RU2238107C2 - Диагностика риска развития у субъекта атеросклероза или диабетической ретинопатии - Google Patents
Диагностика риска развития у субъекта атеросклероза или диабетической ретинопатии Download PDFInfo
- Publication number
- RU2238107C2 RU2238107C2 RU2001130755A RU2001130755A RU2238107C2 RU 2238107 C2 RU2238107 C2 RU 2238107C2 RU 2001130755 A RU2001130755 A RU 2001130755A RU 2001130755 A RU2001130755 A RU 2001130755A RU 2238107 C2 RU2238107 C2 RU 2238107C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- npy
- patient
- atherosclerosis
- sequence
- diabetic retinopathy
- Prior art date
Links
- 238000011161 development Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 title claims description 25
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 title claims description 22
- URPYMXQQVHTUDU-OFGSCBOVSA-N nucleopeptide y Chemical group C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 URPYMXQQVHTUDU-OFGSCBOVSA-N 0.000 claims abstract description 49
- 101710151321 Melanostatin Proteins 0.000 claims abstract description 47
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 41
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 19
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 10
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 8
- 238000010171 animal model Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 102100028427 Pro-neuropeptide Y Human genes 0.000 claims abstract 10
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 50
- 108010087344 preproneuropeptide Y Proteins 0.000 claims description 38
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 28
- 101150035703 NPY gene Proteins 0.000 claims description 21
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 18
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 18
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 13
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 8
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 6
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 claims description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 6
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 6
- 101500025005 Homo sapiens Neuropeptide Y Proteins 0.000 claims description 4
- 101500025020 Mus musculus Neuropeptide Y Proteins 0.000 claims description 4
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 4
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 claims description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 3
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 claims 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 10
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 abstract description 6
- 125000001909 leucine group Chemical class [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 abstract description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 102400000064 Neuropeptide Y Human genes 0.000 description 35
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 19
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 18
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 17
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 15
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 14
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 10
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 9
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 8
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 8
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 6
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 6
- 238000008214 LDL Cholesterol Methods 0.000 description 6
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 101710095342 Apolipoprotein B Proteins 0.000 description 5
- 102100040202 Apolipoprotein B-100 Human genes 0.000 description 5
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 5
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 4
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 4
- SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N (-)-norepinephrine Chemical compound NC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 3
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 3
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 3
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 3
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 3
- 210000003403 autonomic nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 229960002748 norepinephrine Drugs 0.000 description 3
- SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N norepinephrine Natural products NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 230000035488 systolic blood pressure Effects 0.000 description 3
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 208000002705 Glucose Intolerance Diseases 0.000 description 2
- 101100080344 Homo sapiens NPY gene Proteins 0.000 description 2
- 206010054805 Macroangiopathy Diseases 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- -1 methoxy, propoxy Chemical group 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- BPGXUIVWLQTVLZ-OFGSCBOVSA-N neuropeptide y(npy) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 BPGXUIVWLQTVLZ-OFGSCBOVSA-N 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 201000009104 prediabetes syndrome Diseases 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 206010067116 Carotid arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000014882 Carotid artery disease Diseases 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 206010020710 Hyperphagia Diseases 0.000 description 1
- 101000829171 Hypocrea virens (strain Gv29-8 / FGSC 10586) Effector TSP1 Proteins 0.000 description 1
- 102000048143 Insulin-Like Growth Factor II Human genes 0.000 description 1
- 108090001117 Insulin-Like Growth Factor II Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 101710203526 Integrase Proteins 0.000 description 1
- 206010022562 Intermittent claudication Diseases 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 1
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 1
- 108090000189 Neuropeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000003797 Neuropeptides Human genes 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000007844 allele-specific PCR Methods 0.000 description 1
- 239000003282 amino acid receptor affecting agent Substances 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 239000002870 angiogenesis inducing agent Substances 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- 230000002567 autonomic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000877 autonomic nervous system dysfunction Toxicity 0.000 description 1
- 239000002876 beta blocker Substances 0.000 description 1
- 229940097320 beta blocking agent Drugs 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 208000037876 carotid Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 210000004004 carotid artery internal Anatomy 0.000 description 1
- 210000001326 carotid sinus Anatomy 0.000 description 1
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000002934 diuretic Substances 0.000 description 1
- 229940030606 diuretics Drugs 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000007446 glucose tolerance test Methods 0.000 description 1
- 230000004190 glucose uptake Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 208000021156 intermittent vascular claudication Diseases 0.000 description 1
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 description 1
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical compound CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 235000020830 overeating Nutrition 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 1
- 125000005642 phosphothioate group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 208000023516 stroke disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000002889 sympathetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012301 transgenic model Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000006459 vascular development Effects 0.000 description 1
- 231100000216 vascular lesion Toxicity 0.000 description 1
- 239000005526 vasoconstrictor agent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Obesity (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике наличия у субъекта повышенного риска развития атеросклероза и возможного наличия у субъекта-диабетика повышенного риска развития диабетической ретинопатии. Настоящее изобретение касается способов лечения субъектов, у которых диагностировано наличие повышенного риска развития упомянутых заболеваний. Также изобретение касается способов изучения или тестирования фармацевтических средств или генетических средств, применимых для лечения таких заболеваний с использованием животной модели, включающей трансгенное животное. Способы по настоящему изобретению основаны на полиморфной замене лейцина на пролин в 7-м положении в составе гена препропоследовательности нейропептида-Y. Технический результат: повышение эффективности диагностики атеросклероза и диабетической ретинопатии. 8 н. и 5 з.п. ф-лы, 3 табл., 3 ил.
Description
Настоящее изобретение касается способов диагностики возможного наличия у субъекта повышенного риска развития атеросклероза и восприимчивости пациента-диабетика к наличию повышенного риска развития диабетической ретинопатии. Изобретение далее касается способов лечения субъектов с диагнозом наличия повышенного риска развития упомянутых заболеваний с целью предотвращения развития упомянутых заболеваний. Также изобретение касается способов изучения или тестирования фармацевтических средств или генетических средств, применимых для лечения упомянутых заболеваний с использованием животной модели, включающей трансгенное животное.
Предпосылки изобретения
Публикации и другие материалы, использованные в данном тексте для освещения предпосылок настоящего изобретения и, в частности, для представления дополнительных подробностей в связи с практической стороной, включены здесь для сведения в виде библиографических ссылок.
Нейропептид-Y (NPY) входит в состав семейства панкреатических пептидов, являясь нейромодулятором, который секретируется многими нейронами центральной и периферической нервной системы: он является наиболее массовым пептидом в головном мозге и сердце (1-4). NPY является наиболее сильным возбуждающим аппетит нейропептидом и может обладать тонизирующей ингибиторной активностью в отношении сигнала о насыщении, опосредованного лептином (2-3,5). NPY стимулирует секрецию инсулина (6) и индуцируемое инсулином усвоение глюкозы у здоровых крыс (7). Напротив, инсулин и инсулиноподобный фактор-II роста подавляют секрецию NPY гипоталамусом (8). В животных моделях ожирения и диабета 2-го типа усиленная активность NPY-нейронов из-за резистентности гипоталамуса к инсулиновому ингибированию может приводить к перееданию, снижению энергозатрат и ожирению (9). Кроме того, NPY участвует в контроле эндокринной оси “гипоталамус-гипофиз-надпочечник” (10). В сердечно-сосудистой системе NPY является сосудосуживающим фактором - он подавляет секрецию норэпинефрина и опосредует норэпинефриновый ответ (11). Интересно, что при экспериментальном диабете, как было показано, изменяются ответы сердечно-сосудистой и дыхательной систем на NPY (12, 13). Далее, NPY может обладать ангиогенными свойствами (4), что может усиливать развитие атеросклероза. Широко распространяемые эффекты действия NPY опосредуются рядом различных субтипов рецепторов NPY (14). Совсем недавно авторы изобретения идентифицировали весьма распространенный полиморфизм, обусловливаемый заменой лейцина в 7-м положении на пролин (Leu-7-Pro) (15). Было установлено, что этот полиморфизм ассоциирован с существенно более высокими уровнями сывороточных общих и LDL-холестеринов, в частности, у больных с ожирением в исследованных двух независимых популяциях из Финляндии и одной популяции из Голландии. Кроме того, в одной из этих популяций уровни аполипопротеина-В были выше у индивидуумов без диабета, имеющих полиморфизм Leu-7-Pro (15). Хотя биохимическая и физиологическая связь между метаболизмом холестерина и NPY в настоящее время не установлена, тем не менее полиморфизм Leu-7-Pro в гене NPY должен рассматриваться как новый генетический маркер высоких уровней холестерина у больных с ожирением.
