RU2300571C2 - Питательная среда для выделения микобактерий - Google Patents
Питательная среда для выделения микобактерий Download PDFInfo
- Publication number
- RU2300571C2 RU2300571C2 RU2005122742/13A RU2005122742A RU2300571C2 RU 2300571 C2 RU2300571 C2 RU 2300571C2 RU 2005122742/13 A RU2005122742/13 A RU 2005122742/13A RU 2005122742 A RU2005122742 A RU 2005122742A RU 2300571 C2 RU2300571 C2 RU 2300571C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mycobacteria
- nutrient medium
- sodium
- agar
- growth
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано для ранней диагностики туберкулеза. Питательная среда для выделения микобактерий содержит калий фосфорнокислый однозамещенный, натрий фосфорнокислый двузамещенный, магний сернокислый, натрий лимоннокислый, железо лимоннокислое аммиачное, аминокислоту, агар-агар, глицерин, сыворотку лошадиную инактивированную, краситель малахитовый зеленый и воду дистиллированную. Введение α-аминоуксусной кислоты и натрия пировинограднокислого способствует ускорению роста микобактерий с гомогенным их распределением в питательной среде. Инактивация лошадиной сыворотки при 56°С в течение 40 минут снижает ее ингибирующее действие на микобактерии. Бактерицидный краситель - малахитовый зеленый обладает оптимальным действием на сопутствующую микрофлору, не вызывая задержки роста микобактерий. Изобретение обеспечивает повышение ростовых свойств питательной среды, ускоряет рост микобактерий, что способствует их выявляемости в максимально короткие сроки. 1 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано для ранней диагностики туберкулеза.
В последнее время наблюдается рост показателей заболеваемости туберкулезом. В этой связи значительное внимание уделяется лабораторной диагностике туберкулеза.
В настоящее время для выделения (культивирования) микобактерий и определения их чувствительности к лекарственным препаратам используется ряд плотных яичных питательных сред Левенштейна-Иенсена, Финн II [Приказ МЗ РФ от 21.03. 2003 №109 "О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации" М., стр.266-270], среда Мордовского [Методические указания МЗ РСФСР "Приготовление и использование новой питательной среды для выращивания микобактерий туберкулеза", М. - 1972].
Недостатком плотных питательных сред являются длительные сроки роста микобактерий при посеве диагностического материала - 2,5-10 недель, а при пересевах культур и определении лекарственной чувствительности - 12-21 день, что затрудняет раннюю бактериологическую диагностику и своевременную коррекцию лечения.
Применение жидких питательных сред позволяет ускорить выявление микобактерий, что важно для раннего начала лечения больных туберкулезом. Известно использование для этих целей жидких сред, содержащих комплекс солей и L-аспарагин в качестве источника азотистого питания: Соттона (Sauton) [B.H.Василев. Микобактериозы и микозы легких. София, 1971 г., стр.156], Школьниковой [Приказ МЗ РФ от 21.03. 2003 №109 "О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации". М., стр.270-271]. Недостатком этих сред является высокая степень проростов посторонней микрофлоры и использование дорогостоящих ингредиентов.
Наиболее близким решением технической задачи данного назначения к заявляемому изобретению является среда для выделения микобактерий туберкулеза Lebek [B.H.Василев. Микобактериозы и микозы легких. София, 1971 г., стр.163], содержащая аспарагин, натрий лимоннокислый, магний сернокислый, железо лимоннокислое аммиачное, калий фосфорнокислый однозамещенный, натрий фосфорнокислый двузамещенный, глицерин, дистиллированную воду, краситель бромтимоловый синий, агар-агар и говяжью сыворотку крови. Однако эта среда используется в основном для дифференцировки атипичных микобактерий. Входящий в состав питательной среды бромтимоловый синий оказывает тормозящее действие на рост микобактерий туберкулеза, а под влиянием аспарагина возникает конгломеративный рост колоний микобактерий, что осложняет учет результатов исследований.
В основу изобретения поставлена задача повышения ростовых свойств питательной среды.
Поставленная задача решается тем, что в среду, содержащую калий фосфорнокислый однозамещенный, натрий фосфорнокислый двузамещенный, магний сернокислый, натрий лимоннокислый, железо лимоннокислое аммиачное, фактор роста, агар-агар, глицерин, сыворотку животного, бактерицидный краситель и воду, дополнительно вводят в качестве ростового фактора натрий пировинограднокислый, в качестве аминокислоты используют α-аминоуксусную кислоту, в качестве бактерицидного красителя - малахитовый зеленый, а основным питательным веществом является инактивированная лошадиная сыворотка. Введение α-аминоуксусной кислоты и натрия пировинограднокислого способствует ускорению роста микобактерий с гомогенным их распределением в питательной среде. Инактивация лошадиной сыворотки при 56°С в течение 40 минут снижает ее ингибирующее действие на микобактерии. Бактерицидный краситель малахитовый зеленый обладает оптимальным действием на сопутствующую микрофлору, не вызывая задержки роста микобактерии.
