RU2291441C1

RU2291441C1 - Method for diagnosing hepatic cirrhosis

Info

Publication number: RU2291441C1
Application number: RU2005128375/15A
Authority: RU
Inventors: Эльвира Ивановна Белобородова (RU); Эльвира Ивановна Белобородова; Радиф Фаридович Абдрашитов (RU); Радиф Фаридович Абдрашитов; Екатерина Витальевна Белобородова (RU); Екатерина Витальевна Белобородова; Максим Игоревич Рачковский (RU); Максим Игоревич Рачковский; Игорь Леонидович Пурлик (RU); Игорь Леонидович Пурлик; Ольга Евгеньевна Акбашева (RU); Ольга Евгеньевна Акбашева; Анна Степановна Алексеева (RU); Анна Степановна Алексеева; Вера Антоновна Бурковска (RU); Вера Антоновна Бурковская; Наталь Николаевна Варлакова (RU); Наталья Николаевна Варлакова; Дмитрий Александрович Суходолин (RU); Дмитрий Александрович Суходолин
Original assignee: Эльвира Ивановна Белобородова; Радиф Фаридович Абдрашитов; Екатерина Витальевна Белобородова; Максим Игоревич Рачковский; Игорь Леонидович Пурлик; Ольга Евгеньевна Акбашева; Анна Степановна Алексеева; Вера Антоновна Бурковская; Наталья Николаевна Варлакова; Дмитрий Александрович Суходолин; Лариса Анатольевна Петрова; Елена Николаевна Кнутарева; Людмила Павловна Филиппова; Евгения Георгиевна Ламбарова; Леонид Владимирович Перельмутер
Priority date: 2005-09-12
Filing date: 2005-09-12
Publication date: 2007-01-10

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: method involves determining collagenase, collagenase inhibitor and protease inhibitor activity. Collagenase activity increasing to 4 mcmole/(l*h) and higher, protease inhibitor activity falling to 9 IU/ml and lower, collagenase inhibitor content falling to 1.9±0.2 IU/ml and lower, hepatic cirrhosis is to be diagnosed.

EFFECT: high accuracy and information capacity of the method.

Description

Изобретение относится к области медицины, гепатологии и может быть использовано для диагностики цирроза печени.The invention relates to the field of medicine, hepatology and can be used to diagnose cirrhosis of the liver.

Известен способ диагностики цирроза печени по данным пункционной биопсии печени, где V.Desmetit et al (1994) определяют стадию хронизации и оценивают степень выраженности фиброза в гистологических препаратах [6]. В.В.Серовым и Л.О.Северюгиной (1996) для оценки выраженности фиброза предложен гистологический индекс стадий хронизации процесса, где авторы на гистологических препаратах печени предлагают учитывать не только наличие признаков портального и септального фиброза, но и «синусоидального» (перегепатоцеллюлярного) фиброза. Использование известного способа диагностики стадий хронизации процесса дает хорошие результаты при исследовании достаточного объема печеночной ткани. Однако пункционная биопсия печени с нарастанием фиброза затруднительна особенно при уже развившемся циррозе печени. Надо учитывать инвазивность метода пункционной биопсии и невозможность его выполнения из-за опасности возможных осложнений (нарушений свертывания крови с последующим кровотечением при циррозе печени). Возникают сложности процедуры из-за отказа больного в виде инвазивности метода. Необходимо учитывать нередко возможные сложности в диагностике цирроза, так как печень не всегда увеличена, а наоборот, уменьшена в размерах, тем более что клинических признаков цирроза печени практически нет, особенно в стадии компенсации процесса.A known method for the diagnosis of liver cirrhosis according to puncture biopsy of the liver, where V. Desmetit et al (1994) determine the stage of chronicity and assess the severity of fibrosis in histological preparations [6]. To assess the severity of fibrosis, V.V.Serov and L.O. Severyugina (1996) proposed a histological index of the stages of the process chronization, where authors on histological preparations of the liver propose to take into account not only the presence of signs of portal and septal fibrosis, but also “sinusoidal” (perhepatocellular) fibrosis. Using the known method for the diagnosis of stages of the chronic process gives good results in the study of a sufficient amount of liver tissue. However, a puncture liver biopsy with an increase in fibrosis is difficult especially with already developed liver cirrhosis. It is necessary to take into account the invasiveness of the puncture biopsy method and the impossibility of its implementation due to the danger of possible complications (blood coagulation disorders with subsequent bleeding with liver cirrhosis). Complexities of the procedure arise due to patient failure in the form of invasiveness of the method. It is often necessary to take into account the possible difficulties in the diagnosis of cirrhosis, since the liver is not always enlarged, but rather reduced in size, especially since there are practically no clinical signs of liver cirrhosis, especially in the process compensation stage.