Краткое содержание изобретения
В соответствии с одним аспектом настоящее изобретение касается способа диагностики восприимчивости субъекта к наличию повышенного риска развития атеросклероза, причем упомянутый способ включает определение наличия у упомянутого субъекта полиморфизма на участке сигнального пептида препро-NPY человека, причем упомянутый полиморфизм заключается в замене лейцина в положении 7 на пролин на участке сигнального пептида упомянутого препро-NPY, причем упомянутый полиморфизм является индикатором повышенного риска развития атеросклероза.
В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение касается способа диагностики у пациента-диабетика восприимчивости к наличию повышенного риска развития диабетической ретинопатии, причем упомянутый способ включает определение наличия у упомянутого субъекта полиморфизма на участке сигнального пептида препро-NPY человека, причем упомянутый полиморфизм заключается в замене лейцина в положении 7 на пролин на участке сигнального пептида упомянутого препро-NPY, причем упомянутый полиморфизм является индикатором повышенного риска развития диабетической ретинопатии.
В соответствии с третьим аспектом настоящее изобретение касается способа лечения субъекта, у которого диагностирован повышенный риск развития атеросклероза, или лечения пациента-диабетика, у которого диагностирован повышенный риск развития диабетической ретинопатии, с целью предотвращения развития любого из упомянутых заболеваний, включающего введение упомянутому субъекту эффективного количества агента, противодействующего влиянию мутантного гена NPY.
В соответствии с четвертым аспектом настоящее изобретение касается способа лечения субъекта, у которого диагностирован повышенный риск развития атеросклероза, или лечения пациента-диабетика, у которого диагностирован повышенный риск развития диабетической ретинопатии, с целью предотвращения развития любого из упомянутых заболеваний, включающего применение к субъекту специфичной генотерапии, имеющей целью восстановление мутантной последовательности сигнального пептида NPY.
В соответствии с пятым аспектом настоящее изобретение касается способа изучения или тестирования фармацевтических средств или генетических средств, применимых для лечения атеросклероза или диабетической ретинопатии, путем использования животной модели, включающей трансгенное животное, которое несет последовательность ДНК человека, включающую нуклеотидную последовательность, кодирующую препропоследовательность нейропептида-Y (препро-NPY), или ее часть, кодирующую зрелый пептид NPY человека, в котором аминокислота лейцин в 7-м положении на участке сигнального пептида упомянутого препро-NPY либо (i) не изменена, либо (ii) заменена на пролин.
В соответствии с шестым аспектом настоящее изобретение касается способа изучения или тестирования фармацевтических средств или генетических средств, применимых для лечения атеросклероза или диабетической ретинопатии, путем использования животной модели, включающей трансгенное животное, которое несет последовательность ДНК, включающую нуклеотидную последовательность, которая кодирует во всех отношениях нормальную последовательность NPY мыши, или ее часть, которая кодирует зрелый пептид NPY мыши, но в составе которой нуклеотидная последовательность, кодирующая сигнальный пептид мыши, заменена на последовательность сигнального пептида человека, кодирующую либо нормальный, либо мутантный сигнальный пептид человека.
Краткое описание чертежей
На фиг.1а схематически изображена молекулярная структура гена NPY человека, пептида препро-NPY и зрелого пептида NPY.
На фиг.1b показана нуклеотидная последовательность гена NPY человека. Прописные символы соответствуют экзонным последовательностям, а строчные символы - последовательностям интронов. В скобках указаны депозитарные номера GenBank. Стрелка указывает на положение, в котором тимидин (Т) нормального гена заменен на цитозин (С) с образованием мутантного гена. Подчеркнутая последовательность во 2-м экзоне - это последовательность, которая кодирует сигнальный пептид из 28 аминокислот (1-й экзон - SEQ ID NO 1; 2-й экзон - SEQ ID NO 2; 3-й экзон - SEQ ID NO 3 и 4-й экзон - SEQ ID NO 4).
На фиг.1с показана нуклеотидная последовательность мРНК препро-NPY человека (SEQ ID NO 5: последовательность белка приведена в SEQ ID NO 6). Стрелка указывает на положение, в котором тимидин (t) в нормальной мРНК заменен на цитозин (с) с образованием мутантной мРНК.
Подробное описание изобретения
Нейропептид-Y (NPY) является состоящим из 36 аминокислот нейромедиатором, широко представленным в центральной и периферической нервной системе. NPY обладает широким спектром активностей, которые связаны с контролем энергетического баланса организма и функции сердечно-сосудистой системы. Ранее авторами изобретения было показано, что субъекты, у которых в составе сигнального пептида NPY имеется пролин-7, характеризуются более высокими уровнями сывороточных холестерина и аполипопротеина-В по сравнению с индивидуумами, характеризующимися последовательностью сигнального пептида дикого типа (Leu-7/Leu-7). Настоящее изобретение основывается на анализе связи полиморфизма Leu-7-Pro гена NPY и общей толщины интимы-медии (IMT) сонной артерии, определенной методом ультрасоно-графического сечения в ходе 10-летнего катамнестического обследования пациентов, которым в первый раз был поставлен диагноз диабета 2-го типа (81 пациент: 41 мужчина, средний возраст 67,1 лет), и индивидуумов без диабета (105 субъектов: 48 мужчин, средний возраст 65,5 лет), у которых было проведено генотипирование по полиморфизму Leu-7-Pro в составе гена NPY. Частота носительства замены Рrо-7 составила 9,9% у больных-диабетиков и 14,3% у контрольных лиц (р=0,360). Средняя общая IMT сонной артерии у индивидуумов без диабета без полиморфизма Leu-7-Pro составила 1,04±0,02 мм, с полиморфизмом - 1,14±0,04 мм (р=0,156), а у пациентов-диабетиков - соответственно 1,18±0,03 и 1,58±0,21 мм (р=0,004). В анализе ковариаций общей группы средняя общая IMT сонной артерии была независимо ассоциирована с полиморфизмом Leu-7-Pro (F=5,165; р=0,024). Эта модель учитывала возраст, пол, диабет, клинические проявления “макрососудистых” заболеваний, курение, систолическое кровяное давление и уровень LDL-холестерина. Более того, больные-диабетики, включающие Рrо-7 в составе препро-NPY, характеризовались достоверно большей частотой диабетической ретинопатии (р=0,04) по сравнению с пациентами, имевшими генотип Leu-7/Leu-7. Данное исследование указывает на то, что присутствие замены Рrо-7 в препро-NPY достоверно ассоциировано с повышенным атеросклерозом сонных артерий у субъектов с диабетом и без диабета, причем даже после корректировки по известным факторам риска. Более того, представлено первое доказательство того, что Рrо-7 в составе препро-NPY повышает риск развития диабетической ретинопатии у пациентов с диабетом 2-го типа.
