RU2564011C1 - Индуктор гамма интерферона - Google Patents
Индуктор гамма интерферона Download PDFInfo
- Publication number
- RU2564011C1 RU2564011C1 RU2014149018/15A RU2014149018A RU2564011C1 RU 2564011 C1 RU2564011 C1 RU 2564011C1 RU 2014149018/15 A RU2014149018/15 A RU 2014149018/15A RU 2014149018 A RU2014149018 A RU 2014149018A RU 2564011 C1 RU2564011 C1 RU 2564011C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ifn
- interferon
- exopolysaccharide
- inducer
- gamma interferon
- Prior art date
Links
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно для использования в области иммунологии, и касается индуктора гамма интерферона. Для этого применяют экзополисахарид бактерий P.nigrifaciens штамма КММ 156 в качестве индуктора IFN-γ. Использование данного полисахарида обеспечивает образование IFN-γ для создания нового препарата. 2 табл.
Description
Изобретение предназначено для использования в области биотехнологии, медицины, ветеринарии и касается индуктора гамма-интерферона.
В настоящее время в клинической практике используется большое количество препаратов интерферона и индукторов интерферона, которые применяются как при вирусных инфекциях, так и в онкологической практике, с целью иммуностимуляции, а так же в связи с наличием у них антипролиферативного эффекта.
Индукторы интерферона, стимулирующие выработку в организме человека и животных эндогенного интерферона, имеют ряд преимуществ перед препаратами экзогенного интерферона и являются перспективными средствами профилактики и терапии вирусных инфекций.
Известен индуктор эндогенного интерферона - тилорон (www.amixin.ru), который выпускается в виде перорального препарата (торговое название «Амиксин», Инструкция на препарат http://www.regmed.ru/InstrShow2.asp?InstrLinkNx=41 ba48ba44ba43b и «Лавомакс», Инструкция на препарат, http://www.regmed.ru/InstrShow2.asp?InstrLinkNx=a41 ba48ba44ba43b). Тилорон является низкомолекулярным синтетическим индуктором интерферона, стимулирующим образование в организме интерферонов альфа, бета и гамма.
Известен препарат меглумин акридонацетат (торговое название - циклоферон), являющийся низкомолекулярным индуктором интерферона, который оказывает противовирусное, иммуномодулирующее и противовоспалительное действие. Основными клетками-мишенями препарата являются Т- и В-лимфоциты. Он стимулирует продукцию альфа-, бета- и гамма-интерферонов (до 60-80 ЕД/мл и выше) лейкоцитами, макрофагами, эпителиальными клетками, а также тканями селезенки, печени, легких, мозга, проникает в цитоплазму и ядерные структуры, активирует синтез «ранних» интерферонов. Иммуномодулирующий эффект выражается в коррекции иммунного статуса организма при иммунодефицитных состояниях различного генеза. Указанные препараты стимулируют образование интерферонов альфа, бета и гамма. (Описание препарата, www.biomedservis.ru/preparat/pr_cycloferon_liniment.htm).
Известен индуктор Ридостин, имеющий в своем составе двуспиральную РНК из киллерных штаммов дрожжей Saccharomyces cerevisiae в количестве 5-15% и однонитевую РНК дрожжей как основные компоненты (Патент РФ №2083221 от 12.01.1993, МПК А61К 38/20). В отличие от синтетических полирибонуклеотидов, Ридостин позволяет исключить нежелательную нагрузку на окружающую среду, поскольку РНК природного происхождения легко утилизируется в организме.
Указанные препараты обеспечивают образование интерферонов альфа, бета и гамма, однако наряду с высокой эффективностью их как индукторов интерферона эти препараты обладают высокой токсичностью, проявляют мутагенную активность и быстро выводятся из организма.
Задачей изобретения является применение нового препарата, не обладающего побочными эффектами.
Она решается применением в качестве индуктора интерферона IFN-γ экзополисахарида бактерий Pseudoalteromonas nigrifaciens штамма КММ 156.
