RU2153505C2 - Смесь бактериоцинов, штамм streptococcus thermophilus - продуцент бактериоцинов и способ их получения - Google Patents
Смесь бактериоцинов, штамм streptococcus thermophilus - продуцент бактериоцинов и способ их получения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2153505C2 RU2153505C2 RU95109910/13A RU95109910A RU2153505C2 RU 2153505 C2 RU2153505 C2 RU 2153505C2 RU 95109910/13 A RU95109910/13 A RU 95109910/13A RU 95109910 A RU95109910 A RU 95109910A RU 2153505 C2 RU2153505 C2 RU 2153505C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- bacteriocins
- strain
- sequence
- mixture
- seq
- Prior art date
Links
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 title claims abstract description 90
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 title claims abstract description 43
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 15
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 11
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims abstract description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 16
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 8
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 claims description 7
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 7
- 240000002129 Malva sylvestris Species 0.000 claims description 5
- 235000006770 Malva sylvestris Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 claims description 5
- 241000195940 Bryophyta Species 0.000 claims description 4
- 235000011929 mousse Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 4
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 3
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000006210 lotion Substances 0.000 claims description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 19
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 abstract 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 32
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 28
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 24
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 24
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 18
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 18
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 15
- RMMPZDDLWLALLJ-UHFFFAOYSA-N Thermophillin Chemical compound COC1=CC(=O)C(OC)=CC1=O RMMPZDDLWLALLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 14
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 14
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 12
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 11
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 10
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 9
- 244000199885 Lactobacillus bulgaricus Species 0.000 description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 8
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 8
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 8
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 7
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 7
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 7
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 7
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 7
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 7
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 5
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 5
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 5
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 4
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 4
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 4
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 4
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 4
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 4
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 4
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 235000013960 Lactobacillus bulgaricus Nutrition 0.000 description 3
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 3
- 108010053775 Nisin Proteins 0.000 description 3
- NVNLLIYOARQCIX-MSHCCFNRSA-N Nisin Chemical compound N1C(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)[C@@H]([C@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)[C@H](N)[C@H](C)CC)CSC[C@@H]1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]2C(NCC(=O)N[C@H](C)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CS[C@@H]2C)C(=O)N[C@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]2C(N[C@H](C)C(=O)N[C@@H]3C(=O)N[C@@H](C(N[C@H](CC=4NC=NC=4)C(=O)N[C@H](CS[C@@H]3C)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N[C@H]([C@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=3NC=NC=3)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)NC(=C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(O)=O)=O)CS[C@@H]2C)=O)=O)CS[C@@H]1C NVNLLIYOARQCIX-MSHCCFNRSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 3
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 229940004208 lactobacillus bulgaricus Drugs 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000004309 nisin Substances 0.000 description 3
- 235000010297 nisin Nutrition 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 3
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 2
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 2
- 101000867232 Escherichia coli Heat-stable enterotoxin II Proteins 0.000 description 2
- DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N Glycerol 2-phosphate Chemical compound OCC(CO)OP(O)(O)=O DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000191953 Kocuria varians Species 0.000 description 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 2
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 2
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 description 2
- 240000001929 Lactobacillus brevis Species 0.000 description 2
- 235000013957 Lactobacillus brevis Nutrition 0.000 description 2
- 241000186840 Lactobacillus fermentum Species 0.000 description 2
- 240000002605 Lactobacillus helveticus Species 0.000 description 2
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 2
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 241000186429 Propionibacterium Species 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 244000057717 Streptococcus lactis Species 0.000 description 2
- 241000193987 Streptococcus sobrinus Species 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 2
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 2
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 2
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- GICLSALZHXCILJ-UHFFFAOYSA-N ctk5a5089 Chemical group NCC(O)=O.NCC(O)=O GICLSALZHXCILJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000551 dentifrice Substances 0.000 description 2
- 239000005546 dideoxynucleotide Substances 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 108010093128 lactacin F Proteins 0.000 description 2
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 2
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 108010074461 nisin A Proteins 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 108020001775 protein parts Proteins 0.000 description 2
- 102220325989 rs1555376587 Human genes 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VTVWTPGLLAELLI-UHFFFAOYSA-N 4-[[4-(dimethylamino)phenyl]diazenyl]benzenesulfonyl chloride Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1N=NC1=CC=C(S(Cl)(=O)=O)C=C1 VTVWTPGLLAELLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical group C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 1
- 241000186016 Bifidobacterium bifidum Species 0.000 description 1
- 241000186012 Bifidobacterium breve Species 0.000 description 1
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 description 1
- 241000186015 Bifidobacterium longum subsp. infantis Species 0.000 description 1
- 241001112696 Clostridia Species 0.000 description 1
- 241000193155 Clostridium botulinum Species 0.000 description 1
- 241000193452 Clostridium tyrobutyricum Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 1
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 229920002444 Exopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 1
- 101710116034 Immunity protein Proteins 0.000 description 1
- 235000013967 Lactobacillus helveticus Nutrition 0.000 description 1
- 235000001252 Lactococcus lactis subsp lactis bv diacetylactis Nutrition 0.000 description 1
- 241000194034 Lactococcus lactis subsp. cremoris Species 0.000 description 1
- 241000168725 Lactococcus lactis subsp. lactis bv. diacetylactis Species 0.000 description 1
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 description 1
- 244000172809 Leuconostoc cremoris Species 0.000 description 1
- 235000017632 Leuconostoc cremoris Nutrition 0.000 description 1
- 241000186805 Listeria innocua Species 0.000 description 1
- 241001388844 Lorica Species 0.000 description 1
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 241000192001 Pediococcus Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010021757 Polynucleotide 5'-Hydroxyl-Kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000008422 Polynucleotide 5'-hydroxyl-kinase Human genes 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 235000014962 Streptococcus cremoris Nutrition 0.000 description 1
- 235000014897 Streptococcus lactis Nutrition 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003916 acid precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 239000007621 bhi medium Substances 0.000 description 1
- 229940002008 bifidobacterium bifidum Drugs 0.000 description 1
- 229940004120 bifidobacterium infantis Drugs 0.000 description 1
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 235000012846 chilled/fresh pasta Nutrition 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000014048 cultured milk product Nutrition 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 229910052730 francium Inorganic materials 0.000 description 1
- KLMCZVJOEAUDNE-UHFFFAOYSA-N francium atom Chemical compound [Fr] KLMCZVJOEAUDNE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940012969 lactobacillus fermentum Drugs 0.000 description 1
- 229940054346 lactobacillus helveticus Drugs 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 108700042622 nisin Z Proteins 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 108010091212 pepstatin Proteins 0.000 description 1
- FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N pepstatin A Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CC(C)C FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 235000008476 powdered milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000013595 supernatant sample Substances 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 235000008939 whole milk Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
- A23C19/02—Making cheese curd
- A23C19/032—Making cheese curd characterised by the use of specific microorganisms, or enzymes of microbial origin
- A23C19/0323—Making cheese curd characterised by the use of specific microorganisms, or enzymes of microbial origin using only lactic acid bacteria, e.g. Pediococcus and Leuconostoc species; Bifidobacteria; Microbial starters in general
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
- A23C19/097—Preservation
- A23C19/10—Addition of preservatives
- A23C19/11—Addition of preservatives of antibiotics or bacteriocins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1238—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt using specific L. bulgaricus or S. thermophilus microorganisms; using entrapped or encapsulated yoghurt bacteria; Physical or chemical treatment of L. bulgaricus or S. thermophilus cultures; Fermentation only with L. bulgaricus or only with S. thermophilus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
- A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
- A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
- A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
- A23L3/3571—Microorganisms; Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q11/00—Preparations for care of the teeth, of the oral cavity or of dentures; Dentifrices, e.g. toothpastes; Mouth rinses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/315—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/21—Streptococcus, lactococcus
- A23V2400/249—Thermophilus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/885—Streptococcus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Birds (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к микробиологии. Получена смесь бактериоцинов из штамма-продуцента Streptococcus thermophilus CNCM 1-1351 с аминокислотными последовательностями SEQ ID N 1 и SEQ ID N 2. Бактериоцины получены культивированием штамма-продуцента в среде и условиях, благоприятных для его роста, и до содержания микроорганизмов в среде 107 - 109 м.к./мл с последующим центрифугированием культуры, приготовлением экстракта супернатанта, содержащего целевой продукт. Бактериоцины используют для приготовления пищевых продуктов или косметической продукции. 3 с. и 3 з.п. ф-лы, 7 табл.
Description
Описание
Предметом данного изобретения являются два бактериоцина из Streptococcus (S. ) thermophilus, штамм S. thermophilus, который продуцирует эти бактериоцины, способ получения этих бактериоцинов из этого штамма, а также использование этих бактериоцинов и/или этого штамма для изготовления пищевых продуктов или косметической продукции.
Предметом данного изобретения являются два бактериоцина из Streptococcus (S. ) thermophilus, штамм S. thermophilus, который продуцирует эти бактериоцины, способ получения этих бактериоцинов из этого штамма, а также использование этих бактериоцинов и/или этого штамма для изготовления пищевых продуктов или косметической продукции.
Исходный уровень исследований
Бактериоцин - это антибактериальное вещество или соединение, которое активно против бактерий, состоящее из белковой части, которая участвует в антибактериальном или антибиотическом действии. Бактериоцин обычно обладает узким спектром активности или подавления, часто ограниченным видами, близкими к видам бактерий, которые их продуцируют.
Бактериоцин - это антибактериальное вещество или соединение, которое активно против бактерий, состоящее из белковой части, которая участвует в антибактериальном или антибиотическом действии. Бактериоцин обычно обладает узким спектром активности или подавления, часто ограниченным видами, близкими к видам бактерий, которые их продуцируют.
В настоящее время известно четыре бактериоцина S. thermophilus.
Первый, в частности, имеет молекулярный вес, равный от 10 до 20 кD, обнаруживает термолабильность при 90oC и чувствительность к пепсину (Smaczny et al., Deutsche Molkerei - Zeitung, 105: 15, 460-465, 1984).
