary to it, wherein said nucleic acid molecule encodes a peptide having diaminopimelate epimerase activity.
6. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, которая в жестких условиях гибридизуется с молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-5.6. The selected nucleic acid molecule, which under stringent conditions, hybridizes with the nucleic acid molecule according to any one of claims 1 to 5.
7. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-6 и нуклеотидную последовательность, кодирующую гетерологичный полипептид.7. The selected nucleic acid molecule containing the nucleic acid molecule according to any one of claims 1 to 6 and a nucleotide sequence encoding a heterologous polypeptide.
8. Рекомбинантный вектор экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-7 и одну или несколько регуляторных последовательностей.8. A recombinant expression vector comprising a nucleic acid molecule according to any one of claims 1 to 7 and one or more regulatory sequences.
9. Рекомбинантный вектор по п.8, который является плазмидой.9. The recombinant vector of claim 8, which is a plasmid.
10. Способ получения рекомбинантной клетки-хозяина, который предусматривает трансфецирование клетки-хозяина рекомбинантным вектором по п.8 или 9.10. A method of obtaining a recombinant host cell, which comprises transfecting the host cell with the recombinant vector of claim 8 or 9.
11. Способ по п.10, где указанная клетка является микроорганизмом.11. The method of claim 10, wherein said cell is a microorganism.
12. Способ по п.11, где указанная клетка принадлежит роду Corynebacterium или Brevibacterium.12. The method according to claim 11, where the specified cell belongs to the genus Corynebacterium or Brevibacterium.
13. Способ по п.10, где экспрессия указанной молекулы нуклеиновой кислоты приводит к модуляции продукции аминокислоты указанной клеткой.13. The method of claim 10, where the expression of the specified nucleic acid molecule leads to modulation of the production of amino acids by the specified cell.
14. Способ по п.13, где указанная аминокислота является протеиногенной или непротеиногенной аминокислотой.14. The method according to item 13, where the specified amino acid is a proteinogenic or non-proteinogenic amino acid.
15. Способ получения рекомбинантной клетки-хозяина, предусматривающий трансфецирование клетки-хозяина молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1, где молекула нуклеиновой кислоты содержит одну или несколько модификаций нуклеиновой кислоты по сравнению с последовательностью SEQ ID NO: 1, и где молекула нуклеиновой кислоты кодирует полипептид, обладающий диаминопимелат-эпимеразной активностью.15. A method of obtaining a recombinant host cell, comprising transfecting the host cell with a nucleic acid molecule containing the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1, where the nucleic acid molecule contains one or more modifications of the nucleic acid compared to the sequence of SEQ ID NO: 1, and where a nucleic acid molecule encodes a polypeptide having diaminopimelate-epimerase activity.
16. Способ получения рекомбинантной клетки-хозяина, предусматривающий трансфецирование клетки-хозяина молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1, где регуляторная область молекулы нуклеиновой кислоты модифицирована относительно регуляторной области этой молекулы дикого типа, и где молекула нуклеиновой кислоты кодирует полипептид, обладающий диаминопимелат-эпимеразной активностью.16. A method of producing a recombinant host cell, comprising transfecting the host cell with a nucleic acid molecule containing the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1, where the regulatory region of the nucleic acid molecule is modified relative to the regulatory region of this wild-type molecule, and where the nucleic acid molecule encodes a polypeptide, possessing diaminopimelate-epimerase activity.
17. Способ получения полипептида, предусматривающий культивирование рекомбинантной клетки-хозяина, трансфецированной вектором по п.8, в подходящей культуральной среде с получением полипептида, обладающего диаминопимелат-эпимеразной активностью.17. A method of producing a polypeptide comprising culturing a recombinant host cell transfected with the vector of claim 8 in a suitable culture medium to produce a polypeptide having diaminopimelate-epimerase activity.
18. Выделенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, где указанный полипептид обладает диаминопимелат-эпимеразной активностью.18. The selected polypeptide containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, where the specified polypeptide has diaminopimelate-epimerase activity.
19. Выделенный полипептид, содержащий природный аллельный вариант полипептида, содержащего указанную аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, где указанный природный аллельный вариант обладает диаминопимелат-эпимеразной активностью.19. The selected polypeptide containing a natural allelic variant of the polypeptide containing the specified amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, where the specified natural allelic variant has diaminopimelate-epimerase activity.
20. Выделенный полипептид, который кодируется молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична полноразмерной последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1, где указанный полипептид обладает диаминопимелат-эпимеразной активностью.20. The selected polypeptide, which is encoded by a nucleic acid molecule containing a nucleotide sequence that is at least 50% identical to the full-length nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 1, where the polypeptide has diaminopimelate epimerase activity.
21. Выделенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 51% идентична полноразмерной аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, где указанный полипептид обладает диаминопимелат-эпимеразной активностью.21. An isolated polypeptide comprising an amino acid sequence that is at least 51% identical to the full-length amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, wherein said polypeptide has diaminopimelate epimerase activity.
22. Способ получения аминокислоты, предусматривающий культивирование рекомбинантной клетки-хозяина, трансфецированной вектором по п.8, при котором продуцируется аминокислота.22. A method for producing an amino acid, comprising culturing a recombinant host cell transfected with the vector of claim 8, wherein the amino acid is produced.
23. Способ по п.22, где указанный способ дополнительно предусматривает стадию выделения аминокислоты из указанной культуры.23. The method of claim 22, wherein said method further comprises the step of isolating an amino acid from said culture.
24. Способ по п.22, где указанная клетка принадлежит роду Corynebacterium или Brevibacterium.24. The method according to item 22, where the specified cell belongs to the genus Corynebacterium or Brevibacterium.