Экзополисахарид бактерий P.nigrifaciens штамма КММ 156 и способ его получения известен (Биоорганическая химия, 1993, т. 19, №3, с. 327-336). Однако данный полисахарид в качестве индуктора интерферона-γ до сих пор не применялся в связи с ранее не изученными его свойствами.
Экспериментальным путем было установлено, что экзополисахарид бактерий Pseudoalteromonas nigrifaciens штамма КММ 156, выделенного из ткани желудка дальневосточного двустворчатого моллюска Crenomytilus grayanus, можно использовать в качестве индуктора IFN-γ. При этом первоначально этот вид микроорганизма был определен как Alteromonas haloplanktis (Биоорганическая химия, 1993, т. 19, №3, с. 327-336). Затем, на основании генетического анализа, Alteromonas haloplanktis был переименован в Pseudoalteromonas nigrifaciens (International Journal of Systematic Bacteriology, Oct. 1995, Vol. 45. № 4, p. 775-761; International Journal of Systematic Bacteriology, Jan. 1996, Vol. 46. № 1, p. 223-228).
Нетоксичный, легкорастворимый экзополисахарид имеет идентичное строение с входящим в состав липополисахарида О-специфическим полисахаридом и состоит из тетрасахаридных повторяющихся звеньев, содержащих два остатка L-рамнозы, один остаток 2-ацетамидо-2-дезокси-D-глюкозы и один остаток 3-O-[(R)-1-карбоксиэтил]-D-глюкозы (глюколактиловой кислоты).
Методом определения продукции ИФН-γ лимфоцитами периферической крови определяли суммарную продукцию цитокина разными клетками,
Гепаринизированную венозную кровь здоровых доноров разводили в 3 раза стерильной средой RPMI 1640, содержащей 3% глютамина и 100 мкг/мл гентамицина. Для оценки спонтанной продукции ИФН-γ (контроль) к 0.9 мл разбавленной крови в стерильной закрывающейся пробирке добавляли 0,1 мл среды указанного выше состава. Для оценки стимулированной экзополисахаридом продукции гамма-интерферона в 0,9 мл разведенной крови вносили 0,1 мл разведенного средой экзополисахарида (конечная концентрация 10 мкг/мл и 100 мкг/мл). Пробирки помещали в термостат, через 48 ч инкубации при температуре 37°C кровь центрифугировали в течение 5 мин при 1000 об/мин, супернатант отбирали в пластиковые пробирки, замораживали и хранили до использования при -20°C [2]. Уровень IFN-γ определяли с помощью коммерческих тест-систем «ВЕКТОР-БЕСТ» методом "сэндвич"-варианта твердофазного иммуноферментного анализа с помощью двойных антител, согласно рекомендациям производителей. В качестве стандарта для сравнения в реакции использовались рекомбинантные цитокины, входящие в состав тест-наборов. Концентрацию цитокинов выражали в пикограммах на мл.
Учет результатов производили с помощью иммуноферментного анализатора Multiscan RC (Labsystems) по уровню оптической плотности, измеряемой при 450 нм с длиной волны сравнения 620 нм. Расчеты концентрации тестируемых образцов определяли по калибровочной кривой, построенной на основе результатов измерения стандартов.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что экзополисахарид через 48 часов инкубации с цельной кровью дозозависимо увеличивает секрецию IFN-γ.
Следующий, широко используемый в научных целях, метод - это внутриклеточное определение цитокинов методом проточной цитофлюориметрии (J.Immunol., 1995, Vol 154, р. 4294-4394). С помощью этого метода популяцию клеток-продуцентов цитокина можно охарактеризовать фенотипически, дать относительную количественную характеристику этой продукции.
В опытные пробирки помещали по 500 мкл среды, 500 мкл крови, 2 мкл моненсина (Monensin Solution), 10 мкл экзополисахарида. Конечная концентрация экзополисахарида - 10 мкг/мл. В контрольные пробирки помещали по 500 мкл среды RPMI 1640, 500 мкл крови, 2 мкл моненсина (Monensin Solution), 10 мкл раствора Cell WASH. Содержимое всех пробирок перемешивали с помощью вортекса в течение 5 сек. Инкубировали 20 часов в СО2 при температуре +37°C.
