RU2193061C1

RU2193061C1 - Nutrient medium for tuberculosis mycobacterium culturing (mbt-broth)

Info

Publication number: RU2193061C1
Application number: RU2001112456A
Authority: RU
Inventors: М.М. Меджидов; З.У. Темирханова; В.С. Балаклеец; Х.М. Алиева; Т.Д. Шоломинская
Original assignee: Научно-производственное объединение "Питательные среды"
Priority date: 2001-05-04
Filing date: 2001-05-04
Publication date: 2002-11-20

Abstract

FIELD: medicine, clinical microbiology. SUBSTANCE: medium comprises casein dry tryptic hydrolyzate as nitrogen nutrition source, potassium dihydro-orthophosphate, disodium phosphate, magnesium sulfate, sodium citrate, iron citrate-ammonium (green), glycerol and distilled water. Addition of nutrient yeast extract as growth factor and alanine as additional nitrogen source enhances sensitivity of medium with respect to tuberculosis mycobacterium. Commercial production of preparation will ensure the centralized supply practical phthisiobacteriology laboratories with standard nutrient medium. Invention can be used for accelerated detection of tuberculosis mycobacterium (MBT) in clinical material in tuberculosis diagnosis carrying out. EFFECT: enhanced growing properties of medium. 1 tbl, 3 ex

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано для ранней диагностики туберкулеза. The invention relates to medicine, namely to clinical microbiology, and can be used for early diagnosis of tuberculosis.

В последние годы наблюдается значительное повышение уровня показателей заболеваемости туберкулезной инфекцией. In recent years, there has been a significant increase in the incidence rate of tuberculosis infection.

В этой связи уделяется определенное внимание лабораторной диагностике туберкулеза, которая усложнилась появлением морфологически измененных форм возбудителя в результате широкого применения химиопрепаратов (1, 2, 5). In this regard, particular attention is paid to the laboratory diagnosis of tuberculosis, which was complicated by the appearance of morphologically altered forms of the pathogen as a result of the widespread use of chemotherapy (1, 2, 5).

Использование жидких питательных сред для ускоренного выявления МБТ с последующей микроскопией осадка исследуемого материала позволяет обнаружить возбудителя через 5-11 суток, что очень важно для раннего начала лечения больных, не дожидаясь роста на плотных яичных средах (от 3 недель до 2,5 месяца). The use of liquid nutrient media for accelerated detection of MBT followed by microscopy of the sediment of the test material allows the pathogen to be detected after 5-11 days, which is very important for the early treatment of patients without waiting for growth on dense egg media (from 3 weeks to 2.5 months).

Известно использование для этих целей жидких сред Сотона, Школьниковой Р. А. , модификацию среды Сотона с использованием мясокостного фарша тюленя, вместо бычьей сыворотки - сыворотку тюленя (4, 6, 7). It is known that Soton and Shkolnikova R.A. liquid media are used for these purposes, Soton’s environment is modified using meat and bone minced seals, instead of bovine serum, seal serum (4, 6, 7).

Недостатком этих сред является низкая чувствительность и использование дефицитных ингредиентов, а отсутствие коммерческого выпуска ограничивает их применение в практике фтизиобактериологии. The disadvantage of these environments is the low sensitivity and use of scarce ingredients, and the lack of commercial release limits their use in the practice of phthisiobacteriology.

Наиболее близким решением технической задачи данного назначения к заявляемому изобретению по совокупности признаков является среда Школьниковой Р. А. (7), содержащая в качестве источника азотистого питания жидкий гидролизат казеина или аспарагин, калий фосфорнокислый однозамещенный, натрий фосфорнокислый двузамещенный, магний сернокислый, натрий лимонно-кислый, лимонно-аммиачное железо (зеленое), глицерин. The closest solution to the technical problem of this purpose for the claimed invention in terms of features is Shkolnikova R.A. medium (7), containing casein or asparagine liquid, monosubstituted potassium phosphate, disubstituted sodium phosphate, disodium magnesium phosphate, citric sodium sour, lemon-ammonia iron (green), glycerin.

