RU2271819C1 - Биотрансплантат, способ его получения (варианты) и способ лечения алопеции - Google Patents
Биотрансплантат, способ его получения (варианты) и способ лечения алопеции Download PDFInfo
- Publication number
- RU2271819C1 RU2271819C1 RU2004125092/15A RU2004125092A RU2271819C1 RU 2271819 C1 RU2271819 C1 RU 2271819C1 RU 2004125092/15 A RU2004125092/15 A RU 2004125092/15A RU 2004125092 A RU2004125092 A RU 2004125092A RU 2271819 C1 RU2271819 C1 RU 2271819C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- alopecia
- biograft
- cells
- culture
- treatment
- Prior art date
Links
Landscapes
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и биофармакологии. Биотрансплантат для лечения различных видов алопеции содержит культуру генетически немодифицированных мезенхимальных клеток (МСК), фибробластов, в том числе фибробластов дермального сосочка волосяного фолликула, эпителиальных клеток, в том числе полученных из стволовой ниши волосяного фолликула. Биотрансплантат предназначен для внутрикожного введения. Способ лечения алопеции характеризуется тем, что пациенту в условиях процедурного кабинета внутрикожно микропапульным способом вводят биотрансплантат, содержащий от 10 до 100 млн. клеток. Биотрансплантат вводится в физиологическом растворе в концентрации от 1 до 10 млн. на 1 мл. Общее количество трансплантата от 1 до 10 мл в зависимости от площади поражения и формы алопеции. Изобретение обеспечивает высокую воспроизводимость результатов лечения. 5 н. и 7 з.п. ф-лы.
Description
Изобретение касается получения культур генетически немодифицированных мезенхимальных стволовых клеток (МСК), фибробластов, в том числе клеток дермального сосочка волосяного фолликула, эпителиальных клеток, в том числе полученных из стволовой ниши волосяного фолликула, и способа лечения алопеции.
Алопеция (облысение) - это патологическое выпадение волос. Различают рубцовую алопецию, обусловленную разрушением волосяных фолликулов вследствие воспаления, атрофии кожи или рубцевания, и нерубцовую алопецию, протекающую без предшествующего поражения кожи. К нерубцовой алопеции относят очаговую алопецию, андрогенетическую алопецию, диффузную алопецию [Адаскевич В.П., Мяделец О.Д., Тихоновская И.В. 2000].
Очаговая алопеция - хронический дерматоз, характеризующийся патологическим выпадением волос, обусловленным различными воздействиями на волосяной фолликул и клинически проявляющийся формированием очагов с полным отсутствием волос на волосистой части головы, области бороды, бровей, ресниц и туловища. В последнее время большинство авторов считает, что в развитии алопеции ведущую роль играют нарушения иммунной системы. Применение местных раздражающих веществ, способных вызвать явления, аналогичные аллергическому дерматиту, способствуют возобновлению роста волос за счет того, что восстанавливается активность лимфоцитов (например, при использовании динитрохлорбензола). При исследовании биоптатов при очаговой алопеции обнаруживают перифолликулярный инфильтрат, нарушающий трофику волосяного фолликула, методом прямой иммунофлюорисценции выявлены отложения иммунных комплексов (Ig G, Ig М) и С3 комплемента в нижней части волосяного фолликула [Цветкова Г.М. и соавт., 1999].