Затем в пробирки добавили антиген-специфические моноклональные антитела для окрашивания поверхностных маркеров (CD3, CD56), тщательно перемешали 5 сек на вортексе. Инкубировали 15 мин при комнатной температуре в темном месте.
Добавили 2 мл 1-кратного лизирующего раствора (FACS Lysing Solution) для лизирования эритроцитов, перемешали 5 сек на вортексе, инкубировали 5-10 мин при комнатной температуре в темном месте и затем центрифугировали пробирки в течение 5 минут в режиме 500 об/мин.
Удалив надосадочную жидкость, добавили 500 мкл 1-кратного пермеабилизующего раствора (FACS Permeabilizing Solution), тщательно перемешали 5 сек на вортексе, инкубировали 10 мин при комнатной температуре в темноте.
Добавили 2-4 мл раствора Cell WASH, центрифугировали 5 минут в режиме 500 об/мин. Удалив надосадочную жидкость, перемешали осадок.
Добавили 20 мкл конъюгатов моноклональных антител к IFN-γ-PE, перемешали 5 сек на вортексе, инкубировали 30 мин при комнатной температуре в темноте.
Добавили 2-4 мл раствора Cell WASH, центрифугировали 5 минут в режиме 500 об/мин. Удалив надосадочную жидкость, перемешали осадок.
Ресуспендировали клетки в 500 мкл 1%-ного параформальдегида. Образцы анализировали на проточном цитометре «FACS Calibur» фирмы «Вестоп Dickinson (USA) с использованием наборов моноклональных антител того же производителя.
Установлено, что уже через 20 часов под действием экзополисахарида увеличивается количество NK- и NKT-клеток, продуцирующих IFN-γ.
При статистической обработке результатов исследования использовали пакет прикладных программ Statistica 6.0. Результаты считали достоверными при уровне значимости р<0,05.
Результаты исследований показали, что заявляемый экзополисахарид может быть применен в качестве индуктора IFN-γ.
Claims (1)
- Применение экзополисахарида бактерий P.nigrifaciens штамма КММ 156 в качестве индуктора IFN-γ.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014149018/15A RU2564011C1 (ru) | 2014-12-04 | 2014-12-04 | Индуктор гамма интерферона |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014149018/15A RU2564011C1 (ru) | 2014-12-04 | 2014-12-04 | Индуктор гамма интерферона |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2564011C1 true RU2564011C1 (ru) | 2015-09-27 |
Family
ID=54250916
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014149018/15A RU2564011C1 (ru) | 2014-12-04 | 2014-12-04 | Индуктор гамма интерферона |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2564011C1 (ru) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0248531A2 (en) * | 1986-05-02 | 1987-12-09 | Southern Research Institute | Encapsulated nucleic acids |
| RU2083221C1 (ru) * | 1993-01-12 | 1997-07-10 | Научно-исследовательский конструкторско-технологический институт биологически активных веществ Научно-производственного объединения "Вектор" | Индуктор интерферона ридостин |
| RU2172631C2 (ru) * | 1999-10-08 | 2001-08-27 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Индуктор интерферона пролонгированного действия |
-
2014
- 2014-12-04 RU RU2014149018/15A patent/RU2564011C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0248531A2 (en) * | 1986-05-02 | 1987-12-09 | Southern Research Institute | Encapsulated nucleic acids |
| RU2083221C1 (ru) * | 1993-01-12 | 1997-07-10 | Научно-исследовательский конструкторско-технологический институт биологически активных веществ Научно-производственного объединения "Вектор" | Индуктор интерферона ридостин |
| RU2172631C2 (ru) * | 1999-10-08 | 2001-08-27 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Индуктор интерферона пролонгированного действия |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Smolina T.P. et al. Inhibition of prokaryote and eukaryote cells adhesion by sea proteobacteria Pseudoalteromonas nigrifaciens KMM 156 lipopolysaccharide and its fragments // Antibiot Khimioter., 2005;50(5-6):4-6 * |