Задача предлагаемого изобретения - повышение ростовых свойств среды. The task of the invention is to increase the growth properties of the medium.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что предлагаемая среда содержит в качестве источника азотистого питания - сухой триптический гидролизат казеина и аминокислоту - аланин, в качестве ростового фактора - экстракт кормовых дрожжей, в качестве источника железа, магния и серы - лимонно-аммиачное железо и сернокислый магний, потребность в углероде удовлетворяется за счет глицерина, в качестве компонента, улучшающего синтетические процессы в культурах микобактерий туберкулеза использован натрий лимонно-кислый, источником калия и фосфора является калий дигидроортофосфат, для создания буферности и корректировки рН среды - динатрий фосфат, при следующем соотношении компонентов, г/л:
Триптический гидролизат казеина - 18,0-22,0
Экстракт кормовых дрожжей - 4,0-6,0
Аланин - 0,8-1,2
Калий дигидроортофосфат - 1,2-1,8
Динатрий фосфат - 2,0-3,0
Магний сернокислый - 0,3-0,7
Натрий лимонно-кислый трехзамещенный - 1,3-1,7
Железо лимонно-аммиачное (зеленое) - 0,03-0,07
Глицерин - 20,0-25,0
Вода дистиллированная - До 1 л
Богатая аминокислотами, имеющими значение в азотистом питании МБТ питательная основа из казеина в сочетании с аминокислотой аланином и ростстимулирующим препаратом - экстрактом кормовых дрожжей и минеральными солями, создают оптимальные условия для роста микобактерий туберкулеза, что обеспечивает возможность раннего их выявления в максимально короткие сроки, в течение 5-11 суток.The specified technical result during the implementation of the invention is achieved by the fact that the proposed medium contains dry tryptic casein hydrolyzate and amino acid alanine as a source of nitrogen nutrition, extract of fodder yeast as a growth factor, and lemon-ammonia iron as a source of iron, magnesium and sulfur and magnesium sulfate, the need for carbon is satisfied by glycerol, sodium l was used as a component that improves the synthetic processes in the cultures of mycobacterium tuberculosis mono-acid, the source of potassium and phosphorus is potassium dihydroorthophosphate, to create buffering and adjust the pH of the medium - disodium phosphate, in the following ratio of components, g / l:
Casein tryptic hydrolyzate - 18.0-22.0
Fodder Yeast Extract - 4.0-6.0
Alanine - 0.8-1.2
Potassium dihydroorthophosphate - 1.2-1.8
Disodium phosphate - 2.0-3.0
Magnesium sulfate - 0.3-0.7
Sodium citric acid trisubstituted - 1.3-1.7
Lemon-ammonia iron (green) - 0.03-0.07
Glycerin - 20.0-25.0
Distilled water - Up to 1 L
Rich in amino acids that are important in the nitrogenous nutrition of the Office, the nutrient base of casein in combination with the amino acid alanine and growth-stimulating drug - extract of fodder yeast and mineral salts create optimal conditions for the growth of mycobacterium tuberculosis, which provides the possibility of their early detection in the shortest possible time, during 5-11 days.

Среду получают следующим образом:
Пример 1. В 975,0 мл дистиллированной воды, содержащей 20,0 мл глицерина растворяют 18,0 г триптического гидролизата казеина, 4,0 г экстракта кормовых дрожжей, 0,8 г аланина, 1,2 г калия дигидроортофосфата, 2,0 г динатрия фосфата, 0,3 г магния сернокислого, 1,3 г натрия лимонно-кислого трехзамещенного, 0,03 г железа лимонно-аммиачного. Кипятят в течение 1-2 мин, фильтруют через бумажный фильтр, разливают в стерильные пробирки по 2 мл, стерилизуют автоклавированием при температуре 121^oС в течение 20 мин.The environment is prepared as follows:
Example 1. In 975.0 ml of distilled water containing 20.0 ml of glycerol is dissolved 18.0 g of tryptic hydrolyzate of casein, 4.0 g of extract of fodder yeast, 0.8 g of alanine, 1.2 g of potassium dihydroorthophosphate, 2.0 g of disodium phosphate, 0.3 g of magnesium sulfate, 1.3 g of sodium citric acid trisubstituted, 0.03 g of lemon-ammonia iron. It is boiled for 1-2 minutes, filtered through a paper filter, poured into sterile 2 ml tubes, and sterilized by autoclaving at a temperature of 121 ^° C for 20 minutes.

Контроль качества среды осуществляют при посеве тест-штаммов Mycobacterium tuberculosis H₃₇Rv, Mycobacterium tuberculosis H₃₇Ra и свежевыделенных культур от больных туберкулезом легких. Учет результатов проводят визуально по помутнению среды через 5-11 суток инкубации посевов при температуре 37^oС. После 5-11 суток инкубации содержимое пробирок центрифугируют при 1500 об/мин 15 мин. Надосадочную жидкость сливают, из осадка делают мазки для просмотра в люминесцентном микроскопе.Environmental quality control is carried out by sowing test strains of Mycobacterium tuberculosis H ₃₇ Rv, Mycobacterium tuberculosis H ₃₇ Ra and freshly isolated cultures from patients with pulmonary tuberculosis. Analysis of the results is carried out visually by the turbidity of the medium after 5-11 days of incubation of crops at a temperature of 37 ^o C. After 5-11 days of incubation, the contents of the tubes are centrifuged at 1500 rpm for 15 minutes The supernatant is drained, smears are made from the precipitate for viewing in a luminescent microscope.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что в 970,0 мл дистиллированной воды, содержащей 22,5 мл глицерина, растворяют 20,0 г триптического гидролизата казеина, 5,0 г экстракта кормовых дрожжей, 1,0 г аланина, 1,5 г калия дигидроортофосфата, 2,5 г динатрия фосфата, 0,5 г магния сернокислого, 1,5 г натрия лимонно-кислого, 0,05 г железа лимонно-аммиачного. Далее согласно примеру 1. Example 2. It differs from example 1 in that 20.0 g of tryptic hydrolyzate of casein, 5.0 g of extract of fodder yeast, 1.0 g of alanine, 1, are dissolved in 970.0 ml of distilled water containing 22.5 ml of glycerol. 5 g of potassium dihydroorthophosphate, 2.5 g of disodium phosphate, 0.5 g of magnesium sulfate, 1.5 g of sodium citric acid, 0.05 g of lemon-ammonia iron. Further according to example 1.