Андрогенетическая алопеция - это прогрессирующее облысение, вызванное действием андрогенов на волосяные фолликулы и возникающее у людей с наследственной предрасположенностью. Заболевание начинается в любом возрасте, после окончания пубертатного периода, чаще после 40-50 лет. Мужчины болеют значительно чаще, андрогенетическая алопеция составляет почти 95% всех случаев выпадения волос у мужчин. Наследование у мужчин - полигенное или аутосомно-доминантное, у женщин - аутосомно-рецессивное. В основе возникновения андрогенетической алопеции лежит действие андрогенов на волосяные фолликулы, а также унаследованные особенности волосяных фолликулов. Андрогенетическая алопеция вызывается несколькими причинами: избыточное содержание дигидротестостерона (ДГТ) - мужского полового гормона; повышенная чувствительность волосяных фолликулов к ДГТ; повышенная активность фермента 5-α-редуктазы, которая превращает тестостерон в ДГТ, сниженное содержание ароматазы, конкурентно взаимодействующей с 5-α-редуктазой. В тестостерон-чувствительных волосяных фолликулах под воздействием ДГТ спазмируется капиллярная сеть дермального сосочка, в результате чего волос преждевременно входит в фазу покоя (телогена). В дальнейшем, волосяные фолликулы миниатюризируются, атрофируются, волосы теряют структуру, становятся тонкими, пушковыми, затем рост волос прекращается, наступает облысение.
К традиционным методам лечения алопеции относят применение препаратов, улучшающих микроциркуляцию, препараты меди, цинка, железа, биогенные стимуляторы, ноотропные и психотропные препараты, гормональную, иммуносупрессивную и раздражающую терапию, акупунктуру и физиотерапевтические методы. Несмотря на разнообразие представленных методов, необходимо отметить, что ни один из них не обладает большим процентом излечиваемости, терапевтический эффект носит, как правило, временный характер.
В настоящее время внимание многих исследователей обращает возможность применения заместительной клеточной терапии при алопеции. Известны случаи, когда алопеция спонтанно разрешалась после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток [Feher О, et al., 2002]. После аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток по поводу хронического миелолейкоза, диагностированного 5 месяцев назад, у пациента, страдающего около 12 лет общим облысением (alopecia universalis), начался рост волос, и за 2 года наблюдения процесс стабилизировался.
Проводимые эксперименты по получению роста волоса и формированию волосяного фолликула de novo позволяют говорить о возможности восстановления роста волоса введением фибробластов дермального сосочка внутрикожно при условии сохраненной стволовой ниши волоса и в случае разрушенной, поврежденной стволовой ниши волоса - о возможности восстановления волосяного фолликула внесением клеток стволовой ниши волоса и фибробластов дермального сосочка [Reynolds AJ, Jahoda CA,. 1992; Jahoda CA, Oliver RF, Reynolds AJ., 2001, Ferraris C, Chevalier G, Jahoda CA., 2000].
Задачей настоящего изобретения является получение гомогенных культур немодифицированных мезенхимальных клеток (МСК), фибробластов, в том числе фибробластов дермального сосочка волосяного фолликула, эпителиальных клеток, в том числе полученных из стволовой ниши волосяного фолликула, для лечения алопеции различного генеза.
Для решения поставленной задачи предложена группа изобретений, объединенных единым изобретательским замыслом.
Предложен биотрансплантат для лечения алопеции, содержащий суспензию культуры фибробластов, в том числе фибробластов дермального сосочка волосяного фолликула, и эпителиальных клеток, полученную из кожи эмбрионов на 5-8 неделях гестации или кожи взрослого человека, полученной в результате пластических операций, биопсий, липоаспиратов.
Биотрансплантат содержит свежеприготовленную культуру.
Предложен способ получения биотрансплантата для лечения алопеции, заключающийся в том, что кожу отмывают в среде Хэнкса, содержащей антибиотик и антимикотик, измельчают, далее кожу или липоаспират ферментативно дезагрегируют в 0,25% растворе трипсина в течение 40 минут в условиях CO2 при температуре 37°С, полученную суспензию клеток разводят солевым раствором Хэнкса в соотношении 1:1, центрифугируют при 1000 об./мин в течение 5 минут и ресуспендируют в ростовой среде DMEM/F12, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 2 мМ глутамина, затем суспензию высевают при плотности посева первичной клеточной суспензии 500-1000 тысяч клеток на 1 см2 и культивируют до формирования конфлюентного монослоя.