Состав питательной среды при следующих соотношениях, г/л:
калий фосфорнокислый однозамещенный | 2,0-3,0 |
натрий фосфорнокислый двузамещенный | 1,0-2,0 |
магний сернокислый | 0,25-0,75 |
натрий лимоннокислый | 1,0-2,0 |
железо лимоннокислое аммиачное | 0,03-0,07 |
агар-агар | 2,0-4,0 |
сыворотка лошадиная инактивированная | 150,0-250,0 |
малахитовый зеленый | 0,04-0,06 |
глицерин | 20,0-40,0 |
α-аминоуксусная кислота | 0,5-1,5 |
натрий пировинограднокислый | 0,1-0,2 |
вода дистиллированная | до 1 л |
Среду получают следующим образом.
Пример 1.
1. В 20 мл горячего глицерина растворяют 0,04 г малахитового зеленого.
2. 150 мл лошадиной сыворотки инактивируют при 56°С 40 мин и соединяют с раствором малахитового зеленого.
3. Готовят солевой раствор, для чего в 200 мл дистиллированной воды последовательно растворяют 2,0 г калия фосфорнокислого однозамещенного, 1,0 г натрия фосфорнокислого двузамещенного, 0,25 г магния сернокислого, 1,0 г натрия лимоннокислого, 0,03 г железа лимоннокислого аммиачного, 0,5 г α-аминоуксусной кислоты, 0,1 г натрия пировинограднокислого.
Полученный раствор стерилизуют в автоклаве при 1,5 атм 1 мин и после охлаждения соединяют со смесью 2.
4,2 г агар-агара растворяют в оставшемся количестве дистиллированной воды, стерилизуют при 1 атм 30 мин, соединяют со смесью 3, тщательно перемешивают.
Контроль качества среды осуществляют при посеве тест-штаммов Mycobacterium tuberculosis H37Rv, B-5 и свежевыделенных культур от больных туберкулезом легких. Учет результатов проводят визуально по помутнению среды через 2-8 суток инкубации посевов при температуре 37°С.После 2-8 суток инкубации содержимое пробирок центрифугируют при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, из осадка делают мазки для просмотра в люминесцентном микроскопе.
Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что для приготовления смеси 1 используют 30 мл глицерина и 0,05 г малахитового зеленого, для приготовления смеси 2 - 200 мл лошадиной сыворотки, для солевого раствора - 2,5 г калия фосфорнокислого однозамещенного, 1,5 г натрия фосфорнокислого двузамещенного, 0,5 г магния сернокислого, 1,5 г натрия лимоннокислого, 0,05 г железа лимоннокислого аммиачного, 1,0 г α-аминоуксусной кислоты, 0,15 г натрия пировинограднокислого, для приготовления раствора 4 - 3 г агар-агара. Далее среду готовят согласно примеру 1.
Пример 3. Отличается от примера 1,2 тем, что для приготовления смеси 1 используют 40 мл глицерина и 0,06 г малахитового зеленого, для приготовления смеси 2 - 250 мл лошадиной сыворотки, для солевого раствора - 3,0 г калия фосфорнокислого однозамещенного, 2,0 г натрия фосфорнокислого двузамещенного, 0,75 г магния сернокислого, 2,0 г натрия лимоннокислого, 0,07 г железа лимоннокислого аммиачного, 1,5 г α-аминоуксусной кислоты, 0,2 г натрия пировинограднокислого, для приготовления раствора 4 - 4 г агар-агара. Далее среду готовят согласно примерам 1, 2.
После 2-8 суток инкубации содержимое пробирок центрифугируют при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, из осадка делают мазки для просмотра в люминесцентном микроскопе.
Результаты бактериологического контроля предлагаемой и известной сред представлены в таблице.
Из таблицы видно, что сроки роста микобактерий туберкулеза на предлагаемой питательной среде сократились по сравнению с прототипом у лабораторного штамма H37Rv в 1,3-1,6 раза, у штаммов, выделенных от больных, в 1,3-1,7 раза и составили в среднем 6 суток. Выявляемость микобактерий туберкулеза из мокроты больных увеличилась при отрицательных результатах бактериоскопии с 27 до 33%, при положительной бактериоскопии с 66 до 78%, при сокращении сроков роста по сравнению с прототипом на 205 суток.
Таким образом, предлагаемая среда обеспечивает рост микобактерий туберкулеза, что способствует их выявляемости в максимально короткие сроки.