Второй, который описывается в основном по его спектру подавления бактерий в ЕР 443543, обладает способностью подавлять главным образом рост бактерий родов Staphylococcus и Pseudomonas и не способен подавлять рост бактерий родов Lactococcus и Enterococcus и видов Bacillus cercus.
Третий, который описан Pulusani et al. (J. of Food Science, 44: 2, 575-578, 1979), сильно подавляет Pseudomonas, не чувствителен к пепсину и содержит остатки сахаров.
И наконец, четвертый, описанный Gilano et al. (Microbiologie-Aliment-Nutrition, 8, 21-30, 1990), не чувствителен к пепсину, содержит остатки сахаров и не проходит через мембрану с пористостью, равной 100 кD.
В настоящее время S. thermophilus имеет большое значение для пищевого сектора, причем применяется в основном для приготовления молочных продуктов, таких как йогурты, например, и некоторые сыры. Кроме того, существует очень немного бактериоцинов, которые активны одновременно против Bacillus, Clostridium и Listeria. Поэтому может представлять значительную пользу, другими словами, существует потребность в расширении ряда бактериоцинов, продуцируемых представителями этого вида, чтобы, в частности, получить более широкий спектр антибактериальной активности, конкретно, в случае этого типа продукта.
Цель данного изобретения состоит в ответе на эту потребность.
Краткое изложение изобретения
Одной из целей данного изобретения является определение аминокислотной последовательности двух новых бактериоцинов S. thermophilus, а также их сигнального пептида, который обеспечивает их секрецию.
Одной из целей данного изобретения является определение аминокислотной последовательности двух новых бактериоцинов S. thermophilus, а также их сигнального пептида, который обеспечивает их секрецию.
Нуклеотидные последовательности, кодирующие эти два бактериоцина, также являются еще одним объектом этого изобретения.
И также другой целью этого изобретения являются штаммы Streptococcus thermophilus, продуцирующие по крайней мере один из бактериоцинов по этому изобретению, особенно штамм CNCM 1-1351 S. thermophilus, описанный ниже, который способен продуцировать бактериоцины по этому изобретению.
Способ получения экстракта по крайней мере одного бактериоцина по этому изобретению также является еще одним объектом этого изобретения.
И наконец, последним объектом данного изобретения является использование бактериоцинов по данному изобретению и использование их нуклеотидной последовательности, а также их сигнальной последовательности.
Детальное описание изобретения
Штамм CNCM 1-1351 S. thermophilus был выделен из ферментированного молочного продукта из Чехословакии, и наблюдалось, к удивлению, что он обладает замечательным свойством подавления роста широкого круга бактерий. Этот штамм был помещен на хранение 05.08.93 г., по Будапештскому договору, в Национальную коллекцию культур микроорганизмов Института Пастера, 25, Rue du Docteur Roux, F-75724, PARIS CEDEX 15, Франция, где он был соответственно обозначен 1-1351.
Штамм CNCM 1-1351 S. thermophilus был выделен из ферментированного молочного продукта из Чехословакии, и наблюдалось, к удивлению, что он обладает замечательным свойством подавления роста широкого круга бактерий. Этот штамм был помещен на хранение 05.08.93 г., по Будапештскому договору, в Национальную коллекцию культур микроорганизмов Института Пастера, 25, Rue du Docteur Roux, F-75724, PARIS CEDEX 15, Франция, где он был соответственно обозначен 1-1351.
Особенности этого штамма, относящиеся, в частности, к его морфологии, ферментации сахаров и тому подобному, даны ниже:
Морфология:
- Нежгутиковые образующие цепочку кокки. Не образуют споры.
Морфология:
- Нежгутиковые образующие цепочку кокки. Не образуют споры.
- Грам-положительные микроорганизмы, каталазоотрицательные и факультативные анаэробы.
Ферментация сахаров:
Образование молочной кислоты из D-глюкозы, лактозы, сахарозы, раффинозы. Отсутствие образования молочной кислоты из маннозы, фруктозы, галактозы.
Образование молочной кислоты из D-глюкозы, лактозы, сахарозы, раффинозы. Отсутствие образования молочной кислоты из маннозы, фруктозы, галактозы.
Другие:
Штамм, продуцирующий по крайней мере два бактериоцина, один белок, отвечающий за невосприимчивость к бактериоцинам, и экзополисахариды, обладающие структирующими свойствами.
Штамм, продуцирующий по крайней мере два бактериоцина, один белок, отвечающий за невосприимчивость к бактериоцинам, и экзополисахариды, обладающие структирующими свойствами.
Супернатант культуры штамма CNCM 1-1351 поэтому обладает относительно широким спектром антибактериальной активности. Среди бактерий, чувствительных к этому супернатанту, могут содержаться Streptococcus thermophilus, Lactococcus lactis, Lactococcus Lactis biovar diacetylactis, Lactococcus cremoris, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus brevis, Leuconostoc cremoris Leuconostoc mesenteroised, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium infantis, Propionibacterium, Listeria innicua, Listeria momocytogenes, Micrococcus varians и споры и вегетативные клетки Clostridium botulinum, Clostridium tyrobutyricum, Clostridium bifermentans, Clostridium sporogenes, Bacillus subtilis, Bacillus pumilus и Bacillus cereus, например (Bacteries lactiques, vol. I, 1994, Lorica edition).
Затем стало возможно выделить из этого штамма CNCM 1-1351 два белковых фактора, называемых бактериоцинами, которые ответственны за эту антибактериальную активность.
Что касается последнего результата, то первый бактериоцин по этому изобретению, который называется в этом описании "термофиллин I", имеет последовательность ПОСЛ ИД N : 1, описанную в перечислении последовательностей ниже.
Кроме того, можно представить себе, что этот бактериоцин может обладать антибактериальной активностью, имеющей более широкий или более специфичный спектр для одного рода или одного вида бактерий, чем тот, который проявляет термофиллин I, когда последний имеет последовательность, отличающуюся от ПОСЛ ИД N : 1 заменой, делецией и/или вставкой по крайней мере одной аминокислоты, например. Конечно, уже известно из ЕР 521240, что низин Z обладает более благоприятным спектром активности, чем низин A, тогда как он отличается от низина A только заменой одной аминокислоты.
Вот почему все бактериоцины, имеющие замену, делецию и/или вставку по крайней мере одной аминокислоты в их первоначальной последовательности ПОСЛ ИД N : 1, могут считаться бактериоцинами по данному изобретению.
Второй бактериоцин по этому изобретению, названный в этом описании "термофиллином 2", имеет последовательность ПОСЛ ИД N: 2, описанную в перечислении последовательностей ниже. Также возможно представить себе, что этот бактериоцин может обладать антибактериальной активностью, если он имеет последовательность, которая отличается от последовательности ПОСЛ ИД N: 2 заменой, делецией и/или вставкой по крайней мере одной аминокислоты, например. Что касается последнего, то все бактериоцины, имеющие по крайней мере одну из модификаций, описанных выше, в их первоначальной последовательности ПОСЛ ИД N: 2, могут считаться бактериоцинами по данному изобретению.
Кроме того, еще одним объектом данного изобретения являются нуклеотидные последовательности, кодирующие термофиллин 1 и термофиллин 2, так как каждая из них может использоваться для придания, путем трансформации, бактериям, дрожжам или растениям, например, способности подавлять некоторые бактерии. Эти нуклеотидные последовательности могут, таким образом, быть относительно вариабельными по вырожденности генетического кода и могут, в частности, включаться в оперон CNCM 1-1351 штамма, имеющий нуклеотидную последовательность ПОСЛ ИД N: 3, описанную в перечислении последовательностей ниже.
В частности, возможно использовать нуклеотидную последовательность, содержащую нуклеотиды с 221 по 475 из последовательности ПОСЛ ИД N: 3, которая кодирует термофиллин 1 с его сигнальным пептидом. Однако большие преимущества дает использование только последовательности, кодирующей сигнальный пептид, от нуклеотида 221 по 288 из последовательности ПОСЛ ИД N: 3, с тем, чтобы связать ее с интересующим геном так, чтобы обеспечить секрецию белка, кодируемого этим интересующим геном, штаммом Streptociccus thermophilus.
Подобным же образом большие преимущества дает использование только последовательности, кодирующей секретируемый термофиллин 1, с нуклеотида 289 по 475 последовательности ПОСЛ ИД N: 3, чтобы стало возможным ее слияние с сигнальной последовательностью в плазмиде экспрессии, например, с тем, чтобы экспрессировать ее в другом микроорганизме, а не в S. thermophilus.
Подобным же образом может использоваться нуклеиновая последовательность, содержащая нуклеотиды с 495 по 686 последовательности ПОСЛ ИД N: 3, которая кодирует термофиллин 2, с ее сигнальным пептидом. Однако большие преимущества дает использование только одной последовательности, кодирующей сигнальный пептид, от нуклеотида 495 по 557 последовательности ПОСЛ ИД N: 3, так, чтобы обеспечить секрецию штаммом Streptococcus thermophilus какого-либо белка, слитого с этим пептидом.
Также большие преимущества дает использование только последовательности, кодирующей секретируемый термофиллин 2, с нуклеотида 558 по 686 последовательности ПОСЛ ИД N: 3, так, чтобы было возможно слить ее с сигнальной последовательностью в плазмиде экспрессии, например, чтобы экспрессировать ее в другом микроорганизме, а не в S. thermophilus.
И наконец, так как наблюдалось, что некоторые другие штаммы S. thermophilus, помимо CNCM 1-1351, демонстрируют спектр подавления, сходный со спектром, проявляемым штаммом CNCM 1-1351, и устойчивость к последнему (особенно штаммы Sfi 12 и 25, описанные ниже), очень вероятно, что эти штаммы могут продуцировать по крайней мере один из бактериоцинов данного изобретения и в то же самое время белок невосприимчивости, придающий эту устойчивость. В соответствии с последним все штаммы, способные продуцировать по крайней мере один из бактериоцинов, описанных выше, включаются в данное изобретение.
