RU2132690C1

RU2132690C1 - Method of preparing bacterial preparation as suppository for disbacteriosis correction

Info

Publication number: RU2132690C1
Application number: RU97101527A
Authority: RU
Inventors: В.А. Несчисляев
Original assignee: Несчисляев Валерий Александрович
Priority date: 1997-01-30
Filing date: 1997-01-30
Publication date: 1999-07-10

Abstract

FIELD: biotechnology, pharmacy. SUBSTANCE: suppositories of bacterial preparations for correction of disbacteriosis are obtained by mixing the fat base with native liquid or adsorbed biomass at ratio = (4-19):1, respectively. Obtained mixture is poured out. Invention can be used for making medicinal preparations used for bacteriotherapy: lacto-, coli-, bifidumbacterine, acilactum, bificolum and others. EFFECT: simplified process, decreased cost and consumption of bacterial component. 2 tbl, 5 ex

Description

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при изготовлении препаратов для бактериотерапии - лакто-, коли-, бифидумбактерина, ацилакта, бификола и др. The invention relates to medicine and can be used in the manufacture of preparations for bacteriotherapy - lacto-, coli, bifidumbacterin, acylact, bificol, etc.

Известно, что препараты для коррекции дисбактериозов применяют в различных лекарственных формах (лиофилизированная биомасса в ампулах и флаконах, таблетки, порошки и др.). (Поспелова В.В. с соавт. Принципы разработки фармакопейных форм бактерийных препаратов для коррекции микрофлоры организма человека. Республиканский сборник научных трудов "Аутофлора человека в норме и патологии и ее коррекция". Горький, 1988, с. 85-92). Суппозитории указанных препаратов используют для нормализации кишечной или вагинальной микрофлоры. It is known that drugs for the correction of dysbiosis are used in various dosage forms (lyophilized biomass in ampoules and vials, tablets, powders, etc.). (VV Pospelova et al. Principles for the development of pharmacopoeial forms of bacterial preparations for the correction of the microflora of the human body. Republican collection of scientific papers "Human Autoflora in Normal and Pathology and its Correction". Gorky, 1988, pp. 85-92). Suppositories of these drugs are used to normalize the intestinal or vaginal microflora.

Известен способ получения суппозиториев лакто- и бифидумбактерина на основе сухой лиофилизированной биомассы, включающий приготовление бактериальной взвеси с последующим добавлением защитной среды, высушиванием и смешиванием сухой биомассы с жировой основой, формованием суппозиториев путем выливания (ВФС 42-308 ВС-91 "Лактобактерин в свечах"). A known method for producing suppositories of lacto- and bifidumbacterin based on dry lyophilized biomass, including the preparation of bacterial suspensions followed by the addition of a protective medium, drying and mixing dry biomass with a fat base, molding suppositories by pouring (VFS 42-308 BC-91 "Lactobacterin in a candle )

Указанный способ имеет ряд недостатков. К ним относится использование дорогостоящей и длительной сублимационной сушки, большие потери жизнеспособных клеток (50 ± 20)% при получении сухой биомассы, необходимость дополнительной обработки (измельчение) сухой биомассы перед внесением в жировую основу. Из-за высокой гигроскопичности сухой биомассы влажность воздуха в производственных помещениях не должна превышать 50%. Если остаточная влажность сухой биомассы превышает 5%, то она теряет сыпучесть, и суппозитории приобретают "мраморность" окраски, связанную с недостаточно равномерным распределением бактериального компонента в жировой основе. The specified method has several disadvantages. These include the use of expensive and lengthy freeze-drying, large losses of viable cells (50 ± 20)% upon receipt of dry biomass, the need for additional processing (grinding) of dry biomass before adding to the fat base. Due to the high hygroscopicity of dry biomass, air humidity in industrial premises should not exceed 50%. If the residual moisture content of dry biomass exceeds 5%, then it loses its flowability, and suppositories acquire a “marbling” color associated with the insufficiently uniform distribution of the bacterial component in the fat base.

