RU2172631C2 - Индуктор интерферона пролонгированного действия - Google Patents
Индуктор интерферона пролонгированного действия Download PDFInfo
- Publication number
- RU2172631C2 RU2172631C2 RU99121277/14A RU99121277A RU2172631C2 RU 2172631 C2 RU2172631 C2 RU 2172631C2 RU 99121277/14 A RU99121277/14 A RU 99121277/14A RU 99121277 A RU99121277 A RU 99121277A RU 2172631 C2 RU2172631 C2 RU 2172631C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- interferon
- complex
- animals
- pvp
- activity
- Prior art date
Links
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 title claims abstract description 41
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 title claims abstract description 41
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 title claims abstract description 40
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 title abstract description 6
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims abstract description 46
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims abstract description 45
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims abstract description 45
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 21
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 21
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 44
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 claims description 27
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 23
- 239000002799 interferon inducing agent Substances 0.000 claims description 14
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 12
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 5
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 5
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 5
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 claims 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 32
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 22
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 abstract description 14
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 abstract description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 abstract description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 abstract description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 52
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 32
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 25
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 19
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 13
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 13
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 11
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 210000003024 peritoneal macrophage Anatomy 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 7
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 2
- 241000712902 Lassa mammarenavirus Species 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 2
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 231100000243 mutagenic effect Toxicity 0.000 description 2
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 2
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 2
- RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M sodium;(2r)-2-[6-(4-chlorophenoxy)hexyl]oxirane-2-carboxylate Chemical compound [Na+].C=1C=C(Cl)C=CC=1OCCCCCC[C@]1(C(=O)[O-])CO1 RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000252254 Catostomidae Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 206010061041 Chlamydial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000710188 Encephalomyocarditis virus Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010019972 Herpes viral infections Diseases 0.000 description 1
- 206010019973 Herpes virus infection Diseases 0.000 description 1
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- GXBMIBRIOWHPDT-UHFFFAOYSA-N Vasopressin Natural products N1C(=O)C(CC=2C=C(O)C=CC=2)NC(=O)C(N)CSSCC(C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1CC1=CC=CC=C1 GXBMIBRIOWHPDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002852 Vasopressins Human genes 0.000 description 1
- 108010004977 Vasopressins Proteins 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000002022 anti-cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000000703 anti-shock Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 208000024597 arenavirus hemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- KBZOIRJILGZLEJ-LGYYRGKSSA-N argipressin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N1)=O)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(N)=O)C1=CC=CC=C1 KBZOIRJILGZLEJ-LGYYRGKSSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000010001 cellular homeostasis Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229940079920 digestives acid preparations Drugs 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000003899 penis Anatomy 0.000 description 1
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000004223 radioprotective effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000009711 regulatory function Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 229960003726 vasopressin Drugs 0.000 description 1
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и ветеринарии и может быть использовано для лечения и профилактики вирусных заболеваний различной этиологии. Предлагаемые препараты индуктора интерферона на основе натриевой соли двуспиральной РНК киллерных дрожжей Saccharomyces cerevisiae и полимеров-носителей (полиглюкина или поливинилпирролидона) обладают малой токсичностью, пролонгированным интерферониндуцирующим действием и обеспечивают достоверный противовирусный эффект. 2 з.п.ф-лы, 7 табл.
Description
Изобретение относится к медицине и ветеринарии и может быть использовано для лечения и профилактики вирусных заболеваний различной этиологии.
Интерфероны относятся к классу индуцибельных белков клеток позвоночных, которые осуществляют широкие контрольно-регуляторные функции, направленные на сохранение клеточного гомеостаза. Важнейшими из этих функций являются антивирусная, противоклеточная, иммуномодулирующая и радиопротективная. Наиболее изученным к настоящему времени свойством интерферона является его практически универсальная антивирусная активность. Будучи при этом важнейшим неспецифическим фактором противовирусной резистентности интерферон продуцируется почти сразу же после попадания вируса в организм, однако естественно образующегося интерферона часто оказывается недостаточно для предупреждения развития инфекций.
В связи с этим выработаны два основных подхода к прикладному использованию интерферона при вирусных заболеваниях: введение готовых препаратов (экзогенного) интерферона и индукция выработки собственного (эндогенного) интерферона.
Индукторы интерферона, стимулирующие выработку в организме человека и животных эндогенного интерферона, имеют ряд преимуществ перед препаратами экзогенного интерферона и являются перспективными средствами профилактики и терапии вирусных инфекций.
К наиболее активным индукторам интерферона относятся синтетические полирибонуклеотиды и двуспиральные РНК (до РНК) природного происхождения /1/. Однако наряду с высокой эффективностью их как индукторов интерферона эти препараты обладают высокой токсичностью /2, 3/, проявляют мутагенную активность /4/ и быстро выводятся из организма.
Известен индуктор интерферона - двуспиральный полирибонуклеотидный комплекс (поли И:поли Ц) /4/, оказывающий ингибирующее действие в отношении широкого круга вирусов. Однако данный комплекс является высокотоксичным и обладает мутагенной активностью /4, 5/.
Наиболее близким к заявляемому препарату (прототипом) является индуктор интерферона "Ридостин", содержащий до РНК из киллерных штаммов дрожжей Saccharomyces cerevisiae в количестве 8-15% и дополнительно однонитевую высокополимерную РНК дрожжей /6, прототип/, индуцирующий высокие титры интерферона и проявляющий выраженную противовирусную активность в отношении различных форм герпесной и хламидиозной инфекций. Ридостин относится к классу среднетоксичных препаратов.
Недостатками препарата-прототипа являются:
- довольно высокое содержание до РНК - 8-15%;
- большое содержание нуклеотидного материала - 40-60%;
- быстрое выведение препарата из организма (в течение 24 ч),
требующее частого его приема для поддержания терапевтической дозы (максимум индукции интерферона достигается через 3 часа).
- довольно высокое содержание до РНК - 8-15%;
- большое содержание нуклеотидного материала - 40-60%;
- быстрое выведение препарата из организма (в течение 24 ч),
требующее частого его приема для поддержания терапевтической дозы (максимум индукции интерферона достигается через 3 часа).
