RU2255763C2 - Вакцина против сальмонеллеза свиней - Google Patents
Вакцина против сальмонеллеза свиней Download PDFInfo
- Publication number
- RU2255763C2 RU2255763C2 RU2003116802/15A RU2003116802A RU2255763C2 RU 2255763 C2 RU2255763 C2 RU 2255763C2 RU 2003116802/15 A RU2003116802/15 A RU 2003116802/15A RU 2003116802 A RU2003116802 A RU 2003116802A RU 2255763 C2 RU2255763 C2 RU 2255763C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- vaccine
- salmonella choleraesuis
- vgnki
- dept
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к ветеринарии. Вакцина против сальмонеллеза свиней содержит суспензию клеток аттенуированного вакцинного штамма Salmonella choleraesuis ВГНКИ SC 230-ДЕП при следующем соотношении компонентов, об.%: Суспензия штамма Salmonella choleraesuis ВГНКИ SC 230-ДЕП с концентрацией 100-120 млрд. клеток в см3 42,0-55,0; сахароза 5,0-7,5; желатин 1,5-2,0; вода дистиллированная - остальное. Заболеваемость поросят, иммунизированных вакциной, в 2 раза ниже, а сохранность - на 8,6% выше по сравнению с теми же показателями для поросят, иммунизированных известной вакциной из штамма Salmonella choleraesuis ВГНКИ №9. Вакцина более экономична в производстве и имеет стабильные генетические маркеры. 5 табл.
Description
Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии, в частности к средствам специфической профилактики сальмонеллеза свиней.
Salmonella choleraesuis является широко распространенным возбудителем сальмонеллеза животных различных видов и в первую очередь свиней, а также одним из возбудителей пищевых токсикоинфекций человека.
Ущерб, наносимый Salmonella choleraesuis, обусловлен высокой смертностью поросят, широко распространенным носительством у взрослого поголовья, затратами на противоэпизоотические и лечебные мероприятия. Сложность борьбы с сальмонеллезом определяется быстрой адаптацией возбудителя как к антибиотикам, так и другим химиотерапевтическим препаратам. В этой связи на первое место в борьбе с сальмонеллезом выступает вакцинопрофилактика с применением вакцин из живых аттенуированных штаммов.
Известна вакцина против сальмонеллеза свиней из аттенуированного штамма Salmonella choleraesuis TS-177, который представляет собой "дикий" мутант, не имеющий генетических маркеров, кроме пониженной вирулентности [1].
Известна также вакцина против сальмонеллеза свиней из супрессорного ревертанта Salmonella choleraesuis ВГНКИ №9 [2]. Штамм Salmonella choleraesuis ВГНКИ №9 отличается от эпизоотических штаммов высокой частотой (до 50%) выделения стрептомицинзависимых мутантов, вырастающих на МПА с содержанием стрептомицина 300 мкг/см3, большая часть из которых остается вирулентной. Поэтому дифференцировать вакцинный штамм от эпизоотических весьма сложно из-за необходимости изучать большое количество мутантных клонов. Кроме того, штамм Salmonella choleraesuis ВГНКИ №9 получен в результате мутаций, которые замедлили скорость его размножения почти в два раза по сравнению с исходным штаммом. Это существенно увеличивает затраты при производстве вакцины на его основе.
Задача изобретения - создание вакцины против сальмонеллеза свиней на основе генетически маркированного аттенуированного штамма Salmonella choleraesuis, обладающего высокой скоростью роста, более выраженной иммуногенностью, низкой остаточной вирулентностью и стабильно сохраняющего эти свойства.
Поставленная задача решается получением вакцины, содержащей суспензию живых микробных клеток аттенуированного штамма Salmonella choleraesuis ВГНКИ SC 230-ДЕП, сахарозу, желатин и дистиллированную воду при следующем соотношении компонентов, об%:
Суспензия штамма Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП
с концентрацией 100-120 млрд. клеток в 1 см3 - 42,0-55,0
Сахароза - 5,0-7,5
Желатин - 1,5-2,0
Вода дистиллированная - остальное
Полученная вакцина в отличие от известных более эффективна в качестве средства специфической профилактики сальмонеллеза свиней, более экономична в производстве, имеет стабильные генетические маркеры.