Последовательность ДНК или мутантный сигнальный пептид, или упомянутый пептид, связанный с любым иным продуктом расщепления препро-NPY, могут быть использованы для тестирования субъекта с целью определения того, является ли упомянутый субъект носителем мутантного гена NPY. Определение может быть осуществлено либо путем анализа ДНК с помощью хорошо известных методов, которые включают прямое секвенирование ДНК нормального и мутантного гена NPY, аллель-специфичную амплификацию с применением полимеразной цепной реакции (ПЦР), позволяющую выявлять либо нормальную, либо мутантную последовательность NPY, либо путем непрямого выявления нормального или мутантного гена NPY с помощью различных молекулярно-биологических методов, включая, например, метод ПЦР-выявления одноцепочечного конформационного полиморфизма (SSCP) или электрофорез в денатурирующем гель-градиенте (DGGE). Определение нормального или мутантного гена NPY также можно осуществить с использованием метода выявления ПДРФ (полиморфизм длин рестрикционных фрагментов), который, в частности, применим для генотипирования большого числа образцов.
Определение также может быть проведено на уровне РНК с помощью анализа РНК, экспрессируемой на тканевом уровне, с применением различных методов. Для гибридизации могут быть сконструированы аллель-специфичные зонды. Гибридизация может быть осуществлена, например, с использованием метода Нозернблоттинга, теста на защиту от РНКазы или метода гибридизации in situ. РНК, производная от нормального или мутантного гена NPY, также может быть исследована путем конверсии тканевой РНК сначала в кДНК с последующей амплификацией кДНК методом аллель-специфичной ПЦР и анализом их по типу геномной ДНК, как это было описано выше.
Как альтернатива, определение может быть осуществлено с помощью иммунологического теста, в котором образец приводят в контакт с антителом, способным связываться с сигнальным пептидом или упомянутым пептидом, связанным с любым другим продуктом расщепления препро-NPY.
Антитела могут быть сформированы по отношению к нормальной или мутантной препро-NPY или, что более специфично, по отношению к нормальному или мутантному сигнальному пептиду в составе NPY. Получение антител может быть проведено в экспериментальных животных in vivo с целью получения поликлональных антител или in vitro с использованием клеточных линий с целью получения моноклональных антител.
Субъект, у которого диагностировано наличие повышенного риска развития атеросклероза, или субъект-диабетик, у которого диагностировано наличие повышенного риска развития диабетической ретинопатии, могут быть подвергнуты лечению с целью предотвращения развития любого из упомянутых заболеваний путем введения упомянутому субъекту эффективного количества агента, противодействующего влиянию мутантного гена NPY. Это можно осуществить с помощью специфической генотерапии, имеющей целью восстановление мутантной последовательности NPY, или путем введения фармацевтических терапевтических средств, что имеет целью модулировать синтез, секрецию или метаболизм эндогенного NPY или специфическим образом взаимодействовать с сайтами-мишенями для NPY за счет модулирования эффектов NPY с участием специфических белков-рецепторов NPY. К настоящему времени пять различных субтипов рецепторов NPY были клонированы и охарактеризованы (рецепторы Y1-Y5) и были синтезированы молекулы лекарственных средств, которые специфически взаимодействуют с этими рецепторами NPY. Описанная лекарственная терапия не ограничивается только этими указанными рецепторами или механизмами, но также охватывает и другие рецепторы NPY и родственные механизмы, которые еще предстоит открыть, включая механизмы секреции NPY.
Противодействие влиянию мутантного гена NPY у пациента с применением антисмысловой терапии или переключения, или замещения гена включает направленную коррекцию связанной с заболеванием мутации или направленную (сайт-специфичную) инактивацию мутантного аллеля по механизму гомологичной рекомбинации.
Антисмысловая терапия охватывает способы, созданные для нарушения трансляции в результате прямого взаимодействия с информационной РНК-мишенью (мРНК). Этого можно достичь с использованием направленного олигонуклеотида, который взаимодействует в соответствии с правилом Уотсона-Крика с информационной РНК, функции которой блокируются. Подавление генной экспрессии с помощью антисмыслового олигонуклеотида зависит от способности антисмыслового олигонуклеотида связываться с комплементарной последовательностью мРНК и предотвращать трансляцию этой мРНК. Возможной является корректировка единственного мутантного нуклеотида в гене с использованием стратегии, основанной на олигонуклеотидах (Giles et al., 1995; Schwab et al., 1994; Yoon et al., 1996). Короткого, состоящего из 7 или 8 нуклеотидов, олигонуклеотида достаточно для обеспечения антисмысловой активности и специфичности, которые в основном зависят от фланкирующих последовательностей РНК-мишени. Связывания должно быть достаточно для обеспечения стабильного связывания и расщепления, опосредованного РНКазой-Н.
Авторы изобретения противодействовали влиянию мутантного гена NPY с использованием короткого аллель-специфичного олигонуклеотида, который включает последовательность мутировавшего участка: ...cgа ct/сg ggg... (мутировавшие нуклеотиды выделены жирным шрифтом). Этого можно достичь путем использования олигонуклеотидов разной длины при условии, что все они распознают мутировавшую нуклеотидную последовательность. В соответствии с предсказываемой вторичной структурой мРНК препро-NPY (фиг.1 и 2) наилучшей последовательностью-мишенью являются нуклеотиды [-9]-[+2] “вокруг” сайта мутации, т.е. последовательность, направленная на 3'-ас ааg cgа ctg g-5'. Эта последовательность включает “выпуклости”, для которых известно, что они усиливают связывание олигонуклеотида с мРНК-мишенью.
Возможным является использование немодифицированных олигонуклеотидов, однако для повышения их стабильности, устойчивости к действию нуклеаз и эффективности проникновения в ядро можно использовать некоторые модификации. Было синтезировано достаточно большое число модифицированных пиримидинов, в основном по атомам С-2, С-4, С-5 и С-6, с включением их в нуклеотиды. Также могут быть синтезированы и включены в олигонуклеотиды пуриновые аналоги. Положение 2' в сахарной составляющей (пентафуранозном кольце) заменяют на группы метокси, пропокси, O-алкокси или метоксиэтокси. Был сформирован новый скелет олигонуклеотидов, в котором заменены фосфат или сахарно-фосфатная единица, например С5-пропинилпиримидин-модифицированные фосфотиоатные олигонуклеотиды. Также можно использовать химерные олигонуклеотиды, у которых 5'- и 3'-концы модифицированы межнуклеотидными связями, такими как метилфосфотиоатные, фосфодиэфирные или метилфосфонатные. Относительно новые технологии связаны с конформационно ограниченными ЗНК-олигонуклеотидами (“закрытая нуклеиновая кислота”) и пептид-нуклеиновыми кислотами (нуклеопротеины). По структуре отличаются сконструированные в биосистемах рибозимы, однако их специфичность также связана с распознаванием последовательности мРНК-мишени.
