RU2164687C2

RU2164687C2 - Method for diagnosing external genital endometriosis

Info

Publication number: RU2164687C2
Application number: RU99111032A
Authority: RU
Inventors: Л.В. Посисеева; Н.Ю. Сотникова; А.Л. Шор; Ю.С. Анциферова
Original assignee: Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова
Priority date: 1999-05-17
Filing date: 1999-05-17
Publication date: 2001-03-27

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: method involves examining patient peripheral blood. Spontaneous НСТ and ПАМГ-2 neutrophil activity is determined. The value being equal to 24 % and higher, external genital endometriosis is to be diagnosed. EFFECT: increased sensitivity and specificity of examination; high accuracy of diagnosis. 1 tbl

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для диагностики наружного эндометриоза. The invention relates to medicine, namely to gynecology, and can be used to diagnose external endometriosis.

Актуальность изобретения определяется высокой (до 17%) частотой встречаемости наружного эндометриоза [1, 2]. Наружный эндометриоз обнаруживается у 40 - 48% бесплодных женщин [2]. Наружный эндометриоз увеличивает риск бесплодия в 20 раз [10]. Диагноз наружного генитального эндометриоза, как правило, устанавливается на основании результатов инвазивных инструментальных исследований (лапароскопии или лапаротомии с последующим гистологическим исследованием удаленных тканей). В связи с этим разработка достоверных лабораторных диагностических критериев эндометриоза представляет актуальную задачу для практического здравоохранения. The relevance of the invention is determined by the high (up to 17%) incidence of external endometriosis [1, 2]. External endometriosis is found in 40 - 48% of infertile women [2]. External endometriosis increases the risk of infertility by 20 times [10]. The diagnosis of external genital endometriosis, as a rule, is established on the basis of the results of invasive instrumental studies (laparoscopy or laparotomy followed by histological examination of the removed tissue). In this regard, the development of reliable laboratory diagnostic criteria for endometriosis is an urgent task for practical public health.

Известен способ диагностики наружного эндометриоза на основании определения содержания в сыворотке периферической венозной крови аутоантител к эндометриальным клеткам, суть которого заключается в том, что устанавливают повышение титра сывороточных аутоантител и диагностируют тяжелый эндометриоз III и IV степени с точностью 45,5% [9]. A known method for the diagnosis of external endometriosis based on the determination of the content of autoantibodies to endometrial cells in serum of peripheral venous blood, the essence of which is that an increase in the titer of serum autoantibodies is established and severe endometriosis of the III and IV degree is diagnosed with an accuracy of 45.5% [9].

Недостатки способа:
- низкая точность (45,5%),
- данный способ позволяет диагностировать только тяжелые стадии эндометриоза, которые встречаются менее чем в 30% случаев, диагностика которых возможна на основании первичного осмотра, данных анамнеза и результатов УЗИ,
- способ неинформативен при I и II стадиях заболевания.The disadvantages of the method:
- low accuracy (45.5%),
- this method allows you to diagnose only severe stages of endometriosis, which occur in less than 30% of cases, the diagnosis of which is possible on the basis of an initial examination, medical history and ultrasound results,
- the method is not informative in stages I and II of the disease.

Наиболее близким по техническому решению к заявляемому способу является способ диагностики наружного генитального эндометриоза путем исследования биологического материала, отличающийся тем, что из крови больного выделяют базофильные лейкоциты, определяют спонтанное высвобождение гистамина и при значении этого показателя 49% и более диагностируют наружный генитальный эндометриоз [5]. The closest technical solution to the claimed method is a method for diagnosing external genital endometriosis by examining biological material, characterized in that basophilic leukocytes are isolated from the patient’s blood, spontaneous histamine release is determined, and if this value is 49% or more, external genital endometriosis is diagnosed [5] .

