RU2222997C1 - Biologically active food additive - Google Patents
Biologically active food additive Download PDFInfo
- Publication number
- RU2222997C1 RU2222997C1 RU2002120933/13A RU2002120933A RU2222997C1 RU 2222997 C1 RU2222997 C1 RU 2222997C1 RU 2002120933/13 A RU2002120933/13 A RU 2002120933/13A RU 2002120933 A RU2002120933 A RU 2002120933A RU 2222997 C1 RU2222997 C1 RU 2222997C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- biologically active
- molecular weight
- tinrostim
- components
- mice
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано в качестве БАД к пище. При применении предлагаемой добавки происходит активизация иммунной системы, повышение умственной и физической работоспособности, стрессоустойчивости. The invention relates to the food industry and can be used as a dietary supplement for food. When using the proposed supplement, the immune system is activated, increasing mental and physical performance, stress resistance.
Известна питательная диетическая добавка, способствующая повышению сопротивляемости организма человека (Патент США 5292538, МПК 5 А 23 L 1/305, опубл. 08.03.94). Добавка представляет собой смесь веществ и содержит 25-100 частей полимерной глюкозы, 5-25 частей источника гидролизованного белка, состоящая из дипептидов и пептидов с более длинной цепью, 0-20 частей источника липида, 50-500(•103) частей Mg, 0,03-6 частей источника аминокислотных лигандов. Источник гидролизованного белка представляет собой частично гидролизованный лактоальбумин. В состав питательной добавки внесены такие анаболические вещества, как витамины, антиоксиданты и липотропные вещества, с целью придания ей оптимальной энергической ценности. Отличительной особенностью этой добавки является то, что источником пептидов является белок молока.Known nutritional dietary supplement that enhances the resistance of the human body (US Patent 5292538, IPC 5 A 23
Известна пищевая добавка (Патент Франции 2676648, МПК 5 А 61 K 35/407), которая включает экстракты сердца и печени утки Barbari., которая используется для профилактики и лечения инфекционных заболеваний. Known food supplement (French Patent 2676648, IPC 5 A 61 K 35/407), which includes extracts of the heart and liver of duck Barbari., Which is used for the prevention and treatment of infectious diseases.
Известен состав для стимуляции работоспособности при занятии спортом, способ его изготовления и применение в качестве диетической пищевой добавки (Патент Германии 19903560, МПК A 23 L 1/29). Предлагаемый состав для стимуляции работоспособности при занятии спортом содержит МСТ, углеводы, аланин, лизин, фенилаланин, глютаминовую кислоту, метионин, серин, глицин, орнитин и таурин. Предлагаются способ изготовления и применения данного состава в качестве диетической пищевой добавки. A known composition for promoting performance during sports, the method of its manufacture and use as a dietary supplement (German Patent 19903560, IPC A 23
Известен препарат из тканей морских гидробионтов "Орбитар" (патент РФ 2053779, МПК6 А 61 К 35/56) с содержанием азота аминогрупп 0,8-1,0% от общей массы, с соотношением свободных аминокислот к пептидным группам 6:7, массой сухих веществ 25-35 мас.% и рН 4,5-6,0, применяемый для повышения резистентности человека к неблагоприятным факторам. Known drug from the tissues of marine hydrobionts "Orbitar" (RF patent 2053779, IPC 6 A 61 K 35/56) with a nitrogen content of amino groups of 0.8-1.0% of the total mass, with a ratio of free amino acids to peptide groups of 6: 7, mass solids 25-35 wt.% and pH 4.5-6.0, used to increase human resistance to adverse factors.
Известен лечебно-профилактический бальзам "Витаген" (ТУ 9169-010-20785204-94), содержащий в своем составе 37 компонентов растительного и животного происхождения, в том числе женьшень, элеутерококк, препараты из ламинарии, молок лососевых рыб, мумие. Это средство применяют при реабилитации больных после различных перенесенных заболеваний, снижении функций центральной нервной системы, снижении мышечной и умственной работоспособности. Known therapeutic and preventive balm "Vitagen" (TU 9169-010-20785204-94), containing 37 components of plant and animal origin, including ginseng, eleutherococcus, preparations from kelp, salmon milk, mummy. This tool is used in the rehabilitation of patients after various diseases, a decrease in the functions of the central nervous system, and a decrease in muscle and mental performance.
Известна биологически активная добавка (Патент РФ 2164765, МПК7 A 23 L 1/30, А 23 D 9/00, A 23 L 1/24, А 61 К 9/00), содержащая иммунобиологический препарат (биомассу непатогенных микроорганизмов в количестве 103-109 КОЕ и/или автолизат микроорганизмов в количестве 0,1-20,0 мас.%, и/или лизоцим в количестве 0,1-20,0 мас. %), а также целевые добавки в количестве 0,5-90,0 мас. %. Протектор содержит следующие соотношения его компонентов, мас.%: аскорбиновая кислота - 1,0-94,0; и/или лактоза 5,0-98,0; и/или глюкоза 1,0-10,0; и/или сахара 1,0-20,0; и/или желатин 0,5-3,0; и/или полигликин 1,0-94,0; и/или альбумин 1,0-94,0; и/или иммуноглобулины 3,0-98,0. Сухой протектор, и/или сухие целевые добавки, и/или сухой иммунобиологический препарат, и/или сухую смесь иммунобиологических препаратов БАД содержит в измельченном состоянии с размером частиц не более 250 мкм. Также в качестве целевых добавок БАД может содержать компоненты для таблетирования или капсулирования и быть представлена в виде таблетки или капсулы.A biologically active additive is known (RF Patent 2164765, IPC7 A 23