В способе получения экстракта, содержащего по крайней мере один бактериоцин по данному изобретению, штамм S. thermophilus, который продуцирует по крайней мере один из указанных бактериоцинов, культивируется в среде и при условиях, благоприятных для роста S. thermophilus до тех пор, пока среда не будет содержать 107-109 микроорганизмов штамма на мл, полученную культуру центрифугируют и затем получают экстракт супернатанта, содержащего по крайней мере один из указанных бактериоцинов.
Для получения этого экстракта штамм S. thermophilus, продуцирующий по крайней мере один из указанных бактериоцинов по данному изобретению, особенно штамм CNCM 1-1351 S. thermophilus, может поэтому культивироваться в среде и при условиях, благоприятных для роста S. thermophilus.
Он может культивироваться особенно в среде MSK (снятое коровье молоко с добавлением дрожжевого экстракта) или в среде HJ (ультрафильтрат коровьевого молока, дополненный дрожжевым экстрактом и соитоном), например. Он, предпочтительно, культивируется в среде, которая является селективной для Streptococcus, такой как среда М 17, описанная Р.Е. Terzaghi et aL, J. Appl. Microbiol., 29, 807-813 (1975), дополненная 0,5-2% сахара, который может ферментироваться S. thermophilus, особенно сахарозой, лактозой или глюкозой, например.
Такая среда может быть приготовлена путем смешивания 95 мл основной среды и 5 мл раствора, содержащего 10 г ферментируемого сахара на 100 мл воды, причем раствор ферментируемого сахара и основная среда стерилизовались отдельно при 121oC в течение 15 мин, а основную среду готовили путем растворения следующих компонентов в 950 мл кипящей воды:
трипсиновый гидролизат казеина - 2,5 г
пепсиновый гидролизат мяса - 2,5 г
папаиновый гидролизат соевых бобов - 5,0 г
дрожжевой экстракт - 2,5 г
мясной экстракт - 5,0 г
бета-глицерофосфат - 19 г
сульфат Mg - 0,25 г
аскорбиновая кислота - 0,5 г
Указанный штамм может культивироваться в указанной благоприятной для роста S. thermophilus среде при 37-48oC в течение, например, 2-8 часов, до тех пор пока среда не будет содержать примерно 107-109 микроорганизмов штамма на мл, причем значение около 108 микроорганизмов/мл соответствует, с одной стороны, оптической плотности среды, измеренной при 600 нм (OD600), равной примерно 3,6, и с другой стороны, концентрации, достигаемой в коровьем молоке в точке, в которой оно коагулирует под воздействием подкисления, продуцируемого культивируемым штаммом.
трипсиновый гидролизат казеина - 2,5 г
пепсиновый гидролизат мяса - 2,5 г
папаиновый гидролизат соевых бобов - 5,0 г
дрожжевой экстракт - 2,5 г
мясной экстракт - 5,0 г
бета-глицерофосфат - 19 г
сульфат Mg - 0,25 г
аскорбиновая кислота - 0,5 г
Указанный штамм может культивироваться в указанной благоприятной для роста S. thermophilus среде при 37-48oC в течение, например, 2-8 часов, до тех пор пока среда не будет содержать примерно 107-109 микроорганизмов штамма на мл, причем значение около 108 микроорганизмов/мл соответствует, с одной стороны, оптической плотности среды, измеренной при 600 нм (OD600), равной примерно 3,6, и с другой стороны, концентрации, достигаемой в коровьем молоке в точке, в которой оно коагулирует под воздействием подкисления, продуцируемого культивируемым штаммом.
Для получения неочищенного экстракта указанного супернатанта можно использовать любой подходящий метод преципитации, такой как преципитация с помощью трихлоруксусной кислоты, "высаливание" или осаждение растворителем, например.
Предпочтительно, чтобы для получения этого неочищенного экстракта pH супернатанта доводилась до 1,0-2,0 с помощью H3PO4, преципитат отделялся, и проводили одно или более последовательных осаждений с помощью трихлоруксусной кислоты, причем после каждого следовало ресуспендирование в водной суспензии с трихлоруксусной кислотой.
Использование бактериоцинов и/или штамма Streptococcus thermophilus, который продуцирует эти бактериоцины, по данному изобретению предусматривается при приготовлении пищевых продуктов или косметической продукции.
Культура указанного штамма может, в частности, использоваться в качестве стартера при приготовлении сыров, особенно сыров типа моззарелла (чтобы избежать образования полостей, образуемых Bacillus polymixa, споры которой переживают ферментацию), типа швейцарского (такого, как груйер или эмментальский, для борьбы с загрязнением Clostridium tyrobutiricum), типа вачерен (для борьбы с загрязнением Listeris monocytogenes) и типа "сэрэ" (фразцузское название мягкого или сливочного сыра), или при приготовлении кисломолочных продуктов, особенно йогурта или порошкового молока для рецептур для младенцев, например.
В частности, указанный штамм Streptococcus thermophilus может культивироваться в молоке в комбинации со штаммом Lactobacillus bulgaricus, который умеренно чувствителен к термофиллину (например, штамм YL 5, описанный ниже), чтобы исключить после подкисление йогурта, вызываемое L. bulgaricus.
Указанные бактериоцины, особенно в форме неочищенного или очищенного экстракта, или указанный штамм могут также использоваться в качестве консервирующего или активного средства против патогенных бактерий, особенно при приготовлении мясных продуктов, таких как муссы, в качестве активного вещества против роста спор клостридий, особенно Clostridium botulinum или при приготовлении кремов или лосьонов в качестве активного вещества против патогенных бактерий кожи, или же при приготовлении гигиенических продуктов и лечебных средств для ротовой полости в качестве активного вещества против патогенных бактерий ротовой полости, особенно против Streptococcus sobrinus, например.
Бактериоцины по данному изобретению охарактеризованы более детально ниже с помощью различных микробиологических, биохимических и генетических данных, иллюстрирующих их свойства. Проценты даны по весу.
Единица антибактериальной активности - "Agar Well-Test".
В рамках данного описания антибактериальная активность определяется на основе условных единиц.
Одна условная единица (уе) определяется как величина, обратная степени наивысшего разделения, при котором образец еще проявляет антибактериальную активность в испытании, известном лицам - специалистам в данной области под названием "agar well test", английское выражение, которое буквально означает испытание с использованием лунок, вырезанных в агаре.
Стандартный образец супернатанта культуры S. thermophilus по данному изобретению, полученный в стандартных условиях, показанных в примере 1, обычно проявляет активность, равную 32 ye в объеме 60 мкл. Это, таким образом, означает активность, равную 460 уе/мл.
Стандартный неочищенный экстракт бактериоцина, полученного из супернатанта культуры, показанной в примере 1, путем просветления с последующими двумя последовательными осаждениями с помощью трихлоруксусной кислоты и с ресуспендированием после каждого в водной суспензии с трифторуксусной кислотой, обычно имеет активность, равную примерно 1,4 х 105 уе/мл.
С помощью указанного определения на агаре с вырезанными ячейками устанавливается, обладает ли все еще образец антибактериальной активностью при данной степени разведения.
Чтобы сделать это, в чашку Петри наливали 35 мл среды М 17 и к ней добавляли 1% сахарозы и 1,5% агара.
5 мл среды М 17, к которой добавлены 1% сахарозы и 0,75% агара, засеваются 5 мкл культуры, полученной в течение предыдущей ночи, штамма S. thermophilus, который по типу чувствителен к данному бактериоцину (типичный индикатор), в данном случае, например, штамм Sfi 3.
5 мл выливали поверх 35 мл и оставляли высыхать в течение 15 мин в ламинарном потоке. В среде с культурой вырезаются лунки диаметром 5 мм.
Испытуемые образцы наливают в лунки в количестве 70 мкл на лунку. Инкубация проводится в течение 6 час в анаэробных условиях при 42oC. Во время этой инкубации типичный индикаторный штамм подращивался, и становились видны зоны подавления роста. Степень разделения, при которой образец больше не проявляет антибактериальной активности - это степень разведения, при которой зона подавления больше не различается.
Инактивация ферментами
С помощью указанного определения на агаре с вырезанными лунками на агаре, засеянном указанным индикаторным типичным штаммом, как описано выше, определено, инактивируются ли данные бактериоцины или нет различными ферментами.
С помощью указанного определения на агаре с вырезанными лунками на агаре, засеянном указанным индикаторным типичным штаммом, как описано выше, определено, инактивируются ли данные бактериоцины или нет различными ферментами.
При всех использованных ферментах, за исключением липазы, от 1 мкг/мл до 10 мкг/мл фермента добавляется к указанному стандартному неочищенному экстракту, разведенному в 33х буфером, рекомендованным поставщиком фермента, так чтобы получить образцы с 300 ye в 70 мкл. Затем ферменту позволяют действовать в течение 30 мин при температуре, рекомендованной поставщиком перед помещением всего объема в лунку в агаре для испытания.
С другой стороны, для коммерческой липазы сначала к 100 мкл раствора, содержащего 200 мкг/мл липазы, добавляется 1 мкл смеси ингибиторов (1,25 М ЭДТУ; 0,25% пепстатина A (p4265 Sigma); 0,25% Е-64 (E3132 Sigma); 0,25% апротинина (A1153 Sigma), и ингибиторам позволяют действовать в течение 45 мин при комнатной температуре, затем добавляют 5 мкл (450 ye) разведенного стандартного неочищенного экстракта и позволяют реагировать в течение 30 мин при 37oC, затем 70 мкл смеси помещали в лунку в агаре для испытания. Использованные для разведений буферы были следующими.
- pH 2,0: 100 мМ малеиновая кислота, доведенная NaOH,
- pH 7,0: 100 мМ фосфатный буфер (К2HPO4/KH2PO4),
- pH 7,5: 100 мМ фосфатный буфер (К2HPO4/KH2PO4),
- pH 7,75: 100 мМ Трис-HCl.