Для устранения указанных недостатков разработан предлагаемый способ получения суппозиториев без применения сухой биомассы. To address these shortcomings, the proposed method for producing suppositories without the use of dry biomass is developed.

Сущность изобретения заключается в том, что для изготовления суппозиториев используют жидкую бактериальную взвесь, а сохраняемость живых клеток в лекарственной форме обеспечивают стабилизирующие (защитные) свойства жировой основы. Это позволяет исключить высушивание бактериального компонента и связанные с ним потери жизнеспособных клеток, сократить продолжительность производственного цикла по изготовлению суппозиториев и обеспечить однородность их окраски. По содержанию жизнеспособных клеток (10⁷ - 10⁸) получаемые суппозитории не уступают препаратам на основе сухой биомассы.The essence of the invention lies in the fact that for the manufacture of suppositories using liquid bacterial suspension, and the preservation of living cells in a dosage form provide stabilizing (protective) properties of the fat base. This eliminates the drying of the bacterial component and the associated loss of viable cells, reduces the duration of the production cycle for the manufacture of suppositories and ensures the uniformity of their color. According to the content of viable cells (10 ⁷ - 10 ⁸ ), the resulting suppositories are not inferior to drugs based on dry biomass.

Достигаемый технический результат заключается в упрощении и удешевлении способа получения суппозиториев и снижении расхода бактериального компонента (см. табл. 1, 2 в конце описания). The technical result achieved is to simplify and reduce the cost of the method of producing suppositories and reduce the consumption of the bacterial component (see tab. 1, 2 at the end of the description).

При осуществлении способа подготовка бактериального компонента включает получение бактериальных взвесей, содержащих 10⁸-10⁹ КОЕ/мл. Данное количество жизнеспособных клеток обеспечивается культивированием производственных штаммов на регламентированных питательных средах. При культивировании молочнокислых бактерий (лактобактерин, ацилакт) в качестве питательной среды может быть использовано обезжиренное молоко. При необходимости бактериальная взвесь может быть сконцентрирована до указанного показателя с помощью методов микрофильтрации, сепарации, осаждения и др. Концентрирование позволяет также снизить удельный вес бактериального компонента в суппозиторной массе или получать суппозитории с более высоким содержанием клеток.In the implementation of the method, the preparation of the bacterial component includes obtaining bacterial suspensions containing 10 ⁸ -10 ⁹ CFU / ml This number of viable cells is provided by culturing production strains on regulated nutrient media. In the cultivation of lactic acid bacteria (lactobacterin, acylact), skim milk can be used as a nutrient medium. If necessary, the bacterial suspension can be concentrated to the specified indicator using microfiltration, separation, sedimentation, etc. Concentration also allows to reduce the specific gravity of the bacterial component in the suppository mass or to obtain suppositories with a higher cell content.

Для повышения стабильности бактериальных взвесей, в т.ч. для увеличения резистентности к температурным воздействиям при изготовлении суппозиториев, клетки можно адсорбировать на микроносителях, в качестве которых используют гель гидроксида алюминия (ФС 42-394 ВС-91), целлюлозные сорбенты (ВФС 42-2185-93) или активированный уголь (типа КАУ, АУВМ). To increase the stability of bacterial suspensions, including To increase resistance to temperature influences in the manufacture of suppositories, cells can be adsorbed on microcarriers, which use aluminum hydroxide gel (FS 42-394 BC-91), cellulose sorbents (VFS 42-2185-93) or activated carbon (KAU type, AUVM).

Нативную или адсорбированную бактериальную взвесь смешивают с жировой основой в соотношении 1: (4-19). Минимальное количество взвеси (5%) в суппозиторной массе определяется необходимостью равномерного распределения клеток в жировой основе для исключения существенных различий суппозиториев по содержанию бактериального компонента. Максимальный объем удержания жировой основой жидкого бактериального компонента (без разделения на фракции) составляет 20%. Native or adsorbed bacterial suspension is mixed with the fat base in a ratio of 1: (4-19). The minimum amount of suspension (5%) in the suppository mass is determined by the need for uniform distribution of cells in the fat base to exclude significant differences in suppositories in terms of the content of the bacterial component. The maximum retention volume of the liquid bacterial component (without fractionation) by the fatty base is 20%.