Известна биологически активная добавка к пище (Патент РФ 2165719, МПК7 A 23 L 1/30, 1/39, 1/06), содержащая растворимые пищевые волокна, биологически активные вещества морского и растительного происхождения, лимонную кислоту, сорбат калия, сахар, воду, и дополнительно содержит аминокислоту - таурин в количестве не менее 0,03%, при этом в качестве источника биологически активных веществ растительного происхождения содержится астрагал густоцветный или шерстистоцветный, арнику горную (соцветия), бадан толстолистный (корневища), боярышник-красный (плоды), березу повислую (почки), валериану лекарственную (корни и корневища), виноград сушеный (плоды), гибискус (лепестки цветочного чая), зверобой продырявленный (трава), землянику лесную (листья), калину обыкновенную (плоды), лабазник вязолистный (цветки), леспедецу копеечнековую (надземная часть), варену красильную (корневища и корни), мелиссу лекарственную (подземную часть), мяту перечную (листья), пион уклоняющийся (корни и корневища), пустырник сердечный (трава), солодку голую (корни и корневища), смородину черную (листья), хмель обыкновенный (соплодия или "женские шишки", чай китайский (зеленый), а в качестве источника биологически активных веществ морского происхождения - гребешка гидролизат пищевой, кальмара гидролизат пищевой, молок лососевых рыб гидролизат пищевой, мидии гидролизат пищевой, краба гидролизат пищевой, ежи морские плоские мороженые, икру морских ежей ястычную, в качестве растворимых волокон - зостерин, при определенном соотношении ингредиентов. Биологически активные добавки к пище обладают направленным действием на сердечно-сосудистую и нервную системы организма, а также укрепляет капилляры и стенки артерий, нормализует давление и вес. Known biologically active food supplement (RF Patent 2165719, IPC A 23
Известна биологически активная добавка к пище " Русский остров" (Патент РФ 2130738, МПК6 A 23 L 1/30, 1/29, А 61 К 35/78, C 12 G 3/100, A 23 L 2/52), содержащая калий, железо и аскорбиновую кислоту, дополнительно содержит каротин, аминокислоты и флавоноиды, причем соотношение каротина, аминокислот, флавоноидов составляет (0,02-3,0):(0,05-3,8):(1,01-6,25). Биологически активная добавка может применяться в безалкогольных напитках, бальзамах, настойках и т.п. Это позволяет получить биологически активную добавку, обладающую антидепрессивным, тонизирующим, антиоксидантным, противовоспалительным, иммунокоррегирующим и общеукрепляющим свойствами, повышением умственной и физической работоспособности, оказывает умственную и физическую работоспособность, оказывает благотворное влияние на желудочно-кишечный тракт за счет оптимального соотношения компонентов, обусловленное синергизмом действия составляющих, а также это позволит расширить ассортимент известных биологически активных добавок. Known biologically active food supplement "Russian Island" (RF Patent 2130738, IPC 6 A 23
Известна биологически активная добавка к пище (Патент РФ 2165161, МПК7 A 23 L 1/30, 1/39, 1/06), которая состоит из смеси пищевых органических веществ (при следующем соотношении компонентов, мас.%) аминокислот : флавоноидов : каротиноидов : полиненасыщенных жирных кислот составляют (8,34-21,45): (0,14-8,34):(0,001-0,53):(0,009-1,54):(0,0001-0,009). Указанная смесь компонентов позволяет получить биологически активную добавку, обладающую антиоксидантным, противовоспалительным, иммунокоррегирующим и общеукрепляющими свойствами, оказывать благоприятное действие на желудочно-кишечный тракт, функцию печени и почек, поддерживать центральную нервную систему и сердечно-сосудистую систему, регулировать перекисное окисление липидов в организме за счет оптимального соотношения компонентов, обусловленное синергизмом действия составляющих. Known biologically active food supplement (RF Patent 2165161, IPC7 A 23
Известен пищевой продукт (Патент РФ 2061389, МПК6 А 23 L 1/08), содержащий, мас.%: мед 92-94, мумие 1-2, воду 3-4, масляный экстракт калифорнийских червей. Данный продукт рекомендован как профилактическое средство при различных заболеваниях, т.к. он нормализует холестериновый обмен и полностью покрывает недостаточное количество белков в организме. Known food product (RF Patent 2061389, IPC6 A 23
Известен натуральный поливитаминный комплекс "Астенотон" (Патент РФ 2149566, МПК7 А 23 L 1/076, 1/30, 1/302, А 61 К 35/64). Изобретение относится к пищевой промышленности. Натуральный поливитаминный комплекс "Астенотон" содержит, мас.%: цветочная пыльца 48,0-52,0, родиола розовая 8,0-12,0, витамин С 6,0-7,0, витамин Е 1,0-2,0, прополис 1,0-3,0, стеарат кальция 0,9-1,0, тальк 2,7-3,2, лактоза остальное. Сочетание компонентов обеспечивает повышенные адаптогенные и антиоксидантные свойства. Known natural multivitamin complex "Astenoton" (RF Patent 2149566, IPC 7 A 23
Известно лечебно-профилактическое средство широкого спектра действия (патент РФ 2083218, МКИ6 А 61 К 35/78, 31/66), которое включает цветочную пыльцу и ДНК при соотношении 60-95:5-40.A wide range of therapeutic and prophylactic agents is known (RF patent 2083218, MKI 6 A 61 K 35/78, 31/66), which includes pollen and DNA at a ratio of 60-95: 5-40.
Наиболее близким техническим решением является пищевая биологически активная добавка к пище "Тинростим-С" (Патент РФ 2105504, МПК6 A 23 L 1/305, A 23 L 1/29, А 61 К 37/02,) в состав которого входит, %:
Ганглиин (торговое название Тинростим) - 0,2-0,4
Аскорбиновая кислота - 9-11
Глюкоза - Остальное
Ганглиин - пептиды из ганглиев кальмара, является иммуностимулятором высокой активности, технология получения которого разработана в ТИНРО-Центре.The closest technical solution is a biologically active food supplement "Tinrostim-S" (RF Patent 2105504, IPC6 A 23
Gangliin (trade name Tinrostim) - 0.2-0.4
Ascorbic acid - 9-11
Glucose - Else
Gangliin - peptides from squid ganglia, is a high activity immunostimulant, the technology for which was developed at the TINRO Center.
Тинростим-С рекомендуется принимать в качестве общеукрепляющей и иммуностимулирующей биологически активной добавки к пище по 550 мг в день в течение 3-10 дней. Tinrostim-C is recommended to be taken as a general strengthening and immunostimulating biologically active food supplement of 550 mg per day for 3-10 days.
