RU2183971C2 - Способ получения иммуноглобулинового препарата - Google Patents
Способ получения иммуноглобулинового препарата Download PDFInfo
- Publication number
- RU2183971C2 RU2183971C2 RU2000123227A RU2000123227A RU2183971C2 RU 2183971 C2 RU2183971 C2 RU 2183971C2 RU 2000123227 A RU2000123227 A RU 2000123227A RU 2000123227 A RU2000123227 A RU 2000123227A RU 2183971 C2 RU2183971 C2 RU 2183971C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- precipitate
- solution
- centrifugation
- sephadex
- immunoglobulin
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и медицинской промышленности, а именно к производству препаратов для иммунотерапии и иммунопрофилактики бактериальных и вирусных заболеваний. Сущность способа: плазму крови фракционируют этиловым спиртом при низкой температуре, выделяют осадок, содержащий иммуноглобулины, разводят в растворе хлорида натрия, выделяют осадок протромбина центрифугированием, устанавливают рН полученного супернатанта равным 5,3±0,05, добавляют этиловый спирт до концентрации 16-18% при одновременном снижении температуры до (-5) - (-6)oС, удаляют балластный осадок Б центрифугированием, устанавливают рН полученного супернатанта 5,9-6,0, добавляют ДЭАЭ - сефадекс из расчета 6-10 мл на литр раствора, инкубируют раствор в течение 1-5 ч, удаляют ДЭАЭ-сефадекс фильтрацией, получают осадок целевого продукта спиртовым осаждением, растворяют осадок в физиологическом растворе, добавляют гликокол и проводят стерилизующую фильтрацию. Технический результат: получают препарат иммуноглобулина G высокой степени очистки, что снижает побочные реакции при применении его у пациентов.
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для иммунотерапии и иммунопрофилактики бактериальных и вирусных заболеваний.
Известны способы получения иммуноглобулинов, описанные в работах Cohn E. J. et all (Journal of the American Chemical Society, 1946, v.68, p.459-475) и Oncley M. et all (Journal of the American Chemical Society, 1949, v.71, p. 541-550). Эти работы, явившиеся основой создания технологий производства иммуноглобулиновых препаратов, заключаются во фракционировании плазмы крови спиртовым методом при низких температурах; выделении фракции, содержащей иммуноглобулины; растворении и стерилизующей фильтрации. Недостатком методов является то, что полученные препараты содержат иммуноглобулины трех классов - G, А и M, тогда как необходимым является наличие лишь иммуноглобулинов класса G. Присутствие иммуноглобулинов классов А и М может вызывать побочные реакции у пациентов, особенно при внутривенном введении препаратов. Кроме того, наличие этих примесей отрицательно сказывается на стабильности препаратов, вызывает опалесценцию растворов и образование осадка в процессе хранения.
Одним из методов удаления примесей иммуноглобулинов А и М является использование ионообменной хроматографии на диэтил-аминоэтил (ДЭ-АЭ)-ионообменных сорбентах. Использование этого метода было впервые предложено Baumstark J. S. et all (Arch. Biochem. Biophys., 1964, v.108, p.514-522). Однако этот метод был предназначен для лабораторного, а не для промышленного использования.
Описаны методы выделения препаратов крови, включая иммуноглобулины, с использованием ионообменной хроматографии (Curling J. M. "Separation of Plasma Proteins", 1983, Pharmacia Fine Chemicals, A.B., Uppsala). Данные методы требуют кардинальных изменений в технологии получения препаратов, включая использование специального оборудования.
Наиболее близким к заявляемому по технической сущности и достигнутому результату является способ получения иммуноглобулинового препарата, описанный в сборнике "Препараты крови. Инструктивно-методические материалы по контролю и производству", под редакцией Буренкова С.П., Изд. Москва, 1976, стр.203-218.
Метод заключается во фракционировании плазмы спиртовым методом при низкой температуре; выделении осадка, содержащего иммуноглобулины (фракция II+III); разведении фракции II+III в равном объеме 2% раствора хлорида натрия и 1,5 объеме дистиллированной воды, доведении рН раствора до 5,0-5,1; выстаивании смеси при температуре 0-1oС; выделении балластного осадка протромбина центрифугированием; добавлении в центрифугат-1 этилового спирта до конечной концентрации 13%, при снижении температуры раствора (-3)-(-5)oС; выделении балластного осадка Б центрифугированием, фильтрации полученного центрифугата-2, доведении рН раствора до 6,9-7,0, добавлением этилового спирта до конечной концентрации 25% при температуре (-8)-(-10)oС; выделении осадка целевого продукта центрифугированием; разведении осадка иммуноглобулинов в 0,9% растворе хлорида натрия, добавлении гликокола до конечной концентрации 2%, стерилизующей фильтрации. Недостатком способа является наличие примесей иммуноглобулинов А и М в целевом продукте.
Задача, решаемая предлагаемым изобретением, - совершенствование технологии получения иммуноглобулина.
Технический результат от использования изобретения заключается в повышении качества препарата за счет удаления примесей иммуноглобулинов А и М.