Аттенуированный штамм Salmonella choleraesuis ВГНКИ SC 230-ДЕП получен методом инсерционного мутагенеза из вирулентного штамма Salmonella choleraesuis ВГНКИ №95.
Штамм Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП депонирован в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов и имеет регистрационный номер SC 230-ДЕП.
Штамм Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП характеризуется следующими признаками.
Морфология. Бактериальные клетки представляют собой мелкие грамотрицательные палочки длиной 1,0-1,5 мкм и шириной 0,1-0,3 мкм, подвижные с перитрихиально расположенными жгутиками, спор и капсул не образуют.
Культуральные признаки. Клетки штамма хорошо растут на простых питательных средах. При росте на плотной питательной среде (МПА, среда Хоттингера, питательный агар “Дифко”) при температуре 37°С за 20-24 ч вырастают колонии диаметром 1,0-1,5 мм в S-форме: прозрачные, круглые, гладкие, выпуклые. При росте в жидких питательных средах наблюдается равномерное помутнение среды, характерное для бактерий “гладкого” типа.
По характеру роста на питательных средах штамм не отличается от эпизоотических штаммов Salmonella choleraesuis.
Ферментативные свойства. Сбраживает с образованием кислоты и газа глюкозу, мальтозу, галактозу, маннит, сорбит, ксилозу, рамнозу, дульцит, цитрат натрия, глицерин; не сбраживает сахарозу, лактозу, арабинозу, инозит, не образует индол, не свертывает и не пептонизирует молоко, образует сероводород.
Антигенная структура - типичная для сальмонелл серовара Salmonella choleraesuis. Агглютинируется сальмонеллезными монорецепторными "O"-сыворотками: 6, 7 и "Н"-сыворотками специфической фазы - "с" и неспецифической фазы - 1, 5.
Генетические маркеры. Штамм устойчив к рифампицину, стрептомицину и триметоприму. Маркеры устойчивости стабильно сохраняются в условиях периодического культивирования штамма в жидкой среде (10 последовательных пересевов) и после трех пассажей через белых мышей.
Вирулентность. 50%-ная летальная доза (LD50) для белых мышей массой 18-20 г составляет 10 млн микробных клеток (при внутрибрюшинном заражении).
Иммуногенность. Однократная подкожная иммунизация белых мышей массой 16-18 г живой культурой штамма Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП (103-106 микробных клеток) профилактирует развитие инфекционного процесса после внутрибрюшинного заражения (через 21 день после иммунизации) культурой вирулентного штамма серовара Salmonella choleraesuis ВГНКИ №95 в дозе 100 LD50. Выживает от 80 до 100% иммунизированных мышей при 100%-ной гибели неиммунизированных животных. ЕД50=1,4×103 микробных клеток.
Морфологические изменения в органах иммунизированных животных характеризуются диффузионной и очаговой пролиферацией лимфоидных элементов (увеличение региональных и мезентериальных лимфоузлов) без некробиотических процессов в паренхиматозных органах. Бактерии штамма Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП сохраняются в организме мышей в течение 15-22 дней.
Основные свойства штамма Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП и вакцины, полученной на его основе, иллюстрируются следующими примерами.
Пример 1. Для получения аттенуированного штамма Salmonella choleraesuis используют вирулентный штамм Salmonella choleraesuis ВГНКИ №95. Штамм предварительно маркируют мутацией rif, обеспечивающей устойчивость к рифампицину. Селекцию Rifr - мутантов проводят на плотной питательной среде, содержащей 100 мкг/см3 рифампицина, высевая 2×109 микробных клеток культуры штамма Salmonella choleraesuis ВГНКИ №95.
Для проведения инсерционного мутагенеза используют транспозон Тn7, входящий в состав векторной плазмады с температурочувствительной репликацией ДНК pVD3::Tn7 (Тc Ар Km Sm Tp). Передачу плазмиды в реципиентный штамм Salmonella choleraesuis ВГНКИ №95-Rif осуществляют в конъюгационном скрещивании: E.coli JC 1553 (pVD3::Tn7) x Salmonella choleraesuis 95-Rifr. Отбирают трансконъюганты Salmonella choleraesuis 95-Rif (pVD3::Tn7) с фенотипом Rifr (определяется rif-мутацией штамма) Tcr Apr Kmr (маркеры плазмиды pVD3) Tpr Smr (маркеры транспозона Tn7) [3].