Пример 3. Отличается от примера 1,2 тем, что в 965,0 мл дистиллированной воды, содержащей 25,0 мл глицерина растворяют 22,0 г триптического гидролизата казеина, 6,0 г экстракта кормовых дрожжей, 1,2 г аланина, 1,8 г калия дигидроортофосфата, 3,0 г динатрия фосфата, 0,7 г магния сернокислого, 1,7 г натрия лимонно-кислого трехзамещенного, 0,07 г железа лимонно-аммиачного. Далее согласно примеру 1,2. Example 3. It differs from example 1.2 in that 22.0 g of tryptic hydrolyzate of casein, 6.0 g of extract of fodder yeast, 1.2 g of alanine, 1 are dissolved in 965.0 ml of distilled water containing 25.0 ml of glycerol , 8 g of potassium dihydroorthophosphate, 3.0 g of disodium phosphate, 0.7 g of magnesium sulfate, 1.7 g of sodium citric acid trisubstituted, 0.07 g of lemon-ammonia iron. Further according to example 1,2.

Результаты бактериологического контроля предлагаемой и известной сред представлены в таблице. The results of bacteriological control of the proposed and known environments are presented in the table.

Из таблицы видно, что предлагаемая среда имеет преимущество, так как чувствительность предлагаемой среды составляет 10^-4, а известной 10^-3.The table shows that the proposed environment has an advantage, since the sensitivity of the proposed environment is 10 ^-4 , and the known 10 ^-3 .

Таким образом, предлагаемая среда обеспечивает рост микобактерий туберкулеза, что способствует выявляемости их в максимально короткие сроки. Thus, the proposed environment ensures the growth of mycobacterium tuberculosis, which contributes to their detection in the shortest possible time.

Источники информации
1. Дорожкова И.Р. Формы персистирования микобактерий туберкулеза в организме человека. Диссертация докт. M. 1974 г.Sources of information
1. Dorozhkova I.R. Forms of persistence of mycobacterium tuberculosis in the human body. Thesis Doct. M. 1974

2. Капков Л. П., Аникин В.А., Корнеев А.А. Проблема обеспечения службы фтизиобактериологии в современных условиях. Материалы доклада Всероссийской научно-практической конференции 31 октября 1994 г., Махачкала, 1994 г., стр. 187. 2. Kapkov L.P., Anikin V.A., Korneev A.A. The problem of providing the service of phthisiobacteriology in modern conditions. Materials of the report of the All-Russian Scientific and Practical Conference on October 31, 1994, Makhachkala, 1994, p. 187.

3. Модель Л. А. Биология туберкулеза микобактерий и иммунология туберкулеза. М., 1958 г. 3. Model L. A. Biology of tuberculosis of mycobacteria and immunology of tuberculosis. M., 1958

4. Методические рекомендации "Современные методы лабораторной диагностики туберкулеза" М., 1992 г. 4. Methodical recommendations "Modern methods of laboratory diagnosis of tuberculosis" M., 1992

5. Макаревич Н.М., Благодарный Н.А., Кадочкин А.М. и др. Методы и средства диагностики, терапии и профилактики инфекционных болезней животных. Труды НИЭВ, М., 1985 г, стр. 63. 5. Makarevich N. M., Grateful N. A., Kadochkin A. M. and other Methods and means of diagnosis, therapy and prevention of infectious diseases of animals. Proceedings of the NIEV, M., 1985, p. 63.

6. Приказ 558 от 8 июня 1978 г. "Об унификации микробиологических методов исследования при туберкулезе" М., 1978 г. 6. Order 558 of June 8, 1978 "On the unification of microbiological research methods in tuberculosis" M., 1978

7. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, М., "Медицина", 1973, стр. 80. 7. Handbook of microbiological and virological research methods, M., "Medicine", 1973, p. 80.

Claims

Culture medium for the cultivation of Mycobacterium tuberculosis, containing tryptic casein hydrolyzate, potassium dihydroorthophosphate, disodium phosphate, magnesium sulfate, sodium citric acid, lemon-ammonia iron (green), glycerin, distilled water, which additionally differs in that contains extract of fodder yeast as a growth factor and alanine as an additional source of nitrogen nutrition in the following ratio of components, g / l:
Casein tryptic hydrolyzate (dry) - 18.0-22.0
Fodder Yeast Extract - 4.0-6.0
Alanine - 0.8-1.2
Potassium dihydroorthophosphate - 1.2-1.8
Disodium phosphate - 2.0-3.0
Magnesium sulfate - 0.3-0.7
Sodium citrate trisubstituted - 1.3-1.7
Lemon-ammonia iron (green) - 0.03-0.07
Glycerin - 20-25
Distilled water - Up to 1 L