Задача, решаемая изобретением, расширение ассортимента БАД, обладающих общеукрепляющим, иммуностимулирующим, антистрессовым действием и способностью активизировать умственную и физическую работоспособность. The problem solved by the invention, the expansion of the range of dietary supplements with tonic, immunostimulating, anti-stress effect and the ability to activate mental and physical performance.
Сущность изобретения заключается в том, что заявляемая биологически активная добавка содержит в своем составе, мас.%:
Тинростим - 0,1-0,3
Нуклеопротеиновый комплекс, выделенный из молок лососевых рыб - Остальное
В биологически активную добавку могут быть также включены целевые добавки: аскорбиновая кислота; микрокристаллическая целлюлоза (МКЦ) и/или крахмал в количестве 10-35 мас.%. В качестве целевых добавок биологически активная добавка может также содержать компоненты для таблетирования или капсулирования в количестве 0,5-1,5 мас.%.The essence of the invention lies in the fact that the inventive biologically active additive contains in its composition, wt.%:
Tinrostim - 0.1-0.3
Nucleoprotein Complex Isolated from Salmon Milk - Rest
Targeted additives may also be included in the dietary supplement: ascorbic acid; microcrystalline cellulose (MCC) and / or starch in an amount of 10-35 wt.%. As target additives, the biologically active additive may also contain components for tabletting or encapsulation in an amount of 0.5-1.5 wt.%.
Заявляемую биологически активную добавку к пище получают простым смешиванием компонентов. The inventive biologically active food supplement is obtained by simple mixing of the components.
Новизна изобретения заключается в совместном ранее не известном применении двух биологически активных добавок к пище Тинростима и Нуклеопротеинового комплекса, выделенного из молок лососевых рыб. The novelty of the invention lies in the joint previously unknown use of two biologically active food additives Tinrostim and Nucleoprotein complex isolated from salmon milk.
Нуклеопротеиновый комплекс из молок лососевых рыб содержит 75-80% низкомолекулярной ДНК с молекулярной массой от 100 до 300 кДа, 15-20% РНК и 5% белка. The nucleoprotein complex of salmon milk contains 75-80% of low molecular weight DNA with a molecular weight of 100 to 300 kDa, 15-20% RNA and 5% protein.
Тинростим - комплекс низкомолекулярных пептидов, выделенный из нервной ткани кальмаров, с молекулярной массой от 1 до 15 кДа. При совместном применении Тинростима и Нуклеопротеинового комплекса из молок лососевых рыб в указанных количествах проявляется синергизм действия, выражающийся в уменьшении действующей дозы компонентов на 15-20%, чем при раздельном применении Тинростима и Нуклеопротеинового комплекса из молок лососевых рыб при одинаковом биологическом эффекте. Tinrostim is a complex of low molecular weight peptides isolated from squid nervous tissue with a molecular weight of 1 to 15 kDa. With the combined use of Tinrostim and the Nucleoprotein complex from salmon milk, in the indicated amounts, a synergy of action is manifested, expressed in a decrease in the effective dose of the components by 15-20% than with the separate use of Tinrostim and the Nucleoprotein complex from salmon milk with the same biological effect.
Заявляемая БАД проявляет более широкий спектр биологического действия чем Нуклеопротеиновый комплекс из молок лососевых рыб и Тинростим, применяемые отдельно. Заявляемая БАД проявляет общеукрепляющее действие, высокую иммуностимулирующую активность, повышает стрессоустойчивость, умственную и физическую работоспособность, улучшает процессы памяти. The inventive dietary supplement exhibits a wider spectrum of biological action than the Nucleoprotein complex of salmon milk and Tinrostim, used separately. The inventive dietary supplement exhibits a general strengthening effect, high immunostimulating activity, increases stress resistance, mental and physical performance, improves memory processes.
Биологически активную добавку в виде порошков, таблеток или капсул по 250 или 500 мг употребляют с профилактической целью в количестве 500 мг 1-2 раза в день в течение 3-15 дней одновременно с пищей. A dietary supplement in the form of powders, tablets or capsules of 250 or 500 mg is used prophylactically in the amount of 500 mg 1-2 times a day for 3-15 days at the same time as food.
Сущность изобретения поясняется примерами. The invention is illustrated by examples.
Пример 1
Компоненты смешивают в следующем соотношении, мас.%:
Тинростим - 0,1
Нуклеопротеиновый комплекс, выделенный из молок лососевых рыб - 99,9
Ингредиенты перемешивают в смесителе, обеспечивая равномерное распределение компонентов, и фасуют в порошки по 500 мг. Биологически активная добавка представляет собой порошок светло-кремового цвета, по вкусу напоминает сушеные морепродукты. Рекомендуется употреблять по одному порошку 1-2 раза в день одновременно с пищей.Example 1
The components are mixed in the following ratio, wt.%:
Tinrostim - 0.1
Nucleoprotein complex isolated from salmon milk - 99.9
The ingredients are mixed in a mixer, ensuring a uniform distribution of components, and packaged in powders of 500 mg. The dietary supplement is a light cream powder, reminiscent of dried seafood in taste. It is recommended to use one powder 1-2 times a day at a time with food.
Заявляемая биологически активная добавка к пище была подвергнута исследованиям. The inventive biologically active food supplement has been investigated.
Массовую долю дезоксирибонуклеиновой кислоты в нуклеопротеиновом комплексе из молок лососевых рыб определяли на спектрофотометре по методу Спирина (Спирин А.С. Спектрофотометрическое определение суммарного количества нуклеиновых кислот.// Биохимия, 1958. - Т.23, 5, - с.656-662). Метод основан на экстракции и стандартном гидролизе низкомолекулярной ДНК 0,5 М хлорной кислотой до растворимых фрагментов и измерении оптической плотности при длине волны 270 и 290 нм. Массовую долю ДНК определяют по разности оптических плотностей. Содержание низкомолекулярной ДНК из молок лососевых рыб в порошке составило 75,8%. The mass fraction of deoxyribonucleic acid in the nucleoprotein complex of salmon milk was determined on a spectrophotometer according to the Spirin method (Spirin A.S. Spectrophotometric determination of the total number of nucleic acids. // Biochemistry, 1958. - T.23, 5, - p. 566-662) . The method is based on the extraction and standard hydrolysis of low molecular weight DNA with 0.5 M perchloric acid to soluble fragments and the measurement of optical density at a wavelength of 270 and 290 nm. Mass fraction of DNA is determined by the difference in optical densities. The content of low molecular weight DNA from salmon fish milk in the powder was 75.8%.