Наиболее близким к предлагаемому является способ диагностики цирроза печени путем определения относительного содержания фракций лизофосфатидилхолина (ЛФХ), относительного содержания сфингомиелина (СМ), фосфатидилхолина фосфолипидного спектра крови и расчета коэффициента, определяемого по формуле ФХ²/CM×ЛФХ, где ФХ - относительное содержание фосфатидилхолина, CM - относительное содержание сфингомиелина, ЛФХ - относительное лизофосфатидилхолина, и при его значениях: 20-35 диагностируется хронический вирусный гепатит, в том числе и у носителей HB_sAg, 36-45 - хронический вирусный гепатит у лиц, злоупотребляющих алкоголем, 50-96 диагностируют цирроз [5].Closest to the proposed is a method for the diagnosis of liver cirrhosis by determining the relative content of fractions of lysophosphatidylcholine (LPC), the relative content of sphingomyelin (SM), phosphatidylcholine of the phospholipid spectrum of the blood and calculating the coefficient determined by the formula FC ² / CM × LPC, where FC is the relative content of phosphatidylcholine , CM - the relative content of sphingomyelin, LFH - the relative lysophosphatidylcholine, and with its values: 20-35, chronic viral hepatitis is diagnosed, including Lei HB _s Ag, 36-45 - Chronic hepatitis in patients who abuse alcohol, 50-96 diagnosed with cirrhosis [5].

Однако данный способ неточен, так как исследования фосфолипидного спектра проводятся в крови, в то время как первичные и наиболее выраженные изменения липидного обмена происходят в гепатоцитах печени, а уровень перекисного окисления липидов зависит от состояния антиоксидантной системы [1]. Указанный метод сомнителен, так как не решает вопросы по существу проблемы, а проводится путем относительного определения фракций фосфолипидного спектра крови и не сопровождаются параллельным изучением морфологического состояния печени. Поэтому указанные диагнозы в данном способе выглядят мало достоверными. Наконец, данный способ далек от диагностики сывороточных маркеров фиброза, в качестве последних применяются компоненты внеклеточного матрикса, участвующие в процессе печеного фибриногенеза, в частности, дисбаланс коллагеназы и ее ингибиторов, а также тканевых ингибиторов протеаз.However, this method is inaccurate, since studies of the phospholipid spectrum are carried out in the blood, while the primary and most pronounced changes in lipid metabolism occur in liver hepatocytes, and the level of lipid peroxidation depends on the state of the antioxidant system [1]. This method is doubtful, since it does not solve the essence of the problem, but is carried out by relative determination of the fractions of the phospholipid spectrum of the blood and is not accompanied by a parallel study of the morphological state of the liver. Therefore, these diagnoses in this method look a little reliable. Finally, this method is far from the diagnosis of serum markers of fibrosis, the components of the extracellular matrix involved in the process of baked fibrinogenesis, in particular, the imbalance of collagenase and its inhibitors, as well as tissue protease inhibitors, are used as the latter.

Новая техническая задача - повышение точности и информативности способа, расширение области его применения.A new technical task is to increase the accuracy and information content of the method, expanding its scope.