В способах замещения гена или переключения гена инактивируют последовательность мутантного гена и вносят скорректированную последовательность. Этого можно достичь путем трансфекции экзогенного гена с нормальной кодирующей последовательностью и блокировки мутантной кодирующей последовательности антисмысловым олигонуклеотидом. Также можно использовать способ, включающий только внесение скорректированной нормальной последовательности без разрушения мутантной последовательности. Это можно использовать в гетерозиготных клетках, т.е. клетках, несущих один нормальный аллель и один мутантный аллель, результатом чего будет преобладание экспрессии нормальных аллелей. Также могут быть обработаны гомозиготные по мутации клетки, в результате чего будет достигнут доминантный положительный эффект, т.е. нормальный аллель будет экспрессирован в большей степени, чем мутантный аллель.
Влияние мутантной последовательности NPY на функции гена NPY можно исследовать у трансгенных животных. Трансгенное животное может быть получено с использованием методологии направленной гомологичной рекомбинации. И нормальная, и мутантная последовательности сигнального пептида NPY человека (или любая последовательность ДНК, включающая нуклеотидную последовательность, которая кодирует препропоследовательность нейропептида-Y (препро-NPY), или ее часть, которая кодирует аминокислотную последовательность зрелого пептида NPY мыши или зрелого пептида NPY человека, в котором (i) аминокислота лейцин в 7-м положении на участке сигнального пептида упомянутой препро-NPY была заменена на пролин, или (ii) аминокислота лейцин в 7-м положении на участке сигнального пептида упомянутой препро-NPY не изменена, должны быть внесены в последовательность гена NPY с целью замены эндогенной последовательности сигнального пептида. При данных условиях функции эндогенного гена NPY во всех отношениях остаются в норме, лишь синтез препро-NPY регулируется либо нормальной, либо мутантной последовательностью сигнального пептида NPY человека. Такую трансгенную модель можно использовать для изучения физиологического значения мутантного гена NPY высокоспецифичным образом. Она также будет представлять собой идеальную предклиническую модель для изучения и тестирования новых молекул лекарственных средств, которые созданы с целью модифицирования влияния мутантного гена NPY.
Настоящее изобретение более подробно описывается нижеследующими экспериментами.
Экспериментальная часть
Схема исследований
Данное исследование представляет собой данные перекрестного анализа по материалам 10-летнего обследования группы пациентов с диабетом 2-го типа и контрольных индивидуумов без диабета, наблюдаемых с момента постановки диагноза в соответствии с подробно описанным ранее (16-22). Вкратце, исходное обследование охватывало 133 пациента, у которых впервые был поставлен диагноз диабета 2-го типа, в возрасте 45-64 лет и 144 контрольных индивидуума без диабета, случайным образом отобранных из перечня населения. Базовый анализ был проведен в течение 1979-81 годов, а все субъекты обследования проживали в определенном районе на востоке Финляндии (16). Все субъекты были включены в 5- и 10-летние катамнестические наблюдения в течение 1985-86 годов (17) и 1991-92 годов (18-19) соответственно. В течение 10-летнего наблюдения 36 пациентов-диабетиков (27%) и восемь контрольных индивидуумов (6%) скончались в основном из-за сердечно-сосудистых заболеваний (18). В ходе 10-летнего наблюдения ультрасонографический анализ сонной артерии (20-21) был проведен у 84 диабетиков исходной группы (63%) и 119 членов недиабетической группы (83%), а анализ генотипа был сделан для всех субъектов за исключением трех диабетиков и одного субъекта без диабета. Исследование было утверждено Комитетом по этике университета в Куопио.
Субъекты и методы
Анализ историй болезни и сердечно-сосудистых заболеваний, применение лекарств, курение, кровяное давление, индекс массы тела (ИМТ) и соотношение окружностей талии и бедра были подробно описаны ранее (18-22). Группа “макрососудистых заболеваний” охватывает субъектов с любыми ранее установленными случаями инфаркта миокарда, инсульта или синдрома Шарко. Тест на толерантность к пищевой глюкозе проводили с использованием дозы глюкозы 75 г. Нарушенную толерантность к глюкозе у контрольных индивидуумов классифицировали в соответствии с критериями ВОЗ (23). Также ранее были охарактеризованы взятие проб крови и измерение сывороточных липидов и липопротеинов с помощью методов ультрацентрифугирования и преципитации, а также уровней аполипопротеина-В, плазматической глюкозы и плазматического инсулина (19-22).
Анализ генотипа
Генотип препро-NPY определяли с помощью анализа ПДРФ (полиморфизм длин рестрикционных фрагментов) на материале ДНК, экстрагированной из периферической крови субъектов, при том что исследователь не знал фенотип субъекта. Вкратце, полиморфизм, проявляющийся в замене тимина (1128) на цитозин (1128), образует рестрикционный BsiEI-сайт, который и использовали для генотипирования субъектов по полиморфизму Leu-7-Pro в соответствии с описанным ранее (15). ПЦР-продукты расщепляли рестриктазой BsiEI (New England Biolabs Inc., Beverly, MA: США), и продукты расщепления анализировали методом электрофореза в 2%-ном агарозном геле.
Оценка атеросклероза сонной артерии
Метод высокоразрешающего ультрасонографического изображения В-типа разработали для обеспечения надежной и воспроизводимой идентификации параметров сонных артерий и определения ближних и удаленных контактов областей стенок сосудов в соответствии с тем, что более подробно описано ранее (10-21, 24). Вкратце, сонную артерию разделяли на два сегмента на основании анатомии и геометрии артерии. Ключевыми анатомическими параметрами, определяющими такое разделение, являлись проксимальная точка каротидного синуса (область бифуркации сонной артерии) и конец делителя протока, который отделяет внутреннюю сонную артерию от наружной. В продольных изображениях артерий граница адвентициальной оболочки и медиальной оболочки (медии) и граница интимы и просвета на дальней стенке сосуда являются специфическими анатомическими границами, определяющими IMT. Ультразвуковой анализ сонных артерий был проведен на двух сертифицированных соникаторах. Использовали ультразвуковое устройство Biosound Phase Two, оборудованное 10-мегагерцовым кольцевым последовательным датчиком. Видеоинформацию анализировали по количественным параметрам в центральной лаборатории с использованием процедуры компьютерного считывания (24-25). Среднюю максимальную величину для дальней стенки сосудов по двум сторонам головы использовали в качестве показателя общей IMT сонной артерии.
Статистические методы
Отправной гипотезой авторы изобретения считали то, что субъекты, характеризующиеся заменой Рrо-7 в составе препро-NPY, имеют более высокую среднюю IMT по сравнению с субъектами, имеющими препро-NPY дикого типа (Leu-7/Leu-7). Ассоциации полиморфизма Leu-7-Pro с непрерывными переменными определяли с помощью критерия Стьюдента, а для дискретных переменных использовали критерий хи-квадрат. Связь общей IMT сонной артерии с полиморфизмом Leu-7-Pro дополнительно анализировали с помощью теста на ковариантность (ANCOVA), позволяющего контролировать влияние отобранных ковариационных факторов. Переменные с асимметричным распределением (например, IMT сонной артерии, содержание инсулина) анализировали после логарифмирования. Величина Р, равная или меньшая 0,05, рассматривалась как статистически значимая. Все статистические анализы были осуществлены с помощью процедур от SPSS-Unix.