Влияние предлагаемой заявки на стрессоустойчивость, умственную и физическую работоспособность и процессы памяти, определяли в институте физиологии им. И.П. Павлова РАН. Исследования проводили на монозиготных близнецах (5-ти парах) и группе детей с психической ретордацией (средней степени дебильности). The impact of the proposed application on stress resistance, mental and physical performance and memory processes was determined at the Institute of Physiology. I.P. Pavlova RAS. Studies were performed on monozygotic twins (5 pairs) and a group of children with mental retardation (moderate debility).
Оценивались следующие показатели:
Биоэлектрическая активность головного мозга - ЭЭГ, по 16 отведениям с последующей компьютерной обработкой данных по специально разработанной программе;
Текущее психологическое состояние испытуемых, их стрессоустойчивость, наличие тревоги и т.д. - тест Люшера и тест САН самочувствие, активность, настроение по Доскин В.А., Лаврентьева Н.А., Мирошенников М.П., Шарий В.Б. Тест дифференцированной самооценки функционального состояния. //Вопросы психологии, 1973, 6, - с.141-145;
Уровень невротизации и психопатизации (тест УНП) - по методическим рекомендациям. Л., 1980, Ленинградский НИИ им. В.М.Бехтерева, мин. здравоохр. СССР;
Объем кратковременной памяти, процесс заучивания, ретенция - по Вудвордс Ф. "Экспериментальная психология", М.: И.Л., 1950;
Индекс физической работоспособности (Гарвардский степ-тест) по - Бойков Ю.Г. и др. Фармакологическая коррекция утомления. М.: Медицина, 1984;
Уровень интеллекта (WISC тест) по Агафонова, Колеченко. Методика изучения интеллекта. Ч.1. Методические рекомендации. Изд-во ин-та усовершенствования учителей, С-Петербург, 1991, - с.4-106.The following indicators were evaluated:
Bioelectric activity of the brain - EEG, 16 leads with subsequent computer processing of data according to a specially developed program;
The current psychological state of the subjects, their stress resistance, the presence of anxiety, etc. - Lusher test and SAN test of well-being, activity, mood by Doskin V.A., Lavrentieva N.A., Miroshennikov M.P., Shary V.B. Test differentiated self-assessment of the functional state. // Questions of psychology, 1973, 6, - p.141-145;
The level of neurotization and psychopathization (UNP test) - according to methodological recommendations. L., 1980, Leningrad Research Institute. V.M. Bekhterev, min. health USSR;
The volume of short-term memory, the process of memorization, retention - according to Woodwards F. “Experimental Psychology”, M .: I.L., 1950;
Physical Performance Index (Harvard Step Test) by - Boykov Yu.G. and other Pharmacological correction of fatigue. M .: Medicine, 1984;
Intelligence Level (WISC Test) by Agafonov, Kolechenko. Methods of studying intelligence.
Вышеуказанными исследованиями заявляемой БАД установлено, что введенный в состав пищевой добавки Нуклеопротеиновый комплекс, основной составной частью которого является низкомолекулярная ДНК, повышает физическую работоспособность на 34%, снижает уровень невротизации, тревожности, астенической симптоматики эмоциональной лабильности на 20%, улучшает селективное внимание на 25%. Анализ биоэлектрической активности показал, что в основе наблюдаемых психических улучшений лежит оптимизация корко-подкорковых взаимоотношений ЦНС, которая выражалась в увеличении альфа индекса и снижении бета-активности и медленных волн. Полученные данные позволяют сделать вывод, что стимулирующий эффект низкомолекулярной ДНК из молок лососевых на умственную и физическую работоспособность основан не на истощении резервов организма, а именно на оптимизации взаимодействия функциональных систем организма. The above studies of the claimed dietary supplements found that introduced into the composition of the food supplement Nucleoprotein complex, the main component of which is low molecular weight DNA, increases physical performance by 34%, reduces the level of neurotization, anxiety, asthenic symptoms of emotional lability by 20%, improves selective attention by 25% . The analysis of bioelectric activity showed that the basis of the observed mental improvements is the optimization of the cortical-subcortical relationships of the central nervous system, which was expressed in an increase in the alpha index and a decrease in beta activity and slow waves. The data obtained allow us to conclude that the stimulating effect of low molecular weight DNA from salmon milk on mental and physical performance is based not on the depletion of body reserves, but on the optimization of the interaction of the functional systems of the body.
Иммуностимулирующее действие препарата определяли в Научно-исследовательском Институте эпидемиологии и микробиологии СО РАМН г. Владивосток и оценивали по следующим направлениям:
I. Определение влияния заявляемой добавки на гуморальный иммунный ответ иммунодефицитных мышей в тестах: влияние на уровень антител в сыворотках; число антителообразующих (АОК) клеток в селезенках мышей, иммунизированных эритроцитами барана (ЭБ) и число иммунных розеткообразующих клеток (РОК) в селезенке мышей. Иммунодефицит у мышей вызывали внутрибрюшинным введением циклофосфана в дозе 100 мг на 1 кг массы животного.The immunostimulating effect of the drug was determined at the Research Institute of Epidemiology and Microbiology SB RAMS of Vladivostok and was evaluated in the following areas:
I. Determination of the effect of the claimed additives on the humoral immune response of immunodeficient mice in tests: the effect on the level of antibodies in serum; the number of antibody-forming (AOK) cells in the spleens of mice immunized with sheep erythrocytes (EB); and the number of immune rosette-forming cells (ROS) in the spleen of mice. Immunodeficiency in mice was caused by intraperitoneal administration of cyclophosphamide at a dose of 100 mg per 1 kg of animal weight.