Для отбора инсерционных мутантов бактерии Salmonella choleraesuis 95-Rif (pVD3::Tn7), выращенные при температуре 31°С в L-бульоне, высевают на плотную питательную среду, содержащую стрептомицин (40 мкг/мл) или триметоприм (50 мкг/мл), и инкубируют при температуре 43°С. У выросших клонов проверяют наличие неселектируемых маркеров векторной плазмиды (Тc Km Ар) и отбирают варианты, содержащие только маркеры Tn7 (Sm Tp), то есть клоны с инсерциями Tn7. Оценивают вирулентность инсерционных мутантов в опытах по внутрибрюшинному заражению белых мышей и отбирают штаммы с пониженной вирулентностью. Штамм Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП выявлен при анализе 60 инсерционных мутантов вирулентного штамма Salmonella choleraesuis ВГНКИ №95.
Пример 2. Изучение стабильности генетических маркеров аттенуированного штамма Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП.
Исследуют сохранение маркеров устойчивости к стрептомицину (Sm) и триметоприму (Tp) транспозона Tn7, инсерция которого привела к аттенуации штамма SC 230, в условиях периодического культивирования этого штамма в L-бульоне (LB) и в тех же условиях с последующим заражением белых мышей и анализом выделенной из инфицированного организма культуры. В обоих случаях культуру штамма после завершения эксперимента клонируют на плотной питательной среде и определяют наличие маркеров Smr и Трr не менее чем у 50 клонов. Результаты экспериментов представлены в таблице 1.
Пример 3. Определение остаточной вирулентности аттенуированного штамма.
Белых мышей массой 18-20 г заражают внутрибрюшинно суспензией агаровой культуры Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП; заражающие дозы 105, 106, 107, 108 микробных клеток. Контрольную группу животных заражают культурой вирулентного штамма Salmonella choleraesuis ВГНКИ №95. За животными наблюдают 21 сутки. В этих условиях эксперимента LD50 Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП, рассчитанная по методу Кербера, колеблется от 5×106 до 5×107 клеток, LD50 штамма Salmonella choleraesuis ВГНКИ №95 - 10-100 клеток. Таким образом, остаточная вирулентность штамма Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП для белых мышей в 100000 раз ниже по сравнению с вирулентностью исходного штамма.
Пример 4. Протективные свойства аттенуированного штамма Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП определяют в экспериментах на белых мышах. Белым мышам массой 16-18 г подкожно вводят суспензию аттенуированного штамма в дозе 1×104 микробных клеток. Через 20 дней иммунизированных и неиммунизированных животных заражают 100 LD50 вирулентного штамма Salmonella choleraesuis ВГНКИ №95.
Сравнительные результаты трех опытов по определению протективных свойств аттенуированного штамма Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП представлены в таблице 2.
Пример 5. Способность аттенуированного штамма Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП профилактировать сальмонеллез свиней определяют на поросятах. Поросятам 20-25-дневного возраста внутримышечно вводят суспензию аттенуированного штамма в дозе 5×108 микробных клеток. Через 21 сутки иммунизированных и неиммунизированных животных внутрибрюшинно заражают культурой вирулентного штамма Salmonella choleraesuis ВГНКИ №95 в дозе 4×1010 микробных клеток. Результаты двух опытов представлены в таблице 3. Иммунизация поросят аттенуированным штаммом Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП предохраняет от гибели после заражения вирулентным штаммом 90% животных при 100%-ной гибели животных в контрольной группе.
Пример 6. Изготовление вакцины против сальмонеллеза из штамма Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП.
В реактор с бульоном Хоттингера (300 л) вносят матровую расплодку микробных клеток штамма из расчета 35 млн/см3. Центрифугируют при 15 тыс. об/мин в течение 60 минут. Бактериальную массу смешивают с желатино-сахарозовым стабилизатором в соотношении 1:2.
Вакцину расфасовывают в ампулы по 4 см3 и лиофилизируют.
Вакцина серии 1 имеет следующий состав, об %:
Суспензия штамма Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП
с концентрацией 100-120 млрд. клеток в 1 см3 - 55,0
Сахароза - 7,5
Желатин - 2,0
Вода дистиллированная - остальное
Вакцина серии 2 имеет следующий состав, об%:
Суспензия штамма Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП
с концентрацией 100-120 млрд. клеток в 1 см3 - 42,0
Сахароза - 5,0
Желатин - 1,5
Вода дистиллированная - остальное
Пример 7. Безвредность предложенной вакцины по величине переносимой дозы изучена на белых мышах, морских свинках и поросятах. Данные опытов суммированы в таблице 4.