Результаты
Различие в частотах аллеля С1128 в группах субъектов без диабета (14,3%) и диабетиков (9,9%) было статистически незначимым (р=0,36). Характеристики субъектов с диабетом и без диабета в группах Leu7/Leu7 и Рго7/- даны в табл.1а-b. Различий по возрасту, полу, индексу массы тела, отношению окружности талии и бедра, уровням кровяного давления и частоте “макрососудистых” заболеваний не было выявлено между генотипическими группами в пределах групп диабетиков и субъектов без диабета. Уровень LDL-холестерина был выше у субъектов без диабета с полиморфизмом Leu-7-Pro по сравнению с отсутствием полиморфизма (р=0,05), о чем авторы сообщали ранее (15). Хотя имелась тенденция более высокого содержания аполипопротеина-В в группе Рго7/- по сравнению с группой Leu7/Leu7, это различие не было статистически значимым. Проведенные ранее авторами исследования включали только субъектов без ожирения и без применения каких-либо медикаментозных средств, известных как подавители метаболизма холестерина (такие как бета-блокаторы или мочегонные средства), в составе имевшейся группы субъектов без диабета (15). По другим липопротеинам не было выявлено отчетливых различий: интересно, что у пациентов-диабетиков не было связи с уровнем сывороточного холестерина даже тогда, когда пациентов анализировали в соответствии со средним индексом массы тела (данные не включены).
Средняя общая IMT сонной артерии была примерно на 25% выше у пациентов-диабетиков, несущих аллель Рrо-7, по сравнению с таковыми без него (р=0,004), а аналогичное превышение по IMT у субъектов без диабета составило 9% (р=0,156). Анализ ковариаций в обеих группах после их объединения (табл.2) показал, что факторами, независимо влияющими на общую IMT сонной артерии, являлись возраст, аллель Рrо-7, диабет, систолическое кровяное давление и “макрососудистые” заболевания. Более того, пациенты-диабетики, характеризовавшиеся заменой Рrо-7 в составе препро-NPY, проявляли существенно ускоренное развитие диабетической ретинопатии (р=0,04) по сравнению с диабетиками, имевшими генотип Leu-7/Leu-7.
Обсуждение
Полученные авторами изобретения данные обследования пожилых субъектов с диабетом и без диабета из Финляндии указывают на то, что аллель Рrо-7 препро-NPY достоверно связан с усиленным атеросклерозом сонных артерий, причем даже более выражение у пациентов-диабетиков. Обнаружение этого является важным потому, что повышение толщины стенок (IMT) сонных артерий повышает риск сердечно-сосудистых нарушений пропорциональным образом даже до клинического проявления сердечно-сосудистых заболеваний (26). Кроме того, присутствие полиморфизма Pro-7 в составе препро-NPY было достоверным образом связано со скоростью развития диабетической ретинопатии. Аллель Рrо-7 также был ассоциирован с высокими уровнями сывороточного LDL-холестерина и уровнями аполипопротеина-В у субъектов без диабета и без ожирения (15), однако такая связь отсутствовала у пациентов-диабетиков вне зависимости от их массы тела.
Диабет 2-го типа характеризуется состоянием, при котором заметно возрастает риск атеросклероза, и, хотя известные факторы риска составляют основу встречаемости диабетических “макрососудистых” заболеваний (27), значительная доля таких случаев поражения сосудов остается необъясненной, оправдывая тем самым поиск других вероятных средовых, метаболических и генетических влияющих факторов. В проведенном исследовании авторы изобретения впервые показывают, что для пациентов-диабетиков, несущих аллель Рrо-7, характерна более высокая IMT сонных артерий по сравнению с таковой при генотипе Leu-7/Leu-7. Хотя эти данные основываются на ограниченном числе обследованных субъектов, отсутствие связи аллеля Рrо-7 с другими факторами риска, исследованными у пациентов-диабетиков, делают обнаруженный факт более интригующим. Поскольку группа контрольных лиц без диабета включала субъектов с нарушенной переносимостью глюкозы, как и в любом популяционном анализе, а, следовательно, толерантность к глюкозе представляет собой фактор непрерывного перехода между группами исследованной популяции, то авторы объединили группы с целью повышения статистического разрешения анализа ковариаций. В таком анализе факторы возраста, диабета, систолического кровяного давления и клинически проявленных “макрососудистых” заболеваний были, как и сообщалось ранее (21), мощными факторами, влияющими на IMT сонных артерий. Интересно, что влияние генотипа NPY сохраняло статистическую значимость и в таком анализе. Ни в одной из групп другие факторы риска сердечно-сосудистых заболеваний у лиц без диабета не были связаны с генотипом NPY за исключением уровня инсулина при голодании. Нарушения в интерпретации могут быть обусловлены избирательной смертностью, как и в любом перекрестном анализе. Однако, поскольку уровни LDL-холестерина были стабильно выше на протяжении всего 10-летнего наблюдения у контрольных субъектов без диабета и без ожирения, несущих аллель Рrо-7, а, с другой стороны, поскольку влияние генотипа на IMT сонных артерий было более выраженным у пациентов-диабетиков, у которых со времени диагностирования наблюдалась высокая смертность от сердечно-сосудистых заболеваний (18), то весьма вероятно, что в проведенных исследованиях данная связь недооценена.
Каким образом NPY может усиливать развитие атеросклероза? Во-первых, такой эффект может опосредоваться влиянием генотипа по препро-NPY на метаболизм LDL-холестерина (15). Однако этот эффект модулируется массой тела (15) и, как явствует из проведенного здесь исследования, в этом отношении такой эффект не был выявлен у пациентов с диабетом 2-го типа (более подробный анализ липопротеинов, проведенный в связи с такой зависимостью перекрестно или во времени, не дал в этом отношении каких-либо дополнительных находок). Во-вторых, NPY может обладать ангиогенными свойствами, которые могут быть вовлечены в развитие атеросклероза. Как было показано, NPY активен как митоген гладкой мускулатуры (28), как стимулятор прикрепления, миграции, синтеза ДНК (29) и образования капиллярных сосудов эндотелиальными клетками человека (4). Небольшая доля циркулирующего NPY происходит от эндотелиальных клеток, и такой происходящий от эндотелиальных клеток NPY может действовать как аутокринный ангиогенный фактор даже при очень низких своих концентрациях (4). Следовательно, лица с заменой Рrо-7 в составе препро-NPY могут быть предрасположены к увеличению толщины стенок сосудов, что выражается в увеличении толщины интимы-медии у сонных артерий, вследствие нарушения функций эндотелиального NPY. В-третьих, NPY является важным модулятором вегетативной нервной системы. Основная часть циркулирующего NPY образуется в окончаниях периваскулярных симпатических нервов, а уровень NPY коррелирует с уровнем норэпинефрина (30). Дисфункция вегетативной нервной системы является независимым фактором предрасположения пациентов с диабетом 2-го типа к смертности от сердечно-сосудистых заболеваний, на что указывает анализ исследованной здесь популяции (22). Механизмы, лежащие в основе сердечно-сосудистых заболеваний и дисфункции вегетативной нервной системы во многом предположительны, однако согласно неопубликованным данным авторов настоящего изобретения вегетативная регуляция сердечной деятельности изменена у субъектов, несущих замену Рrо-7 в составе препро-NPY. Следовательно, авторы настоящего изобретения предполагают, что атеросклероз может быть связан с геном (генами), вовлеченным в развитие сосудов, липидный метаболизм и функцию вегетативной нервной системы, а недавно обнаруженный вариант гена NPY (15) является первым таким фактором, для которого показана связь с ускоренным развитием атеросклероза.
В заключение полученные результаты указывают на то, что наличие замены Рrо-7 в составе препро-NPY связано с оцениваемым ультрасонографическим методом атеросклерозом сонных артерий у жителей Финляндии с диабетом и без диабета. Более того, данное исследование впервые доказало, что присутствие Рrо-7 в препро-NPY также связано с повышенным риском развития диабетической ретинопатии у пациентов с инсулиннезависимым сахарным диабетом (диабетом 2-го типа), что может являться потенциальной мишенью для разработки лекарственных средств.