Данный способ был выбран нами в качестве прототипа. Однако, он имеет ряд недостатков:
- выделение базофильных лейкоцитов требует забора большого количества крови (18 мл) из-за относительной малочисленности базофилов в периферической крови человека (0,5-1%) и низкого содержания в них гистамина [4];
- предлагаемый способ неспецифичен, так как повышение высвобождения гистамина базофилами происходит при других патологических состояниях, например, при аллергических реакциях немедленного типа;
- отсутствуют данные о точности способа.This method was chosen by us as a prototype. However, it has several disadvantages:
- the allocation of basophilic leukocytes requires the collection of a large amount of blood (18 ml) due to the relative small number of basophils in human peripheral blood (0.5-1%) and low histamine content in them [4];
- the proposed method is nonspecific, since an increase in the release of histamine by basophils occurs in other pathological conditions, for example, with allergic reactions of an immediate type;
- there is no data on the accuracy of the method.

Указанные недостатки предлагается устранить в заявляемом способе. These disadvantages are proposed to eliminate in the present method.

Заявляемый технический результат достигается тем, что в периферической крови определяют показатель спонтанной НСТ-активности нейтрофилов после их инкубации с плацентарным α - 2 микроглобулином фертильности (ПАМГ-2) и при значениях этого показателя, равных 24% и более, диагностируют наружный генитальный эндометриоз с точностью 84%. The claimed technical result is achieved by the fact that in the peripheral blood the spontaneous HCT activity of neutrophils is determined after their incubation with placental α-2 microglobulin fertility (PAMG-2) and, with values of 24% or more, external genital endometriosis is diagnosed with accuracy 84%

Показатель НСТ-активности периферических нейтрофилов основан на способности фагоцитов утилизировать кислород с образованием свободных радикалов и служит индикатором респираторного "взрыва" в клетках. Ранее он использовался как один из диагностических критериев воспалительного процесса, для контроля эффективности антибактериальной терапией [6] . Известно, что при наружном эндометриозе повышается содержание ПАМГ-2 в сыворотке крови [8]. Вероятно, это служит фактором, сенсибилизирующим нейтрофилы периферической крови женщин с эндометриозом. The index of HCT activity of peripheral neutrophils is based on the ability of phagocytes to utilize oxygen to form free radicals and serves as an indicator of a respiratory “explosion” in cells. Previously, it was used as one of the diagnostic criteria for the inflammatory process, to monitor the effectiveness of antibiotic therapy [6]. It is known that with external endometriosis, the content of PAMG-2 in the blood serum increases [8]. This is probably the factor sensitizing the neutrophils of the peripheral blood of women with endometriosis.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается диагностировать наружный эндометриоз по определению показателей НСТ-активности периферических нейтрофилов после их инкубации с ПАМГ-2. The novelty of the proposed method lies in the fact that for the first time it is proposed to diagnose external endometriosis by determining the HCT activity of peripheral neutrophils after their incubation with PAMG-2.

Способ осуществляется следующим образом:
По стандартной методике выделяются нейтрофилы из 1 мл гепаринизированной крови из локтевой вены [7]. Далее нами предлагается добавить к 0,1 мл взвеси клеток в концентрации 2·10⁶ кл/мл равный объем Среды 199, содержащей 20 нг ПАМГ-2. Клетки инкубируют в течение 60 мин при t=37^oC в термостате, отмывают Средой 199 центрифугированием в течение 10 мин и ставят спонтанный НСТ-тест по стандартной методике [3]. Показатели НСТ-активности нейтрофилов вычисляют при световом микроскопировании.The method is as follows:
According to the standard method, neutrophils from 1 ml of heparinized blood from the ulnar vein are isolated [7]. Further, we propose to add to 0.1 ml of cell suspension at a concentration of 2 · 10 ⁶ cells / ml an equal volume of Medium 199 containing 20 ng PAMG-2. Cells are incubated for 60 min at t = 37 ^° C in a thermostat, washed with Medium 199 by centrifugation for 10 min, and a spontaneous HCT test is performed according to the standard method [3]. Neutrophil HCT activity indices are calculated by light microscopy.

Использование предлагаемого способа позволяет диагностировать наружный генитальный эндометриоз с точностью 84%. Using the proposed method allows to diagnose external genital endometriosis with an accuracy of 84%.