Предложен также биотрансплантат для лечения алопеции, содержащий мезенхимальные стволовые клетки (МСК), полученные из фетального, донорского или аутологичного материала, при этом ткань дезагрегируют, полученную клеточную суспензию ресуспендируют и культивируют на ростовой среде, содержащей трансферин, инсулин, фактор роста фибробластов и гепарин до накопления в культуре клеток зрелой стромы.
В качестве фетального материала используют: костный мозг, тимус, печень или жировую ткань эмбрионов человека 1-го триместра беременности.
В качестве донорского аутологичного материала используют: костный мозг, тимус, печень или жировую ткань.
Биотрансплантат содержит свежеприготовленную культуру.
Биотрансплантат содержит клеточную культуру, криоконсервированную с использованием в качестве криопротектора диметилсульфоксида.
Предложен также способ получения биотрансплантата для лечения алопеции, заключающийся в том, что мезенхимальные стволовые клетки (МСК), полученные из фетального, донорского или аутологичного материала ферментативно дезагрегируют, полученную клеточную суспензию ресуспендируют в ростовой среде DMEM/F12, содержащей 15% эмбриональной телячьей сыворотки и 2 мМ глутамина, далее высевают при плотности посева 1-20 млн мононуклеарных клеток на 1 см2 и инкубируют при 37°С в атмосфере 5% CO2, по достижении культурой 50% конфлуентности монослой трипсинизируют и пересевают с плотностью 10-30 клеток на 1 см2 на ростовую среду, содержащую 10 мкг/мл трансферрина, 1 мкг/мл инсулина, 10 нг/мл фактора роста фибробластов - 2 и 8 ЕД/мл гепарина и с увеличением посевной дозы культивирование ведут до накопления в культуре зрелой стромы.
Предложен способ лечения алопеции, заключающийся в том, что пациенту внутрикожно, микропапульным способом, вводят биотрасплантат по п.1 и/или по п.4, содержащий от 10 до 100 млн. клеток, при этом биотрансплантат вводят в физиологическом растворе в концентрации от 1 до 10 млн. на 1 мл, при общем количестве трансплантата от 1 до 10 мл, в зависимости от площади поражения и формы алопеции и введение осуществляют в очаге облысения или по всей поверхности волосистой части головы, в случае тотальной или диффузной алопеции.
Эпителиальные клетки кожи (кератиноциты) получают из кожи эмбрионов на сроках I-II триместра беременности; кожи взрослого человека, полученных в результате пластических операций или биопсий. Кожу с содержащимися в ней волосяными фолликулами отмывают в среде Хэнкса, содержащей антибиотик и антимикотик, измельчают и ферментативно дезагрегируют в 0,25% растворе диспазы в течение 40 минут в условиях CO2 инкубатора при температуре 37°С. Из них выделяют эпителий и фолликулы, разводят 1:1 солевым раствором Хэнкса, центрифугируют в режиме 1000 × об/мин 5 минут и ресуспендируют в ростовой среде 199 и помещают в пластмассовые покрытые коллагеном или гидрофильные чашки из расчета не менее 70000-100000 на 1 см2. Сменяют среду каждые 3 дня до формирования конфлюентного монослоя.
Фибробласты получают из кожи фетусов 1-2 триместра беременности, кожи взрослого человека, полученной в результате пластических операций или биопсий, липоаспиратов. Кожу отмывают в среде Хэнкса, содержащей антибиотик и антимикотик, измельчают и ферментативно дезагрегируют в 0,25% растворе трипсина в течение 40 минут в условиях СО2 инкубатора при температуре 37°С. Липоаспират ферментативно дезагрегируют аналогично. Суспензию клеток разводят 1:1 солевым раствором Хэнкса, центрифугируют в режиме 1000 × об./мин 5 минут и ресуспендируют в ростовой среде DMEM/F12, содержащей 10% эмбриональной телячей сыворотки, 2 мМ глутамина. Суспензию высевают на пластиковые чашки Петри с диаметром 100 мм. Плотность посева первичной клеточной суспензии составляет 500-1000 тысяч клеток на 1 см2.