Должно быть понятно, что способы по настоящему изобретению могут быть включены в форме различных вариантов, причем только немногие из них раскрыты в данном тексте. Для специалистов в данной области должно быть понятно, что существуют и другие варианты, которые не отклоняются от сути настоящего изобретения. Следовательно, описанные варианты являются иллюстративными и не должны рассматриваться как в чем-либо ограничивающие.
Схема 1
Предсказанная вторичная структура мРНК препро-NPY. Данная схема показывает предсказанную структуру 5'-конца (нуклеотиды 1-138) полноразмерной последовательности мРНК препро-NPY, опубликованной в GenBank под депозитарным №К01911. Вторичная структура была предсказана с использованием программы MFOLD от Genetics Computer Group Висконсинского университета.
Изображение в алгоритме Squiggle для: osa1.mfold от 7 февраля, 19100, 12:46. (Линейная) MFOLD для: osa1.seq Т:37.0. Обозначение: 5173 от 1: до 138 от 7 февраля, 19100, 12:43. Длина - 138. Энергия - -28,4.
Схема 2
Предсказанная вторичная структура мРНК препро-NPY. Данная схема показывает предсказанную структуру 5'-конца (нуклеотиды 1-138) полноразмерной последовательности мРНК препро-NPY, опубликованной в GenBank под депозитарным №К01911. Вторичная структура была предсказана с использованием программы MFOLD от Genetics Computer Group Висконсинского университета. Мутантным нуклеотидом является Т→С в 106-м положении.
Изображение в алгоритме Squiggle для: osa2.mfold от 7 февраля, 19100, 14:11. (Линейная) MFOLD для: osa2.seq Т:37.0. Обозначение: 4340 от 1: до 138 от 7 февраля, 19100, 14:07. Длина - 138. Энергия - -26,4.
Библиография
1. Benarroch ЕЕ: Neuropeptides in the sympathetic system: presence, plasticity, modulation and implications. Ann Neurol 36:6-13, 1994.
2. Tomaszuk A, Simpson С, Williams G: Neuropeptide Y, the hypothalamus and the regulation of energy homeostasis. Horm Res 46:53-8, 1996.
3. Palmiter RD, Erickson JC, Hollopeter G, Baraban SC, Schwatrz MW: Life without neuropeptide Y. Recent Prog Horm Res 53:163-99, 1998.
4. Zukowska-Grojec Z, Karwatowska-Prokopczuk E, Rose W, Rone J, Movafagh S, Ji H, Yeh Y, Chen WT, Kleinman HK, Grouzmann E, Grant DS: Neuropeptide Y: a novel angiogenic factor from the sympathetic nerves and endothelium. Circ Rec 83:187-95, 1998.
5. Sahu A, Kalra SP: Neuropeptide regulation of feeding behaviour Neuropeptide Y:TEM 4:217-224, 1993.
6. Moltz JH, McDonald JK: Neuropeptide Y: direct and indirect action on insulin secretion in the rat. Peptides 6:1155-1159, 1985.
7. Vettor R, Pagano C, Granzotto M, Englaro P, Angeli P, Blum WF, Federspil G, Rohner-Jeanrenaud F, Jeanrenaud B: Effects of intravenous neuropeptide Y on insulin secretion and insulin sensivity on skeletal muscle in normal rats. Diabetologia 41:1361-7, 1998.
8. Sahu A, Dube MG, Phelps CP, Sninsky CA, Kalra PS, Kalra SP: Insulin and insulin-like growth factor II suppress neuropeptide Y release from the nerve terminals in the paraventricular nucleus: a putative hypothalamic site for energy homeostasis. Endocrinology 136:5718-24, 1995.
9. Frankish HM, Dryden S, Hopkins D, Wang Q, Williams G: Neuropeptide Y, the hypothalamus and diabetes: insights into the central control of metabolism. Peptides 16:757-71, 1995.
10. Wahlestedt С, Skagerberg G, Ekman R, Heilig M, Sundler F, Hakanson R: Neuropeptide Y (NPY) in the area of the hypothalamic paraventricular nucleus activates the pituitary-adrenocortical axis in the rat. Brain Res 417:33-38, 1987.
11. Shine J, Potter EK, Biden T, Selbie LA, Herzog H: Neuropeptide Y and regulation of the cardiovascular system. J Hypertens (Suppi) 12:S41-S45, 1994.
12. Dunbar JC, Ergene E, Anderson GF, Barraco RA: Decreased cardiorespiratory effects of neuropeptide Y in the nucleus tractus solitarius in diabetes. AmJ Physiol 262:R865-71, 1992.
13. Lind H, Eriinge D, Brunkwall J, Edvinsson L: Selective attenuation of neuropeptide-Y-mediated contractile responses in blood vessels from patients with diabetes mellitus. Clin Auton Res 5:191-7, 1995.
14. Larhammar D, Soderberg С, Lundell I: Evolution of the neuropeptide Y family and its receptors. Ann. NY Acad Sci 839:35-40, 1998.
15. Karvonen MK, Pesonen U, Koulu M, Niskanen L, Laakso M, Rissanen A, Dekker JM, Hart LM, Valve R, Uusitupa MIJ: Association of a leucine(7)-to-proline(7) polymorphism in the signal peptide of neuropeptide Y with high serum cholesterol and LDL cholesterol levels. Nat Med 4:1434-1437, 1998.
16. Uusitupa M, Siitonen O, Aro A,: Prevalence of coronary heart disease, left ventricular failure and hypertension in middle-aged, newly diagnosed type 2 (non-insulin-dependent) diabetic subjects. Diabetologia 28:22-27, 1985.
17. Niskanen LK, Uusitupa MI, Sarlund H, Siitonen O, : Five-year follow-up study on plasma insulin levels in newly diagnosed NIDDM patients and nondiabetic subjects. Diabetes Care 13:41-48, 1990.
18. Uusitupa MIJ, Niskanen LK, Siitonen O, Voutilainen E, : Ten-year cardiovascular mortality in relation to risk factors and abnormalities in lipoprotein composition in type 2 (non-insulin-dependent) diabetic and non-diabetic subjects. Diabetologia 36:1175-1184, 1993.
19. Niskanen L, Uusitupa M, Karjalainen J, Siitonen O: Metabolic evolution of Type 2 diabets - 10-year follow-up study. J Intern Med 236:263-270, 1994.
20. Uusitupa M, Niskanen L, Luoma J, Mercouri M, Rauramaa R,: Autoantibodies against oxidized LDL as predictors of atherosclerotic vascular disease in non-insulin-dependent diabetes mellitus. Arterioscl&Thromb&Vasc Biol 16:1236-1242, 1996.
21. Niskanen L, Rauramaa R, Miettien H, Haffner SM, Mercuri M, Uusitupa M: Carotid artery intima-media thikness in elderly patients with NIDDM and in nondiabetic subjects. Stroke 27:1986-1992, 1996.
22. Toyry J, Niskanen L, Lansimies E, Uusitupa M: Occurrence, predictors and clinical significance of autonomic neuropathy in NIDDM: 10-year follow-up from the diagnosis. Diabetes 45:308-315, 1996.
23. World Healths Organisation. Diabetes mellitus: report of a WHO Study Group. Geneva: World Health Org., Tech Rep Ser, no 727, 1985.
24. Mercuri M, Bond MG, Nichols FT, Carr AA, Flack JM, Byington R, Raines J, for the MIDAS Group. Baseline reproducibility of B-mode ultrasound imaging measurement of carotid intimal media thikness: the Multicenter Isradipine Diuretic Atherosclerosis Study (MIDAS). J Cardiovasc Diagnosis Procedures 11:241-252, 1993.
