RU2225196C1

RU2225196C1 - Biologically active additive for cosmetic and curative preparations and method for its obtaining

Info

Publication number: RU2225196C1
Application number: RU2003100578/15A
Authority: RU
Original assignee: Общество с ограниченной ответственностью Компания народной медицины "Биофабрика"
Priority date: 2003-01-08
Filing date: 2003-01-08
Publication date: 2004-03-10

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: the present innovation deals with manufacturing biologically active substances out of medicinal leech. The suggested biologically active additive (BAA) for cosmetic and medicinal preparations is a powder-like substance or liquid obtained at complete or partial removal of extract being emulsion of the following composition: vegetable oil, phospholipid and water. Freeze dried mass of medicinal leech undergo extraction. The present innovation, also, deals with the method for obtaining biologically active additive for cosmetic and medicinal preparations due to freezing medicinal leech, its freeze drying, reducing, extraction and filtration. Innovation provides to obtain BAA out of medicinal leech tissue as lipid-enzymatic complex of protease and hyaluronidase activity favoring BAA stability in aqueous solutions. BAA obtained due to the above- mentioned method increases skin permeability by 1.5-2.3 times that leads to higher activity of cosmetic and medicinal preparations that contain such an additive. Moreover, the suggested BAA keeps the activity of protease and that of hyaluronidase for 6 mo that is 10 times higher against a prototype. EFFECT: higher efficiency. 6 cl, 3 ex, 3 tbl

Description

Изобретение относится к производству биологически активных веществ для косметических и лекарственных средств, а именно к производству биологически активных веществ из медицинских пиявок. The invention relates to the production of biologically active substances for cosmetics and medicines, namely the production of biologically active substances from medical leeches.

Описана биологически активная добавка для лечебных и косметических целей (Патент РФ 2153325) и способ ее получения. Она представляет собой надосадочную жидкость экстракта из гомогената медицинских пиявок или их частей, или секрета слюнных желез или крови из пищеварительного канала медицинских пиявок, обладает антмстрессорной и антиоксидантной активностью. Способ ее получения заключается в ТОМ, что пиявки или их части гомогенизируют водой, полученный гомогенат экстрагируют водой, центрифугируют, фильтруют, собирают надосадочную жидкость. Стабильность продукта, полученного таким способом, не описана. A biologically active additive for therapeutic and cosmetic purposes is described (RF Patent 2153325) and a method for its preparation. It is a supernatant of the extract from the homogenate of medical leeches or parts thereof, or the secretion of the salivary glands or blood from the digestive canal of medical leeches, has anti-stress and antioxidant activity. The method for its preparation is that the leeches or parts thereof are homogenized with water, the resulting homogenate is extracted with water, centrifuged, filtered, and the supernatant is collected. The stability of the product obtained in this way is not described.

Наиболее близкой по технической сущности к предлагаемой добавке и способу получения является биологически активная добавка для косметических средств, обладающая протеолитической активностью и представляющая собой водный экстракт измельченного лиофилизатата медицинских пиявок (Патент РФ 2113843). Получают ее путем экстракции водой измельченной до порошкообразного состояния массы лиофилизата, который образуется при замораживании пиявок с последующей лиофилизацией в течение 12-24 часов. Добавка обладает протеолитической активностью и стимулирует белковый и липидный обмен в коже. Однако добавка, полученная таким способом, недостаточно стабильна, не известно ее влияние на проницаемость кожи для содержащихся в креме или мази биологически активных веществ. The closest in technical essence to the proposed additive and method of obtaining is a biologically active additive for cosmetics with proteolytic activity and representing an aqueous extract of powdered lyophilisate of medical leeches (RF Patent 2113843). It is obtained by extraction with water of a lyophilizate mass crushed to a powder state, which is formed upon freezing of leeches, followed by lyophilization for 12-24 hours. The supplement has proteolytic activity and stimulates protein and lipid metabolism in the skin. However, the additive obtained in this way is not stable enough, its effect on the permeability of the skin to the biologically active substances contained in the cream or ointment is not known.

Задача изобретения - получить из тканей медицинской пиявки биологически активную добавку, повышающую проницаемость кожи, стабильную в жидких средах. The objective of the invention is to obtain from the tissue of a medical leech a biologically active additive that increases the permeability of the skin, stable in liquid media.

Поставленная задача реализуется предлагаемой биологически активной добавкой для косметических и лекарственных средств и способом ее получения. Биологически активная добавка (БАД) для косметических и лекарственных средств представляет собой порошкообразное вещество или жидкость, полученную при полном или частичном удалении экстракта, являющегося эмульсией следующего состава, мас.%: растительное масло 1-26, фосфолипид 4-6, вода остальное. Экстракции подвергают лиофилизированную массу медицинских пиявок, причем отношение лиофилизат:экстрагент при экстракции как 1:(3÷10). The task is implemented by the proposed biologically active additive for cosmetic and medicinal products and the method for its preparation. A biologically active additive (BAA) for cosmetics and medicines is a powdered substance or liquid obtained by completely or partially removing the extract, which is an emulsion of the following composition, wt.%: Vegetable oil 1-26, phospholipid 4-6, water the rest. Extraction is subjected to a lyophilized mass of medical leeches, and the ratio of lyophilisate: extractant during extraction as 1: (3 ÷ 10).