Отличительными признаками способа являются:
- установлен диагностический параметр НСТ-активности нейтрофилов периферической крови, определяемый после инкубации нейтрофилов с ПАМГ-2, при количественных значениях которого, равных 24% и более, диагностируют наружный генитальный эндометриоз.Distinctive features of the method are:
- a diagnostic parameter was established for the HCT activity of peripheral blood neutrophils, determined after incubation of neutrophils with PAMG-2, with quantitative values of 24% or more, external genital endometriosis is diagnosed.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами:
Пример 1. Больная П., 25 лет. Обратилась по поводу вторичного бесплодия выраженного болевого синдрома в виде альгодисменореи, диспареунии. Больна около 6 лет. В анамнезе медицинский аборт. Неоднократно проводилась противовоспалительная терапия по поводу обострения хронического 2-х стороннего аднексита без эффекта. Объективно: матка нормальных размеров, отклонена кзади, попытка вывести ее в нормальное положение резко болезненна, в ректовагинальной перегородке пальпируется болезненный плотный узел диаметром 1,5 см. Придатки без особенностей. Пальпация крестцово-маточных связок болезненна. При пальцевом исследовании прямой кишки патологии не выявлено.The essence of the proposed method is illustrated by the following examples:
Example 1. Patient P., 25 years old. Appeared about secondary infertility expressed pain in the form of algodismenorea, dyspareunia. Sick for about 6 years. History of medical abortion. Repeatedly carried out anti-inflammatory therapy for exacerbation of chronic 2-sided adnexitis without effect. Objectively: the uterus is normal in size, deflected posteriorly, an attempt to bring it to its normal position is sharply painful, a painful, dense node 1.5 cm in diameter is palpated in the rectovaginal septum. Appendages without features. Palpation of the sacro-uterine ligaments is painful. A digital examination of the rectum revealed no pathology.

Клинический диагноз: наружный и ретроцервикальный эндометриоз. Clinical diagnosis: external and retrocervical endometriosis.

По данным иммунологического обследования по заявляемому способу показатель спонтанной НСТ-активности нейтрофилов после инкубации их с ПАМГ-2 составил 38%. According to immunological examination according to the claimed method, the rate of spontaneous HCT activity of neutrophils after incubating them with PAMG-2 was 38%.

Заключение: по заявленному способу диагностируется наружный эндометриоз. Conclusion: according to the claimed method, external endometriosis is diagnosed.

На 7-й день менструального цикла произведена лапароскопия, при которой обнаружены глубокие очаги эндометриоза, площадью более 3 см² на брюшине крестцовоматочных связок и инфильтрирующий очаг в ректовагинальной перегородке с рубцовыми изменениями. Произведено иссечение очагов эндометриоза монополярным коагулятором и нейротомия. Гистологическое исследование удаленных тканей подтвердило поставленный диагноз.On the 7th day of the menstrual cycle, laparoscopy was performed, in which deep foci of endometriosis were found, with an area of more than 3 cm ² on the peritoneum of the sacrouterine ligaments and an infiltrating lesion in the rectovaginal septum with cicatricial changes. Produced excision of foci of endometriosis with a monopolar coagulator and neurotomy. A histological examination of the removed tissue confirmed the diagnosis.

Пример 2. Больная Л., 36 лет. Обратилась по поводу вторичного бесплодия. В анамнезе: 1 своевременные роды, 2 медицинских аборта без осложнений, ВМС 4 года. В настоящее время состоит во втором браке, три года не применяет контрацепции, беременность не наступает. На момент осмотра предъявляет жалобы на умеренные тянущие боли внизу живота, усиливающиеся во время менструации. Обследована на предмет бесплодия: цикл - двухфазный, по данным гистеросальпингографии матка не изменена, маточные трубы умеренно извиты, свободно проходимы. Муж обследован, здоров. Проба Миллера - положительная. Example 2. Patient L., 36 years old. Appeared about secondary infertility. History: 1 timely delivery, 2 medical abortions without complications, IUD 4 years. He is currently in a second marriage, has not been using contraception for three years, and pregnancy does not occur. At the time of examination, complains of moderate pulling pains in the lower abdomen, aggravated during menstruation. It was examined for infertility: the cycle is two-phase, according to hysterosalpingography, the uterus is not changed, the fallopian tubes are moderately tortuous, freely passable. The husband is examined, healthy. Miller's test is positive.

При влагалищном исследовании тело матки чуть больше нормальных размеров, в боковых сводах болезненная тяжистость. With a vaginal examination, the body of the uterus is slightly larger than normal, with painful heaviness in the lateral arches.