Поставленную задачу решают новым способом диагностики цирроза печени, заключающимся в обследовании пациента с проведением биохимического исследования крови, причем в сыворотке крови определяют активность коллагеназы, активность ингибитора коллагеназы и протеазы, и при увеличении активности коллагеназы до 4 мкмоль/(л·ч) и выше, снижении активности ингибитора коллагеназы до 1,9 ИЕ/мл и ниже и снижении активности протеазного ингибитора до 9 ИЕ/мл и ниже диагностируют цирроз печени.The problem is solved by a new method for the diagnosis of liver cirrhosis, which consists in examining a patient with a biochemical blood test, and the activity of collagenase, the activity of a collagenase inhibitor and protease are determined in blood serum, and with an increase in collagenase activity to 4 μmol / (l · h) and higher, a decrease in the activity of the collagenase inhibitor to 1.9 IU / ml and lower and a decrease in the activity of the protease inhibitor to 9 IU / ml and lower are diagnosed with cirrhosis.

Способ осуществляют следующим образомThe method is as follows

В сыворотке крови пациента определяют активности коллагеназы, ингибитора коллагеназы и протеазы и при увеличении активности коллагеназы до 4 мкмоль/(л·ч) и выше, снижении активности ингибитора коллагеназы до 1,9 ИЕ/мл и ниже и снижении активности протеазного ингибитора до 9 ИЕ/мл и ниже диагностируют цирроз печени.The activity of collagenase, a collagenase inhibitor and a protease is determined in the patient’s blood serum and with an increase in collagenase activity to 4 μmol / (l · h) and higher, a decrease in the activity of a collagenase inhibitor to 1.9 IU / ml and lower, and a decrease in the activity of the protease inhibitor to 9 IU / ml and below diagnose cirrhosis.

Предлагаемые критерии подобраны на основании анализа данных обследования 60 больных хроническим гепатитов различных стадий хронизации и 20 больных циррозом печени. Этиология заболевания - вирусная (вирус С, В, В+С). Всем больным проводились общие клинические методы обследования и пункционная печени по Менгини с получением биоптата с последующим морфологическим исследованием и определением гистологического индекса активности и индекса стадии хронизации (индекса фиброза) и одновременно определяли активность в сыворотке крови коллагензы [2], активности ингибиторов коллагеназы и протеазного ингибитора [3].The proposed criteria are selected based on an analysis of the survey data of 60 patients with chronic hepatitis of various stages of chronicity and 20 patients with cirrhosis. The etiology of the disease is viral (virus C, B, B + C). All patients underwent general clinical examination methods and a Mengini liver puncture method to obtain a biopsy specimen followed by morphological examination and determination of a histological activity index and a chronic stage index (fibrosis index) and simultaneously determined the activity of collagenase in blood serum [2], the activity of collagenase inhibitors and a protease inhibitor [3].

В группе больных с отсутствием фиброза активность коллагеназы в сыворотке крови была не выше 1,87 мкмоль/л·ч, у больных циррозом печени - 4 мкмоль/л·ч и выше, что позволяло рассматривать нарастание активности коллагеназы как активацию системы коллагенолиза в ответ на усиление синтеза коллагена [4]; при циррозе печени активность ингибитора коллагеназы в сыворотке крови с отсутствием фиброза была не ниже 3,8 ИЕ/мл, а при наличии цирроза этот показатель снижался до 1,9 ИЕ/мл и ниже; активность протеазного ингибитора при отсутствии фиброза была не ниже 26,4 ИЕ/мл, а у больных циррозом печени она снижалась до 9,0 ИЕ/мл и ниже.In the group of patients with no fibrosis, serum collagenase activity was not higher than 1.87 μmol / l · h, in patients with cirrhosis - 4 μmol / l · h and higher, which allowed us to consider the increase in collagenase activity as activation of the collagenolysis system in response to increased collagen synthesis [4]; with cirrhosis of the liver, the activity of a collagenase inhibitor in the blood serum with no fibrosis was not lower than 3.8 IU / ml, and in the presence of cirrhosis this indicator decreased to 1.9 IU / ml and lower; the activity of the protease inhibitor in the absence of fibrosis was not lower than 26.4 IE / ml, and in patients with cirrhosis it decreased to 9.0 IE / ml and lower.