25. Способ по п.22, где указанная клетка выбрана из группы, состоящей из Corynebacterium glutamicum, Corynebacterium herculis, Corynebacterium lilium, Corynebacterium acetoacidophilum, Corynebacterium acetoglutamicum, Corynebacterium acetophilum, Corynebacterium ammoniagenes, Corynebacterium fujiokense, Corynebacterium nitrilophilus, Brevibacterium ammoniagenes, Brevibacterium butanicum, Brevibacterium divaricatum, Brevibacterium flavum, Brevibacterium healii, Brevibacterium ketoglutamicum, Brevibacterium ketosoreductum, Brevibacterium lactofermentum, Brevibacterium linens, Brevibacterium paraffinolyticum и штаммов, представленных в таблице 3.25. The method of claim 22, wherein said cell is selected from the group consisting of Corynebacterium glutamicum, Corynebacterium herculis, Corynebacterium lilium, Corynebacterium acetoacidophilum, Corynebacterium acetoglutamicum, Corynebacterium acetophilum, Corynebacterium ammoniagenes, Corynebacterium fujiokense, Corynebacterium nitrilophilus, Brevibacterium ammoniagenes, Brevibacterium butanicum, Brevibacterium divaricatum, Brevibacterium flavum, Brevibacterium healii, Brevibacterium ketoglutamicum, Brevibacterium ketosoreductum, Brevibacterium lactofermentum, Brevibacterium linens, Brevibacterium paraffinolyticum and the strains shown in Table 3.
26. Способ по п.22, где экспрессия молекулы нуклеиновой кислоты из указанного вектора приводит к модуляции продукции указанной аминокислоты.26. The method according to item 22, where the expression of a nucleic acid molecule from the specified vector leads to modulation of the production of the specified amino acids.
27. Способ по п.22, где указанная аминокислота является протеиногенной или непротеиногенной аминокислотой.27. The method according to item 22, where the specified amino acid is a proteinogenic or non-proteinogenic amino acid.
28. Способ по п.22, где указанная аминокислота выбрана из группы, состоящей из лизина, глутамата, глутамина, аланина, аспартата, глицина, серина, треонина, метионина, цистеина, валина, лейцина, изолейцина, аргинина, пролина, гистидина, тирозина, фенилаланина и триптофана.28. The method according to item 22, where the specified amino acid is selected from the group consisting of lysine, glutamate, glutamine, alanine, aspartate, glycine, serine, threonine, methionine, cysteine, valine, leucine, isoleucine, arginine, proline, histidine, tyrosine , phenylalanine and tryptophan.
29. Способ получения аминокислоты, предусматривающий культивирование клетки, геномная ДНК которой была изменена введением молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-7.29. A method of producing an amino acid comprising culturing a cell whose genomic DNA has been altered by introducing a nucleic acid molecule according to any one of claims 1 to 7.
30. Выделенный полипептид, содержащий фрагмент аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, где указанный фрагмент сохраняет диаминопимелат-эпимеразную активность.30. The selected polypeptide containing a fragment of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, where the specified fragment retains diaminopimelate-epimerase activity.
31. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая фрагмент по меньшей мере из 15 последовательно расположенных нуклеотидов нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 1, или комплементарной ей последовательности, где указанная молекула нуклеиновой кислоты может использоваться в качестве праймера.31. An isolated nucleic acid molecule containing a fragment of at least 15 nucleotides of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1, or a sequence complementary to it, wherein said nucleic acid molecule can be used as a primer.
32. Выделенный полипептид, кодируемый молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1, где указанный полипептид обладает диаминопимелат-эпимеразной активностью.32. The selected polypeptide encoded by a nucleic acid molecule containing the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1, where the specified polypeptide has diaminopimelate-epimerase activity.
33. Выделенный полипептид по любому из пп.18, 19, 20, 21, 30 или 32, дополнительно содержащий гетерологичные аминокислотные последовательности.33. The selected polypeptide according to any one of claims 18, 19, 20, 21, 30, or 32, further comprising heterologous amino acid sequences.
34. Способ диагностики Corynebacterium diphtheriae у пациента, предусматривающий обнаружение по меньшей мере одной молекулы нуклеиновой кислоты по пп.1-5 или по меньшей мере одной молекулы полипептида по пп.18, 19, 20, 21, 30 или 32, то есть, проведение диагностики или определение активности Corynebacterium diphtheriae у пациента.34. A method for diagnosing Corynebacterium diphtheriae in a patient, comprising detecting at least one nucleic acid molecule according to claims 1-5 or at least one polypeptide molecule according to claims 18, 19, 20, 21, 30 or 32, that is, conducting diagnosing or determining the activity of Corynebacterium diphtheriae in a patient.
35. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая фрагмент по меньшей мере из 15 последовательно расположенных нуклеотидов нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 1, или комплементарной ей последовательности, где указанная молекула нуклеиновой кислоты может использоваться в качестве зонда.35. An isolated nucleic acid molecule containing a fragment of at least 15 nucleotides of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1, or a complementary sequence thereof, where the specified nucleic acid molecule can be used as a probe.
36. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая фрагмент по меньшей мере из 15 последовательно расположенных нуклеотидов нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 1, или комплементарной ей последовательности, где указанная молекула нуклеиновой кислоты может использоваться в качестве антисмысловой молекулы.36. An isolated nucleic acid molecule containing a fragment of at least 15 nucleotides of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 or a sequence complementary to it, wherein said nucleic acid molecule can be used as an antisense molecule.