Поскольку препараты нуклеиновых кислот относятся к классу нестабильных высокотоксичных соединений, то увеличение дозировок ведет к усилению побочных эффектов.
В последние годы разработан ряд технологических приемов создания новых лекарственных форм, позволяющих решить проблему пролонгации действия лекарств при уменьшении их дозы и снижении побочных эффектов. Описаны способы получения пероральных форм (таблетки, капсулы) с дозированным высвобождением активного начала, липосомальных, мазевых, иммобилизованных форм, в которых лекарственное вещество связано с носителем методами физической и химической иммобилизации.
Среди синтетических полимеров-носителей следует отметить поливинилпирролидон (ПВП), который находит наибольшее применение в медицине. ПВП относится к полимерным поверхностно-активным веществам и образует растворимые комплексы со многими неорганическими и органическими соединениями: витаминами, антибиотиками, различными лекарственными веществами /7/. Показано, что инъекционные препараты с ПВП с молекулярной массой от 10000 до 60000 дают пролонгированный эффект. ПВП в водном растворе образует комплексы с большим числом лекарственных веществ (пенициллин, инсулин, вазопрессин и др.) /8/. Другим "клиническим" полимером является полиглюкин (ПГ) - среднемолекулярная фракция частично гидролизованного декстрана (полимер глюкозы). Нативный декстран - высокомолекулярный бактериальный полисахарид, продуцируемый микроорганизмами различных штаммов Leuconostos mecenteroides и некоторыми другими /9,10/. В результате фракционирования гидролизованного нативного декстрана получают полиглюкин с молекулярной массой 60•10 тыс. Да, который применяют при хирургических операциях, нарушениях микроциркуляции в качестве плазмозаменяющих противошоковых препаратов /11/, а также в фармацевтических композициях противовирусного действия /12/.
Технической задачей прелагаемого изобретения является создание препарата индуктора интерферона на основе до РНК киллерных дрожжей, обладающего пролонгированной продуцирующей способностью интерферона в организме, при низком содержании до РНК и нуклеотидного материала, сохраняющего при этом свойство низкой токсичности.
Поставленная задача решается путем создания оптимальной лекарственной формы индуктора интерферона, в состав которого входит натриевая соль до РНК дрожжей Saccharomyces cerevisiae в количестве 2,4 - 6,0% и дополнительно полимерные вещества-носители в количестве 10 -70% (поливинилпирролидон - 10 - 30% или полиглюкин - до 70%), а в качестве наполнителя - хлорид натрия. При этом препарат натриевой соли до РНК дрожжей, полученный по ВФС 42-2643-95, представляет собой смесь до РНК и сопутствующего нуклеотидного материала клеток дрожжей Sacchromyces cerevisiae.
Пролонгация продуцирующей активности интерферона в организме при применении заявляемого препарата индуктора интерферона достигается за счет синергидного эффекта, проявляющегося при совместном действии полимера и лекарственного начала, а также за счет ионного взаимодействия между ними. При этом содержание дрожжевой до РНК ограничивается 2,4 - 6% (против 8 - 15% в прототипе) с 7,6 - 20% нуклеотидного материала (против 45 - 60% в прототипе), что и обеспечивает низкую токсичность нового препарата.
Патентуемый препарат индуктора интерферона представляет собой стерильную лиофилизованную субстанцию в виде белого аморфного порошка следующего состава, мас.%:
1) Натриевая соль до РНК дрожжей Saccharomyces cerevisiae - 2,4 - 4,5
Поливинилпирролидон с М.в. 10000 - 35000 - 10 - 30
Хлористый натрий - Остальное
2) Натриевая соль до РНК дрожжей Saccharomyces cerevisiae - 4,5 - 6,0
Полиглюкин - До 70
Хлористый натрий - Остальное
Новыми существенными признаками предлагаемого препарата индуктора интерферона являются:
- введение в состав препарата синтетических полимеров-носителей для обеспечения пролонгации;
- снижение содержания высокотоксичного компонента до РНК киллерных дрожжей до 2,5 - 5%.
1) Натриевая соль до РНК дрожжей Saccharomyces cerevisiae - 2,4 - 4,5
Поливинилпирролидон с М.в. 10000 - 35000 - 10 - 30
Хлористый натрий - Остальное
2) Натриевая соль до РНК дрожжей Saccharomyces cerevisiae - 4,5 - 6,0
Полиглюкин - До 70
Хлористый натрий - Остальное
Новыми существенными признаками предлагаемого препарата индуктора интерферона являются:
- введение в состав препарата синтетических полимеров-носителей для обеспечения пролонгации;
- снижение содержания высокотоксичного компонента до РНК киллерных дрожжей до 2,5 - 5%.
Экспериментальные образцы комплексного препарата до РНК с ПВП (с разным процентным содержанием двуспиральных структур и полимера) и с полиглюкином охарактеризованы по следующим физико-химическим показателям: удельная экстинция, максимум поглощения, pH раствора. Процентное содержание до РНК в препаратах определяют хроматографическим методом и по температуре плавления.
Партии препарата имеют следующие биологические характеристики:
- интерферониндуцирующая активность - не менее 640 UE 50/0,2 мл;
- значение среднесмертельных доз для мышей при внутрибрюшинном способе введения - от 260 до 850 мг/кг веса.
- интерферониндуцирующая активность - не менее 640 UE 50/0,2 мл;
- значение среднесмертельных доз для мышей при внутрибрюшинном способе введения - от 260 до 850 мг/кг веса.
Определение среднесмертельных доз комплексных препаратов до РНК киллерных дрожжей с полиглюкином и ПВП в сравнении с препаратом-прототипом "Ридостин" проводили экспресс-методом по Прозоровскому /13/ на белых беспородных мышах при внутрибрюшинном введении.
Результаты, представленные в таблице 1, показывают, что введение в состав препарата индуктора интерферона полимеров (поливинилпирролидона или полиглюкина) вызывает явное снижение токсичности последнего по сравнению с прототипом - препаратом "Ридостин".