| СМОЛИНА Т.П. и др. Ранняя активация лимфоцитов и моноцитов периферической крови человека компонентами протеобактерий Pseudoalteromonas nigrifaciens // Тихоокеанский медицинский журнал, 2009, N3, стр. 45-48. * |
| формула п.п.1-3. * |
| формула. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Brook et al. | BCG vaccination–induced emergency granulopoiesis provides rapid protection from neonatal sepsis | |
| Tecchio et al. | Neutrophil-derived chemokines on the road to immunity | |
| Cheng et al. | Periodontitis‐associated pathogens P. gingivalis and A. actinomycetemcomitans activate human CD14+ monocytes leading to enhanced Th17/IL‐17 responses | |
| Dowling et al. | Ontogeny of early life immunity | |
| Niu et al. | IL-21 regulates Th17 cells in rheumatoid arthritis | |
| Myhill et al. | Mucosal barrier and Th2 immune responses are enhanced by dietary inulin in pigs infected with Trichuris suis | |
| Ge et al. | Bystander activation of pulmonary Trm cells attenuates the severity of bacterial pneumonia by enhancing neutrophil recruitment | |
| JP6359019B2 (ja) | ＩＬ−１５Ｒα型、ＩＬ−１５Ｒα型を発現する細胞、ならびにＩＬ−１５ＲαおよびＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体の治療上の使用 | |
| Nosko et al. | T-bet enhances regulatory T cell fitness and directs control of Th1 responses in crescentic GN | |
| Gibaldi et al. | CCL3/macrophage inflammatory protein-1α is dually involved in parasite persistence and induction of a TNF-and IFNγ-enriched inflammatory milieu in Trypanosoma cruzi-induced chronic cardiomyopathy | |
| Chuammitri et al. | Heterophil functional responses to dietary immunomodulators vary in genetically distinct chicken lines | |
| AU2009208390B2 (en) | A method of inducing tolerance to an allergen | |
| Goff et al. | IL-4 and IL-10 inhibition of IFN-γ-and TNF-α-dependent nitric oxide production from bovine mononuclear phagocytes exposed to Babesia bovis merozoites | |
| Valanparambil et al. | Production and analysis of immunomodulatory excretory-secretory products from the mouse gastrointestinal nematode Heligmosomoides polygyrus bakeri | |
| Declue et al. | Pathogen associated molecular pattern motifs from Gram-positive and Gram-negative bacteria induce different inflammatory mediator profiles in equine blood | |
| Nazari et al. | Comparison of the Th1, IFN-gamma secreting cells and FoxP3 expression between patients with stable graft function and acute rejection post kidney transplantation | |
| JP2020527361A (ja) | Ｃｄ３９間質幹細胞の単離方法と使用 | |
| Nozzi et al. | Leishmaniasis and autoimmune diseases in pediatric age | |
| Pan et al. | Altered balance between Th1 and Th17 cells in circulation is an indicator for the severity of murine acute GVHD | |
| Pivniouk et al. | The role of innate immunity in asthma development and protection: lessons from the environment | |
| Toyama et al. | Attenuated accumulation of regulatory T cells and reduced production of interleukin 10 lead to the exacerbation of tissue injury in a mouse model of acute respiratory distress syndrome | |
| Jin et al. | An immunotherapeutic treatment against flea allergy dermatitis in cats by co-immunization of DNA and protein vaccines | |
| CN113396333A (zh) | 使用间充质干细胞和免疫调节治疗特应性皮炎 | |
| Cheeseman et al. | Salmonella enteritidis–induced alteration of inflammatory CXCL chemokine messenger-RNA expression and histologic changes in the ceca of infected chicks | |
| Giguère et al. | Cytokine induction in murine macrophages infected with virulent and avirulent Rhodococcus equi |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20161205 |