Исследования по определению уровня антител и числа АОК проводили по методу W.K. Yerne и А.А. Nordin (1963). В качестве тимусзависимого антигена были использованы эритроциты барана, которые, попадая в организм, быстро фиксируются фагоцитирующими клетками, перерабатываются в высокоиммуногенные продукты и затем последние экспрессируются на клеточной мембране макрофагов. Иммунный ответ В-лимфоцитов на этот антиген предполагает обязательное участие в кооперативных процессах Т-хелперов и (или) секретируемых ими веществ. Уровень антителообразования определяли в реакции гемагглютинации (РГА). Для испытаний было создано 4 группы мышей - две контрольные (1-ая - здоровые мыши, не получавшие БАД; 2-ая - мыши с иммунодефицитом, не получавшие БАД; 3-я группа - здоровые мыши, получавшие БАД; 4-я группа - иммунодефицитные мыши, получавшие БАД). В каждую группу было взято по 10 мышей, эксперименты повторяли дважды на мышах (самцах) массой 16-18 г. Биологически активную добавку скармливали мышам опытной группы вместе с кормом в дозе 0,5 мкг в день на мышь в течение 3 дней. Эритроциты барана вводили внутрибрюшинно в дозе 2•108. На четвертые сутки после иммунизации определяли количество антителообразующих клеток (АОК) и титр гемагглютининов.Studies to determine the level of antibodies and the number of AOK were carried out according to the method of WK Yerne and A.A. Nordin (1963). Sheep erythrocytes were used as a thymus-dependent antigen, which, entering the body, are quickly fixed by phagocytic cells, processed into highly immunogenic products, and then the latter are expressed on the cell membrane of macrophages. The immune response of B-lymphocytes to this antigen implies mandatory participation in cooperative processes of T-helpers and (or) substances secreted by them. The level of antibody formation was determined in a hemagglutination reaction (RGA). For the tests, 4 groups of mice were created - two control (1st — healthy mice that did not receive dietary supplements; 2nd — mice with immunodeficiency that did not receive dietary supplements; 3rd group — healthy mice that received dietary supplements; 4th group — immunodeficient mice treated with dietary supplements). 10 mice were taken in each group, experiments were repeated twice on mice (males) weighing 16-18 g. The dietary supplement was fed to mice of the experimental group along with food at a dose of 0.5 μg per day per mouse for 3 days. Sheep red blood cells were administered intraperitoneally at a dose of 2 • 10 8 . On the fourth day after immunization, the number of antibody-forming cells (AOK) and the hemagglutinin titer were determined.
Исследования влияния БАД на число РОК проводили по методу J.S.Haskill et.al.(1972). Studies of the influence of dietary supplements on the number of ROCKs were performed according to the method of J.S. Haskill et.al. (1972).
Результаты исследования показали статистически достоверное усиление гуморального иммунного ответа: титра гемагглютининов, числа АОК и числа РОК в селезенках мышей по сравнению с контролем (иммунодефицитные мыши). Результаты этих экспериментов представлены в таблице 1. The results of the study showed a statistically significant increase in the humoral immune response: hemagglutinin titer, the number of AOKs and the number of ROCKs in the spleens of mice compared to the control (immunodeficient mice). The results of these experiments are presented in table 1.
Как следует из материалов таблицы, после введения циклофосфана иммунологические показатели мышей понижались вдвое (группа 2). Добавление в корм иммунодефицитным мышам заявляемой БАД выводит мышей из состояния иммунодефицита, их показатели значительно повышались (группа 4) и приближались к показателям здоровых мышей, не принимавших БАД (группа 1). У здоровых мышей, принимавших БАД, показатели гуморального фактора самые высокие. As follows from the table, after the introduction of cyclophosphamide, the immunological parameters of mice decreased by half (group 2). Adding the inventive dietary supplement to the food of immunodeficient mice deduces the mice from the state of immunodeficiency, their indices increased significantly (group 4) and approached those of healthy mice that did not take dietary supplements (group 1). In healthy mice that took dietary supplements, the humoral factor was highest.
II. Влияние заявляемой БАД на клеточные факторы иммунитета. II. The effect of the claimed dietary supplement on cellular factors of immunity.
Эксперименты проводили на мышах линии СВА по методу Р.Н. Lagrange et.al. (1974) - изменение уровня гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ). ГЗТ индуцировали у мышей введением сенсибилизирующей дозы ЭБ (5•108 в 0,5 мл 0,85% раствора хлорида натрия внутрибрюшинно). На четвертые сутки в подушечку лапки мышей вводили разрешающую дозу ЭБ (1•108 в 20 мкл 0,85% раствора хлорида натрия). Контролем служила лапка, в которую вводили равный объем (20 мкл) 0,85% раствора хлорида натрия. Биологически активную добавку скармливали мышам ежедневно в течение эксперимента и один день до эксперимента в дозе 0,25 мг на мышь. Через 24 часа после введения разрешающей дозы мышей усыпляли, лапки отрезали по выступу кости ниже сочленения мало- и большеберцовой кости и выше пяточного сустава и взвешивали конечности на аналитических весах. Процент прироста веса лапки, характеризующий интенсивность реакции ГЗТ, определяли по формуле
где Х - % прироста веса лапки.The experiments were performed on CBA mice according to the method of R.N. Lagrange et.al. (1974) - a change in the level of delayed-type hypersensitivity (HRT). HRT was induced in mice by administering a sensitizing dose of EB (5 x 10 8 in 0.5 ml of a 0.85% sodium chloride solution intraperitoneally). On the fourth day, a resolving dose of EB (1 × 10 8 in 20 μl of a 0.85% sodium chloride solution) was injected into the paw pad of mice. A foot was served as a control, into which an equal volume (20 μl) of a 0.85% sodium chloride solution was introduced. The dietary supplement was fed to mice daily during the experiment and one day before the experiment at a dose of 0.25 mg per mouse. 24 hours after the introduction of the permissive dose, the mice were euthanized, the legs were cut off along the protrusion of the bone below the junction of the tibia and above the heel joint and limbs were weighed on an analytical balance. The percentage of weight gain of the paw, characterizing the intensity of the HRT reaction, was determined by the formula
where X is the% increase in paw weight.
III. Влияние БАД на фагоцитарную активность макрофагов брюшной полости мышей. III. The influence of dietary supplements on the phagocytic activity of macrophages of the abdominal cavity of mice.