Биологическую активность образцов препарата оценивали по показателям фагоцитарной активности (ФА) перитонеальных макрофагов, уровню противовирусной активности и титрам интерферона в сыворотке крови животных.
Метод определения фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов был использован в качестве метода первичной оценки новых форм индукторов интерферона. Выбор метода определялся следующими соображеними. Клетки макрофагальной фагоцитозстимулирующей системы (МФС) являются важным звеном неспецифической защиты организма от инвазивных агентов. Существует тесная корреляция между процессом индукции интерферона и функциональной зависимостью фагоцитов, повышением их способности к эндоцитозу и ферментативной деградации чужеродных частиц /14/. Следовательно, состояние МФС отражает изменение естественной резистентности организма при воздействии разных форм индукторов интерферона.
Тестирование проводили на монослойной культуре клеток по методу Rowley; в качестве объекта фагоцитоза использовали опсонизированные эритроциты барана.
Исследование показало, что препараты комплекса до РНК с ПВП с содержанием до РНК от 2,4 до 9,3% достоверно вызывают повышение поглотительной способности фагоцитов. Эффект стимуляции регистрируется через сутки и сохраняется в течение 5 сут после введения. Снижение содержания до-структур до 0,3% приводит к исчезновению фагоцитозстимулирующего эффекта (см. таблицу 2).
Для дальнейшего изучения в качестве оптимального был выбран комплекс с ПВП с содержанием до PHK 2,4%.
Оценка активности фагоцитов перитонеальных макрофагов мышей с содержанием до PHK 2,4% и равным содержанием ПВП (10 - 30%) показывает, что варьирование содержания в препарате носителя не приводит к дальнейшему усилению либо пролонгированию эффекта (таблица 3).
Введение в состав комплексного препарата до РHK высокомолекулярного ПВП с М.в. 35000 приводит к ярко выраженной пролонгации функциональной активности макрофагов до 5 сут в сравнении с препаратом "Ридостин" (см. табл. 4).
Таким образом, оценка влияния образцов до PHK на различных носителях на функцию макрофагов показывает, что через сутки после введения животным комплекса [до PHK - ПВП] фагоцитарная активность макрофагов повышается более чем в 1,5 раза по сравнению с до PHK без носителя (прототип "Ридостин"). Через 2 сут фагоцитозстимулирующее действие комплексных образцов препарата с низко- и высокополимерным ПВП не только сохраняется, но и усиливается до 128 и 184% соответственно. Через 3 сут фагоцитозстимулирующей активностью обладает лишь комплекс до PHK с высокополимерным ПВП (процент стимуляции - 150%). Данный комплекс приводит к пролонгации активности перитонеальных макрофагов до 5 сут. Комплекс до PHK с полиглюкином имеет сравнимые показатели фагоцитоза с "Ридостином".
В экспериментах по оценке интерферонииндуцирующей активности интерфероногенов использовали препараты до PHK (2,4%) с различными полимерными наполнителями (ПВП или полиглюкин) и "Ридостин". Исследование проводили на белых беспородных мышах линии ICR, самцах. Титр интерферона в сыворотках крови мышей, полученных в разные сроки после введения препаратов (5 мг/кг, внутрибрюшинно), определяли по предотвращению цитопатического действия вируса энцефаломиелита (100 ТЦД 50) на монослое клеток мышиных фибробластов L929. В качестве препаратов сравнения были использованы препараты ПВП и субстанции до PHK в дозах, эквивалентных их содержанию в комплексных препаратах. В таблице 5 представлены данные титров интерферона, полученные при введении комплексных препаратов до PHK опытным животным.
Представленные данные показывают, что комплексы до PHK с полиглюкином и поливинилпирролидоном сохраняют высокую интерферониндуцирующую активность при меньшем содержании до PHK, чем в "Ридостине". Из приведенных данных также видна зависимость от природы полимера, входящего в комплекс, и его молекулярного веса. ПВП с молекулярной массой 35000 обеспечивает интерферониндуцирующую активность на уровне 16 ед. даже через 5 сут после введения препарата, тогда как в сыворотках нормальных животных уровень интерферона составляет титр до 10 ед. Высокомолекулярный ПВП, введенный в комплекс с до PHK, приводит к усилению интерферониндуцирующей активности комплексного препарата через 24 ч после введения опытным животным в 2,6 раза по сравнению с препаратом-прототипом "Ридостин".
В вирусологических экспериментах была проведена сравнительная оценка противовирусной активности препаратов до PHK на различных полисахаридных носителях, отобранных в результате изучения их интерферон- и фагоцитоpстимулирующей активности. Исследование проведено на мышах линии CBA/Calac, зараженных вирусом Ласса (1000 БОЕ, интрацеребрально), вызывающим аренавирусную геморрагическую лихорадку. Комплексные препараты до PHK с полиглюкином и поливинилпирролидоном, а также "Ридостин" вводили животным интранозально за 4 и 24 ч до заражения в дозе 5 мг/кг. Установлено (см. таблицу 6), что комплексные препараты до PHK при введении подопытным животным как за 4, так и 24 ч до заражения обеспечивают достоверную защиту животных от летального воздействия вируса Ласса, чего не наблюдалось в группах мышей, которым вводили препараты дрожжевой до PHK, не содержащие полисахаридных носителей. Этот показатель превосходит эффект защиты, который обеспечивает препарат-прототип "Ридостин".
Сущность изобретения раскрывается в примерах конкретного выполнения.
Пример 1. Приготовление комплекса до PHK rиллерных дрожжей с поливинилпирролидоном
0,42 г натриевой соли двуспиральной рибонуклеиновой кислоты коллерных дрожжей Saccharomyces cerevisiae и 1,7 г натрия хлорида растворяют при перемешивании 15-20 мин в 180 мл дистиллированной воды. К полученному раствору добавляют 6 мл 15%-ного раствора ПВП и перемешивают еще 15-20 мин. Раствор комплекса фильтруют через мембранный фильтр N 2 и лиофильно высушивают до содержания влаги 8-10%. Содержание компонентов в высушенном препарате составляет, в мас.%: Na-соль дсPHK - (2,4 - 4,5), ПВП - (10-30), NaCl - остальное.