Клинический диагноз: хронический сальпингит, наружный эндометриоз. Обследование по заявляемому способу показало, что спонтанная НСТ-активность нейтрофилов, инкубированных с ПАМГ-2, составила 12%. Clinical diagnosis: chronic salpingitis, external endometriosis. Examination by the claimed method showed that the spontaneous HCT activity of neutrophils incubated with PAMG-2 was 12%.

Заключение: по заявленному способу диагноз эндометриоза не подтверждается. Conclusion: according to the claimed method, the diagnosis of endometriosis is not confirmed.

На лапароскопии матка и маточные трубы не изменены, тазовая брюшина без патологических включений. В правом яичнике преовуляторный фолликул. Как причина болевого синдрома выявлено варикозное расширение вен параметриев с обеих сторон. Проведенный интраоперационный посткоитальный тест выявил причину бесплодия: в аспирированной перитонеальной жидкости и задней трети цервикального канала подвижных сперматозоидов не обнаружено. On laparoscopy, the uterus and fallopian tubes are not changed, the pelvic peritoneum without pathological inclusions. In the right ovary is a preovulatory follicle. As a cause of the pain syndrome, varicose veins of the parametres on both sides were revealed. The performed intraoperative postcoital test revealed the cause of infertility: in the aspirated peritoneal fluid and the posterior third of the cervical canal, motile spermatozoa were not found.

Пример 3. Больная С., 22 лет. Обратилась по поводу первичного бесплодия. Состоит в первом браке, гинекологических заболеваний в анамнезе не было, специфических жалоб не предъявляет. Example 3. Patient S., 22 years old. Asked about primary infertility. He is in his first marriage, there was no history of gynecological diseases, he does not present specific complaints.

При дооперационном обследовании установлен двухфазный менструальный цикл, исключен "мужской" фактор, посткоитальный тест положительный. По данным гистеросальпингографии полость матки имеет правильную форму, левая маточная труба не контрастировалась, правая заполняется до ампулярного отдела, в свободной брюшной полости контраста нет. During the preoperative examination, a two-phase menstrual cycle was established, the "male" factor was excluded, the postcoital test was positive. According to hysterosalpingography, the uterine cavity has the correct shape, the left fallopian tube did not contrast, the right one is filled to the ampullar region, and there is no contrast in the free abdominal cavity.

При объективном осмотре матка нормальных размеров, положения. Придатки не определяются, своды свободны, выделения слизистые, необильные. With an objective examination, the uterus is of normal size, position. Appendages are not determined, the vaults are free, the discharge is mucous, not abundant.

Заключение: хронический сальпингит с окклюзией маточных труб. Conclusion: chronic salpingitis with tubal occlusion.

По данным обследования по заявляемому способу спонтанная НСТ-активность нейтрофилов после инкубации с ПАМГ-2 составила 24%. According to the survey according to the claimed method, the spontaneous HCT activity of neutrophils after incubation with PAMG-2 was 24%.

Заключение: по заявленному способу заподозрен наружный генитальный эндометриоз. Conclusion: according to the claimed method, external genital endometriosis is suspected.

При лапароскопии маточные трубы не изменены, при хромогидротубации свободно проходимы. На брюшине заднего листка широкой маточной связки слева и поверхности левого яичника обнаружены единичные очаги эндометриоза. Очаги на брюшине коагулированы биполярным коагулятором, яичник резецирован. Результат гистологического исследования препарата - эндометриоз яичника, что подтверждает правильность диагноза, установленного по заявленному методу. With laparoscopy, the fallopian tubes are not changed, with chromohydrotubation freely passable. On the peritoneum of the posterior leaf of the wide uterine ligament on the left and on the surface of the left ovary, single foci of endometriosis were found. The foci on the peritoneum are coagulated by a bipolar coagulator, the ovary is resected. The result of a histological examination of the drug is ovarian endometriosis, which confirms the correctness of the diagnosis established by the claimed method.

Указанным способом обследовано 19 пациентов, данные приведены в таблице 1. The specified method examined 19 patients, the data are shown in table 1.