Установлено, что основной точкой приложения тинростима (ганглиина) являются клетки системы мононуклеарных фагоцитов. Особое значение фагоцитоз приобретает при инфекционных процессах, вызываемых факультативными внутриклеточными микроорганизмами (сальмонеллез, псевдотуберкулез и др.). При этих заболеваниях возбудители длительное время могут персистировать в цитоплазме макрофагов, оставаясь недосягаемыми для гуморальных факторов иммунитета и лекарственных средств. Как правило, фагоцитоз в этом случае носит незавершенный характер. Есть данные о ведущей роли фагоцитоза в защите организма от стафилококковой инфекции, возбудители которой фагоцитируются в основном полиморфноядерными лейкоцитами (ПМЯЛ). Поэтому для полной элиминации таких возбудителей болезни из организма необходимо значительно активизировать поглотительную и переваривающую функцию макрофагов. It has been established that the main point of application of tinrostim (gangliin) are cells of the mononuclear phagocyte system. Of particular importance is phagocytosis in infectious processes caused by facultative intracellular microorganisms (salmonellosis, pseudotuberculosis, etc.). In these diseases, pathogens can persist for a long time in the cytoplasm of macrophages, remaining unattainable for humoral immunity factors and drugs. As a rule, phagocytosis in this case is incomplete. There is evidence of the leading role of phagocytosis in protecting the body against staphylococcal infection, the causative agents of which are phagocytized mainly by polymorphonuclear leukocytes (PMNL). Therefore, for the complete elimination of such pathogens from the body, it is necessary to significantly activate the absorption and digestion function of macrophages.
Изучение фагоцитарных процессов в макрофагах перитониальной полости неинбредных мышей проводили по общепринятому методу (Брауде Н.И., 1964). Для образования монослоя макрофаги культивировали в пробирках с плавающими стеклами (2•106 клеток на 1 мл) в среде 199 с добавлением 20% сыворотки крупного рогатого скота и антибиотиков (100 ЕД/мл пенициллина и 100 ЕД/мл стрептомицина) в течение 1 часа при 37oС. Наблюдение за культурой макрофагов осуществляли в течение 6 часов. Стекла с монослоем клеток окрашивали азур П-эозином. В каждом препарате считали 300 клеток: давали качественную характеристику состояния макрофагов и количественную оценку с определением фагоцитарного показателя в % (ФП) - число фагоцитирующих клеток из 100- и фагоцитарного числа (ФЧ) - среднего числа микробов, поглощенных одним макрофагом. Перед взятием макрофагов опытным группам мышей скармливали заявляемую БАД в дозе 0,25 мг в день в течение 3 дней. В качестве объектов фагоцитоза были взяты Y. pseudotuberculosis и E.coli. Материалы этой серии экспериментов представлены в таблице 2.The study of phagocytic processes in macrophages of the peritoneal cavity of non-inbred mice was carried out according to the generally accepted method (Braude NI, 1964). To form a monolayer, macrophages were cultured in test tubes with floating glasses (2 × 10 6 cells per 1 ml) in medium 199 with the addition of 20% serum of cattle and antibiotics (100 IU / ml penicillin and 100 IU / ml streptomycin) for 1 hour at 37 o C. Observation of the culture of macrophages was carried out for 6 hours. Glasses with a monolayer of cells were stained with azure P-eosin. 300 cells were counted in each preparation: they gave a qualitative description of the state of macrophages and a quantitative assessment determining the phagocytic index in% (AF) —the number of phagocytic cells from 100 and phagocytic numbers (PS) —the average number of microbes absorbed by one macrophage. Before taking macrophages, experimental groups of mice were fed the claimed dietary supplement at a dose of 0.25 mg per day for 3 days. Y. pseudotuberculosis and E. coli were taken as objects of phagocytosis. The materials of this series of experiments are presented in table 2.
Как следует из материалов таблицы, скармливание мышам заявляемой БАВ стимулировало поглотительную и переваривающую активность макрофагов по отношению к микроорганизмам. Это выражается в вовлечении в фагоцитарный процесс, уже в первые часы наблюдения, большего по сравнению с макрофагами животных, не получавшими БАД, числа фагоцитирующих клеток и в увеличении числа микроорганизмов, поглощенных одним макрофагом. Кроме того, под действием БАВ отмечается более полное и раннее завершение фагоцитарного процесса в макрофагах. As follows from the table, feeding mice of the claimed BAS stimulated the absorption and digestion activity of macrophages in relation to microorganisms. This is expressed in the involvement in the phagocytic process, already in the first hours of observation, of a greater number of phagocytic cells compared to macrophages of animals that did not receive dietary supplements and in an increase in the number of microorganisms absorbed by one macrophage. In addition, under the action of biologically active substances, a more complete and earlier completion of the phagocytic process in macrophages is noted.
IV. Влияния БАД на стимуляцию неспецифической резистентности к экспериментальным инфекциям. IV. The influence of dietary supplements on the stimulation of nonspecific resistance to experimental infections.
Одним из основных критериев биологической активности стимуляторов иммунитета служит суммарный эффект, слагающийся из действия многочисленных факторов, обеспечивающих защиту организма от возбудителей инфекции, который выражается в целом в способности организма противостоять развитию инфекционного процесса. Показано, что тинростим вызывает в организме многокомпонентную защитную реакцию, обеспечивая тем самым повышение сопротивляемости к инфекционным процессам. На модели генерализованной инфекции, развивающейся в результате заражения большой дозой E.coli (млн. микробных клеток), была изучена способность предлагаеой БАД повышать уровень иммунобиологической защиты в этих условиях. One of the main criteria for the biological activity of immunity stimulants is the total effect, consisting of the action of numerous factors that protect the body from pathogens, which is expressed in general in the body's ability to withstand the development of the infectious process. It is shown that tinrostim induces a multicomponent protective reaction in the body, thereby providing increased resistance to infectious processes. In a model of generalized infection that develops as a result of infection with a large dose of E. coli (million microbial cells), the ability of the proposed dietary supplement to increase the level of immunobiological protection under these conditions was studied.
E.coli вводили мышам внутрибрюшинно. Мыши контрольной группы, не получавшие БАД, погибали в течение 3 дней. Выживание опытной группы мышей, получавших БАД в дозе 0,5 мкг на мышь в течение пяти дней, составило 79,7%. В контрольной группе гибель мышей составила 100%. E. coli was administered intraperitoneally to mice. Mice in the control group that did not receive dietary supplements died within 3 days. The survival of the experimental group of mice receiving dietary supplements at a dose of 0.5 μg per mouse for five days was 79.7%. In the control group, the death of mice was 100%.