Предложен способ получения биотрансплантата для алопеции, заключающийся в том, что мезенхимальные стволовые клетки (МСК), полученные из фетального, донорского или аутологичного материала ферментативно дезагрегируют, полученную клеточную суспензию ресуспендируют в ростовой среде DMEM/F12, содержащей 15% эмбриональной телячьей сыворотки и 2 мМ глутамина, далее высевают при плотности посева 1-20 млн. мононуклеарных клеток на 1 см2 и инкубируют при 37°С в атмосфере 5% CO2, по достижении культурой 50% конфлюентности монослой трипсинизируют и пересевают с плотностью 10-30 клеток на 1 см2 на ростовую среду, содержащую 10 мкг/мл трансферрина, 1 мкг/мл инсулина, 10 нг/мл фактора роста фибробластов - 2 и 8 ЕД/мл гепарина и с увеличением посевной дозы культивирование ведут до накопления в культуре зрелой стромы.
В качестве биотрансплантата используют свежеполученную клеточную культуру или после ее криоконсервировации. В качестве криопротектора используют 7% диметилсульфоксид.
Экспериментально подобранные условия, объединяющие критерии отбора исходного биоматериала и режим культивирования, являются оптимальными для достижения следующих результатов:
Система последовательной ферментативной дезагрегации исходной ткани позволяет получать максимальное количество жизнеспособных клеток одинакового фенотипа с незначительной примесью гетеротопных клеток.
Режим культивирования и селективные культуральные среды позволяют максимально наращивать количество аггрекан- и коллаген II-экспрессирующих клеток.
Режим культивирования и селективные культуральные среды позволяют получать гомогенную клеточную культуру с содержанием аггрекан- и коллаген II-экспрессирующих клеток не менее 80%.
Режим культивирования и селективные культуральные среды позволяют при многократном пассировании максимально наращивать гомогенную клеточную культуру недифференцированных клеток.
Режим культивирования и селективные культуральные среды позволяют сохранить плюрипотентность клеточных культур.
Режим культивирования и селективные культуральные среды позволяют получить большое количество клеток для трансплантации (серию), что обеспечивает воспроизводимость результатов лечения.
Предложенный способ лечения алопеции различного генеза заключается в том, что вышеуказанный биотрансплантат вводится микропапульным способом в кожу головы.
Суммарный объем вводимых клеток может варьировать от 10 до 100 млн., в зависимости от стадии и этиологии алопеции. Возможно использование как биотрансплантата, содержащего монокультуру, так и различных вышеперечисленных культур в различных соотношениях.
Биотрансплантаты, содержащие предложенные культуры клеток с последующей ферментативной дезагрегацией тканей и режима культивирования, обеспечивают большое количество гомогенных клеток для трансплантациии и высокую воспроизводимость результатов лечения.
Claims (12)
1. Биотрансплантат для лечения алопеции, характеризующийся тем, что он содержит суспензию культуры фибробластов, в том числе фибробластов дермального сосочка волосяного фолликула и эпителиальных клеток, полученную из кожи эмбрионов на 5-8 неделях гестации или кожи взрослого человека, полученной в результате пластических операций, биопсий, липоаспиратов.
2. Биотрансплантат по п.1, содержит свежеприготовленную культуру.
3. Способ получения биотрансплантата для лечения алопеции, характеризующийся тем, что кожу отмывают в среде Хэнкса, содержащей антибиотик и антимикотик, измельчают, далее кожу или липоаспират ферментативно дезагрегируют в 0,25%-ном растворе трипсина в течение 40 мин в условиях CO2 при температуре 37°С, полученную суспензию клеток разводят солевым раствором Хэнкса в соотношении 1:1, центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин и ресуспендируют в ростовой среде DMEM/F12, содержащей 10% эмбриональной телячей сыворотки и 2 мМ глутамина, затем суспензию высевают при плотности посева первичной клеточной суспензии 500-1000 тысяч клеток на 1 см2 и культивируют до формирования конфлюентного монослоя.