При циррозе печени нарастала активность коллагеназы в 3 и более раз (4 мкмоль/(л·ч) и выше), снижается активность ингибитора коллагеназы в 2 раза (1,9 ИЕ/мл и ниже) и снижается активность протеазного ингибитора, отражающая снижение белково-синтетической функции печени, в 3 раза (9 ИЕ/мл и ниже).With liver cirrhosis, collagenase activity increased by 3 or more times (4 μmol / (l · h) and above), the activity of a collagenase inhibitor decreased by 2 times (1.9 IU / ml and below), and the activity of the protease inhibitor, reflecting a decrease in protein -synthetic liver function, 3 times (9 IE / ml and below).

Пример 1. Больной П., 52 года, диагноз - цирроз печени, стадия А (по Чальз-Пью) в анамнезе в течение 10 лет определяется HBcorAgIgG, HBsAg, повышение трансаминаз умеренного характера в 1,5 раза, отмечается умеренная гепатомегалия, печень плотная с острым краем. Жалобы на общую слабость, утомляемость, при обследовании выявлено ПЦР к ДНК HBV, повышение активности трансаминаз в 2 раза. Проведено исследование согласно предлагаемому способу. В сыворотке крови - альбумин 38 г/л, протромбиновый индекс - 80, активность коллагеназы 4,4 мкмоль/л·ч, активность ингибитора коллагеназы 1,7 ИЕ/мл, активность протеазного ингибитора 8,5 ИЕ/мл. При гистологическом исследовании печени - цирроз печени в активной фазе.Example 1. Patient P., 52 years old, diagnosed with cirrhosis of the liver, stage A (according to Chals-Pugh) in the history of 10 years is determined by HBcorAgIgG, HBsAg, a 1.5-fold increase in transaminases, moderate hepatomegaly, a dense liver with a sharp edge. Complaints about general weakness, fatigue, examination revealed PCR for HBV DNA, a 2-fold increase in transaminase activity. A study according to the proposed method. In serum - albumin 38 g / l, prothrombin index - 80, collagenase activity 4.4 µmol / l · h, collagenase inhibitor activity 1.7 IU / ml, protease inhibitor activity 8.5 IU / ml. With a histological examination of the liver - cirrhosis of the liver in the active phase.

Пример 2. Больная Г., 56 лет в анамнезе частое донорство и гемотрансфузия по поводу маточного кровотечения 10 лет назад. Периодически повышение уровня аланинами-нотрансферазы, ухудшение самочувствия в последние 3 года. При обследовании в условиях гепатологического отделения отмечается положительная ПЦР к РНК HCV, активность трансаминаз была повышена в 1,5 раза, на УЗИ гепато и спленомегалия/. Проведено исследование согласно предлагаемому способу. В сыворотке крови содержание альбумина 35 г/л, протромбиновый индекс 78, активность коллагеназы - 4,6 мкмоль/л·ч, активность ингибитора коллагеназы 1,6 ИЕ/мл, активность протеазного ингибитора 8,3 ИЕ/мл. При гистологическом исследовании печени диагностирован цирроз печени активная фаза.Example 2. Patient G., 56 years old with a history of frequent donation and blood transfusion due to uterine bleeding 10 years ago. Periodically, an increase in the level of alanine-notransferase, a deterioration in well-being in the last 3 years. Examination under conditions of the hepatological department showed a positive PCR for HCV RNA, the activity of transaminases was increased by 1.5 times, on ultrasound hepato and splenomegaly /. A study according to the proposed method. The serum albumin content is 35 g / l, the prothrombin index is 78, the collagenase activity is 4.6 μmol / l · h, the activity of the collagenase inhibitor is 1.6 IE / ml, the activity of the protease inhibitor is 8.3 IE / ml. An histological examination of the liver diagnosed cirrhosis of the liver as the active phase.