Указанный результат достигается тем, что в способе получения иммуноглобулинового препарата путем фракционирования плазмы крови этиловым спиртом при низкой температуре, выделения осадка, содержащего иммуноглобулины, разведения в растворе хлорида натрия, выделения осадка протромбина центрифугированием, добавления в центрифугат-1 этилового спирта, выделения балластного осадка Б центрифугированием, выделения осадка целевого продукта спиртовым осаждением, растворения осадка, добавления гликокола, стерилизующей фильтрации, выделение балластного осадка Б осуществляют при рН центрифугата-1 5,3±0,05 добавлением этилового спирта до концентрации 16-18% при одновременном снижении температуры до -(-5)-(-6)oС, после выделения балластного осадка Б устанавливают рН центрифугата 5,9-6,0, добавляют ДЭАЭ-сефадекс из расчета 6-10 мл на 1 л раствора, инкубируют раствор в течение 1-5 ч, удаляют ДЭАЭ-сефадекс фильтрацией.
Способ осуществляют следующим образом.
Проводят фракционирование плазмы крови этиловым спиртом, выделяя осадок, содержащий иммуноглобулины. Осадок разводят в солевом растворе, устанавливают рН 5,0-5,1, выстаивают при температуре 0-1oС и отделяют сформировавшийся осадок протромбина центрифугированием. Устанавливают рН полученного центрифугата-1 равным 5,3±0,05, добавляют этиловый спирт до 16-18%, снижая температуру раствора до (-5)-(-6)oС. Удаляют сформировавшийся балластный осадок Б центрифугированием. Указанные параметры фракционирования являются оптимальными, интервал значения определяется погрешностью определения величин температуры, рН и объема спирта. При уменьшении рН раствора ниже 5,3 затрудняется формирование балластного осадка, увеличение указанного рН ведет в дальнейшем к денатурации молекул иммуноглобулинов. Уменьшение рекомендуемой концентрации этилового спирта ведет к замерзанию раствора, увеличение - к денатурации белков. Превышение указанной температуры также способствует усилению денатурирующего воздействия этилового спирта на белковые молекулы, уменьшение температуры ниже -6oС ведет к замерзанию раствора. Устанавливают рН раствора полученного центрифугата-2 равным 5,9-6,0. В раствор вносят суспензию ионообменного сорбента ДЭАЭ-сефадекса из расчета 6-10 мл на 1 л раствора. Указанные значения рН являются оптимальными, так как при рН ниже 5,9 нарушается связывание примесей с сорбентом, а при рН выше 6,0 происходит осаждение целевого продукта. Данное количество сорбента является оптимальным, поскольку при его уменьшении ниже 6 мл/л не происходит полного удаления примесей, а превышение 10 мл/л ведет к потере целевого продукта. После добавления сорбента раствор инкубируют в течение 1-5 ч при непрерывном перемешивании, затем сорбент удаляют фильтрацией. Уменьшение времени инкубации не позволяет добиться полного удаления примесей, увеличение времени инкубации свыше 5 ч технологически нецелесообразно. Далее технологический процесс ведут по методике прототипа: добавляют в центрифугат этиловый спирт до конечной концентрации 25%, снижают температуру раствора до -10oС, повышают рН до 7,0-7,4; выделяют осадок целевого продукта, добавляют гликокол до конечной концентрации 2%, проводят стерилизующую фильтрацию.
Пример 1. К 1 кг спиртовой фракции плазмы крови - осадка II+III добавляют 1 л охлажденного 2% раствора хлорида натрия и 1,5 л дистиллированной воды при перемешивании, поддерживая температуру от 0 до -1oС. Устанавливают рН раствора равным 5,3 добавлением 0,1 Н соляной кислоты. Добавляют этиловый спирт до конечной концентрации 16%, снижая температуру раствора до -5oС. Сформировавшийся балластный осадок Б удаляют центрифугированием. Устанавливают рН полученного центрифугата-2 равным 6,0 с помощью 0,1 Н гидроокиси натрия. К полученному центрифугату-2 добавляют 15 мл суспензии ДЭАЭ-сефадекса из расчета 6 мл на 1 л раствора, инкубируют раствор при непрерывном перемешивании в течение 1 ч. По истечении срока инкубации сорбент удаляют фильтрацией. В растворе устанавливают рН 7,2 с использованием 0,1 Н гидроокиси натрия, добавляют этиловый спирт до конечной концентрации 25%, снижают температуру до -10oС. Проводят центрифугирование, выделяя осадок целевого продукта. Осадок разводят в физиологическом растворе, добавляют глицин до конечной концентрации, проводят стерилизующую фильтрацию. Определение содержание иммуноглобулинов методом радиальной иммунодиффузии по Манчини показало полное отсутствие иммуноглобулинов А и М в полученном препарате.
Пример 2. Проводят аналогично примеру 1, при выделении балластного осадка Б этиловый спирт добавляют до концентрации 18%, суспензию сефадекса вносят из расчета 10 мл на 1 л раствора, инкубацию осуществляют в течение 5 ч. Определение содержание иммуноглобулинов методом радиальной иммунодиффузии по Манчини показало полное отсутствие иммуноглобулинов А и М в полученном препарате.