- pH 7,0: 100 мМ фосфатный буфер (К2HPO4/KH2PO4),
- pH 7,5: 100 мМ фосфатный буфер (К2HPO4/KH2PO4),
- pH 7,75: 100 мМ Трис-HCl.
Диаметр зоны подавления сравнивается с контрольным диаметром зоны, полученной без добавления фермента, который для каждого буфера и для каждой температуры инкубации составляет примерно 14 мм.
В таблице I представлены результаты, полученные с испытуемыми ферментами. В этой таблице фермент обозначен по его типу, названию поставщика и к тому же номером поставщика. Инактивация бактериоцина показана как функция концентрации добавленного фермента. Цифра 0 обозначает, что больше не существует какой-либо зоны, или другими словами, что антибактериальная активность данного бактериоцина нарушена инкубацией с ферментом. Цифра 14 показывает, что все еще существует зона, равная 14 мм, соответствующая полной антибактериальной активности данного бактериоцина.
Все протеазы угнетают антибактериальную активность супернатанта, что указывает на то, что в этой активности задействована белковая часть.
Тот факт, что не наблюдается никакого влияния каталазы на антибактериальную активность бактериоцинов, также показывает, что угнетение роста типичного индикаторного штамма не связано с антибактериальной активностью H2O2, которая, как известно, обладает подобной активностью, как и бактериоцины, так как H2O2 разрушалась бы каталазой.
Подобно этому, тот факт, что не наблюдается устранения антибактериальной активности альфа-амилазой, демонстрирует отсутствие гидролизуемых альфа-амилазой сахаров, участвующих в этой антибактериальной активности.
Кроме того, тот факт, что липаза не обладает влиянием на интибактериальную активность, также показывает отсутствие липидной фракции, участвующей в этой активности.
Спектр подавления
С помощью определения на агаре с лунками, с агаром, засеянным разными штаммами спор или бактерий, определяют, обладает ли ингибирующей активностью на рост этих различных бактерий супернатант культуры CNCM 1-1351 штамма, продуцирующего два бактериоцина по этому изобретению, другими словами, определяется спектр подавления для этого супернатанта.
С помощью определения на агаре с лунками, с агаром, засеянным разными штаммами спор или бактерий, определяют, обладает ли ингибирующей активностью на рост этих различных бактерий супернатант культуры CNCM 1-1351 штамма, продуцирующего два бактериоцина по этому изобретению, другими словами, определяется спектр подавления для этого супернатанта.
Чтобы сделать это, подавляющее действие на рост испытуемого штамма, производимое образцом супернатанта, проявляющего активность, равную 300 ye при pH 7,0, наблюдают по отношению к этому действию, которое в норме равно нулю, того же самого образца, предварительно дезактивированного инкубацией при 37oC в течение 30 минут в присутствии 5 мкг/мл протеиназы К.
Для проведения этих исследований использовали чашки для тканевых культур FALCON 3046 Multiwell. 6 мл среды М 17, содержащей дополнительно 1% лактозы и 1,5% агара (среда M17L), покрывается 700 мкл среды M17, содержащей дополнительно 1% лактозы и 0,6% агара, засеянного 1% культуры тест-штамма, подрощенного в течение предыдущей ночи и разведенного до OD600, равной 0,1.
Когда тест-штамм должен выращиваться из спор, засев осуществляется 105- 106 спор на мл покрывающей среды.
Если испытуемый штамм не Lactococcuc, Streptococcus или Enterococcus, среда M17L заменяется стандартной средой, предпочтительной для роста рассматриваемых бактерий, особенно на среду MRS, включающую дополнительно 2% глюкозы для Lactobacillus, Pediococcus, Leuconostos и Beifidobacterium (Sanofi Diagnostics Pasteur, Франция), среду RCM для спор или вегетативных клеток Clostridium (Oxoid, Англия) и среду BHI (Difco, США) для других испытуемых бактерий.
Две лунки диаметром 5 мм и глубиной 5 мм вырезаются в каждой чашке. Образец объемом 70 мкл с 300 ye данного бактериоцина помещается в одну из лунок, а в другую тот же самый образец, предварительно дезактивированный. Инкубиацию проводят при температуре, благоприятной для роста испытуемого штамма в течение периода, необходимого для того, чтобы чашка покрылась видимым бактериальным газоном.
Эффект или степень подавления характеризуется диаметром наблюдаемой зоны подавления роста. Считается, что подавление очень высокое (+ + + +), если зона имеет диаметр, равный 16-18 мм, высокое (+ + +) при диаметре, равном 11,5- 15,5 мм, среднее (+ +) при диаметре, равном 7,5-11 мм, слабое при диаметре, равном 5-7,5 мм и нулевое (-), если зона не наблюдается.
Таким образом было испытано более 74 штаммов молочнокислых бактерий различных видов и подвидов, и наблюдалось, что только примерно 7% из них устойчивы к супернатанту. Детали результатов этих испытаний представлены в таблице II. В этой таблице II, как и в последующих таблицах, название штамма или указанный N - это N , который присвоен ему в коллекции Nestle (адрес: NESTEC S. A. , Reseearch Centre, Vers-chez-les-Blanc, CH-1000 Lausanne 26, Швейцария). Указанная температура является температурой инкубации во время испытания.
В этой таблице II видно, что спектр подавления супернатанта является узким в том смысле, что для некоторых видов Lactobacillus, таких как Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus bulgaricus, например, степень подавления гетерогенна. Однако для других видов, таких как L. fermentum, L. helveticus и Lactococcus, например, степень подавления гомогенна.
Это целесообразно в свете того факта, что очень трудно отличить один штамм от другого внутри одного и того же вида. Поэтому возможно предвидеть преимущественное использование супернатанта или очищенных бактериоацинов для различения промышленных штаммов.
Также возможно предвидеть использование штамма, продуцирующего по крайней мере один из бактериоцинов по данному изобретению, в культуре с другим штаммом молочнокислых бактерий, который природно устойчив или слабочувствителен к бактериоцинам, продуцируемым в среде. Йогурты, особенно йогурты, демонстрирующие сниженное послеподкисление, например, могут получаться таким образом.
Также видно, что супернатант подавляет рост шести штаммов, продуцирующих низин, L. Lactis. Это доказывает, что данный бактериоцин не является низином. Это подтверждается тем фактом, что данный бактериоцин инактивируется трипсином при концентрации 10 мкг/мл (сравните таблицу 1), что не является характерным для низина.
Однако спектр подавления супернатанта культуры, продуцирующей два бактериоцина этого изобретения, является также и широким в том смысле, что он не ограничивается видами молочнокислых бактерий, но что он распространяется на другие виды грам-положительных бактерий, особенно на пищевые бактерии Bifidobacterium, на нежелательные патогенные бактерии Listeria innocua, Listeria monocytogenes, Propionibacterium и Micrococcus varians и на споры и клетки многих патогенных бактерий рода Clostridium и Bacillus, например, что демонстрируется результатами, представленными в таблице III.
Результаты, показанные в этой таблице III, между прочим, делают возможным предположить преимущественное использование супернатанта или очищенных бактериоцинов в качестве консерванта при приготовлении пищевых продуктов, как активного вещества против патогенных возбудителей, особенно в мясных продуктах против Clostridium, в сырах против Listeria monocytogenes и C. tyrobutyricum или в свежих пастах и соусах против Bacillus, из которых действительно выделены вышеуказанные штаммы, например.
И наконец, данные бактериоцины не оказывают подавляющего действия на рост грам-отрицательных бактерий, что можно видеть в свете результатов, показанных в таблице IV.
Устойчивость к нагреванию, стабильность
Бактериоцины, присутствующие в экстракте, полученном при условиях, показанных в примере 1, не проявляют хорошей стабильности при хранении при 4oC, если экстракт предварительно не прогрет. С другой стороны, они демонстрируют хорошую стабильность при хранении, если экстракт резко нагревают в течение по крайней мере 15 минут при 90-121oC, например.
Бактериоцины, присутствующие в экстракте, полученном при условиях, показанных в примере 1, не проявляют хорошей стабильности при хранении при 4oC, если экстракт предварительно не прогрет. С другой стороны, они демонстрируют хорошую стабильность при хранении, если экстракт резко нагревают в течение по крайней мере 15 минут при 90-121oC, например.
При проверке оказалось, в частности, что более 50% активности такого экстракта сохраняется после 5 месяцев хранения при 4oC, если указанный экстракт прогревали заранее в течение 20 мин при 94oC на водяной бане, например. При проверке также определено, что 100% активности сохраняется после прогревания указанного экстракта в течение 60 мин при 100oC (испытание проводили на термостатированной масляной бане с 1 мл супернатанта, концентрированного или же культуры штамма S. thermophilus по данному способу).
С другой стороны, данные бактериоцины сохраняют только около трети их активности после стерилизующей обработки в течение 30 минут при 121oC (испытание проводили на 40 мл неконцентрированного супернатанта культуры штамма S. thermophilus по данному процессу), например.
И наконец, с помощью исследования с ультрафильтрацией на фильтрах Amicon последующим электрофорезом в геле (SOS-PAGE) наблюдалось, что бактериоцины данного изобретения в супернатанте культуры S. thermophilus, особенно в супернатанте стандартной культуры, полученном в примере 1, существуют в виде агрегатов с молекулярным весом (МБ) более 10 kDa, из которых 67% представлены MB менее 100 KDa, а 33% представлены MB более 100 kDa.
Очистка бактериоцинов
В описании, которое следует далее, процентное содержание трифторуксусной кислоты и ацетонитрила дано по объему.
В описании, которое следует далее, процентное содержание трифторуксусной кислоты и ацетонитрила дано по объему.
1 литр культуры штамма CNCM 1-1351 получают в среде М17, дополненной 1% сахарозы, в течение 6 час при 42oC и в анаэробных условиях.