В качестве жировой основы используют твердый жир (ВФС 42-1117-86), витепсол (ВТУ N 30-70) или масло какао. Указанные жировые основы не имеют отличий по стабилизирующим свойствам. Температура расплавленной жировой основы при внесении в нее бактериального компонента не должна превышать 42-44^oC для предотвращения гибели клеток. При изготовлении суппозиториев со спорообразующими микроорганизмами (споробактерин, биоспорин) температура суппозиторной массы может быть более высокой.As a fat base, solid fat (VFS 42-1117-86), vitepsol (VTU N 30-70) or cocoa butter are used. These fatty bases do not have differences in stabilizing properties. The temperature of the molten fat base when introducing into it a bacterial component should not exceed 42-44 ^o C to prevent cell death. In the manufacture of suppositories with spore-forming microorganisms (sporobacterin, biosporin), the temperature of the suppository mass may be higher.

Суппозиторную массу выливают в формы для получения торпедовидных или цилиндрических с закругленным концом суппозиториев массой 1,5 - 1,7 г. The suppository mass is poured into molds to produce torpedo-shaped or cylindrical with a rounded end suppositories weighing 1.5 - 1.7 g.

Пример 1. 10 мл взвеси лактобактерий, содержащей 10⁹ КОЕ/мл, полученной после культивирования штамма L.plantarum 8Р-А3 на регламентированной казеиново-дрожжевой среде, вносят в 190 г жировой основы (твердый жир). Жировую основу предварительно нагревают на водяной бане до расплавления. Суппозиторную массу тщательно перемешивают 1-3 минуты и выливают в формы, которые помещают в морозильную камеру (-12^oC) на 20-30 минут. Содержание живых клеток в полученных суппозиториях лактобактерина составляет 10⁸ КОЕ.Example 1. 10 ml of a suspension of lactobacilli containing 10 ⁹ CFU / ml obtained after cultivation of the strain L.plantarum 8P-A3 in a regulated casein-yeast medium, contribute to 190 g of a fatty base (solid fat). The fat base is preheated in a water bath until melted. The suppository mass is thoroughly mixed for 1-3 minutes and poured into molds, which are placed in the freezer (-12 ^o C) for 20-30 minutes. The content of living cells in the obtained suppositories of lactobacterin is 10 ⁸ CFU.

Пример 2. 20 мл взвеси ацидофильных бактерий (10⁸ клеток в 1 мл), полученной после культивирования производственных штаммов в обезжиренном молоке, вносят в 180 г расплавленной жировой основы (витепсол). Суппозиторную массу перемешивают 2-3 минуты и выливают в формы, которые помещают на 15-20 минут в морозильную камеру. Содержание животных клеток в полученных суппозиториях ацилакта составляет 10⁷.Example 2. 20 ml of a suspension of acidophilic bacteria (10 ⁸ cells in 1 ml) obtained after culturing production strains in skim milk is added to 180 g of molten fatty base (vitepsol). The suppository mass is mixed for 2-3 minutes and poured into molds, which are placed for 15-20 minutes in the freezer. The content of animal cells in the obtained acylact suppositories is 10 ⁷ .

Пример 3. 30 мл взвеси бифидобактерий штамма B.bifidum N 1, содержащей 10⁸ КОЕ/мл, тщательно перемешивают с 10 мл 1%-ного геля гидроксида алюминия в течение 15 минут при комнатной температуре. Полученную адсорбированную взвесь вносят в 160 г расплавленной жировой основы (масло какао) и перемешивают 3-5 минут. После выливания в формы последние помещают в морозильную камеру на 30-40 минут. Содержание живых клеток в полученных суппозиториях бифидумбактерина составляет 10⁷ КОЕ.Example 3. 30 ml of a suspension of bifidobacteria strain B. bifidum N 1 containing 10 ⁸ CFU / ml, thoroughly mixed with 10 ml of 1% gel of aluminum hydroxide for 15 minutes at room temperature. The resulting adsorbed suspension is added to 160 g of molten fat base (cocoa butter) and mixed for 3-5 minutes. After pouring into molds, the latter are placed in the freezer for 30-40 minutes. The content of living cells in the obtained bifidumbacterin suppositories is 10 ⁷ CFU.

