RU2211046C1 - Средство, стимулирующее пролиферацию фибробластов - Google Patents
Средство, стимулирующее пролиферацию фибробластов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2211046C1 RU2211046C1 RU2002100743/14A RU2002100743A RU2211046C1 RU 2211046 C1 RU2211046 C1 RU 2211046C1 RU 2002100743/14 A RU2002100743/14 A RU 2002100743/14A RU 2002100743 A RU2002100743 A RU 2002100743A RU 2211046 C1 RU2211046 C1 RU 2211046C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- glu
- proliferation
- fibroblasts
- peptide
- agent
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и медицинской промышленности и заключается в применении пептида формулы Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu в качестве средства, стимулирующего пролиферацию фибробластов. Пептид Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu способен стимулировать пролиферацию фибробластов в 50 раз меньших дозировках, что свидетельствует о его большей специфической активности и дает возможность уменьшить риск побочного влияния. Предлагаемое средство может найти применение в качестве стимулятора процессов пролиферации при различной патологии, требующей активации регенераторного потенциала, и обеспечивает повышение биологической активности. 3 табл.
Description
Изобретение относится к медицине и медицинской промышленности и заключается в применении пептида формулы Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu в качестве средства, стимулирующего пролиферацию фибробластов.
Известно вещество, полученное из цельной крови, являющееся производным гликолипидов и стимулирующее регенерацию клеток и тканей (патент СССР 1396958, МКЛ4 А 61 К 35/14); средство пептидной природы, выделенное из плаценты и обладающее противовоспалительным и репаративным действием (АС СССР 948001, МКЛ4 А 61 К 35/50). Данные препараты обладают репаративным действием. Известны пептиды с молекулярной массой 8-10 кД, выделенные из гипофизов крупного рогатого скота и стимулирующие пролиферацию фибробластов (Biochim. et Biophys. Acta (P), 626 (1980), 397-411, L.Kelly, D.Puett Preparation). Использование данного препарата в качестве лекарственного средства затруднено в связи со сложностью способа получения, малым выходом активного вещества, значительной вариабельностью физико-химических свойств пептидов, входящих в его состав, а также из-за наличия нежелательных побочных эффектов, ввиду присутствия балластных высокомолекулярных компонентов.
Известны монокины - полипептидные молекулы, продуцируемые клетками макрофагально-моноцитарного ряда и относящиеся к классу цитокинов, которые обладают широким спектром биологической активности, в том числе способны стимулировать пролиферацию фибробластов. К ним относятся гепаринсвязанный эпидермальный ростовой фактор (HB-ECF), вырабатываемый макрофагами и стимулирующий пролиферацию гладкомышечных клеток и фибробластов; трансформирующий фактор роста, вырабатываемый клетками мозга, макрофагами, кератиноцитами и стимулирующий пролиферацию фибробластов, а также индуцирующий развитие эпителия и ангиогенез; тромбоцитарный фактор роста, стимулирующий пролиферацию фибробластов, глиальных клеток, гладкомышечных клеток, клеток эпителия и эндотелия (Жибурт Е.Б., Серебряная Н.Б., Каткова И.В. и др. Цитокины в кроветворении, иммуногенезе и воспалении // Терра Медика Нова.-1996.- 3(4). - С. 15-20; Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции реакции воспаления и иммунитета // Иммунология. - 1995. - 3. - С. 30-44). Известен фактор роста фибробластов (FGF), представляющий собой полипептид с молекулярной массой 50 кДа и длиной цепи 267 аминокислот; его аналоги (патент РФ 97105853, МПК6 С 61 К 38/18, 1999); пептиды, которые на 60% идентичны FGF от аминокислотного остатка 28 (Glu) до аминокислотного остатка 207 (Ala) (патент РФ 99109987, МПК7 А 61 К 38/16, 2001), а также основной фактор роста фибробластов (bFGF), являющийся частью молекулы природного фактора роста фибробластов с 10 по 155 аминокислоту (патент РФ 2093519, МПК6 С 07 К 1/12, 1997). Указанные средства способны стимулировать пролиферацию фибробластов. Однако использование их в качестве лекарственных препаратов затруднено в связи со сложностью и дороговизной промышленного синтеза, возможностью развития аллергических реакций, обусловленной высокой молекулярной массой препарата. Предпочтительнее использовать низкомолекулярные синтетические пептиды. Они эффективны в чрезвычайно малых дозах и не оказывают вредного воздействия на организм.