Таким образом, исследованиями было установлено, что заявляемая БАД обладает широким спектром биологической активности. Thus, studies have found that the claimed dietary supplement has a wide range of biological activity.
Пример 2
Компоненты смешивают в следующем соотношении, мас.%:
Тинростим - 0,3
Нуклеопротеиновый комплекс, выделенный из молок лососевых рыб - 99,7
Ингредиенты перемешивают в смесителе, обеспечивающем равномерное распределение компонентов, и фасуют по 250 мг в капсулы. Рекомендуется употреблять по две капсулы 1-2 раза в день. Биологическое действие пищевой добавки, полученной в соответствии с рецептурой, указанной в примере 2, соответствует действию добавки, полученной по рецептуре, указанной в примере 1.Example 2
The components are mixed in the following ratio, wt.%:
Tinrostim - 0.3
Nucleoprotein complex isolated from salmon milk - 99.7
The ingredients are mixed in a mixer, ensuring a uniform distribution of components, and Packed in 250 mg in capsules. It is recommended to take two capsules 1-2 times a day. The biological effect of the food additive obtained in accordance with the recipe specified in example 2 corresponds to the action of the additive obtained according to the recipe specified in example 1.
Пример 3
Компоненты смешивают в следующем соотношении, мас.%:
Тинростим - 0,2
Нуклеопротеиновый комплекс, выделенный из молок лососевых рыб - 99,8
Ингредиенты перемешивали в смесителе, обеспечивающем равномерное распределение компонентов, и дозируют в порошки по 500 мг. Рекомендуется употреблять по одному порошку 1-2 раза в день. Биологически активная добавка представляет собой порошок светло-кремового цвета со вкусом сушеных морепродуктов. Биологическое действие полученной добавки соответствует действию БАД, указанной в примере 1.Example 3
The components are mixed in the following ratio, wt.%:
Tinrostim - 0.2
Nucleoprotein complex isolated from salmon milk - 99.8
The ingredients were mixed in a mixer, ensuring a uniform distribution of components, and dosed in powders of 500 mg. It is recommended to use one powder 1-2 times a day. The dietary supplement is a light cream powder with the taste of dried seafood. The biological effect of the obtained additives corresponds to the action of dietary supplements specified in example 1.
Пример 4
Компоненты смешивают в следующем соотношении, мас.%:
Тинростим - 0,1
Аскорбиновая кислота - 5
Крахмал - 20
Нуклеопротеиновый комплекс, выделенный из молок лососевых рыб - 74,9
Ингредиенты перемешивают в смесителе, обеспечивающем равномерное распределение компонентов, и фасуют в порошки по 500 мг. Рекомендуется употреблять по одному порошку 1-2 раза в день. Биологически активная добавка представляет собой порошок светло-кремового цвета. Вкус напоминает сушеные морепродукты, кисловатый. Биологическое действие полученной добавки близко действию, указанному для добавки, полученной по рецептуре, указанной в примере 1.Example 4
The components are mixed in the following ratio, wt.%:
Tinrostim - 0.1
Ascorbic acid - 5
Starch - 20
Nucleoprotein complex isolated from salmon milk - 74.9
The ingredients are mixed in a mixer, ensuring a uniform distribution of components, and Packed in powders of 500 mg. It is recommended to use one powder 1-2 times a day. The dietary supplement is a light cream powder. The taste resembles dried seafood, sour. The biological effect of the obtained additive is close to the action indicated for the additive obtained according to the recipe specified in example 1.
Пример 5
Компоненты смешивают в следующем соотношении, мас.%:
Тинростим - 0,3
Аскорбиновая кислота - 7
Крахмал - 15
Стеарат кальция - 1
Нуклеопротеиновый комплекс, выделенный из молок лососевых рыб - 76,7
Ингредиенты перемешивают в смесителе, обеспечивающем равномерное распределение компонентов, и таблетируют. Таблетка прочная, целая с гладкой поверхностью, время распадаемости таблетки составляет 10 мин. Цвет таблетки светло-кремовый, вкус слабо-кислый с привкусом сухого морепродукта. Масса таблетки - 250 мг. Рекомендуется употреблять по 2 таблетки 1-2 раза в день. Биологическое действие таблеткок БАД, указанной в примере 5, соответствует действию добавки, полученной по рецептуре, указанной в примере 1
Пример 6
Компоненты смешивают в следующем соотношении, мас.%:
Тинростим - 0,2
Аскорбиновая кислота - 10,0
МКЦ - 25
Стеарат кальция - 1
Нуклеопротеиновый комплекс, выделенный из молок лососевых рыб - 63,8
Ингредиенты перемешивают в смесителе, обеспечивающем равномерное распределение компонентов и таблетируют. Таблетка светло-кремового цвета, прочная, целая. Вкус кисловатый с привкусом морепродуктов. Время распадаемости таблетки 8 мин. Масса таблетки 250 мг. Рекомендуется употреблять по 2 таблетке 1-2 раза в день. Биологическое действие таблеток соответствует действию добавки, указанной в примере 1.Example 5
The components are mixed in the following ratio, wt.%:
Tinrostim - 0.3
Ascorbic acid - 7
Starch - 15
Calcium Stearate - 1
Nucleoprotein complex isolated from salmon milk - 76.7
The ingredients are mixed in a mixer, ensuring a uniform distribution of components, and tableted. The tablet is strong, whole with a smooth surface, the disintegration time of the tablet is 10 minutes. The color of the tablet is light cream, the taste is slightly acidic with a touch of dry seafood. The weight of the tablet is 250 mg. It is recommended to take 2 tablets 1-2 times a day. The biological effect of the tablets of dietary supplements specified in example 5, corresponds to the action of the additives obtained by the formulation specified in example 1
Example 6
The components are mixed in the following ratio, wt.%:
Tinrostim - 0.2
Ascorbic acid - 10.0
MCC - 25
Calcium Stearate - 1
Nucleoprotein complex isolated from salmon milk - 63.8
The ingredients are mixed in a mixer, ensuring a uniform distribution of the components and tableted. The tablet is a light cream color, durable, whole. The taste is sour with a touch of seafood. Disintegration time of the tablet is 8 minutes. The weight of the tablet is 250 mg. It is recommended to take 2 tablets 1-2 times a day. The biological effect of the tablets corresponds to the action of the additive specified in example 1.