Таблица Характеристика ростовых свойств питательной среды на основании проведенных исследований (1500 пробирочных опытов) |
||||||||
Исследуемый материал | Рост микроорганизмов на питательных средах | |||||||
Прототип | Предлагаемая среда по составу | |||||||
Минимальный | Средний | Максимальный | ||||||
Сроки роста (сутки) | Количество колоний, % | Сроки роста (сутки) | Количество колоний, % | Сроки роста (сутки) | Количество колоний, % | Сроки роста (сутки) | Количество колоний, % | |
Лабораторный штамм H37Rv | 8 | 98 | 6 | 98 | 6 | 100 | 5 | 100 |
Штаммы, выделенные от больных | 10 | 95 | 8 | 98 | 7 | 98 | 6 | 100 |
Мокрота больных при положительной бактериоскопии | 16 | 66 | 14 | 73 | 14 | 78 | 14 | 78 |
Мокрота больных при отрицательной бактериоскопии | 21 | 27 | 16 | 29 | 16 | 32 | 16 | 33 |
Проросты при иследовании мокроты | 6 | 32 | 7 | 4 | 8 | 2 | 8 | 2 |
Claims (1)
- Питательная среда для выделения микобактерий, содержащая калий фосфорнокислый однозамещенный, натрий фосфорнокислый двузамещенный, магний сернокислый, натрий лимоннокислый, железо лимоннокислое аммиачное, аминокислоту, агар-агар, глицерин, сыворотку животного, бактерицидный краситель и воду дистиллированную, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит натрий пировинограднокислый, в качестве аминокислоты - α-аминоуксусную кислоту, в качестве бактерицидного красителя - малахитовый зеленый, в качестве сыворотки - сыворотку лошадиную инактивированную при следующем соотношении компонентов, г/л:
Калий фосфорнокислый однозамещенный 2,0-3,0 Натрий фосфорнокислый двузамещенный 1,0-2,0 Магний сернокислый 0,25-0,75 Натрий лимоннокислый 1,0-2,0 Железо лимоннокислое аммиачное 0,03-0,07 α-аминоуксусная кислота 0,5-1,5 Натрий пировинограднокислый 0,1-0,2 Агар-агар 2,0-4,0 Сыворотка лошадиная инактивированная 150,0-250,0 Малахитовый зеленый 0,04-0,06 Глицерин 20,0-40,0 Вода дистиллированная До 1 л
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2005122742/13A RU2300571C2 (ru) | 2005-07-18 | 2005-07-18 | Питательная среда для выделения микобактерий |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2005122742/13A RU2300571C2 (ru) | 2005-07-18 | 2005-07-18 | Питательная среда для выделения микобактерий |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2005122742A RU2005122742A (ru) | 2007-01-27 |
RU2300571C2 true RU2300571C2 (ru) | 2007-06-10 |
Family
ID=37773161
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2005122742/13A RU2300571C2 (ru) | 2005-07-18 | 2005-07-18 | Питательная среда для выделения микобактерий |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2300571C2 (ru) |
-
2005
- 2005-07-18 RU RU2005122742/13A patent/RU2300571C2/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ВАСИЛЬЕВ В.Н. Микобактериозы и микозы легких. София, 1971, с.163-165. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2005122742A (ru) | 2007-01-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2412240C1 (ru) | Питательная среда для выращивания легионелл | |
RU2300571C2 (ru) | Питательная среда для выделения микобактерий | |
RU2518304C2 (ru) | ДВУХФАЗНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ТОНКОСЛОЙНОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Helicobacter pylori И СПОСОБ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ | |
RU2435842C1 (ru) | Питательная среда транспортная (жидкая) для культивирования бруцеллезного микроба | |
Taylor et al. | Assessment of transport and isolation methods for gonococci. | |
CN107446986A (zh) | 一种检测人体血液中微生物的培养基及其制备方法 | |
EP3732300B1 (en) | A novel medium for growth and antibiotic susceptibility test of mycobacteria | |
RU2648160C2 (ru) | Питательная среда для выделения бактерий yersinia enterocolitica | |
RU2247775C1 (ru) | Транспортная жидкая питательная среда для сбора, культивирования и транспортировки крови больных, подозреваемых на заболевание бруцеллезом | |
RU2213779C2 (ru) | Питательная среда для выделения лактобактерий | |
RU2800127C1 (ru) | Питательная среда для культивирования микроорганизмов | |
RU2510416C1 (ru) | Питательная среда для выделения лактобактерий | |
RU2289622C2 (ru) | Диагностическая питательная среда для идентификации возбудителя сибирской язвы сухая | |
RU2580227C1 (ru) | Питательная среда для выделения legionella pneumophila | |
CN109355226A (zh) | 用于军团菌的增菌培养和分离培养的双相培养基及其制备方法 | |
RU2350648C1 (ru) | Способ оценки антагонистической активности пробиотиков на основе лиофилизированной биомассы анаэробных бактерий по отношению к патогенным микобактериям | |
RU2460768C1 (ru) | Питательная среда плотная для выращивания легионелл | |
SU1751211A1 (ru) | Питательна среда дл выделени чумного микроба | |
RU2484141C1 (ru) | Элективно-дифференциальная питательная среда для выделения холерных вибрионов (варианты) | |
RU2175671C1 (ru) | Питательная среда для выделения гемокультуры при диагностике брюшного тифа и паратифов | |
RU2299237C2 (ru) | Питательная среда для выделения грибов рода candida | |
RU2387714C2 (ru) | Способ приготовления питательной среды для выявления синегнойной палочки | |
RU2681116C2 (ru) | Питательная среда плотная для хранения микроба чумы | |
RU2346052C1 (ru) | Двухфазная питательная среда для выделения бруцеллезного микроба | |
RU2353654C1 (ru) | Способ выделения чумного микроба бактериологическим методом из исследуемого материала (варианты) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090719 |