Известны пародонтальные пептиды, обладающие способностью стимулировать пролиферацию фибробластов [1]. Данное средство по технической сущности и достигаемому эффекту является наиболее близким к предлагаемому решению и является его прототипом. Согласно прототипу пародонтальные пептиды дозозависимо и избирательно стимулируют пролиферацию фибробластов. Этот эффект проявляется в увеличении количества клеток и индекса пролиферации. Одновременно, под влиянием пародонтальных пептидов повышается содержание ДНК и РНК в культуре фибробластов, что также свидетельствует о более интенсивной клеточной пролиферации. Пародонтальные пептиды активны в диапазоне концентраций от 0,5 до 50 мкг/мл. Причем, прослеживается доза-эффект - при увеличении концентрации пародонтальных пептидов в культуральной среде возрастает их специфическая активность. Однако данный пептид обладает низкой биологической активностью. Так, максимальная активность вещества в культуре фибробластов проявляется в концентрации 50 мкг/мл. Это требует применения больших доз препарата и влечет возможное появление аллергических и других нежелательных побочных эффектов.
Настоящее изобретение направлено на расширение арсенала и повышение биологической активности средств, стимулирующих пролиферацию фибробластов.
Решение поставленной задачи достигается тем, что в качестве средства, обладающего способностью стимулировать пролиферацию фибробластов, предлагается использовать синтетический пептид структурной формулы: Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu. Пептид Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu был известен ранее как средство, обладающее способностью стимулировать дифференцировку Т-лимфоцитов [2, 3]. Пептид синтезировали стандартной методикой твердофазного синтеза путем наращивания пептидной цепи с N-конца [4].
При экспериментальном изучении специфической активности заявляемого средства, проведенном в сравнении с прототипом, выявлена новая, ранее неизвестная для пептида Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu способность стимулировать пролиферацию фибробластов. Это подтверждается следующими примерами.
Пример 1. Влияние пептида Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu на пролиферацию фибробластов в культуре клеток
Биологическую активность предлагаемого средства изучали по его действию на культуру фибробластов. Фибробласты выделяли по стандартной методике из 8-12 недельных эмбрионов человека, взятых при искусственном прерывании беременности [5], и вносили в среду 199, содержащую гидролизат лактальбумина и 20% фетальной сыворотки теленка в соотношении 1:1. Концентрацию клеток доводили до 3•105/мл. В культуру фибробластов вносили пептид Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu в концентрациях от 0,005 до 0,5 мкг/мл. В качестве контроля в культуру фибробластов добавляли среду 199 в том же объеме, а также пародонтальные пептиды в диапазоне концентраций от 50 до 0,05 мкг/мл. Клетки культивировали в течение 72 часов при 37oС.
Биологическую активность предлагаемого средства изучали по его действию на культуру фибробластов. Фибробласты выделяли по стандартной методике из 8-12 недельных эмбрионов человека, взятых при искусственном прерывании беременности [5], и вносили в среду 199, содержащую гидролизат лактальбумина и 20% фетальной сыворотки теленка в соотношении 1:1. Концентрацию клеток доводили до 3•105/мл. В культуру фибробластов вносили пептид Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu в концентрациях от 0,005 до 0,5 мкг/мл. В качестве контроля в культуру фибробластов добавляли среду 199 в том же объеме, а также пародонтальные пептиды в диапазоне концентраций от 50 до 0,05 мкг/мл. Клетки культивировали в течение 72 часов при 37oС.