25. Rauramaa R, , Mercuri M, Rankinen Т, Bond MG: Association of risk factors and body iron status to carotid atherosclerosis in middle-aged Eastern Finnish men. Eur Heart J 15:1020-1027, 1994.
26. O'Leary DH, Polak JF, Kronmal RA, Manolio ТА, Burke GL, Wolfon SKJ. Carotid-artery intima and media thikness as a risk factor for myocardial infarction and stroke in older adults. Cardiovascular Health Study Collaborative Research Group. N Engi J Med 1999; 340:14-22.
27. Stamler J, Vaccaro O, Neaton JD, Wentworth D for the Multiple Risk Factor Intervention Trial Research Group: Diabetes, other risk factors and 12-years cardiovascular mortality for men screened in the Multiple Risk Factor Intervention Trial. Diabetes Care 16:434-444, 1993.
28. Zukowska-Grojec Z, Pruszczyk P, Colton C, Yao J, Shen GH, Myers AK, Wahlestedt C: Mitogenic effect of neuropeptide Y in rat vascular smooth muscle cells. Peptides 1993; 14:263-268.
29. Shigeri Y, Fujimoto M: Neuropeptide Y stimulates DNA synthesis in vascular smooth muscle cells. Neurosci Lett 1993; 149:19-22.
30. Lundberg JM, Franco-Cereceda A, Hemsen A, Lacroix JS, Pernow J: Pharmacology of noradrenaline and neuropeptide tyrosine (NPY)-mediated sympathetic cotransmission. Fundam Clin Pharmacol 4:373-391, 1990.
Claims (13)
1. Способ диагностики риска развития атеросклероза, включающий определение у пациента полиморфизма на участке сигнального пептида препро-NPY человека, причем полиморфизм заключается в замене лейцина на пролин в 7-м положении на участке указанного сигнального пептида и является индикатором повышенного риска развития атеросклероза.
2. Способ по п.1, в котором пациент является диабетиком.
3. Способ диагностики риска развития диабетической ретинопатии, включающий определение у пациента полиморфизма на участке сигнального пептида препро-NPY человека, причем полиморфизм заключается в замене лейцина на пролин в 7-м положении на участке указанного сигнального пептида и является индикатором повышенного риска развития диабетической ретинопатии.
4. Способ лечения пациента, у которого диагностирован повышенный риск развития атеросклероза в соответствии с п.1 или 2, с целью предотвращения развития атеросклероза, включающий введение пациенту эффективного количества агента, противодействующего влиянию мутантного гена NPY.
5. Способ по п.4, при котором упомянутым агентом является фармацевтическое средство, имеющее целью модулировать синтез, секрецию или метаболизм эндогенного NPY или взаимодействовать специфическим образом с сайтами-мишенями для NPY путем модулирования действия NPY за счет специфичных к NPY белков-рецепторов.
6. Способ по п.4, при котором упомянутым агентом является фармацевтическое средство, имеющее целью модулировать экспрессию нормального или мутантного гена NPY.
7. Способ лечения пациента с повышенным риском развития атеросклероза в соответствии с п.1 или 2 с целью предотвращения развития атеросклероза, включающий применение к пациенту специфичной генотерапии, имеющей целью восстановление мутантной последовательности NPY.
8. Способ лечения пациента-диабетика с повышенным риском развития диабетической ретинопатии в соответствии с п.3 с целью предотвращения развития диабетической ретинопатии, включающий введение пациенту эффективного количества агента, противодействующего влиянию мутантного гена NPY.
9. Способ по п.8, при котором упомянутым агентом является фармацевтическое средство, имеющее целью модулировать синтез, секрецию или метаболизм эндогенного NPY или взаимодействовать специфическим образом с сайтами-мишенями для NPY путем модулирования действия NPY за счет специфичных к NPY белков-рецепторов.
10. Способ по п.8, при котором упомянутым агентом является фармацевтическое средство, имеющее целью модулировать экспрессию нормального или мутантного гена NPY.
11. Способ лечения пациента-диабетика с повышенным риском развития диабетической ретинопатии в соответствии с п.3 с целью предотвращения развития диабетической ретинопатии, включающий применение к пациенту специфичной генотерапии, имеющей целью восстановление мутантной последовательности NPY.
12. Способ изучения фармацевтических средств или генетических средств, применимых в лечении атеросклероза или диабетической ретинопатии, путем использования животной модели, включающей трансгенное животное, которое несет последовательность ДНК человека, включающую нуклеотидную последовательность, которая кодирует препропоследовательность нейропептида-Y (препро-NPY), или ее часть, которая кодирует зрелый пептид NPY человека, в котором аминокислота лейцин в 7-м положении на участке сигнального пептида упомянутой препро-NPY (i) не заменена или (ii) заменена пролином.
13. Способ изучения фармацевтических средств или генетических средств, применимых в лечении атеросклероза или диабетической ретинопатии, путем использования животной модели, включающей трансгенное животное, которое несет последовательность ДНК, включающую нуклеотидную последовательность, которая кодирует во всех отношениях нормальную последовательность NPY мыши, или ее часть, которая кодирует зрелый пептид NPY мыши, но в которой нуклеотидная последовательность, кодирующая сигнальный пептид мыши, заменена на последовательность сигнального пептида человека, кодирующую либо нормальный, либо мутантный сигнальный пептид человека.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US09/291,994 US6312898B1 (en) | 1999-04-15 | 1999-04-15 | Diagnosis of a person's risk of developing atherosclerosis or diabetic retinopathy based on leucine 7 to proline 7 polymorphism in the prepro-neuropeptide Y gene |
US09/291,994 | 1999-04-15 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2001130755A RU2001130755A (ru) | 2003-08-27 |
RU2238107C2 true RU2238107C2 (ru) | 2004-10-20 |
Family
ID=23122742
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2001130755A RU2238107C2 (ru) | 1999-04-15 | 2000-03-29 | Диагностика риска развития у субъекта атеросклероза или диабетической ретинопатии |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US6312898B1 (ru) |
EP (1) | EP1169475B1 (ru) |
JP (1) | JP2003521473A (ru) |
AT (1) | ATE316153T1 (ru) |
AU (1) | AU777917B2 (ru) |
CA (1) | CA2363994A1 (ru) |
CZ (1) | CZ20013549A3 (ru) |
DE (1) | DE60025595T2 (ru) |
EE (1) | EE200100533A (ru) |
ES (1) | ES2251977T3 (ru) |
HU (1) | HUP0200719A3 (ru) |
NO (1) | NO20014969D0 (ru) |
NZ (1) | NZ513189A (ru) |
PL (1) | PL350620A1 (ru) |
RU (1) | RU2238107C2 (ru) |
WO (1) | WO2000063430A1 (ru) |
ZA (1) | ZA200104775B (ru) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2461005C1 (ru) * | 2011-09-07 | 2012-09-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации" | Способ прогнозирования риска развития диабетической ретинопатии при сахарном диабете типа 2 у якуток |
RU2465598C1 (ru) * | 2011-09-07 | 2012-10-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации" | Способ прогнозирования риска развития диабетической ретинопатии при сахарном диабете типа 2 у якутов |