Затем добавляется 20 г смолы XAD-7 (Sigma) непосредственно в культуру, и все это осторожно перемешивается в течение 1 часа при 4oC. Затем смесь фильтруется через фильтр Schleicher & Schvell (Германия) 604, затем смолу, оставшуюся на фильтре, промывают 1 литром 50 мМ раствора уксусной кислоты с pH 5,2 для удаления бактерий. Затем смолу помещают в колонку и элюируют бактериоцины 45 мл раствора, содержащего 70% ацетонитрила и 0,1% трифторуксусной кислоты (ТФУ). Таким образом получается элюат, содержащий оба бактериоцина.
Объем элюата сначала снижается по 24 мл путем центрифугирования/ лиофилизации (Speedvac, Savant Instrument), полученный объем затем доводится до концентрации 2М NaCI и 250 мМ Трис•Cl, pH 8 до объема 50 мл, затем этот объем вводится в колонку Phenyl Superose HR 16/10 с гидрофобным взаимодействием (Pharmacia), предварительно уравновешенную буфером, содержащим 50 мМ Трис•Cl, pH 8 и 2М NaCl.
Затем последовательно пропускают со скоростью 4 мл/мин 200 мл предшествующего буфера, 100 мл линейного градиента, начиная с предшествующего буфера и заканчивая 50 мМ раствором Трис•Cl, pH 8, 100 мл предшествующего буфера, 60 мл чистой воды, 60 мл 50 мМ раствора Трис•Cl, pH 8 и в конце 60 мл чистой воды.
50 мкл каждой фракции, собранной на выходе из колонки, затем разводят в 50 мкл 0,1% ТФУ, и затем определяется антибактериальная активность каждой смеси с помощью испытания на агаре с вырезанными лунками, описанном выше.
Таким образом обнаружено, что франкция 470 и 490 мл проявляют антибактериальную активность. Эти фракции затем перемешивают, объем этой смеси снижают путем центрифугирования/лиофилизации до 1 мл, затем этот сниженный объем вводят в колонку Pep RPC HR 5/5 (Pharmacia), предварительно уравновешенную 0,1% раствором ТФУ, называемым в этом описании "раствором А".
Также готовят раствор элюирования "В", содержащий 70% ацетонитрила и 0,097% ТФУ, Затем через колонку последовательно пропускали со скоростью 1 мл/мин 1 мл раствора А, 9 мл линейного градиента, начиная с раствора А и заканчивая смесью 50/50 растворов А и В, 2 мл этой последней смеси, 7 мл линейного градиента, начиная с этой последней смеси и заканчивая второй смесью 20/80 растворов А и В, 2 мл линейного градиента, начиная с этой второй смеси и заканчивая раствором В, затем 2 мл этого последнего раствора.
Затем определена антибактериальная активность фракций на выходе из колонки с помощью испытания на агаре с вырезанными лунками, которое описано выше. Все фракции с 14 по 22 проявляют антибактериальную активность. С другой стороны, два главных протеиновых пика, наблюдаемых при оптической плотности, равной 215 нм, определяются во фракциях 15 и 21 (по миллилитру).
Секвенирование бактериоцинов
N-концевая часть белков, содержащихся во фракциях 15, 18, 20, 21 и 22, секвенирована с использованием автоматического секвенатора Applied Biosystems 4774.
N-концевая часть белков, содержащихся во фракциях 15, 18, 20, 21 и 22, секвенирована с использованием автоматического секвенатора Applied Biosystems 4774.
Наличие пептида, имеющего последовательность из 48 аминокислот, которая идентична последовательности для N-концевой части последовательности ПОСЛ ИД N: 1, обнаружена таким образом во фракции 15. Другой пептид, преимущественно присутствующий во фракции 21, также имеет последовательность из 23 аминокислот, которая идентична последовательности для N-концевой части последовательности ПОСЛ ИД N: 2.
Поэтому эти результаты показывают, что штамм CNCM 1-1351 продуцирует два пептида, обладающие антибактериальной активностью. Однако различное проявление зон подавления, полученных с фракциями 15 и 21, делает возможным предположение о различной антибактериальной активности термофиллина 1 и термофиллина 2 данного изобретения.
С другой стороны, аминокислотный состав фракций 15 и 21, предварительно гидролизованных 6N HCl при 100oC в течение 24 часов, проанализирован известным методом "дабсилхлоридной дериватизации" ("dabsyl chloride derivatization"). Результаты показывают, что аминокислотный состав каждой фракции уже, по-видимому, соответствует присущей им пептидной последовательности.
И наконец, фракции 15 и 21 подвергли масс-спектрофотометрии, и определен молекулярный вес термофиллина 1, составляющий порядка 5800 Дальтон, и для термофиллина 2 определен молекулярный вес порядка 3900 Дальтон.
Секвенирование генов бактериоцинов
Вырожденные нуклеиновые последовательности ПОСЛ ИД N: 6 и ПОСЛ ИД N: 7, описанные в перечне последовательностей, ниже, которые соответствуют N-концевой части и C-концевой части соответственно, ранее секвенированного пептида термофиллина 1, получены обычным способом.
Вырожденные нуклеиновые последовательности ПОСЛ ИД N: 6 и ПОСЛ ИД N: 7, описанные в перечне последовательностей, ниже, которые соответствуют N-концевой части и C-концевой части соответственно, ранее секвенированного пептида термофиллина 1, получены обычным способом.
Часть смеси последовательностей ПОСЛ ИД N: 6 затем превращали в радиоактивные путем воздействия Т4 полинуклеотидкиназы, как описано в руководстве для лабораторий "Molecular cloning, a Laboratory manual" (second edition, Sambrook et al., Cold Spring Harbor, Laboratory Press, 1989), называемом в данном описании "Maniatis".
Затем проведена PCR ("полимеразная цепная реакция") с помощью двух нерадиоактивных смесей вырожденных последовательностей ПОСЛ ИД N: 6 и ПОСЛ ИД N: 7, на препарате хромосомной ДНК из штамма CNCM 1-1351, как описано в руководстве "PCR technology": (Н.А. Erdlich editor, М stockton press, London).
Затем при электрофорезе в геле обнаружена полоса в области 128 пар оснований (bp), которая затем элюирована по Maniatis. Часть материала затем клонировали непосредственно в плазмиду pGEM-Т (Promega) в соответствии с рекомендациями поставщика и затем секвенировали с помощью "дидезоксинуклеотидного" метода, по Maniatis, используя универсальные пробы pUC19.
Таким образом получена проба, имеющая последовательности ПОСЛ ИД N : 8, описанная в перечне последовательностей, ниже, соответствующая последовательности, кодирующей аминокислоты с 9 по 47 термофиллина 1. И наконец, другая часть элюированной полосы из 128 bp превращена в радиоактивную методом, называемым "случайным примированием" по Maniatis.
С другой стороны, проведено расщепление препарата хромосомной ДНК из штамма CNCM 1-1351 с помощью EcoRI и HindIII по рекомендациям поставщика фермента, затем 10 мкг продукта расщепления разгоняли с помощью аналитического электрофореза в геле, ДНК переносили в щелочной среде из геля на мембрану "Zeta probe" (Biorad), мембрану предварительно гибридизировали при 54oC в течение ночи в среде, содержащей 6X SSC, 1% додецилсульфата натрия и 1% снятого молока, затем эту мембрану гибридизовали с радиоактивной вырожденной пробой ПОСЛ ИД N: 6 в предыдущей среде для гибридизации сначала в течение 18 часов при 54oC со снижением температуры на 2oC каждые 3 часа, затем в течение 24 часов при 42oC.
Мембрану затем отмывали в течение 2 мин последовательно 3 раза в 6X SSC при комнатной температуре и в течение 1 мин в 6X SSC при 47oC. В конце мембрану подвергали экспозиции на пленке для ауторадиографии. Все эти этапы осуществляли по руководству Maniatis.
Затем обнаружена полоса в области 3,6 kb, которая дает нам возможность определить место при препаративном электрофорезе и геле хромосомной ДНК (300 мкг) штамма CNCM 1-1351, выполненном при тех же условиях, что и описанный выше, так как эта часть геля содержит участок интересующей ДНК. Эту часть геля затем вырезали и элюировали обычным способом и элюированную ДНК лигировали в вектор pUC19 (Messing et al. Methods EnzymoL, 101; 20, 1983), предварительно расщепленный с помощью EcoRI и HindIII. Эти этапы проводили в соответствии с руководством Maniatis.
Штамм BZ234 Escherichia coli (Biocentre collection, University of Bale, Швейцария), предварительно превращенный в компетентный, затем трансформирован обычным путем с использованием среды лигирования. Трансформированные клетки затем отбирали с помощью альфа-комплементации. Затем по методу, называемому "перенос колонии" по Maniatis, 300 трансформированных колоний переносят на фильтр, их лизируют, гибридизуют с радиоактивной последовательностью ПОСЛ ИД N: 8, затем фильтр подвергают экспозиции на пленке для ауторадиографии.
Затем на пленке обнаружено 13 колоний, имеющих плазмиды, способные к гибридизации с последовательностью ПОСЛ ИД N : 8. Потом отобраны две из этих колоний, из них обычным способом экстрагирована плазмидная ДНК, и фрагмент ДНК, клонированный в две выбранные плазмиды pUC19, секвенирован "дидезоксинуклеотидным" методом с помощью универсальных проб pUC19, затем пробы создавали на основе последовательностей, полученных таким образом.
Итак, получена нуклеотидная последовательность ПОСЛ ИД N: 3, описанная в перечне последовательностей, ниже, которая идентична для двух выбранных плазмид. Эта последовательность, таким образом, включает оперон, кодирующий два белка, имеющий аминокислотные последовательности ПОСЛ ИД N: 4, соответствующие до созревания термофиллину 1, и ПОСЛ ИД N: 5, соответствующей до созревания термофиллину 2 (смотрите перечень последовательностей ниже). Третья открытая рамка считывания также начинается с нуклеотида 679 этой последовательности и должна, конечно, соответствовать гену по невосприимчивости.