Установлено, что предлагаемое средство оказывает стимулирующее влияние на пролиферацию фибробластов в культуре. Так, при микроскопической оценке, под влиянием пептида Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu возрастает число фибробластов, причем отмечен доза-эффект (таблица 1). Пептид Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu стимулирует пролиферацию фибробластов в диапазоне концентраций от 0,01 до 0,5 мкг/мл. Пародонтальные пептиды (прототип) обладают подобным действием, однако, они эффективны в концентрациях от 0,5 до 50 мкг/мл. Таким образом, минимальная концентрация, в которой заявляемое средство способствует усилению пролиферации фибробластов в культуре клеток, в 50 раз меньше, чем у пародонтальных пептидов, что указывает на более высокую специфическую активность пептида Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu.
Пример 2. Влияние пептида Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu на содержание ДНК и РНК в культуре фибробластов
Уровень ДНК и РНК в культуре фибробластов свидетельствует об интенсивности клеточной пролиферации и является дополнительным подтверждением специфической активности заявляемого средства. Содержание ДНК и РНК в культуре фибробластов определяли по стандартной методике М.Г.Трудолюбивой [6].
Уровень ДНК и РНК в культуре фибробластов свидетельствует об интенсивности клеточной пролиферации и является дополнительным подтверждением специфической активности заявляемого средства. Содержание ДНК и РНК в культуре фибробластов определяли по стандартной методике М.Г.Трудолюбивой [6].
Под влиянием пептида Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu в культуре фибробластов возрастает содержание ДНК и РНК, что обусловлено увеличением клеточной массы. Предлагаемое средство проявляет активность в концентрациях от 0,01 до 0,5 мкг/мл. Подобный эффект зарегистрирован у пародонтальных пептидов, но лишь в концентрациях от 0,5 до 50 мкг/мл (таблицы 2, 3). Таким образом, пептид Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu увеличивает уровень нуклеиновых кислот в дозах, 50 раз меньших, чем пародонтальные пептиды, что является отражением его высокой специфической активности.
Результаты экспериментального изучения заявляемого средства свидетельствуют о его высокой биологической активности, превосходящей таковую известного средства - пародонтальных пептидов. По сравнению с прототипом, заявляемый пептид формулы Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu способен стимулировать пролиферацию фибробластов в 50 раз меньших дозах. Уменьшение дозировки заявляемого средства для достижения аналогичного эффекта свидетельствует о более высокой активности предлагаемого средства и дает возможность уменьшить риск побочного влияния.
Таким образом, при экспериментальном изучении специфической активности заявляемого средства установлено, что пептид Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu обладает свойством стимулировать пролиферацию фибробластов.
Предлагаемое средство может найти применение в медицине в качестве стимулятора процессов пролиферации и регенерации при различной патологии, требующей стимуляции регенераторного потенциала.
Источники информации
1. Токарь Д.Л., Степанов А.В., Кузник Б.И., Цыбиков Н.Н., Пинелис И.С., Хавинсон В.Х. Способ получения вещества, стимулирующего пролиферацию фибробластов // АС СССР 1637077, МПК6 А 61 К 35/37, заявка 4683547/14 от 25.04.1989.
1. Токарь Д.Л., Степанов А.В., Кузник Б.И., Цыбиков Н.Н., Пинелис И.С., Хавинсон В.Х. Способ получения вещества, стимулирующего пролиферацию фибробластов // АС СССР 1637077, МПК6 А 61 К 35/37, заявка 4683547/14 от 25.04.1989.
2. Цепелев С. Л. Биологически активные пептиды бурсы Фабрициуса и их влияние на иммунитет: Дис... канд. мед. наук. - Чита, 2001. - 141с.
3. Цепелев В. Л., Цепелев С.Л., Цыбиков Н.Н., Курупанов С.И. Средство, стимулирующее дифференцировку Т-лимфоцитов // заявка на изобретение 2001103670 от 07.02.2001.
4. Steward J. M. , Young J.D. Solid phase peptide synthesis, San Francisco, 1969.
5. Новые методы культуры животных тканей./ Под ред. Дж. Уосли - М., Мир, 1976.