Из данных, представленных в таблице 4, видно, что переносимая доза вакцины, не вызывающая гибели мышей, в 5×105 и 1,0×105 раз ниже минимальной смертельной дозы вирулентного штамма Salmonella choleraesuis ВГНКИ №95 соответственно при подкожном и пероральном заражении.
Пример 8. Способ профилактики сальмонеллеза свиней включает двукратное введение вакцины поросятам в возрасте 10-12 и 18-20 дней в дозе 500 млн микробных клеток.
Проведено испытание вакцин из штамма Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП и Salmonella choleraesuis ВГНКИ №9 для профилактики сальмонеллеза свиней.
Из данных, представленных в таблице 5, следует, что заболеваемость поросят, иммунизированных предложенной вакциной из штамма Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП, в 2 раза ниже, а сохранность на 8,6% выше по сравнению с теми же показателями для группы поросят, иммунизированных вакциной из штамма Salmonella choleraesuis ВГНКИ №9.
Источники информации
1. Ветеринарное законодательство. T.1.- M.: Колос, 1973.- С.554.
2. А.с. СССР №1577116, 1988 г.
3. Воложанцев Н.В., Светоч Э.А., Борзилов А.И. и др. Получение вакцинных штаммов сальмонелл с помощью инсерционного мутагенеза //Ветеринария - 1997, №9, с.20-24.
| Таблица 1 Стабильность наследования генетических маркеров в аттенуированном штамме Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП |
|||
| Условия культивирования | % клонов, содержащих маркер | Агглютинация сывороткой O7 | |
| Sm | Tр | ||
| 10 последовательных пересевов в LB | 100 | 100 | + |
| 10 пересевов в LB+3-кратный пассаж через белых мышей | 100 | 100 | + |
| Таблица 2 Протективные свойства штамма Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП в экспериментах на мышах |
||||
| Группа мышей | Опыт № | Количество мышей в опыте | Результаты заражения | |
| пали | живы | |||
| Иммунизированные | 1 | 20 | 1 | 19 |
| 3 | 20 | 4 | 16 | |
| 5 | 20 | 0 | 20 | |
| Итого | 60 | 5 | 55 | |
| Контрольные | 2 | 20 | 20 | 0 |
| 4 | 20 | 20 | 0 | |
| 6 | 20 | 20 | 0 | |
| Итого | 60 | 60 | 0 | |
| Таблица 3 Протективные свойства штамма Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП в экспериментах на поросятах |
||||
| Группа поросят | Опыт № | Количество поросят в опыте | Результаты заражения | |
| пали | живы | |||
| Иммунизированные | 1 | 5 | 1 | 4 |
| 3 | 5 | 0 | 5 | |
| Итого | 10 | 1 | 9 | |
| Контрольные | 2 | 5 | 5 | 0 |
| 4 | 5 | 5 | 0 | |
| Итого | 10 | 10 | 0 | |
| Таблица 4 Безвредность вакцины для лабораторных животных и поросят |
|||
| Животные | Способ введения вакцины | Переносимая доза (к-во микр. кл. вакцинного штамма) | Минимальная смертельная доза вирулентного штамма (к-во микр. кл.) |
| Белые мыши (масса 16-18 г) | Подкожно | 1,0×107 | 20 |
| Перорально | 1,0×1010 | 1,5×105 | |
| Морские свинки (масса 300-350г) Поросята (12-15 дневные) | Подкожно | 2,0×1010 | 1,0×109 |
| Перорально | 1,0×1011 | 1,0×1010 | |
| Таблица 5 Эффективность живых вакцин против сальмонеллеза свиней при применении предложенного способа профилактики сальмонеллеза свиней |
||||
| Вид вакцины | Взято в опыт голов | Заболело голов (%) | Пало голов (%) | Сохранность, % |
| Вакцина против сальмонеллеза свиней из штамма Salmonella choleraesuis SC 230-ДЕП | 670 | 31(4,6) | 19(2,8) | 92,5 |
| Сухая живая вакцина из штамма Salmonella choleraesuis №9 | 810 | 77(9,5) | 53(6,5) | 83,9 |
Claims (1)