4. Биотрансплантат для лечения алопеции, характеризующийся тем, что он содержит мезенхимальные стволовые клетки (МСК), полученные из фетального, донорского или аутологичного материала, при этом ткань дезагрегируют, полученную клеточную суспензию ресуспендируют и культивируют на ростовой среде, содержащей трансферрин, инсулин, фактор роста фибробластов и гепарин, до накопления в культуре клеток зрелой стромы.
5. Биотрансплантат по п.4, в качестве фетального материала используют костный мозг, тимус, печень или жировую ткань эмбрионов человека 1-го триместра беременности.
6. Биотрансплантат по п.4, в качестве донорского аутологичного материала используют костный мозг, тимус, печень или жировую ткань.
7. Биотрансплантат по п.4 содержит свежеприготовленную культуру.
8. Биотрансплантат по п.4 содержит клеточную культуру криоконсервированную с использованием в качестве криопротектора диметилсульфоксида.
9. Способ получения биотрансплантата для лечения алопеции, характеризующийся тем, что мезенхимальные стволовые клетки (МСК), полученные из фетального, донорского или аутологичного материала, ферментативно дезагрегируют, полученную клеточную суспензию ресуспендируют в ростовой среде DMEM/F12, содержащей 15% эмбриональной телячьей сыворотки и 2 мМ глутамина, далее высевают при плотности посева 1-20 млн. мононуклеарных клеток на 1 см2 и инкубируют при 37°С в атмосфере 5% CO2, по достижении культурой 50%-ной конфлуентности монослой трипсинизируют и пересевают с плотностью 10-30 клеток на 1 см2 на ростовую среду, содержащую 10 мкг/мл трансферрина, 1 мкг/мл инсулина, 10 нг/мл фактора роста фибробластов - 2 и 8 ЕД/мл гепарина, и с увеличением посевной дозы культивирование ведут до накопления в культуре зрелой стромы.
10. Способ лечения алопеции, характеризующийся тем, что пациенту внутрикожно, микропапульным способом вводят биотрансплантат по п.1 и/или 4, содержащий от 10 до 100 млн. клеток.
11. Способ лечения по п.10, характеризующийся тем, что биотрансплантат вводят в физиологическом растворе в концентрации от 1 до 10 млн на 1 мл при общем количестве трансплантата от 1 до 10 мл в зависимости от площади поражения и формы алопеции.
12. Способ лечения по п.10, характеризующийся тем, что введение осуществляют в очаг облысения или по всей поверхности волосистой части головы в случае тотальной или диффузной алопеции.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2004125092/15A RU2271819C1 (ru) | 2004-08-18 | 2004-08-18 | Биотрансплантат, способ его получения (варианты) и способ лечения алопеции |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2004125092/15A RU2271819C1 (ru) | 2004-08-18 | 2004-08-18 | Биотрансплантат, способ его получения (варианты) и способ лечения алопеции |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2271819C1 true RU2271819C1 (ru) | 2006-03-20 |
Family
ID=36117171
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2004125092/15A RU2271819C1 (ru) | 2004-08-18 | 2004-08-18 | Биотрансплантат, способ его получения (варианты) и способ лечения алопеции |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2271819C1 (ru) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2517087C2 (ru) * | 2011-06-30 | 2014-05-27 | Алексей Валентинович Одинцов | Метод лечения андрогенной алопеции: местное нанесение на очаги облысения гепарина (в составе препаратов для местного лечения) |