Путем сравнения N-концевых пептидных последовательностей очищенных бактериоцинов и аминокислотных последовательностей белков, кодируемых кодирующими рамками оперона ПОСЛ ИД N: 3, может быть определено, что белок из аминокислотной последовательности ПОСЛ ИД N: 4 (термофиллин 1) имеет лидерный пептид из 23 аминокислот, который имеет единицу глицин-глицин, характерную для класса бактериоцинов из молочнокислых бактерий.
И наконец, молекулярная масса термофиллина 1, рассчитанная по его нуклеотидной последовательности, соответствует массе, найденной с помощью спектрофотометрии, то есть составляет порядка 5800 Дальтон.
Аналогично, белок с аминокислотной последовательностью ПОСЛ ИД N: 5 (термофиллин 2) имеет лидерный пептид из 21 аминокислоты, который включает единицу глицин-глицин, характерную для класса бактериоцинов из молочнокислых бактерий. И наконец, молекулярная масса термофиллина 2, рассчитанная по его нуклеотидной последовательности, соответствует найденной с помощью спектрофотометрии, то есть составляет порядка 3900 Дальтон.
Роль различных бактериоцинов
Гомология с первым пептидом оперона "лактокоцеина М" ("lactococein М") (Klaenhammer et al., FEMS Micro. Rew., 12, 39-86, 1993) была обнаружена для последовательности термофиллина 1. Эта гомология связана с повторением единицы GA. Подобным же образом гомология с геном для оперона "лактацин F" (Klaenhammer er al., процитированный выше) была обнаружена для термофиллина 2 в банке данных GenEMBL с использованием программы TFASTA от GCG.
Гомология с первым пептидом оперона "лактокоцеина М" ("lactococein М") (Klaenhammer et al., FEMS Micro. Rew., 12, 39-86, 1993) была обнаружена для последовательности термофиллина 1. Эта гомология связана с повторением единицы GA. Подобным же образом гомология с геном для оперона "лактацин F" (Klaenhammer er al., процитированный выше) была обнаружена для термофиллина 2 в банке данных GenEMBL с использованием программы TFASTA от GCG.
Два оперона, лактокоцеина М и лактацина F, фактически кодируют комплексы порации, включающие несколько пептидов. Поэтому возможно, что ранее описанный оперон может кодировать пептиды, действующие совместно в комплексе порации.
Тем не менее не исключается, что два бактериоцина действуют независимо, поскольку наблюдались несколько различные зоны подавления для двух термофиллинов при испытании на агаре с вырезанными лунками, описанном ранее.
Нижеследующие примеры представлены в качестве иллюстрации способа получения и применения бактериоцина по данному изобретению. Проценты в них даны по весу, если нет других указаний.
Пример 1
Культуральную среду М17, к которой добавлен 1% сахарозы, засевают 1% (объем/объем) культуры, содержащей 108 микроорганизмов штамма CNCM 1-1351 S. thermophilus на мл. Инкубацию проводят в течение 6 часов при 42oC в анаэробных условиях, после чего среда содержит примерно 108 микроорганизмов штамма на мл и имеет OD600, равную 3,6.
Культуральную среду М17, к которой добавлен 1% сахарозы, засевают 1% (объем/объем) культуры, содержащей 108 микроорганизмов штамма CNCM 1-1351 S. thermophilus на мл. Инкубацию проводят в течение 6 часов при 42oC в анаэробных условиях, после чего среда содержит примерно 108 микроорганизмов штамма на мл и имеет OD600, равную 3,6.
Стандартную культуру, полученную таким образом, центрифугируют. Супернатант (стандартный) собирается. Он подкисляется до pH 1,5 H3PO4, получается преципитат, который отделяется центрифугированием, и супернатант после осаждения кислотой собирается.
Бактериоцины, содержащиеся в последнем, осаждаются 10% трихлоруксусной кислотой. Осажденные бактериоцины собираются и затем ресуспендируются в водной суспензии с 0,2% трифторуксусной кислоты (объем/объем).
Бактериоцины снова осаждаются 10% трихлоруксусной кислотой. Осажденные бактериоцины собирают, их промывают 100% ацетоном и ресуспендируют в водной суспензии с 0,2% трифторуксусной кислоты (объем/объем).
Получается стандартный сырой экстракт данных бактериоцинов, имеющий активность 1,4•105 уе/мл.
Таблица V представляет некоторые детали по характеристикам одного литра стандартного супернатанта и характеристикам для 18 мл стандартного неочищенного экстракта, другими словами, концентрата, который был из него получен, в частности, в отношении содержания белка и антибактериальной активности.
Пример 2
Йогурты сорта сквашенных готовятся с включением штамма этого изобретения S. thermophilus CNCM 1-1351 и штамма STII S. thermophilus (который устойчив к бактериоцинам по этому изобретению, но не проявляет антибактериальной активности) и YL5 L. bulgaricus, упомянутого выше.
Йогурты сорта сквашенных готовятся с включением штамма этого изобретения S. thermophilus CNCM 1-1351 и штамма STII S. thermophilus (который устойчив к бактериоцинам по этому изобретению, но не проявляет антибактериальной активности) и YL5 L. bulgaricus, упомянутого выше.
Таким образом готовится молоко на основе цельного молока, содержащего 3,7% жира и 2,5% порошка снятого молока. 40 л этого молока пастеризуется при 92oC в течение 6 мин, затем оно гомогенизируется при 75oC и 150 бар (две стадии) и, наконец, охлаждается до температуры примерно 42oC.
Лиофилизированные штаммы S. thermophilus CNCM 1-1351, S. thermophilus STII и L. bulgaricus YL5 затем реактивируются путем нескольких последовательных предварительных культивирований в стерильной среде MSK (10% восстановленное порошковое снятое молоко, содержащее 0,1% коммерческого дрожжевого экстракта).
Стерильное молоко затем засевается количеством, равным 1% (объем/объем) третьей предварительно полученной культуры каждого штамма S. thermophilus, взятой из стадии коагуляции среды и в количестве, равном 2% (объем/объем), третьей предварительно полученной культуры штамма L. Bulgaricus, взятой на стадии коагуляции среды. Затем молоко инкубируется при 42oC до pH, равного примерно 4,65, и затем охлаждается до 4oC.
Для сравнения, традиционный сквашенный йогурт готовится таким же образом, как описано выше, с помощью ранее описанных штаммов YS8 и SFi3 S. thermophilus и штамма YL18 L.bulgaricus, которые традиционно используются для производства йогурта.
В таблице VI представлены характеристики полученных продуктов, в частности, их pH во время хранения при 4oC.
Пример 3
Сыр меззарелла готовится традиционным способом с помощью культуры S. thermophilus CNCM 1-1351.
Сыр меззарелла готовится традиционным способом с помощью культуры S. thermophilus CNCM 1-1351.
Пример 4
10 литров культуры штамма CNCM 1-1351 S. thermophilus получают в среде М17, дополненной 1% сахарозы, в течение 6 час при 42oC и в анаэробных условиях. Затем непосредственно в среду добавляют 200 г смолы XAD-7 (Sigma), все осторожно перемешивают в течение 1 часа при 4oC. Затем смесь фильтровали через фильтр Schleicher & Schvell (Германия) N 604, затем собранную смолу на фильтре промывают 10 литрами 50 мМ раствора уксусной кислоты, pH 5,2 для удаления бактерий.
10 литров культуры штамма CNCM 1-1351 S. thermophilus получают в среде М17, дополненной 1% сахарозы, в течение 6 час при 42oC и в анаэробных условиях. Затем непосредственно в среду добавляют 200 г смолы XAD-7 (Sigma), все осторожно перемешивают в течение 1 часа при 4oC. Затем смесь фильтровали через фильтр Schleicher & Schvell (Германия) N 604, затем собранную смолу на фильтре промывают 10 литрами 50 мМ раствора уксусной кислоты, pH 5,2 для удаления бактерий.
Затем к смоле добавляют 450 мл раствора, содержащего 100% этанол и 20 мМ ацетата аммония, и все фильтруется для удаления смолы, затем фильтрат лиофилизируют до получения порошка, содержащего бактериоцины по этому изобретению, которые могут использоваться в пищевой промышленности.
И далее определена антибактериальная активность этого порошка, предварительно разведенного водой, путем испытания на агаре с вырезанными лунками, описанного выше. Этот порошок проявляет активность 107 уе/г порошка.
И наконец, 0,5 г/кг вышеуказанного порошка добавляется к мясному муссу во время его приготовления традиционным способом. Таким образом получается мясной мусс, содержащий 5-103 уе/г бактериоцинов, способных полностью подавить размножение патогенных бактерий, в частности Clostridium.
Пример 5
Этот пример относится к приготовлению увлажняющего крема для ухода за кожей, содержащего 0,05 г/кг порошка, описанного в примере 4, то есть, следовательно, 5•102 уе/г бактериоцинов, способных подавить рост нежелательных бактерий на коже.
Этот пример относится к приготовлению увлажняющего крема для ухода за кожей, содержащего 0,05 г/кг порошка, описанного в примере 4, то есть, следовательно, 5•102 уе/г бактериоцинов, способных подавить рост нежелательных бактерий на коже.
Для изготовления этой эмульсии компоненты липидной фазы A смешиваются и нагреваются до 75oC. Готовится водная фаза B и нагревается до 75oC, затем она добавляется к липидной фазе A при медленном перемешивании, смесь охлаждается при медленном перемешивании до комнатной температуры, то есть до примерно 25oC. При этой температуре медленно добавляются составляющие C по прописи. (табл. VII).
Пример 6
0,5 г/кг порошка бактериоцина, описанного в примере 4, добавляется к жидкому средству для чистки зубов. Это средство для чистки зубов, таким образом, способно подавлять рост патогенных бактерий ротовой полости, в частности, Streptococcus sobrinus.