0,42 г натриевой соли двуспиральной рибонуклеиновой кислоты коллерных дрожжей Saccharomyces cerevisiae и 1,7 г натрия хлорида растворяют при перемешивании 15-20 мин в 180 мл дистиллированной воды. К полученному раствору добавляют 6 мл 15%-ного раствора ПВП и перемешивают еще 15-20 мин. Раствор комплекса фильтруют через мембранный фильтр N 2 и лиофильно высушивают до содержания влаги 8-10%. Содержание компонентов в высушенном препарате составляет, в мас.%: Na-соль дсPHK - (2,4 - 4,5), ПВП - (10-30), NaCl - остальное.
Пример 2. Приготовление комплекса дсPHK киллерных дрожжей с полиглюкином
1 г натриевой соли двуспиральной рибонуклеиновой кислоты дрожжей Sac.cerevisiae и 3,04 г NaCl растворяют при перемешивании 15-20 мин в 400-450 мл дистиллированной воды и добавляют 40-45 мл 6%-ного полиглюкина. После 15-20 мин перемешивания раствор фильтруют через мембранный фильтр N 2. Полученный комплекс лиофильно высушивают до содержания влажности 8-10%. Содержание компонентов в высушенном препарате составляет, в мас.%: Na-соль дсPHK-(4,5-6,0), полиглюкин-(-до 70), NaCl - остальное.
1 г натриевой соли двуспиральной рибонуклеиновой кислоты дрожжей Sac.cerevisiae и 3,04 г NaCl растворяют при перемешивании 15-20 мин в 400-450 мл дистиллированной воды и добавляют 40-45 мл 6%-ного полиглюкина. После 15-20 мин перемешивания раствор фильтруют через мембранный фильтр N 2. Полученный комплекс лиофильно высушивают до содержания влажности 8-10%. Содержание компонентов в высушенном препарате составляет, в мас.%: Na-соль дсPHK-(4,5-6,0), полиглюкин-(-до 70), NaCl - остальное.
Биологическую активность комплексных препаратов индукторов интерферона оценивают по показателям фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов, по титрам интерферона в сыворотке крови животных и по уровню противовирусной активности исследуемых препаратов.
Пример 3. Определение активности перитонеальных макрофагов
Исследование проводят на беспородных мышах линии ICR обоего пола, массой 25-30 г. Препараты субстанции до PHK с содержанием двуспиральных структур от 0,3 до 9,3%, а также их комплексы с полиглюкином и поливинилпирролидоном (10 - 30%) вводят внутрибрюшинно в дозе 5 мг/кг. Пробы инъецируют в объеме 0,2 мл в водном растворе на 20 г массы животного. Контрольной группе вводят физиологический раствор в объеме 0,2 мл. Оценку функциональной активности макрофагов проводят через 5, 24, 48, 72 ч, 5 и 7 сут после введения препаратов. Макрофаги выделяют из перитонеальной полости мышей путем вымывания средой Ханкса с гепарином (5 ед. активности на 1 мл среды). Культивирование и все последующие операции проводят в среде Хэнкса с 2,5% сыворотки крупного рогатого скота. Суспензию макрофагов (1•106 мл) высевают на покровное стекло, помещенное в бюкс диаметром 35 мм. Инкубацию проводят в течение 1 ч при температуре 37oC. Для исследования фагоцитоза монослой отмывают от неприкрепившихся клеток. В качестве объекта для фагоцитоза наносят 20 мкл суспензии опсонизированных эритроцитов барана (ЭБ) из расчета 30 эритроцитов на макрофаг. Монослой макрофагов продолжают инкубировать в течение 45 мин, отмывают, высушивают и готовят для микроскопирования. Оценку фагоцитоза проводят путем подсчета перитонеальных макрофагов, поглотивших ЭБ.
Исследование проводят на беспородных мышах линии ICR обоего пола, массой 25-30 г. Препараты субстанции до PHK с содержанием двуспиральных структур от 0,3 до 9,3%, а также их комплексы с полиглюкином и поливинилпирролидоном (10 - 30%) вводят внутрибрюшинно в дозе 5 мг/кг. Пробы инъецируют в объеме 0,2 мл в водном растворе на 20 г массы животного. Контрольной группе вводят физиологический раствор в объеме 0,2 мл. Оценку функциональной активности макрофагов проводят через 5, 24, 48, 72 ч, 5 и 7 сут после введения препаратов. Макрофаги выделяют из перитонеальной полости мышей путем вымывания средой Ханкса с гепарином (5 ед. активности на 1 мл среды). Культивирование и все последующие операции проводят в среде Хэнкса с 2,5% сыворотки крупного рогатого скота. Суспензию макрофагов (1•106 мл) высевают на покровное стекло, помещенное в бюкс диаметром 35 мм. Инкубацию проводят в течение 1 ч при температуре 37oC. Для исследования фагоцитоза монослой отмывают от неприкрепившихся клеток. В качестве объекта для фагоцитоза наносят 20 мкл суспензии опсонизированных эритроцитов барана (ЭБ) из расчета 30 эритроцитов на макрофаг. Монослой макрофагов продолжают инкубировать в течение 45 мин, отмывают, высушивают и готовят для микроскопирования. Оценку фагоцитоза проводят путем подсчета перитонеальных макрофагов, поглотивших ЭБ.
Фагоцитарную активность (ФА) оценивают в % от общего числа макрофагов. Достоверность различий (P) данных, полученных в опыте и контроле, оценивают с помощью критерия Стьюдента при обсчете 250 клеток на монослой. Процент стимуляции определяют по отношению показателей опытных групп животных к контролю по формуле:
Динамика фагоцитоза перитонеальных макрофагов мышей при введении различных доз дсPHR с поливинилпирролидоном (ПВП) представлена в таблице 2. Исследование показало, что препараты комплекса дсPHK с ПВП с содержанием двуспиральных структур от 2,4 до 9,3% достоверно вызывает повышение поглотительной способности фагоцитов. Эффект стимуляции регистрируется через сутки и сохраняется в течение 5 сут после введения. Оптимальным является комплекс с ПВП с содержанием дсPHK 2,4%.