Определение иммуноглобулинов методом радиальной иммунодиффузии по Манчини позволило установить, что обработка растворов ДЭАЭ-сефадексом позволяет уменьшить количество иммуноглобулина А в 10,2 раза, а иммуноглобулина М в 8,3 раза. Изменение параметров фракционирования (рН, температуры, концентрации этилового спирта) позволяет уменьшить количество иммуноглобулина А в 5,6 раза, а иммуноглобулина М в 3,6 раза по сравнению с прототипом. Преимуществом предлагаемого способа также является то, что он не требует значительных изменений в технологии получения иммуноглобулинов и использования специального оборудования.
Claims (1)
- Способ получения препарата иммуноглобулина G путем фракционирования плазмы крови этиловым спиртом при низкой температуре, выделения осадка, содержащего иммуноглобулины, разведения в растворе хлорида натрия, выделения осадка протромбина центрифугированием, добавления в супернатант этилового спирта, выделения балластного осадка Б центрифугированием, выделения осадка целевого продукта спиртовым осаждением, растворения осадка, добавления гликокола, стерилизующей фильтрации, отличающийся тем, что выделение балластного осадка Б осуществляют при рН супернатанта 5,3±0,05 добавлением этилового спирта до концентрации 16-18% при одновременном снижении температуры до (-5) - (-6)oC, после выделения балластного осадка Б устанавливают рН супернатанта 5,9-6,0, добавляют ДЭАЭ-сефадекс из расчета 6-10 мл на литр раствора, инкубируют раствор в течение 1-5 ч, удаляют ДЭАЭ-сефадекс фильтрацией.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000123227A RU2183971C2 (ru) | 2000-09-07 | 2000-09-07 | Способ получения иммуноглобулинового препарата |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000123227A RU2183971C2 (ru) | 2000-09-07 | 2000-09-07 | Способ получения иммуноглобулинового препарата |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2183971C2 true RU2183971C2 (ru) | 2002-06-27 |
Family
ID=20239852
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2000123227A RU2183971C2 (ru) | 2000-09-07 | 2000-09-07 | Способ получения иммуноглобулинового препарата |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2183971C2 (ru) |
-
2000
- 2000-09-07 RU RU2000123227A patent/RU2183971C2/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ПРЕПАРАТЫ КРОВИ. Инструктивно-методические материалы по контролю и производству. Под ред. Буренкова С.П. - М., 1976, с.203-218. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI60400B (fi) | Foerfarande foer utvinning av albumin ur blodplasma | |
US7125552B2 (en) | Method for high yield purification of immune globulins from blood plasma and blood plasma intermediates | |
US3992367A (en) | Process for the preparation of purified albumin by thermocoagulation and albumin obtained by said process | |
JPH10502074A (ja) | 濾 過 | |
KR20030057545A (ko) | 잠복형 안티트롬빈 iii의 제조방법 | |
JP2016523877A (ja) | 方法 | |
JP2024069288A (ja) | 治療用タンパク質組成物及び方法 | |
EP0402205B1 (fr) | Procédé de préparation de solutions d'albumine purifiée | |
JPS5855432A (ja) | 静脈注射用免疫グロブリンの製法 | |
RU2183971C2 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата | |
JPH0822879B2 (ja) | 冷沈澱により抗血友病因子を製造し且つ得られる抗血友病因子製品の溶解度を改善するための方法 | |
EP0282363B1 (fr) | Procédé d'obtention d'un concentré d'alpha 1-antitrypsine à partir d'une fraction de plasma humain et son utilisation à titre de médicament | |
US5114710A (en) | M-csf as a therapeutic agent for thrombocytopenia | |
US4452893A (en) | Cell growth medium supplement | |
RU2089204C1 (ru) | Способ получения пептидов, восстанавливающих функцию предстательной железы | |
RU2192279C2 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата | |
SU944580A1 (ru) | Способ получени поверхностного антигена гепатита В | |
RU2672816C2 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЗМЕТИОНИНОВОГО РЕЦЕПТОРНОГО АНТАГОНИСТА ИНТЕРЛЕЙКИНА-36, ШТАММ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI BL21[DE3] - ПРОДУЦЕНТ БЕЗМЕТИОНИНОВОГО РЕЦЕПТОРНОГО АНТАГОНИСТА ИНТЕРЛЕЙКИНА-36 (ВАРИАНТЫ), СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, ПЛАЗМИДНЫЕ ВЕКТОРЫ pBAD15A и pET15A И ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ ДНК ДЛЯ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ | |
RU2189833C2 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата | |
EP0449897A1 (en) | A PURE FACTOR I-PROTEIN AND METHOD FOR PRODUCTION. | |
SU301158A1 (ru) | Способ приготовления альбумина | |
WO2023215722A1 (en) | Methods of preparing cohn pool concentrate from blood plasma through ultrafiltration | |
RU2192280C1 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата | |
KR920005973B1 (ko) | 유전자 재조합한 효모에서 인간 성장 호르몬의 정제 방법 | |
RU2225725C2 (ru) | Способ получения церулоплазмина |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20180716 |
|
PD4A | Correction of name of patent owner |