0,5 г/кг порошка бактериоцина, описанного в примере 4, добавляется к жидкому средству для чистки зубов. Это средство для чистки зубов, таким образом, способно подавлять рост патогенных бактерий ротовой полости, в частности, Streptococcus sobrinus.
Пример 7
Раствором, содержащим порошок бактериоцина из примера 4, разведенным водой до содержания 1%, опрыскивают пищевой продукт, подлежащий стерилизации, для предотвращения последующей контаминации во время упаковки.
Раствором, содержащим порошок бактериоцина из примера 4, разведенным водой до содержания 1%, опрыскивают пищевой продукт, подлежащий стерилизации, для предотвращения последующей контаминации во время упаковки.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
(2) ИНФОРМАЦИЯ ПО ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ИД N 1:
(1) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 62 аминокислоты
(B) ТИП: аминокислотная
() ТОПОЛОГИЯ: линейная
(II) ТИП МОЛЕКУЛЫ: белок
(VI) ПЕРВОНАЧАЛЬНЫЙ ИСТОЧНИК:
(A) ОРГАНИЗМ: Streptococcus thermophilus
(B) ШТАММ: CNCM 1-1351
(XI) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ПОСЛ ИД N 1(см. в конце описания)
(2) ИНФОРМАЦИЯ ПО ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ПОСЛ ИД N 2:
(1) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 43 аминокислоты
(B) ТИП: аминокислотная
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(II) ТИП МОЛЕКУЛЫ: белок
(VI) ПЕРВОНАЧАЛЬНЫЙ ИСТОЧНИК:
(A) ОРГАНИЗМ: Streptococcus thermophilus
(B) ШТАММ: CNCM 1-1351
(XI) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ПОСЛ ИД N 2 (см. в конце описания)
(2) ИНФОРМАЦИЯ ПО ПОСЛ ИД N 3:
(1) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 770 пар оснований
(B) ТИП: нуклеиновая кислота
(C) ЧИСЛО НИТЕЙ: одна
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(II) ТИП МОЛЕКУЛЫ: ДНК (геномная)
(VI) ПЕРВОНАЧАЛЬНЫЙ ИСТОЧНИК:
(A) ОРГАНИЗМ: Streptococcus thermophilus
(В) ШТАММ: CNCM 1-1351
(IX) ОСОБЕННОСТЬ:
(A) НАЗВАНИЕ/КЛЮЧ: CDS
(В) МЕСТОНАХОЖДЕНИЕ: 221...475
(IX) ОСОБЕННОСТЬ:
(A) НАЗВАНИЕ/КЛЮЧ: сиг_пептид
(B) МЕСТОНАХОЖДЕНИЕ: 221...289
(IX) ОСОБЕННОСТЬ:
(A) НАЗВАНИЕ/КЛЮЧ: мат_пептид
(B) МЕСТОНАХОЖДЕНИЕ: 290...475
(D) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: /функция = "кодирует термофиллин 1"
(IX) ОСОБЕННОСТЬ:
(A) НАЗВАНИЕ/КЛЮЧ: CDS
(B) МЕСТОНАХОЖДЕНИЕ: 495...686
(IX) ОСОБЕННОСТЬ:
(A) НАЗВАНИЕ/КЛЮЧ: сиг_пептид
(B) МЕСТОНАХОЖДЕНИЕ: 495...557
(IX) ОСОБЕННОСТЬ:
(A) НАЗВАНИЕ/КЛЮЧ: мат_пептид
(B) МЕСТОНАХОЖДЕНИЕ: 558...686
(D) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: /функция = "кодирует термофиллин 2"
(XI) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ПОСЛ ИД N 3 (см. в конце описания)
(2) ИНФОРМАЦИЯ ПО ПОСЛ ИД N: 4:
(I) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 85 аминокислот
(B) ТИП: аминокислотная
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(II) ТИП МОЛЕКУЛЫ: белок
(XI) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ПОСЛ ИД N 4 (см. в конце описания)
(2) ИНФОРМАЦИЯ ПО ПОСЛ ИД N: 5:
(I) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 64 аминокислоты
(B) ТИП: аминокислотная
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(II) ТИП МОЛЕКУЛЫ: белок
(XI) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ПОСЛ ИД N 5 (см. в конце описания)
(2) ИНФОРМАЦИЯ ПО ПОСЛ ИД N: 6:
(I) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 17 пар оснований
(B) ТИП: нуклеиновая кислота
(C) ЧИСЛО НИТЕЙ: одна
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(II) ТИП МОЛЕКУЛЫ: ДНК (геномная)
(III) ГИПОТЕТИЧЕСКАЯ: ДА
(XI) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ПОСЛ ИД N 6::
GAYATGGGNG GNTAYGC
(2) ИНФОРМАЦИЯ ПО ПОСЛ ИД N 7:
(I) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 17 пар оснований
(B) ТИП: нуклеиновая кислота
(C) ЧИСЛО НИТЕЙ: одна
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(II) ТИП МОЛЕКУЛЫ: ДНК (геномная)
(III) ГИПОТЕТИЧЕСКАЯ: ДА
(XI) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ПОСЛ ИД N 7:
GCTATNGCNC CNACGTG
(2) ИНФОРМАЦИЯ ПО ПОСЛ ИД N: 8:
(I) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 128 пар оснований
(B) ТИП: нуклеиновая кислота
(C) ЧИСЛО НИТЕЙ: одна
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(II) ТИП МОЛЕКУЛЫ: ДНК (геномная)
(VI) ПЕРВОНАЧАЛЬНЫЙ ИСТОЧНИК:
(A) ОРГАНИЗМ: Streptococcus thermophilus
(B) ШТАММ: CNCM 1-1351
(XI) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ПОСЛ ИД N 8 (см. в конце описания)
(2) ИНФОРМАЦИЯ ПО ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ИД N 1:
(1) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 62 аминокислоты
(B) ТИП: аминокислотная
() ТОПОЛОГИЯ: линейная
(II) ТИП МОЛЕКУЛЫ: белок
(VI) ПЕРВОНАЧАЛЬНЫЙ ИСТОЧНИК:
(A) ОРГАНИЗМ: Streptococcus thermophilus
(B) ШТАММ: CNCM 1-1351
(XI) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ПОСЛ ИД N 1(см. в конце описания)
(2) ИНФОРМАЦИЯ ПО ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ПОСЛ ИД N 2:
(1) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 43 аминокислоты
(B) ТИП: аминокислотная
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(II) ТИП МОЛЕКУЛЫ: белок
(VI) ПЕРВОНАЧАЛЬНЫЙ ИСТОЧНИК:
(A) ОРГАНИЗМ: Streptococcus thermophilus
(B) ШТАММ: CNCM 1-1351
(XI) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ПОСЛ ИД N 2 (см. в конце описания)
(2) ИНФОРМАЦИЯ ПО ПОСЛ ИД N 3:
(1) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 770 пар оснований
(B) ТИП: нуклеиновая кислота
(C) ЧИСЛО НИТЕЙ: одна
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(II) ТИП МОЛЕКУЛЫ: ДНК (геномная)
(VI) ПЕРВОНАЧАЛЬНЫЙ ИСТОЧНИК:
(A) ОРГАНИЗМ: Streptococcus thermophilus
(В) ШТАММ: CNCM 1-1351
(IX) ОСОБЕННОСТЬ:
(A) НАЗВАНИЕ/КЛЮЧ: CDS
(В) МЕСТОНАХОЖДЕНИЕ: 221...475
(IX) ОСОБЕННОСТЬ:
(A) НАЗВАНИЕ/КЛЮЧ: сиг_пептид
(B) МЕСТОНАХОЖДЕНИЕ: 221...289
(IX) ОСОБЕННОСТЬ:
(A) НАЗВАНИЕ/КЛЮЧ: мат_пептид
(B) МЕСТОНАХОЖДЕНИЕ: 290...475
(D) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: /функция = "кодирует термофиллин 1"
(IX) ОСОБЕННОСТЬ:
(A) НАЗВАНИЕ/КЛЮЧ: CDS
(B) МЕСТОНАХОЖДЕНИЕ: 495...686
(IX) ОСОБЕННОСТЬ:
(A) НАЗВАНИЕ/КЛЮЧ: сиг_пептид
(B) МЕСТОНАХОЖДЕНИЕ: 495...557
(IX) ОСОБЕННОСТЬ:
(A) НАЗВАНИЕ/КЛЮЧ: мат_пептид
(B) МЕСТОНАХОЖДЕНИЕ: 558...686
(D) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: /функция = "кодирует термофиллин 2"
(XI) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ПОСЛ ИД N 3 (см. в конце описания)
(2) ИНФОРМАЦИЯ ПО ПОСЛ ИД N: 4:
(I) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 85 аминокислот
(B) ТИП: аминокислотная
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(II) ТИП МОЛЕКУЛЫ: белок
(XI) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ПОСЛ ИД N 4 (см. в конце описания)
(2) ИНФОРМАЦИЯ ПО ПОСЛ ИД N: 5:
(I) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 64 аминокислоты
(B) ТИП: аминокислотная
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(II) ТИП МОЛЕКУЛЫ: белок
(XI) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ПОСЛ ИД N 5 (см. в конце описания)
(2) ИНФОРМАЦИЯ ПО ПОСЛ ИД N: 6:
(I) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 17 пар оснований
(B) ТИП: нуклеиновая кислота
(C) ЧИСЛО НИТЕЙ: одна
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(II) ТИП МОЛЕКУЛЫ: ДНК (геномная)
(III) ГИПОТЕТИЧЕСКАЯ: ДА
(XI) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ПОСЛ ИД N 6::
GAYATGGGNG GNTAYGC
(2) ИНФОРМАЦИЯ ПО ПОСЛ ИД N 7:
(I) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 17 пар оснований
(B) ТИП: нуклеиновая кислота
(C) ЧИСЛО НИТЕЙ: одна
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(II) ТИП МОЛЕКУЛЫ: ДНК (геномная)
(III) ГИПОТЕТИЧЕСКАЯ: ДА
(XI) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ПОСЛ ИД N 7:
GCTATNGCNC CNACGTG
(2) ИНФОРМАЦИЯ ПО ПОСЛ ИД N: 8:
(I) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 128 пар оснований
(B) ТИП: нуклеиновая кислота
(C) ЧИСЛО НИТЕЙ: одна
(D) ТОПОЛОГИЯ: линейная
(II) ТИП МОЛЕКУЛЫ: ДНК (геномная)
(VI) ПЕРВОНАЧАЛЬНЫЙ ИСТОЧНИК:
(A) ОРГАНИЗМ: Streptococcus thermophilus
(B) ШТАММ: CNCM 1-1351
(XI) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ПОСЛ ИД N 8 (см. в конце описания)
Claims (6)
1. Смесь бактериоцинов, выделенная из штамма Streptococcus thermophilus CNCM 1-1351 с соответствующими аминокислотными последовательностями SEQ ID N 1 и SEQ ID N 2 для приготовления пищевых продуктов или косметической продукции.