- Вакцина против сальмонеллеза свиней, содержащая суспензию клеток вакцинного штамма, сахарозу, желатин и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что в качестве вакцинного штамма она содержит аттенуированный штамм Salmonella choleraesuis ВГНКИ SC 230-ДЕП при следующем соотношении компонентов, об.%:Суспензия штамма Salmonella choleraesuis ВГНКИ SC 230-ДЕП с концентрацией 100-120 млрд.клеток в 1 см3 42,0-55,0Сахароза 5,0-7,5Желатин 1,5-2,0Вода дистиллированная Остальное
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003116802/15A RU2255763C2 (ru) | 2003-06-04 | 2003-06-04 | Вакцина против сальмонеллеза свиней |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003116802/15A RU2255763C2 (ru) | 2003-06-04 | 2003-06-04 | Вакцина против сальмонеллеза свиней |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2003116802A RU2003116802A (ru) | 2004-12-20 |
| RU2255763C2 true RU2255763C2 (ru) | 2005-07-10 |
Family
ID=35838622
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2003116802/15A RU2255763C2 (ru) | 2003-06-04 | 2003-06-04 | Вакцина против сальмонеллеза свиней |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2255763C2 (ru) |
-
2003
- 2003-06-04 RU RU2003116802/15A patent/RU2255763C2/ru not_active IP Right Cessation
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Aragon et al. | Glässer's disease | |
| EP0555366B1 (en) | Bacterial attenuation method and vaccine | |
| US5580557A (en) | Live, avirulent salmonella choleraesuis vaccine used for inducing an immune response in animals | |
| US6656478B1 (en) | Cross-protective salmonella vaccines | |
| US8404253B2 (en) | Modified live (JMSO strain) Haemophilus parasuis vaccine | |
| KR20160095185A (ko) | 마이코플라즈마 보비스 백신 | |
| JP5745731B2 (ja) | サルモネラワクチン | |
| IE47175B1 (en) | Fowl cholera vaccine | |
| CN102140430B (zh) | 一种不含抗性标记的鼠伤寒沙门氏菌基因缺失突变菌株、疫苗及应用 | |
| JP2004337175A (ja) | 無毒性微生物及びその使用：サルモネラ | |
| CN112063561B (zh) | 猪链球菌3型疫苗株及其应用 | |
| CN103421731B (zh) | 一种副猪嗜血杆菌减毒沙门氏菌苗 | |
| KR100954175B1 (ko) | 조류 질병을 유발하는 신규한 박테리아 및 그로부터 유래된 백신 | |
| RU2255763C2 (ru) | Вакцина против сальмонеллеза свиней | |
| CN103421728A (zh) | 一种重组支气管败血波氏杆菌菌株、疫苗及应用 | |
| WO1993010815A1 (en) | Non-capsulated mutants of bacteria useful as vaccines | |
| Clarke et al. | Galactose epimeraseless mutants of Salmonella typhimurium as live vaccines for calves. | |
| US20020012672A1 (en) | Live vaccine against colibacillosis | |
| US9132183B2 (en) | Modified live (JMSO strain) Haemophilus parasuis vaccine | |
| RU2824493C1 (ru) | Штамм бактерии Actinobacillus pleuropneumoniae 8 серотипа, предназначенный для получения моно- и поливалентных иммуногенных композиций, направленных на специфическую профилактику актинобациллезной плевропневмонии свиней | |
| RU2030916C1 (ru) | Вакцина против сальмонеллеза кур и способ профилактики сальмонеллеза кур | |
| RU2521651C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ, Moraxella bovoculi "СХ-Ч6 N-ДЕП" ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМОВ И ВАКЦИН ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО КЕРАТОКОНЪЮКТИВИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | |
| RU2827226C1 (ru) | Штамм бактерий Actinobacillus pleuropneumoniae 2 серотипа, предназначенный для получения моно- и поливалентных иммуногенных композиций, направленных на специфическую профилактику актинобациллезной плевропневмонии свиней | |
| US3529056A (en) | Method of producing jowl abscess vaccine | |
| CN114854654B (zh) | 一种肠炎沙门氏菌活疫苗 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20070605 |