Способ получения биологически активной добавки для косметических и лекарственных средств включает замораживание медицинской пиявки, лиофилизацию, измельчение, экстракцию, фильтрацию, причем экстракцию проводят эмульсией следующего состава, мас.%: масло растительное 1-26, фосфолипид 4-6, вода -остальное, после фильтрации экстрагент удаляют или полностью, или от 30% до 90% первоначального объема. В качестве растительного масла используют, например, оливковое, а в качестве фосфолипида используют лецитин или фосфодиэтаноламин. A method of obtaining a biologically active additive for cosmetics and medicines includes freezing a medical leech, lyophilization, grinding, extraction, filtering, and the extraction is carried out by an emulsion of the following composition, wt.%: Vegetable oil 1-26, phospholipid 4-6, other water, after By filtration, the extractant is removed either completely or from 30% to 90% of the original volume. For example, olive oil is used as a vegetable oil, and lecithin or phosphodiethanolamine is used as a phospholipid.

Оказалось, что применение для экстракции эмульсии описанного состава и способа получения позволили из ткани медицинской пиявки получить БАД в виде липидно-энзимного комплекса, обладающего протеазной и гиалуронидазной активностью и способствующего стабильности БАД в водных растворах. It turned out that the use of the described composition and preparation method for the extraction of emulsions made it possible to obtain dietary supplements from the tissue of a medical leech in the form of a lipid-enzyme complex with protease and hyaluronidase activity and contributing to the stability of dietary supplements in aqueous solutions.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами:
Пример 1. Получение БАД.The invention is illustrated by the following examples:
Example 1. Obtaining dietary supplements.

Пиявки медицинские промывают, подсушивают. Далее массу лиофилизируют, измельчают. Затем лиофилизат экстрагируют эмульсией, содержащей растительное масло, фосфолипид, воду. Соотношение лиофилизат:экстрагент как 1:(3:10). Экстракцию проводят в течение 5-70 часов при постоянном перемешивании ультразвуковой мешалкой в режиме, позволяющем сохранять стабильность эмульсии. По окончании экстракции экстракт фильтруют и затем удаляют воду до получения необходимой консистенции целевого продукта: порошкообразное вещество или жидкость, представляющая собой водный или масляный раствор целевого продукта. Он содержит гирудин, полипептиды, фосфолипиды, проявляет протеазную и гиалуронидазную активность. Конкретные примеры получения представлены в таблице 1. Medical leeches are washed, dried. Next, the mass is lyophilized, crushed. Then the lyophilisate is extracted with an emulsion containing vegetable oil, phospholipid, water. The ratio of lyophilisate: extractant as 1: (3:10). The extraction is carried out for 5-70 hours with constant stirring with an ultrasonic mixer in a mode that allows to maintain the stability of the emulsion. At the end of the extraction, the extract is filtered and then water is removed to obtain the desired consistency of the target product: a powdery substance or liquid, which is an aqueous or oily solution of the target product. It contains hirudin, polypeptides, phospholipids, exhibits protease and hyaluronidase activity. Specific production examples are presented in table 1.

Пример 2. Исследование проницаемости кожи. Example 2. The study of permeability of the skin.

Изменение проницаемости кожи исследовалось in vitro на кожи мыши (Смирнов А.В., Фейглин B.C. "Космическая биология и медицина", 1976, т. 21, 6, с. 123-127). Исследуемый кожный лоскут предварительно в течение 15 и 30 минут выдерживался в разведенном в 50 раз густом экстракте, полученном вышеописанным методом, и закреплялся в специальную камеру. Последняя представляет собой емкость, герметично разделенную исследуемым кожным лоскутом на две камеры. Камеры заполнялись физиологическим раствором, а затем в первую добавляли по 200 мМ СаСl₂, KНСО₃, NaH₂PO₄, а также лизин. Через 1 час после начала опыта определяли концентрацию ионов Са⁺², K⁺, Na⁺ и лизина во второй камере в опыте (С_оп) и в контроле(С_контр). В качестве контроля исследовалась проницаемость кожного лоскута после предварительного 15 и 30-минутного воздействия физиологическим раствором. Увеличение проницаемости обработанной экстрактом кожи для исследованных ионов выражено как отношение концентрации ионов, прошедших через кожный лоскут в контроле, к аналогичной величине в опыте. Во всех случаях различия статистически достоверны. Результаты испытания представлены в таблице 2.The change in skin permeability was studied in vitro on mouse skin (Smirnov A.V., Feiglin BC "Space Biology and Medicine", 1976, v. 21, 6, pp. 123-127). The studied skin flap was preliminarily kept for 15 and 30 minutes in a diluted 50 times thick extract obtained by the method described above and fixed in a special chamber. The latter is a container hermetically divided by the studied skin flap into two chambers. The chambers were filled with physiological saline, and then 200 mM CaCl ₂ , KHCO ₃ , NaH ₂ PO ₄ , and also lysine were added to the first. 1 hour after the start of the experiment, the concentration of Ca ^{+ 2} , K ⁺ , Na ⁺ and lysine ions in the second chamber in the experiment (C _op ) and in the control (C _counter ) was determined. As a control, the permeability of the skin flap was studied after a preliminary 15 and 30 minute exposure to saline. The increase in the permeability of the skin treated with the extract for the studied ions is expressed as the ratio of the concentration of ions passing through the skin flap in the control to a similar value in the experiment. In all cases, the differences are statistically significant. The test results are presented in table 2.