RU2533836C1 (ru) * | 2013-09-25 | 2014-11-20 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Воронежская государственная медицинская академия имени Н.Н. Бурденко Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО ВГМА им. Н.Н. Бурденко Минздрава России) | Способ мониторинга лиц с риском раннего развития атеросклероза и наличием сахарного диабета 2 типа |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050107327A1 (en) * | 1997-12-19 | 2005-05-19 | Hormos Medical Corporation | Method for reducing overproduction of neuropeptide Y in an individual |
JP2003527865A (ja) * | 2000-03-21 | 2003-09-24 | ホルモス メディカル コーポレーション | ヒトのアルコール依存症の発症に関するリスクの診断 |
US20040254131A1 (en) * | 2003-06-16 | 2004-12-16 | Markku Koulu | Method for prevention or treatment of diseases or disorders related to excessive formation of vascular tissue or blood vessels |
US6979294B1 (en) * | 2002-12-13 | 2005-12-27 | California Institute Of Technology | Split-screen display system and standardized methods for ultrasound image acquisition and processing for improved measurements of vascular structures |
WO2005052593A1 (en) * | 2003-10-29 | 2005-06-09 | The University Of Leicester | Detection |
KR100961926B1 (ko) * | 2007-08-30 | 2010-06-10 | 서울대학교산학협력단 | 당뇨병성 망막병증 검출용 바이오 마커 조성물 및 진단키트 |
ES2337115B2 (es) * | 2007-09-26 | 2011-01-24 | Universidade De Santiago De Compostela | Metodo para la deteccion del riesgo de desarrollar vitreorretinopatiaproliferante (vrp). |
US20100225239A1 (en) * | 2009-03-04 | 2010-09-09 | Purespectrum, Inc. | Methods and apparatus for a high power factor, high efficiency, dimmable, rapid starting cold cathode lighting ballast |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5455164A (en) | 1989-11-03 | 1995-10-03 | Mcgill University | Ruminant immortalized mammary epithelial cell lines |
US5714497A (en) * | 1993-02-15 | 1998-02-03 | Sanofi | Compounds bearing sulphamoyl and amidino radicals, their preparation process and pharmaceutical compositions containing them |
GB9406974D0 (en) | 1994-04-08 | 1994-06-01 | Pharmaceutical Proteins Ltd | Transgenic production |
GB9708918D0 (en) | 1997-05-01 | 1997-06-25 | Ppl Therapeutics Scotland Ltd | Methods |
SE9703414D0 (sv) * | 1997-09-23 | 1997-09-23 | Astra Ab | New compounds |
-
1999
- 1999-04-15 US US09/291,994 patent/US6312898B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-03-29 AU AU35632/00A patent/AU777917B2/en not_active Ceased
- 2000-03-29 EE EEP200100533A patent/EE200100533A/xx unknown
- 2000-03-29 DE DE60025595T patent/DE60025595T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2000-03-29 RU RU2001130755A patent/RU2238107C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-03-29 JP JP2000612507A patent/JP2003521473A/ja active Pending
- 2000-03-29 ES ES00914228T patent/ES2251977T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-29 NZ NZ513189A patent/NZ513189A/en unknown
- 2000-03-29 HU HU0200719A patent/HUP0200719A3/hu unknown
- 2000-03-29 EP EP00914228A patent/EP1169475B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-29 WO PCT/FI2000/000260 patent/WO2000063430A1/en active IP Right Grant
- 2000-03-29 PL PL00350620A patent/PL350620A1/xx unknown
- 2000-03-29 AT AT00914228T patent/ATE316153T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-03-29 CZ CZ20013549A patent/CZ20013549A3/cs unknown
- 2000-03-29 CA CA002363994A patent/CA2363994A1/en not_active Abandoned
-
2001
- 2001-06-12 ZA ZA200104775A patent/ZA200104775B/en unknown
- 2001-10-12 NO NO20014969A patent/NO20014969D0/no not_active Application Discontinuation
-
2005
- 2005-06-14 US US11/151,453 patent/US20050234008A1/en not_active Abandoned
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
HIDEKI LTO et al. Risk Factor Analysis for Makrovask.... Diabetes. - 1996, v.45, №3, р.4914. Биохимия гормонов и гормональная регуляция /Под ред. Н.А.Юдаева. - М.: Наука, 1976, стр. 72-96. * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2461005C1 (ru) * | 2011-09-07 | 2012-09-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации" | Способ прогнозирования риска развития диабетической ретинопатии при сахарном диабете типа 2 у якуток |
RU2465598C1 (ru) * | 2011-09-07 | 2012-10-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации" | Способ прогнозирования риска развития диабетической ретинопатии при сахарном диабете типа 2 у якутов |
RU2533836C1 (ru) * | 2013-09-25 | 2014-11-20 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Воронежская государственная медицинская академия имени Н.Н. Бурденко Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО ВГМА им. Н.Н. Бурденко Минздрава России) | Способ мониторинга лиц с риском раннего развития атеросклероза и наличием сахарного диабета 2 типа |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
NZ513189A (en) | 2003-05-30 |
AU777917B2 (en) | 2004-11-04 |
HUP0200719A3 (en) | 2004-11-29 |
DE60025595T2 (de) | 2006-11-16 |
ES2251977T3 (es) | 2006-05-16 |
DE60025595D1 (de) | 2006-04-06 |
ATE316153T1 (de) | 2006-02-15 |
CA2363994A1 (en) | 2000-10-26 |
NO20014969L (no) | 2001-10-12 |
PL350620A1 (en) | 2003-01-27 |
NO20014969D0 (no) | 2001-10-12 |
EP1169475A1 (en) | 2002-01-09 |
HUP0200719A2 (en) | 2002-06-29 |
JP2003521473A (ja) | 2003-07-15 |
ZA200104775B (en) | 2002-06-12 |
CZ20013549A3 (cs) | 2002-04-17 |
US20050234008A1 (en) | 2005-10-20 |
US6312898B1 (en) | 2001-11-06 |
EP1169475B1 (en) | 2006-01-18 |
EE200100533A (et) | 2002-12-16 |
WO2000063430A1 (en) | 2000-10-26 |
AU3563200A (en) | 2000-11-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20050234008A1 (en) | Diagnosis of a person's risk of developing atherosclerosis or diabetic retinopathy based on leucine 7 to proline 7 polymorphism in the prepro-neuropeptide Y gene | |
Isohanni et al. | DARS2 mutations in mitochondrial leucoencephalopathy and multiple sclerosis | |
CN109069494A (zh) | 治疗在gla基因中具有g9331a突变的患者的法布里病的方法 | |
Oz et al. | Reduction in Filamin C transcript is associated with arrhythmogenic cardiomyopathy in Ashkenazi Jews | |
WO2007063405A2 (en) | Diagnosis and treatment of exocrine pancreatic dysfunction and diabetes using human cel gene | |
JP4174203B2 (ja) | 骨損傷の受け易さを判定する方法 | |
AU752138B2 (en) | A DNA molecule encoding a mutant prepro-neuropeptide Y, a mutant signal peptide, and uses thereof | |
US6544743B1 (en) | Peroxisome proliferator-activated receptor alpha and disorders of lipid metabolism | |
Jeffries et al. | Biallelic CRELD1 variants cause a multisystem syndrome, including neurodevelopmental phenotypes, cardiac dysrhythmias, and frequent infections | |
US20030224362A1 (en) | Diagnosis of a person's risk of developing alcoholism | |
US20040259104A1 (en) | Test | |
Knudsen et al. | Hepatic lipase deficiency in a Finnish family; novel and known genetic variants in the HL gene | |
CZ20002214A3 (cs) | DNA molekula kódující mutantní preproneuropeptid Y, mutantní signální peptid, a jejich použití | |
MXPA02003010A (en) | Diagnosis of a person s risk of developing alcoholism | |
Laing | NEW TRENDS IN THE CONGENITAL MYOPATHIES: INVITED LECTURES |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20080330 |