Динамика фагоцитоза перитонеальных макрофагов мышей при введении различных доз дсPHR с поливинилпирролидоном (ПВП) представлена в таблице 2. Исследование показало, что препараты комплекса дсPHK с ПВП с содержанием двуспиральных структур от 2,4 до 9,3% достоверно вызывает повышение поглотительной способности фагоцитов. Эффект стимуляции регистрируется через сутки и сохраняется в течение 5 сут после введения. Оптимальным является комплекс с ПВП с содержанием дсPHK 2,4%.
Динамика фагоцитоза перитонеальных макрофагов мышей при введении комплекса дсPHK 2,4% с различным содержанием ПВП (10-30%), представленная в таблице 3, показывает, что варьирование содержания в комплексном препарате носителя не приводит к дальнейшему усилению либо пролонгированию эффекта.
Введение в состав комплексного препарата дсРНК высокомолекулярного ПВП с М. в. 35000 ед. приводит к ярко выраженной пролонгации функциональной активности макрофагов до 5 сут в сравнении с препаратом-прототипом "Ридостин" (см. таблицу 4).
Анализ данных, представленных в таблицах 2-4, показывает, что через сутки введения животным комплекса (дсРНК-ПВП) фагоцитарная активность макрофагов повышается более чем в 1,5 раза по сравнению с дсРНК без носителя (прототип "Ридостин"); через 2 сут фагоцитозстимулирующее действие комплексных образцов препарата с низко- (М.в. 10000 ед.) и высокополимерным (М. в. 35000 ед.) ПВП не только сохраняется, но и усиливается до 128 и 184% соответственно; через 3 сут фагоцитозстимулирующей активностью обладает лишь комплекс с высокополимерным ПВП (стимуляция-150%); последний приводит к пролонгации активности макрофагов до 5 сут.
Пример 4. Определение интерферониндуцирующей активности комплексных препаратов
Комплексы дсРНК(2,4%) с ПВП (М.в. 10000 ед. и 35000 ед.) и с полиглюкином (ПГ) готовят и стандартизуют как описано выше. Исследование проводят на белых беспородных мышах линии ICR, самцах. Каждый из описанных препаратов и препарат-прототип "Ридостин" вводят 5 животным внутрибрюшинно в дозе 5 мг/кг массы животного в объеме 0,1 мл. Через 24 ч, 48 ч или 5 сут инъекции описанных препаратов мышей декапитируют, сыворотки объединяют и определяют интерферон микрометодом на 96-луночных планшетах на культуре клеток мышиных фибробластов L-929, используя серийные разведения сывороток и вирус энцефаломиокардита мышей в качестве тест-вируса. Титром интерферона считают величину, обратную наибольшему разведению сыворотки, вызывающему 50%-ную задержку цитопатического действия дозы вируса 100 ЦПД50. В качестве препаратов сравнения используют препараты ПВП и субстанции дсРНК в дозах, эквивалентных их содержанию в комплексных препаратах.
Комплексы дсРНК(2,4%) с ПВП (М.в. 10000 ед. и 35000 ед.) и с полиглюкином (ПГ) готовят и стандартизуют как описано выше. Исследование проводят на белых беспородных мышах линии ICR, самцах. Каждый из описанных препаратов и препарат-прототип "Ридостин" вводят 5 животным внутрибрюшинно в дозе 5 мг/кг массы животного в объеме 0,1 мл. Через 24 ч, 48 ч или 5 сут инъекции описанных препаратов мышей декапитируют, сыворотки объединяют и определяют интерферон микрометодом на 96-луночных планшетах на культуре клеток мышиных фибробластов L-929, используя серийные разведения сывороток и вирус энцефаломиокардита мышей в качестве тест-вируса. Титром интерферона считают величину, обратную наибольшему разведению сыворотки, вызывающему 50%-ную задержку цитопатического действия дозы вируса 100 ЦПД50. В качестве препаратов сравнения используют препараты ПВП и субстанции дсРНК в дозах, эквивалентных их содержанию в комплексных препаратах.
Данные, представленные в таблице 5, показывают, что комплексы дсРНК с полиглюкином и ПВП сохраняют высокую интерферониндуцирующую активность при меньшем содержании двуспиральных структур, чем в "Ридостине". Кроме того, ПВП с М. в. 35000 ед. обеспечивает интерферониндуцирующую активность на уровне 16 ед. даже через 5 сут после введения препарата, а через сутки уровень индукции интерферона в 2,6 раза выше, чем при введении препарата "Ридостин" (препарат-прототип).
Пример 5. Изучение противовирусного действия индукторов интерферона с пролонгированным эффектом на примере вируса герпеса
Оценку противовирусной активности комплекса дсРНК с полиглюкином проводят на модели герпес вирусной инфекции.
Оценку противовирусной активности комплекса дсРНК с полиглюкином проводят на модели герпес вирусной инфекции.
В работе используют вирус простого герпеса 2 типа штамм MS, полученный из Государственной коллекции вирусов при Институте вирусологии им. Д.И. Ивановского РАН. Перед использованием в эксперименте штамм прошел два последовательных пассажа на культуре клеток Vero E6. Титр вируса составлял 105 ЦПД. Экспериментальными животными являются самцы морских свинок весом 200-220 г. В эксперимент берут 48 животных, которых делят на 4 группы. Животных 1-3 групп заражают на наружную поверхность penis вышеуказанным вирусным штаммом. Первой группе подопытных животных вводят внутримышечно в наружную поверхность бедра препарат комплекса дсРНК с полиглюкином. Второй группе вводят препарат-прототип "Ридостин". Третья группа животных заражается, но не получает никакого лечения (положительный контроль). Четвертая группа является отрицательным контролем, т. е. здоровые животные по отношению к которым сравнивается интенсивность герпетических изменений. Противовирусный эффект оценивали по разности баллов в 3- и 1-й опытных группах в период максимального проявления заболевания 3-4-й день после инфицирования).