Пример 4. 80 мл взвеси кишечных палочек и бифидобактерий (бификол), содержащей 10⁸ клеток каждого компонента, концентрируют в 2 раза с помощью разделительного аппарата на полых волокнах ВПУ-15. Полученную взвесь вносят в 160 мл расплавленной жировой основы. Суппозиторную массу перемешивают 2-3 минуты и выливают в формы с последующим охлаждением в течение 20-30 минут при -12^oC. Содержание живых клеток каждого бактериального компонента в полученных суппозиториях бификола составляет 10⁸ КОЕ.Example 4. 80 ml of suspension of Escherichia coli and bifidobacteria (bifikol) containing 10 ⁸ cells of each component, is concentrated 2 times using a separator on hollow fibers of VPU-15. The resulting suspension is added to 160 ml of molten fat base. The suppository mass is mixed for 2-3 minutes and poured into molds, followed by cooling for 20-30 minutes at -12 ^o C. The content of living cells of each bacterial component in the obtained bificol suppositories is 10 ⁸ CFU.

Суппозитории бактерийных препаратов на основе жидкой биомассы полностью соответствуют требованиям статьи ГФ XI "Суппозитории". Suppositories of bacterial preparations based on liquid biomass fully comply with the requirements of the GF XI article "Suppositories".

Вариант предложенного способа может быть использован при внутриаптечном изготовлении суппозиториев. В этом случае жидкую биомассу получают путем растворения сухих препаратов в ампулах (флаконах) с последующим внесением в жировую основу. A variant of the proposed method can be used in the in-house manufacturing of suppositories. In this case, liquid biomass is obtained by dissolving dry preparations in ampoules (vials), followed by adding to the fat base.

Пример 5. Сухую биомассу колибактерина во флаконе (5 доз) растворяют с помощью 1,5 мл физраствора и вносят в 8,5 г расплавленной жировой основы. Суппозиторную массу перемешивают и выливают в форму с последующим 20-30 минутным охлаждением. Полученные суппозитории содержат 10⁸ жизнеспособных клеток. Общая продолжительность технологического цикла и расход бактериального компонента при получении суппозиториев приведены в табл. 1 и 2. Представленные данные свидетельствуют, что продолжительность технологического цикла по предлагаемому способу, исключающему стадии замораживания и высушивания биомассы, сокращается на 84-128 ч по сравнению с известным. Расход биомассы уменьшается в 2,5 - 6 раз.Example 5. The dry biomass of colibacterin in a vial (5 doses) is dissolved with 1.5 ml of saline and added to 8.5 g of molten fat base. The suppository mass is mixed and poured into a mold, followed by 20-30 minutes of cooling. The resulting suppositories contain 10 ⁸ viable cells. The total duration of the technological cycle and the consumption of the bacterial component in the preparation of suppositories are given in table. 1 and 2. The data presented indicate that the duration of the technological cycle of the proposed method, excluding the stage of freezing and drying of biomass, is reduced by 84-128 hours compared with the known. Biomass consumption decreases by 2.5-6 times.

Таким образом, предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет сократить технологические стадии получения суппозиториев бактерийных препаратов, а также вводить в данную лекарственную форму бактериальный компонент в меньшем количестве, что приводит к удешевлению данного способа. Thus, the proposed method in comparison with the known allows to reduce the technological stage of obtaining suppositories of bacterial preparations, as well as to introduce a bacterial component in this dosage form in a smaller amount, which leads to the cost reduction of this method.

Claims

A method of producing suppositories of bacterial preparations for the correction of dysbacteriosis, including the preparation of a bacterial component in the form of biomass or adsorbed biomass, mixing with a fat base, pouring the resulting mixture, characterized in that the native liquid or adsorbed bacterial mass is mixed directly with the fat base (4-19 ): 1, respectively.