RU2631642C1 (ru) * | 2016-11-29 | 2017-09-25 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная компания Стемма" | Способ лечения нерубцовой алопеции |
RU2681854C1 (ru) * | 2018-10-02 | 2019-03-13 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная компания Стемма" | Способ лечения нерубцовой алопеции |
RU2695364C1 (ru) * | 2018-11-08 | 2019-07-23 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная компания Стемма" | Способ лечения нерубцовой алопеции |
-
2004
- 2004-08-18 RU RU2004125092/15A patent/RU2271819C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Reynolds AJ, Jahoda CA, Development, 1992, Jun, 115(2): 587-93. * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2517087C2 (ru) * | 2011-06-30 | 2014-05-27 | Алексей Валентинович Одинцов | Метод лечения андрогенной алопеции: местное нанесение на очаги облысения гепарина (в составе препаратов для местного лечения) |
RU2631642C1 (ru) * | 2016-11-29 | 2017-09-25 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная компания Стемма" | Способ лечения нерубцовой алопеции |
RU2681854C1 (ru) * | 2018-10-02 | 2019-03-13 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная компания Стемма" | Способ лечения нерубцовой алопеции |
RU2695364C1 (ru) * | 2018-11-08 | 2019-07-23 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная компания Стемма" | Способ лечения нерубцовой алопеции |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20210220256A1 (en) | Hair growth promoting capacity of conditioned media of stimulated stem cells and use thereof | |
EP3146973B1 (en) | Hair growth-promoting function of small-sized stem cells and use thereof | |
JP2011525370A (ja) | ヒト多能性幹細胞からヒト代用皮膚を調製するための方法 | |
JP2011525370A5 (ru) | ||
WO2008002064A1 (en) | Soft tissue filler composition for injection and preparation method thereof | |
US20120189585A1 (en) | Method and composition for restoration of age-related tissue loss in the face or selected areas of the body | |
US10398736B2 (en) | Compositions and methods for producing reconstituted skin | |
CN111956668B (zh) | 一种皮肤再生修复细胞组合物及制备方法 | |
JP6185913B2 (ja) | ヒトの皮膚真皮由来成体幹細胞 | |
KR20100097574A (ko) | 발모 유도 세포 조성물 | |
KR101749218B1 (ko) | 양모 효과를 가지는 인간 지방유래 줄기세포의 조건 배지 및 이의 용도 | |
KR101425653B1 (ko) | 인간 지방조직 유래 다분화능 줄기세포 및 모낭세포를함유하는 세포치료제 | |
CN113041208A (zh) | 胚胎干细胞外泌体在制备美白及抗衰老药物或者化妆品中的用途 | |
RU2271819C1 (ru) | Биотрансплантат, способ его получения (варианты) и способ лечения алопеции | |
KR101032271B1 (ko) | 피부세포 재생용 조성물, 그 제조 방법, 피부세포 재생 방법 및 화장료 조성물 | |
EP4257674A1 (en) | Method for isolating and culturing cord blood stem cells expressing gdf-3 at high level, and use of gdf-3 | |
KR101943203B1 (ko) | 지방유래줄기세포로부터 모유두 세포로의 분화방법 및 이의 용도 | |
Persinal-Medina et al. | Xeno-free approach for the expansion of human adipose derived mesenchymal stem cells for ocular therapies | |
KR100939361B1 (ko) | 여성의 소음순 유래 성체세포로부터 리프로그래밍의 과정을통해 혈관 세포로 분화할 수 있는 혈관 줄기세포를제조하는 방법 및 상기 분화된 세포의 세포 치료제로서의용도 | |
US20090148416A1 (en) | Angiogenically induced transplants and methods for their use and manufacture | |
US20120039856A1 (en) | Composition for treating baldness with stem cell derived from umbilical cord blood | |
CN111939176B (zh) | 一种含有脂肪干细胞的皮肤损伤修复剂及制备方法 | |
WO2021045238A1 (ja) | 皮膚由来骨格筋細胞の調製方法 | |
KR100957233B1 (ko) | 여성의 소음순 유래 성체세포로부터 리프로그래밍의 과정을통해 다양한 신경줄기세포로 분화할 수 있는신경줄기세포를 제조하는 방법 및 상기 분화된 세포의 세포치료제로서의 용도 | |
CN115820555A (zh) | 一种维持体外连续传代的间充质干细胞干性的组合物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150819 |