Результаты, представленные в таблице 7, свидетельствуют о том, что у животных третья группы, не получавших никакого лечения после заражения (положительный контроль), к 4 сут из пустулезных элементов или эрозий был выделен вирус герпеса 2 типа в титре 102 ЦПТ. У животных второй группы, получавших лечение препаратом "Ридостин", на месте заражения отмечалась отечность и гиперимия в первые 2 сут, к третьим суткам отмечались отдельные пустулезные проявления; к 5 сут эти явления затухают. За животными первой группы, получавшими лечение новым комплексным препаратом, наблюдение продолжалось 45 сут. У данной группы отмечен быстрый эффект купирования внешних проявлений герпетической инфекции; не отмечено рецидивов заболевания, выделений вируса как на месте заражения, так и из крови не обнаружено.
Пример 6. Изучение противовирусного действия комплексного препарата дсРНК на примере вируса Ласса
В работе был использован вирус Ласса штамм "Joshia", депонированный в государственной коллекции вирусов при институте им. Д.И. Ивановского, депонент N 789. Штамм прошел 2 последовательных пассажа на культуре клеток Vero и 2 пассажа через мозг сосунков белой инбредной мыши. Вирусный материал хранили при температуре -20oC. Для внутримозгового заражения животных использовали дозы 1000 БОЕ вируса Ласса в объеме 30 мкл. Опыты проводили на мышах линии CBA/Calac (гаплотип H-12k) массой 10-12 г.
В работе был использован вирус Ласса штамм "Joshia", депонированный в государственной коллекции вирусов при институте им. Д.И. Ивановского, депонент N 789. Штамм прошел 2 последовательных пассажа на культуре клеток Vero и 2 пассажа через мозг сосунков белой инбредной мыши. Вирусный материал хранили при температуре -20oC. Для внутримозгового заражения животных использовали дозы 1000 БОЕ вируса Ласса в объеме 30 мкл. Опыты проводили на мышах линии CBA/Calac (гаплотип H-12k) массой 10-12 г.
В эксперимент взято 110 мышей, которые были разделены на 11 групп по 10 животных в каждой. Все животные заражались вирусом Ласса в дозе 1000 БОЕ-мышь.
Схема эксперимента:
- 1 группа животных - положительный контроль (не получают лечения);
- 2 группа животных - интраназально вводят комплексный препарат дсРНК (2,7%) с ПВП в дозе 5 мг/кг за 4 ч до заражения вирусом;
- 3 группа животных - интраназально вводят комплексный препарат дсРНК (4,5%) с полиглюкином в дозе 5 мг/кг за 4 ч до заражения вирусом;
- 4 группа животных - интраназально вводят препарат Констроля к 1 группе (2,7% дсРНК) в дозе 5 мг/кг за 4 ч до заражения вирусом;
- 5 группа животных - интраназально вводят препарат Контроля ко 2 группе (4,5% дсРНК) в дозе 5 мг/кг за 4 ч до заражения вирусом;
- 6 группа животных - интраназально вводят препарат "Ридостин" в дозе 5 мг/кг за 4 ч до заражения вирусом;
- 7 группа животных - интраназально вводят комплексный препарат дсРНК (2,7%) с ПВП в дозе 5 мг/кг за 24 ч до заражения вирусом;
- 8 группа животных - интраназально вводят комплексный препарат дсРНК (4,5%) с полиглюкином в дозе 5 мг/кг за 24 ч до заражения вирусом;
- 9 группа животных - интраназально вводят препарат Контроля к 7 группе (2,7% дсРНК) в дозе 5 мг/кг за 24 ч до заражения вирусом;
- 10 группа животных - интраназально вводят препарат Контроля к 8 группе 94,5% дсРНК) в дозе 5 мг/кг за 24 ч до заражения вирусом;
- 11 группа животных - интраназально вводят препарат "Ридостин" в дозе 5 мг/кг за 24 ч до заражения вирусом.
- 1 группа животных - положительный контроль (не получают лечения);
- 2 группа животных - интраназально вводят комплексный препарат дсРНК (2,7%) с ПВП в дозе 5 мг/кг за 4 ч до заражения вирусом;
- 3 группа животных - интраназально вводят комплексный препарат дсРНК (4,5%) с полиглюкином в дозе 5 мг/кг за 4 ч до заражения вирусом;
- 4 группа животных - интраназально вводят препарат Констроля к 1 группе (2,7% дсРНК) в дозе 5 мг/кг за 4 ч до заражения вирусом;
- 5 группа животных - интраназально вводят препарат Контроля ко 2 группе (4,5% дсРНК) в дозе 5 мг/кг за 4 ч до заражения вирусом;
- 6 группа животных - интраназально вводят препарат "Ридостин" в дозе 5 мг/кг за 4 ч до заражения вирусом;
- 7 группа животных - интраназально вводят комплексный препарат дсРНК (2,7%) с ПВП в дозе 5 мг/кг за 24 ч до заражения вирусом;
- 8 группа животных - интраназально вводят комплексный препарат дсРНК (4,5%) с полиглюкином в дозе 5 мг/кг за 24 ч до заражения вирусом;
- 9 группа животных - интраназально вводят препарат Контроля к 7 группе (2,7% дсРНК) в дозе 5 мг/кг за 24 ч до заражения вирусом;
- 10 группа животных - интраназально вводят препарат Контроля к 8 группе 94,5% дсРНК) в дозе 5 мг/кг за 24 ч до заражения вирусом;
- 11 группа животных - интраназально вводят препарат "Ридостин" в дозе 5 мг/кг за 24 ч до заражения вирусом.
По количеству выживших в этих группах животных определяют % защиты. Полученные данные приведены в таблице 6.
Представленные данные свидетельствуют о том, что введение комплексных препаратов дсРНК с полиглюкином и поливинилпирролидоном в сравнении с препаратом "Ридостин" (прототип) обеспечивают достоверную защиту животных от гибели как за 4 ч, так и за 24 ч до заражения вирусом.