2. Смесь бактериоцинов по п.1 для приготовления сыров или кисломолочных продуктов или мясных продуктов, таких, как муссы.
3. Смесь бактериоцинов по п.1 для приготовления кремов, или лосьонов, или гигиенических лечебных продуктов.
4. Штамм Streptococcus thermophilus CNCM 1-1351 - продуцент смеси бактериоцинов по п.1.
5. Способ получения бактериоцинов по п.1, предусматривающий культивирование штамма Streptococcus thermophilus CNCM 1-1351, в среде и условиях, благоприятных для его роста, до содержания микроорганизмов в среде 107 - 109 м. к. /мл, центрифугирование культуры, приготовление экстракта супернатанта, содержащего целевой продукт.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что при приготовлении экстракта, pH супернатанта доводят до 1,0 - 2,0 добавлением H3PO4, осадок удаляют и проводят одно или более последовательных осаждений трихлоруксусной кислотой с ресуспендированием осадка после каждого осаждения в водной суспензии с трихлоруксусной кислотой.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CH262893 | 1993-09-03 | ||
CH2628/93-7 | 1993-09-03 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU95109910A RU95109910A (ru) | 1997-03-27 |
RU2153505C2 true RU2153505C2 (ru) | 2000-07-27 |
Family
ID=4238040
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU95109910/13A RU2153505C2 (ru) | 1993-09-03 | 1994-08-24 | Смесь бактериоцинов, штамм streptococcus thermophilus - продуцент бактериоцинов и способ их получения |
Country Status (26)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5683890A (ru) |
EP (1) | EP0643136B1 (ru) |
JP (1) | JP3031716B2 (ru) |
KR (1) | KR0183187B1 (ru) |
CN (1) | CN1065568C (ru) |
AT (1) | ATE207960T1 (ru) |
AU (1) | AU677100B2 (ru) |
BR (1) | BR9405576A (ru) |
CA (1) | CA2148223C (ru) |
CZ (1) | CZ284978B6 (ru) |
DE (1) | DE69428854T2 (ru) |
ES (1) | ES2165860T3 (ru) |
FI (1) | FI952080A (ru) |
HU (1) | HU217216B (ru) |
MX (1) | MX194616B (ru) |
MY (1) | MY113279A (ru) |
NO (1) | NO951688D0 (ru) |
NZ (1) | NZ273567A (ru) |
PH (1) | PH31943A (ru) |
PL (1) | PL308541A1 (ru) |
RU (1) | RU2153505C2 (ru) |
SK (1) | SK280696B6 (ru) |
TR (1) | TR27735A (ru) |
UA (1) | UA43326C2 (ru) |
WO (1) | WO1995006736A1 (ru) |
ZA (1) | ZA946620B (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2492231C2 (ru) * | 2011-07-28 | 2013-09-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | Способ выделения бактериоцинов |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ATE234924T1 (de) * | 1995-08-07 | 2003-04-15 | Nestle Sa | Bakteriozin |
WO1997023619A1 (en) * | 1995-12-22 | 1997-07-03 | Innogenetics N.V. | Sequences coding for new bacteriocins |
NZ533636A (en) * | 2001-11-29 | 2007-03-30 | Univ Bruxelles | A food grade lantibiotic from streptococcus macedonicus and uses thereof |
US7556833B2 (en) * | 2003-11-26 | 2009-07-07 | Kraft Foods Global Brands Llc | Cheese flavoring systems prepared with bacteriocins |
US7988958B2 (en) * | 2005-04-05 | 2011-08-02 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Enterococcus and Streptococcus strains and bacteriocins |
DK2034848T3 (en) * | 2006-06-16 | 2017-02-06 | Dupont Nutrition Biosci Aps | STREPTOCOCCUS THERMOPHILUS BACTERIA |
EP2210898A1 (en) * | 2006-11-29 | 2010-07-28 | Novozymes Inc. | Bacillus Licheniformis chromosome |
ES2668552T3 (es) * | 2007-03-21 | 2018-05-18 | Nestec S.A. | Sistema de seguridad para composiciones nutricionales en polvo |
FR2916759B1 (fr) * | 2007-05-29 | 2009-07-10 | Adisseo France Sas Soc Par Act | Peptide rumc presentant une activite antimicrobienne |
EP2294926B1 (en) * | 2008-06-30 | 2014-11-19 | Meiji Co., Ltd. | Process for producing fermented milk |
DE202009011379U1 (de) * | 2009-08-24 | 2010-12-30 | Khalifa, Samir | Orale Präparate zur Mund- und Zahnpflege und Bekämpfung von Mundgeruch |
EP2701522B1 (en) * | 2011-04-29 | 2019-10-02 | Compagnie Gervais Danone | Use of nisin resistant mutant strains of lactobacilli for reducing the post acidification in food products |
LT6142B (lt) | 2013-05-15 | 2015-04-27 | Uab "Biocentras" | Sėklinių grūdų ir sėklų apdorojimo būdas |
CN106010996B (zh) * | 2016-04-29 | 2020-04-24 | 周礼红 | 一种醋酸杆菌及其培养分离方法、筛选方法和应用 |
CN111248277A (zh) * | 2018-11-30 | 2020-06-09 | 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 | 一种高蛋白低脂肪酸奶及其制备方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0732702B2 (ja) * | 1990-02-23 | 1995-04-12 | 雪印乳業株式会社 | 新規乳酸菌、その産生する抗菌物質、この乳酸菌を含有する発酵乳用スターター及びそれを用いた発酵乳の製造方法 |
-
1994
- 1994-08-19 ES ES94112913T patent/ES2165860T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-08-19 EP EP94112913A patent/EP0643136B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1994-08-19 DE DE69428854T patent/DE69428854T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1994-08-19 AT AT94112913T patent/ATE207960T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-08-24 US US08/428,091 patent/US5683890A/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-08-24 AU AU76911/94A patent/AU677100B2/en not_active Ceased
- 1994-08-24 UA UA95048375A patent/UA43326C2/uk unknown
- 1994-08-24 RU RU95109910/13A patent/RU2153505C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1994-08-24 BR BR9405576A patent/BR9405576A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-08-24 WO PCT/EP1994/002805 patent/WO1995006736A1/en active IP Right Grant
- 1994-08-24 NZ NZ273567A patent/NZ273567A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-08-24 CA CA002148223A patent/CA2148223C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-08-24 JP JP7507924A patent/JP3031716B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1994-08-24 HU HU9501259A patent/HU217216B/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-08-24 PL PL94308541A patent/PL308541A1/xx unknown
- 1994-08-24 KR KR1019950701744A patent/KR0183187B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-08-24 CN CN94190654A patent/CN1065568C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1994-08-24 CZ CZ951139A patent/CZ284978B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-08-30 ZA ZA946620A patent/ZA946620B/xx unknown
- 1994-09-01 PH PH48893A patent/PH31943A/en unknown
- 1994-09-02 MY MYPI94002297A patent/MY113279A/en unknown
- 1994-09-02 TR TR00857/94A patent/TR27735A/xx unknown
- 1994-09-02 MX MX9406741A patent/MX194616B/es not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-04-28 SK SK552-95A patent/SK280696B6/sk unknown
- 1995-05-02 NO NO951688A patent/NO951688D0/no unknown
- 1995-05-02 FI FI952080A patent/FI952080A/fi unknown
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Deutshe molkerei-zeitung, 1984, v. 105, N 15, p. 460 - 464. Abstracts of annual meeting of the american society for microbiology, 1993, may, Washington US, p. 344. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2492231C2 (ru) * | 2011-07-28 | 2013-09-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | Способ выделения бактериоцинов |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2153505C2 (ru) | Смесь бактериоцинов, штамм streptococcus thermophilus - продуцент бактериоцинов и способ их получения | |
EP0821736B1 (en) | Bacteriocins | |
Mathot et al. | Streptococcus thermophilus 580 produces a bacteriocin potentially suitable for inhibition of Clostridium tyrobutyricum in hard cheese | |
US5756665A (en) | Peptide isolated from micrococcus varians and use thereof | |
MXPA96003127A (en) | Bacterioc | |
US5173297A (en) | Bacteriocin from lactococcus lactis subspecies lactis | |
O'Sullivan et al. | Elevated enzyme release from lactococcal starter cultures on exposure to the lantibiotic lacticin 481, produced by Lactococcus lactis DPC5552 | |
EP0759999A1 (en) | Process for inhibiting the growth of a culture of lactic acid bacteria, and optionally lysing the bacterial cells, and uses of the resulting lysed culture | |
US5232849A (en) | Bacteriocin from lactococcus lactis subspecies lactis | |
AU706127B2 (en) | Process for the lysis of a culture of lactic acid bacteria by means of a lysin, and uses of the resulting lysed culture | |
US5629182A (en) | DNA fragments coding for a bacteriophage-resistant mechanism | |
EP0810289B1 (en) | Starter strains expressing a protease of Lactobacillus bulgaricus |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090825 |