Пример 3. Сравнительное изучение изменения активности протеазы и гиалуронидазы. Example 3. A comparative study of changes in the activity of protease and hyaluronidase.

Сравнение изменения активности протеазы и гиалуронидазы исследовалось в двух растворах: опыт 1 - в полученном по прототипу водном экстракте измельченных лиофильно высушенных медицинских пиявок и опыт 2 - в водном растворе сухого экстракта медицинских пиявок, полученном по заявляемому методу. В обоих случаях использовалась дистиллированная вода. Во 2-м опыте концентрация сухого экстракта медицинской пиявки была подобрана таким образом, чтобы исходная активность ферментов была достаточно близка. Активность гиалуронидазы (в нмоль глюкуроновой кислоты/мг белка/мин) и протеазы (мкмоль лейцина/мг белка/мин) определяли сразу после приготовления (получения) раствора, а также к концу 1, 3, 7, 15, 30, 60, 90, 180-х суток с момента приготовления. Весь период эксперимента растворы хранились в термостате при Т=20^oС. С целью предупреждения процессов брожения в оба раствора добавлялся стандартный консервант, используемый в косметической промышленности. По результатам испытаний, представленным в таблице 3, видно, что в водном растворе биологически активной добавки, полученной по заявленному способу, активность протеазы и гиалуронидазы сохраняется в течение шести месяцев в отличие от прототипа, где активность сохраняется только 15 суток.A comparison of changes in the activity of protease and hyaluronidase was studied in two solutions: experiment 1 — in the aqueous extract obtained from the prototype of milled lyophilized dried medical leeches; and experiment 2 — in an aqueous solution of the dry extract of medical leeches obtained by the claimed method. In both cases, distilled water was used. In the 2nd experiment, the concentration of the dry extract of medical leeches was chosen so that the initial activity of the enzymes was fairly close. The activity of hyaluronidase (in nmol glucuronic acid / mg protein / min) and protease (μmol leucine / mg protein / min) was determined immediately after preparation (preparation) of the solution, as well as towards the end of 1, 3, 7, 15, 30, 60, 90 , 180 days from the date of preparation. The entire period of the experiment, the solutions were stored in a thermostat at Т = 20 ^o С. In order to prevent fermentation processes, a standard preservative used in the cosmetic industry was added to both solutions. According to the test results presented in table 3, it is seen that in an aqueous solution of biologically active additives obtained by the claimed method, the activity of the protease and hyaluronidase is maintained for six months, in contrast to the prototype, where the activity lasts only 15 days.

Таким образом, биологически активная добавка, полученная предложенным способом, увеличивает в 1,5-2,3 раза проницаемость кожи, что приведет к повышению активности косметических и лекарственных средств, содержащих эту добавку. Кроме того, предложенная БАД сохраняет активность протеазы и гиалуронидазы в жидкой среде в течение 6 месяцев, что более чем в 10 раз больше, чем у прототипа. Thus, the biologically active additive obtained by the proposed method increases the permeability of the skin by 1.5-2.3 times, which will lead to an increase in the activity of cosmetics and medicines containing this additive. In addition, the proposed dietary supplement maintains the activity of protease and hyaluronidase in a liquid medium for 6 months, which is more than 10 times more than that of the prototype.

Claims

1. Dietary supplement for cosmetics and medicines, which is a powder or liquid extract obtained from the lyophilized mass of medical leeches, characterized in that it is obtained by extraction with an emulsion of the following composition, wt.%: Vegetable oil 1-26, phospholipid 4-6 , water the rest, with a ratio of lyophilisate: extractant 1: (3-10), followed by complete or partial removal of water.

2. A method of obtaining a biologically active additive for cosmetics and medicines, including freezing a medical leech, lyophilization, grinding, extraction, filtration, characterized in that the extraction is carried out by an emulsion of the following composition, wt.%:

Vegetable oil 1-26

Phospholipid 4-6

Water Else

and after filtration, water is removed from the extract.

3. The method according to claim 2, characterized in that the water is removed completely.

4. The method according to claim 2, characterized in that the water is removed from 30 to 90%.

5. The method according to claim 2, characterized in that olive oil is used as a vegetable oil.

6. The method according to claim 2, characterized in that lecithin or phosphodiesthanolamine is used as the phospholipid.