Таким образом, предложены новые малотоксичные комплексные препараты индукторов интерферона на основе натриевой соли дсРНК киллерных дрожжей Saccharomyces cerevisiae и полисахаридных полимеров-носителей, которые обладают пролонгированным до 5 сут интерферониндуцирующим действием и обеспечивают достоверный противовирусный эффект.
Список литературы:
1. Ершов Ф.И., Жданов В.М., в кн. "Индукторы интерферона", М., 1982 г., стр. 7-18.
1. Ершов Ф.И., Жданов В.М., в кн. "Индукторы интерферона", М., 1982 г., стр. 7-18.
2. Фельдмане Г. Я., Дук Ф.Э. и др. в кн.: "Индукторы интерферона", М., 1982 г., стр. 70-75.
3. Масычева В. И., Надолинная И.Г. //Острая токсичность и кумулятивные свойства полирибонуклеотидных комплексов поли И: поли Ц и поли Г: поли Ц //Фармакол.токсикол.// 1981 г., N 3, стр. 353-358.
4. Матвеева В. Г. //Исследование мутагенной активности синтетических индукторов интерферона на лабораторных мышах// Вопр. вирусологии// 1982 г. // N 5 // стр. 540-543.
5. Смородинцев А. А., Аксенов О.А., Константинова И.К. и др.// Сравнительное исследование токсичности поли Г: поли Ц и поли И: поли Ц на различных объектах. //Вопр. вирусологии //1978 г.// N 2// стр. 201-206.
6. Патент РФ 2083221 //кл. A 61 K 38/20 //1993 г.
7. Кирш Ю.Э., Соколова Л.В. //Поливинилпирролидон и лекарственные композиции на его основе, способы их получения. //Хим. фарм. ж. //1983 г.// N 6// стр. 711-721.
8. Molyneux P., Fhmed G. //Kolloid-Z. // 1973// Bd 251// s. 310-328.
9. Биотехнология. //Учебное пособие// кн. 7// Иммобилизованные ферменты. //М.: Высш.шк.// 1987 г.// стр. 159.
10. Платэ Н.А., Васильев А.Е. в кн. "Физиологически активные полимеры", М.: Химия, 1986 г., стр. 296.
11. Кн. "Лекарственные средства, применяемые в медицинской практике в СССР" //Под ред. Клюева М.А, М.: Медицина //1989 г.// стр. 512.
12. Патент РФ 2129878 //кл. A 61 K 39/00 //1996 г.
13. Прозоровский В.Б., Прозоровский М.П., Демченко В.М. // Экспресси-метод определени средней эффективной дозы и ее ошибки// Фармакол. токсикол. // 1978 г. // N 4// стр. 197-502.
14. Фадина В. А. , Масычева В.И., Дубатолова Т.Д //Изучение активности макрофагов в процессе интерферонообразования // в ст. Современные аспекты применения интерферонов и других иммуномодуляторов //М., 1990 г. //стр. 130.
Claims (1)
1. Индуктор интерферона пролонгированного действия, содержащий натриевую соль двуспиральной РНК из киллерных дрожжей Saccharomyces cerevisiae, полимер-носитель и хлорид натрия при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Натриевая соль двуспиральной РНК киллерных дрожжей Saccharomyces cerevisiae - 2,4 - 6,0
Полимер-носитель - 10 - 70
Хлорид натрия - Остальное
2. Индуктор интерферона по п.1, отличающийся тем, что в качестве полимера-носителя содержит поливинилпирролидон при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Натриевая соль двуспиральной РНК киллерных дрожжей Saccharomyces cerevisiae - 2,4 - 4,5
Поливинилпирролидон М.в. 10000 - 35000 - 10 - 30
Хлорид натрия - Остальное
3. Индуктор интерферона по п.1, отличающийся тем, что в качестве полимера-носителя содержит полисахарид полигликин при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Натриевая соль двуспиральной РНК киллерных дрожжей Saccharomyces cerevisiae - 4,5 - 6,0
Полиглюкин - До 70
Хлорид натрия - Остальное1
Натриевая соль двуспиральной РНК киллерных дрожжей Saccharomyces cerevisiae - 2,4 - 6,0
Полимер-носитель - 10 - 70
Хлорид натрия - Остальное
2. Индуктор интерферона по п.1, отличающийся тем, что в качестве полимера-носителя содержит поливинилпирролидон при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Натриевая соль двуспиральной РНК киллерных дрожжей Saccharomyces cerevisiae - 2,4 - 4,5
Поливинилпирролидон М.в. 10000 - 35000 - 10 - 30
Хлорид натрия - Остальное
3. Индуктор интерферона по п.1, отличающийся тем, что в качестве полимера-носителя содержит полисахарид полигликин при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Натриевая соль двуспиральной РНК киллерных дрожжей Saccharomyces cerevisiae - 4,5 - 6,0
Полиглюкин - До 70
Хлорид натрия - Остальное1
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99121277/14A RU2172631C2 (ru) | 1999-10-08 | 1999-10-08 | Индуктор интерферона пролонгированного действия |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99121277/14A RU2172631C2 (ru) | 1999-10-08 | 1999-10-08 | Индуктор интерферона пролонгированного действия |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU99121277A RU99121277A (ru) | 2001-07-20 |
| RU2172631C2 true RU2172631C2 (ru) | 2001-08-27 |
Family
ID=37502478
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU99121277/14A RU2172631C2 (ru) | 1999-10-08 | 1999-10-08 | Индуктор интерферона пролонгированного действия |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2172631C2 (ru) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2272632C2 (ru) * | 2004-03-30 | 2006-03-27 | Государственное Научное Учреждение Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН (ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН) | Способ лечения и профилактики желудочно-кишечных инфекционных болезней поросят в условиях промышленного свиноводства |
| RU2328272C2 (ru) * | 2005-03-22 | 2008-07-10 | Общество с ограниченной ответственностью (ООО) "Диафарм" | Суппозитории индуктора интерферона |
| RU2391405C1 (ru) * | 2008-12-15 | 2010-06-10 | Учреждение Российской академии наук Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения РАН (ИХБФМ СО РАН) | Фрагменты двуцепочечной рнк, обладающие антипролиферативной и интерферон-индуцирующей активностями |