6. Современные методы в биохимии./ Под ред. В.Н. Ореховича, М., Медицина,1977, с. 313-316.
Claims (1)
- Применение пептида формулы Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu в качестве средства, стимулирующего пролиферацию фибробластов.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2002100743/14A RU2211046C1 (ru) | 2002-01-08 | 2002-01-08 | Средство, стимулирующее пролиферацию фибробластов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2002100743/14A RU2211046C1 (ru) | 2002-01-08 | 2002-01-08 | Средство, стимулирующее пролиферацию фибробластов |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2211046C1 true RU2211046C1 (ru) | 2003-08-27 |
| RU2002100743A RU2002100743A (ru) | 2004-04-20 |
Family
ID=29246259
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2002100743/14A RU2211046C1 (ru) | 2002-01-08 | 2002-01-08 | Средство, стимулирующее пролиферацию фибробластов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2211046C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2740152C1 (ru) * | 2020-01-09 | 2021-01-13 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук" (ФИЦ КНЦ СО РАН) | Способ активации пролиферативного ответа фибробластоподобных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани |
-
2002
- 2002-01-08 RU RU2002100743/14A patent/RU2211046C1/ru not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2740152C1 (ru) * | 2020-01-09 | 2021-01-13 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук" (ФИЦ КНЦ СО РАН) | Способ активации пролиферативного ответа фибробластоподобных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2139085C1 (ru) | Средство, стимулирующее репаративные процессы, и способ его применения | |
| ES2740826T3 (es) | Péptidos de osteopontina modificados que tienen un dominio RGD inactivado y usos de estos | |
| WO2024109878A1 (zh) | 具有抗衰老作用的肽及其组合物和用途 | |
| DE69033200T2 (de) | Wundbehandlung mittels biologisch aktiver peptide | |
| RU2009100884A (ru) | Пептидные фрагменты для индукции синтеза белков внеклеточного матрикса | |
| JPH0661262B2 (ja) | 細胞増殖の刺激方法 | |
| WO2016093326A1 (ja) | 血管新生病の免疫療法 | |
| CN101522708A (zh) | 具有表皮生长因子活性的肽及其用途 | |
| KR20190101990A (ko) | 펩티드 wkdeagkplvk를 포함하는 조성물 | |
| ES2235183T3 (es) | Tioles para promover el crecimiento de celulas madre hematopoyeticas. | |
| JP4708511B2 (ja) | 胆汁由来免疫調節組成物 | |
| JPH02502826A (ja) | 免疫欠損状態の治療のための医薬製剤 | |
| US11912787B2 (en) | Peptide for skin aging prevention and wrinkle reduction, and composition comprising same | |
| CN101679495B (zh) | 用于细胞学和免疫学调节的短的生物活性肽 | |
| RU2211046C1 (ru) | Средство, стимулирующее пролиферацию фибробластов | |
| RU2299741C1 (ru) | Пептид, нормализующий метаболизм в костной и хрящевой тканях, фармацевтическая композиция на его основе и способ ее применения | |
| LT5421B (lt) | Tetrapeptidas, reguliuojantis kraujo gliukozės lygį, sergant cukriniu diabetu | |
| EP2624853B1 (en) | Novel use of antimicrobial peptides in regeneration of skin cells | |
| JP7511296B2 (ja) | ペプチド並びにそれを含む化粧料組成物及び薬学組成物 | |
| Tator et al. | The effect of exogenous thyroid hormones on functional recovery of the rat after acute spinal cord compression injury | |
| JP2002226395A (ja) | 皮膚創傷治癒促進剤 | |
| CN114716515A (zh) | 一种多肽类似物及其制备方法和应用 | |
| JP5123683B2 (ja) | 新規ペプチド | |
| CA2423190C (fr) | Agent angiogeniques et leurs utilisations | |
| MXPA04011502A (es) | Compuestos capaces de bloquear la respueta a sustancias quimicas o estimulos termicos o mediadores de la inflamacion de los nociceptores, un metodo para su obtencion y composiciones que los contienen. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20040109 |