Преимущества заявляемого способа:
1. Высокая точность - 84%, чувствительность - 85%, специфичность - 86%.The advantages of the proposed method:
1. High accuracy - 84%, sensitivity - 85%, specificity - 86%.

2. Малое количество (1 мл) крови, необходимое для исследования. 2. A small amount (1 ml) of blood required for the study.

3. Простота, общедоступность проведения методики. 3. Simplicity, accessibility of the methodology.

Список литературы
1. Баскаков В.П. Клиника и лечение эндометриоза. - М., 1990.- 240 с.List of references
1. Baskakov V.P. Clinic and treatment of endometriosis. - M., 1990.- 240 p.

2. Генитальный эндометриоз: клиника, диагностика, лечение (методические рекомендации). - Москва, 1997. - 31 с. 2. Genital endometriosis: clinic, diagnosis, treatment (guidelines). - Moscow, 1997 .-- 31 p.

3. Демин А.А. НТБ - тест при бактериальных и небактериальных заболеваниях //Сов. Медицина. - 1976. - N 12. - С. 16-20. 3. Demin A.A. NTB - a test for bacterial and non-bacterial diseases // Sov. The medicine. - 1976. - N 12. - S. 16-20.

4. Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля.- М.: Медицина, 1987. - С. 358-361. 4. Immunological methods / Ed. G. Frimelya.- M .: Medicine, 1987.- S. 358-361.

5. Ионов И.Д., Волков Н.И., Сухих Г.Т., Пшеничникова Т.Я. Способ диагностики наружного генитального эндометриоза //Открытия изобретения. - 1990, N 1. - С. 180 (А.С. N 1534397). 5. Ionov I.D., Volkov N.I., Sukhikh G.T., Pshenichnikova T.Ya. A method for the diagnosis of external genital endometriosis // Discovery of the invention. - 1990, N 1. - P. 180 (A.S. N 1534397).

6. Маянский А.Н., Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоцитоза.- Казань: Магариф, 1993. - 192 с. 6. Mayansky A.N., Pikuza O.I. Clinical aspects of phagocytosis. - Kazan: Magarif, 1993 .-- 192 p.

7. Петрова И.В., Васильева Л.А. Метод выделения из периферической крови человека чистой популяции нейтрофилов для изучения их розеткообразующих свойств //Лаб.дело. - 1974. - N 11. - С. 26-28. 7. Petrova I.V., Vasilyeva L.A. A method for isolating a pure population of neutrophils from human peripheral blood to study their rosette-forming properties // Lab.delo. - 1974.- N 11. - S. 26-28.

8. Татаринов Ю. С. , Посисеева Л.В., Петрунин Д.Д. Специфический альфа₂-микроглобулин (гликоделин) репродуктивной системы человека: 20 лет от фундаментальных исследований до внедрения в клиническую практику. - Иваново, МИК, 1998. - 128 с.8. Tatarinov Yu. S., Posiseeva L.V., Petrunin D.D. Specific alpha ₂ -microglobulin (glycodelin) of the human reproductive system: 20 years from basic research to implementation in clinical practice. - Ivanovo, MIK, 1998 .-- 128 s.

9. Martinez P., Ulcova - Gallova Z., Iborra A., Palacio J.R., Bousel L., Rokyta Z., Novotny Z. Endometriosis and autoantibodies //Am. J. Reprod. Immunol. - 1998. - v.40. - N 4. - p. 271. 9. Martinez P., Ulcova - Gallova Z., Iborra A., Palacio J.R., Bousel L., Rokyta Z., Novotny Z. Endometriosis and autoantibodies // Am. J. Reprod. Immunol. - 1998. - v. 40. - N 4. - p. 271.

10. Ory S.J. Pelvic endometriosis // Obstet. Ginnecol. Clin. J. Amer. - 1987. - Vol. 14, N 4. - P. 999-1014. 10. Ory S.J. Pelvic endometriosis // Obstet. Ginnecol. Clin. J. Amer. - 1987. - Vol. 14, N 4. - P. 999-1014.

Claims

A method for diagnosing external genital endometriosis by examining peripheral blood, characterized in that the blood determines the spontaneous HCT activity of neutrophils after their incubation with PAMG-2 and at a rate of 24% or more, external genital endometriosis is diagnosed.