| RU2564011C1 (ru) * | 2014-12-04 | 2015-09-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НИИЭМ имени Г.П. Сомова" СО РАМН) | Индуктор гамма интерферона |
| RU2574953C1 (ru) * | 2014-11-17 | 2016-02-10 | Общество с ограниченной ответственностью "ВИТАЛАНГ" | Средство для лечения и профилактики кожных новообразований вирусной этиологии |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0286224A2 (en) * | 1987-03-23 | 1988-10-12 | Hem Pharmaceuticals Corp. | Treatment of human viral infection by dsRNA combined with viral inhibitors |
| RU2043714C1 (ru) * | 1993-10-22 | 1995-09-20 | Всероссийский научно-исследовательский институт прудового рыбного хозяйства | Способ профилактики вирусных заболеваний рыб |
| RU2083221C1 (ru) * | 1993-01-12 | 1997-07-10 | Научно-исследовательский конструкторско-технологический институт биологически активных веществ Научно-производственного объединения "Вектор" | Индуктор интерферона ридостин |
| RU2123339C1 (ru) * | 1996-06-18 | 1998-12-20 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Противовирусное средство |
-
1999
- 1999-10-08 RU RU99121277/14A patent/RU2172631C2/ru active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0286224A2 (en) * | 1987-03-23 | 1988-10-12 | Hem Pharmaceuticals Corp. | Treatment of human viral infection by dsRNA combined with viral inhibitors |
| RU2083221C1 (ru) * | 1993-01-12 | 1997-07-10 | Научно-исследовательский конструкторско-технологический институт биологически активных веществ Научно-производственного объединения "Вектор" | Индуктор интерферона ридостин |
| RU2043714C1 (ru) * | 1993-10-22 | 1995-09-20 | Всероссийский научно-исследовательский институт прудового рыбного хозяйства | Способ профилактики вирусных заболеваний рыб |
| RU2123339C1 (ru) * | 1996-06-18 | 1998-12-20 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Противовирусное средство |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2272632C2 (ru) * | 2004-03-30 | 2006-03-27 | Государственное Научное Учреждение Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН (ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН) | Способ лечения и профилактики желудочно-кишечных инфекционных болезней поросят в условиях промышленного свиноводства |
| RU2328272C2 (ru) * | 2005-03-22 | 2008-07-10 | Общество с ограниченной ответственностью (ООО) "Диафарм" | Суппозитории индуктора интерферона |
| RU2391405C1 (ru) * | 2008-12-15 | 2010-06-10 | Учреждение Российской академии наук Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения РАН (ИХБФМ СО РАН) | Фрагменты двуцепочечной рнк, обладающие антипролиферативной и интерферон-индуцирующей активностями |
| RU2574953C1 (ru) * | 2014-11-17 | 2016-02-10 | Общество с ограниченной ответственностью "ВИТАЛАНГ" | Средство для лечения и профилактики кожных новообразований вирусной этиологии |
| RU2564011C1 (ru) * | 2014-12-04 | 2015-09-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НИИЭМ имени Г.П. Сомова" СО РАМН) | Индуктор гамма интерферона |
| RU2833350C1 (ru) * | 2023-12-04 | 2025-01-20 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | Интраназальное противовирусное средство |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1117013A (en) | Method for treating kidney stones | |
| DE69327642T2 (de) | Verfahren zur behandlung von viralen infectionen | |
| CN114392228A (zh) | 呈现长期稳定性的褪黑素注射剂的持久制剂 | |
| CN111991401A (zh) | 一种化合物在治疗SARS-CoV-2感染中的应用 | |
| US6720011B1 (en) | Injectable composition for cancer treatment | |
| RU2172631C2 (ru) | Индуктор интерферона пролонгированного действия | |
| EP0424193B1 (en) | Use of actinonin for the manufacture of a medicament for angiogenesis inhibition | |
| CA2465062C (en) | Preventive and/or therapeutic agent for viral infection | |
| RU2240784C1 (ru) | Лекарственное средство на основе арбидола | |
| RU2206326C2 (ru) | Применение натрия нуклеоспермата для лечения вич-инфекции и способ лечения | |
| CN105919991A (zh) | 泽兰素在制备治疗抑郁症药物中的应用 | |
| JPH08109134A (ja) | 細胞変成抑制並びに臓器毒性軽減剤 | |
| US20210085710A1 (en) | A new use of the poloxamer as a pharmacologically active substance | |
| JP2019510731A (ja) | 抗ウイルス薬およびウイルス感染症の治療方法 | |
| EP4134078A1 (en) | Injectable melatonin composition for the treatment of viral diseases | |
| CA1336491C (en) | Antiviral pharmaceutical composition | |
| EP2683369B1 (en) | Multiantivirus compound, composition and method for treatment of virus diseases | |
| JPS5938207B2 (ja) | 腎疾患治療剤 | |
| CA1174169A (en) | Orally active tolciclate and tolnaftate | |
| CN105708856A (zh) | 一种用于防治鸡球虫病含凹凸棒石的药物组合物及其制备 | |
| CN1636581A (zh) | 一种红花药物组合物、其制备方法及其用途 | |
| CN117510408B (zh) | 抗病毒中药单体蝙蝠葛碱、及其药物组合物和应用 | |
| JPH05504130A (ja) | 腫瘍壊死因子拮抗剤 | |
| US4230725A (en) | Antiviral agent | |
| CN113491668B (zh) | 注射用药物组合制剂及其制备方法与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QB4A | Licence on use of patent |
Effective date: 20061006 |
|
| HK4A | Changes in a published invention | ||
| QZ4A | Changes in the licence of a patent |
Effective date: 20010601 |
|
| QZ41 | Official registration of changes to a registered agreement (patent) |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20010601 Effective date: 20111011 |
|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| QC41 | Official registration of the termination of the licence agreement or other agreements on the disposal of an exclusive right |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20061006 Effective date: 20140919 |
|
| QC41 | Official registration of the termination of the licence agreement or other agreements on the disposal of an exclusive right |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20010601 Effective date: 20150313 |
|
| PD4A | Correction of name of patent owner |