Пример 3. Больной Ц., 41 год, в анамнезе в течение 10 лет применение внутривенного введения наркотиков (опийная наркомания). Периодически повышение трансаминаз не более чем в 2 раза в крови в течение этого времени положительная ПЦР к РНК HCV. Проведено исследование согласно предлагаемому способу. В сыворотке крови при поступлении отмечалось снижение альбуминов до 33 г/л, протромбиновый индекс 78, активность коллагеназы 4,8 мкмоль/л·ч, активность ингибитора коллагеназы 1,7 ИЕ/мл, активность протеазного ингибитора 8,1 ИЕ/мл. Проведение пункционной биопсии выявило цирроз печени умеренной степени активности.Example 3. Patient C., 41 years old, a history of 10 years of intravenous drug use (opium addiction). Periodically, an increase in transaminases is not more than 2 times in the blood during this time, positive PCR to HCV RNA. A study according to the proposed method. In admission, there was a decrease in albumin to 33 g / l, prothrombin index 78, collagenase activity 4.8 μmol / l · h, collagenase inhibitor activity 1.7 IU / ml, protease inhibitor activity 8.1 IU / ml. A puncture biopsy revealed moderate cirrhosis of the liver.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет провести неинвазивное обследование с определением биохимических показателей сыворотки крови на активность коллагеназ, активность ингибиторов коллагеназы и протеазы.Thus, the proposed method allows a non-invasive examination to determine the biochemical parameters of blood serum on the activity of collagenases, the activity of inhibitors of collagenase and protease.

Применение предложенного неинвазивного метода исследования позволяет диагностировать цирроз печени, т.е. оценить структуру печени, а при динамическом наблюдении без пункционной биопсии печени оценить результаты лечения, выражающиеся в нарастании цирротических изменений, либо в стабилизации показателей.Application of the proposed non-invasive research method allows to diagnose cirrhosis of the liver, i.e. evaluate the structure of the liver, and during dynamic observation without a puncture biopsy of the liver, evaluate the treatment results, expressed in an increase in cirrhotic changes, or in stabilization of indicators.

Источники информацииInformation sources

1. Дунаевский О.А. Вирусные гепатиты и дифференциальная диагностика заболеваний печени. - Тверь, 1993. - 263 с.1. Dunaevsky O.A. Viral hepatitis and differential diagnosis of liver diseases. - Tver, 1993 .-- 263 p.

2. Шараев И.Н., Пишков В.Н., Зворыгина Н.Г. Определение коллагеновой активности плазмы крови // Лабораторное дело. - 1987. - №1. - С.60-62.2. Sharaev I.N., Pishkov V.N., Zvorygina N.G. Determination of collagen activity of blood plasma // Laboratory. - 1987. - No. 1. - S.60-62.

3. Нарткова В.Ф., Пасхина Т.С. Унифицированный метод определения активности α₂-макроглобулин в сыворотке (плазме) крови человека // Вопросы медицинской химии. - 1979. - Т.25, №4. - С.494-499.3. Nartkova V.F., Paschina T.S. Unified method for determining the activity of α ₂ -macroglobulin in human serum (plasma) // Questions of medical chemistry. - 1979. - T. 25, No. 4. - S. 494-499.

4. Логинов А.С., Блок Ю.Е. Хронические гепатиты и циррозы печени. - Медицина, 1987.4. Loginov A.S., Block Yu.E. Chronic hepatitis and cirrhosis of the liver. - Medicine, 1987.

5. Патент №2167424 Способ диагностики хронических заболеваний печени. Автор Макаров В.К.5. Patent No. 2164424 A method for the diagnosis of chronic liver diseases. Author Makarov V.K.

6. Desmetit V., Gerber M., et al. Классификация хронического гепатита, диагностика, определение тяжести и тяжести течения // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопрактологии. - 1995. - №2. - С.38-45.6. Desmetit V., Gerber M., et al. Classification of chronic hepatitis, diagnosis, determination of the severity and severity of the course // Russian Journal of Gastroenterology, Hepatology and Colopractology. - 1995. - No. 2. - S. 38-45.

Claims

A method for the diagnosis of liver cirrhosis, which consists in examining a patient and conducting a biochemical blood test, characterized in that the activity of collagenase, a collagenase inhibitor and protease is determined in blood serum and with an increase in collagenase activity to 4 μmol / (l · h) and higher, a decrease in inhibitor activity collagenase up to 1.9 IU / ml and lower and a decrease in the activity of the protease inhibitor to 9 IU / ml and lower diagnose cirrhosis.