Пример 7
Компоненты готовят в следующем соотношении, мас.%:
Тинростим - 0,1
Аскорбиновая кислота - 5
МКЦ - 15
Крахмал - 15
Стеарат кальция - 1
Нуклеопротеиновый комплекс, выделенный из молок лососевых рыб - 63,9
Ингредиенты перемешивают в смесителе, обеспечивающем равномерное распределение компонентов, и таблетируют. Таблетка белого цвета, прочная, целая, время распадаемости 9 мин. Вкус кисловатый с привкусом сушеных морепродуктов. Масса таблетки - 250 мг. Рекомендуется употреблять по две таблетки 1-2 раза в день. Биологическое действие таблеток, соответствует добавке, полученной в соответствии с рецептурой указанной в примере 1.Example 7
The components are prepared in the following ratio, wt.%:
Tinrostim - 0.1
Ascorbic acid - 5
MCC - 15
Starch - 15
Calcium Stearate - 1
Nucleoprotein complex isolated from salmon milk - 63.9
The ingredients are mixed in a mixer, ensuring a uniform distribution of components, and tableted. The tablet is white, durable, intact, disintegration time 9 min. The taste is sour with a touch of dried seafood. The weight of the tablet is 250 mg. It is recommended to take two tablets 1-2 times a day. The biological effect of the tablets corresponds to the additive obtained in accordance with the formulation indicated in example 1.
Таким образом биологически активная добавка к пище, включающая Тинростим и ДНК, имеет широкий спектр биологического действия, превышающий действие этих веществ, применяемых отдельно. Thus, a biologically active food supplement, including Tinrostim and DNA, has a wide range of biological effects that exceed the effects of these substances used separately.
Claims (3)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2002120933/13A RU2222997C1 (en) | 2002-07-30 | 2002-07-30 | Biologically active food additive |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2002120933/13A RU2222997C1 (en) | 2002-07-30 | 2002-07-30 | Biologically active food additive |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2002120933A RU2002120933A (en) | 2004-02-10 |
RU2222997C1 true RU2222997C1 (en) | 2004-02-10 |
Family
ID=32173102
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2002120933/13A RU2222997C1 (en) | 2002-07-30 | 2002-07-30 | Biologically active food additive |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2222997C1 (en) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2559066C1 (en) * | 2014-09-10 | 2015-08-10 | Евгений Иванович Верещагин | Biologically active food additive |
RU2828278C1 (en) * | 2023-10-20 | 2024-10-08 | Общество с ограниченной ответственностью "ФармОушен Лаб." | Method for producing biologically active supplement from hydrobionts gonads |
-
2002
- 2002-07-30 RU RU2002120933/13A patent/RU2222997C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ТУТЕЛЬЯН В.А. и др. Биологически активные добавки в питании человека (оценка качества и безопасности, эффективность, характеристика, применение в профилактической и клинической медицине). Томск, НТА, 1999, с.19. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2559066C1 (en) * | 2014-09-10 | 2015-08-10 | Евгений Иванович Верещагин | Biologically active food additive |
RU2828278C1 (en) * | 2023-10-20 | 2024-10-08 | Общество с ограниченной ответственностью "ФармОушен Лаб." | Method for producing biologically active supplement from hydrobionts gonads |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2002120933A (en) | 2004-02-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7069490B2 (en) | Yuricoma longifolia extract and its use in enhancing and / or stimulating the immune system | |
US20060222682A1 (en) | Nutraceutical Moringa composition | |
JP2002179586A (en) | Lipase inhibitor | |
CN101518336A (en) | Nutrition food with oxidation resistance function and preparation method thereof | |
Rzepecka-Stojko et al. | The Effect of Storage of Bee Pollen Extracts on Polyphenol Content. | |
Salla et al. | A comparative study on the role of Omani honey with various food supplements on diabetes and wound healing | |
FR3095761A1 (en) | Nutraceutical composition to induce weight loss and reduce abdominal fat | |
ES2815351T3 (en) | Marine peptides and fish nucleotides, compositions and their uses for lowering blood glucose | |
JP3502072B2 (en) | Health food composition for protecting liver (Healthy food composition for protecting hepatic) | |
RU2222997C1 (en) | Biologically active food additive | |
RU2333677C2 (en) | Dietary supplement | |
RU2667781C1 (en) | Biologically active cedar shell additive and method for its preparation | |
RU2215532C2 (en) | Method for complex processing sea cucumber viscera and preparing biologically active food supplements and biologically active food supplements "tingol-2" and "erogol" | |
KR100877669B1 (en) | Cosmetic composition containing the extract of allium monanthum, allium scorodorpasum, allium tuberosum, allium fistulosum and scilla scilloides | |
RU2223670C1 (en) | Food biologically active additive | |
KR101713115B1 (en) | Cosmetic composition containing the fermented extract of allium monanthum, allium scorodorpasum, allium tuberosum, allium fistulosum and scilla scilloides | |
AU732706B2 (en) | Lipid-based immune modulator composition | |
WO2016206363A1 (en) | Use of jilin ginseng oligopeptide in preparation of anti-oxidant food product or health care food product | |
AU2012325600A1 (en) | Pharmaceutical composition regulating blood fat and preparation process thereof | |
RU2436415C2 (en) | Composition of biologically active substances based on betulin with regulated rate of releasing components for reducing degree of alcohol intoxication, preventing and relieving alcohol intoxication and alcohol withdrawal syndrome | |
Sharoba | Spirulina: Functional Compounds And Health Benefits | |
CN116114871B (en) | Chinese health-preserving composition for enhancing immunity and preparation method and application thereof | |
TWI745609B (en) | Composition for promoting antioxidative activity | |
RU2181560C2 (en) | Food biologically active supplement | |
RU2098985C1 (en) | Bioactive preparation |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20150820 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180731 |