RU2128185C1

RU2128185C1 - 3-0-сукциноил-11-оксо-урсоловая кислота и ее диаммонийная соль, проявляющая иммуностимулирующую активность

Info

Publication number: RU2128185C1
Application number: RU97116071A
Authority: RU
Inventors: Г.А. Толстиков; С.В. Чернов; Э.Э. Шульц; Т.Н. Ильичева; Т.Р. Проняева; А.Г. Покровский
Original assignee: Новосибирский институт органической химии СО РАН; Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор"
Priority date: 1997-09-17
Filing date: 1997-09-17
Publication date: 1999-03-27

Abstract

Изобретение относится к новым биологически активным соединениям, конкретно к З-О-сукциноил-11-оксо-урсоловой кислоте, ее диаммонийной соли формулы

где Х = Н, NH₄, проявляющей иммуностимулирующую активность. 1 табл.

Description

Изобретение относится к новым химическим соединениям класса тритерпеноидов, конкретно к 3-O-сукциноил-11-оксо-урсоловой кислоте формулы (I)

где X - H, NH₄,
Обладающей иммуностимулирующей активностью.

Аналогами по строению соединения I являются 3-O-сукциноил-глицирретовая кислота II, а также глицирризиновая кислота, а также глицирризиновая кислота III.

Соединение II в виде динатриевой соли являются высокоэффективным противоязвенным средством и используется в клинике язвы желудка (препарат карбеноксолон [1] ). Иммуностимулирующие свойства карбеноксолона неизвестны. Глицирризиновая кислота III является иммунорегулятором. Однако ее недостаток состоит в том, что, обладая в малых дозах иммуностимулирующим действием, в высоких дозах она проявляет себя как иммуносупрессор [2,3]. Это свойство может отрицательно сказаться при передозировках при длительном применении.

Задачей изобретения является получение нового вещества, обладающего иммуностимулирующим действием в широком интервале доз.

Поставленная задача решается получением нового вещества -3-O-сукциноил-11-оксо-урсоловой кислоты, формулы I.

Способ получения иммуностимулятора I заключается в обработке урсоловой кислоты (IV) янтарным ангидридом в присутствии безводного пиридина и окислении образующейся 3-O-сукциноил-урсоловой кислоты (V, выход 90%) хромовым ангидридом в уксусной кислоте (выход 62%).

Соединение I может использоваться как непосредственно, так и в виде водорастворимых солей, например диаммонийной.

Достоинство нового соединения I состоит в том, что исходным соединением для его синтеза является урсоловая кислота IV, которая легко может быть получена экстракцией доступного растительного сырья - шротов, накапливающихся при переработке облепихи, клюквы или брусники.

Соединение I относится к 3-ему классу умеренно опасных веществ. Лд₅₀ вещества при внутрибрюшинном введении составляет 500 мг/кг.

Иммуностимулирующие свойства патентуемого соединения изучали на беспородных мышах массой 18-20 г при иммунизации слабым антигеном. Исследуемые соединения вводили в дозах 5 мг/кг или 100 мг/кг внутрибрюшинно или подкожно. Контрольной группе животных вводили бычий альбумин без препарата (отрицательный контроль) или с полным адьювантом Фрейнда (положительный контроль). Результаты испытаний приведены в таблице.

Из данных табл. видно, что вещество (I) обладает выраженными иммуностимулирующими свойствами, так как титры антител в сыворотках, полученных от иммунизации альбумином с этим препаратом сходны с титрами антител в сыворотках при иммунизации с полным адьювантом Фрейнда и в 30 раз выше, чем при введении альбумина без препарата. Необходимо отметить, что глицирризиновая кислота (III) и кислый сукцинат урсоловой кислоты (V) по активности существенно уступают полному адьюванту Фрейнда.

Данное изобретение иллюстрируется примерами.

Пример 1. Синтез 3-O-сукциноил урсоловой кислоты (V). В круглодонную колбу емкостью 100 мл загружали 10 г (0.0219 моль) высушенной кислоты в 30 мл толуола, добавляли 6 г (0.06 моль) янтарного ангидрида и 15 мл сухого пиридина.

Реакционную массу кипятили в течение 3 ч, растворитель отогнали в вакууме. Остаток растворили при кипячении в 50 мл воды, после охлаждения выпавший осадок отфильтровали и промыли водой (3х10 мл). После высушивания получили 11.1 г (90%) кислого сукцината урсоловой кислоты (V). Т.пл. 218-220^oC (из метанола). ИК спектр ν, см^-1):3440 (OH), 1720, 1670 (C=O). Спектр ПМР (CD₃OD, δ, м.д.): 0.90 с, 0.92 с, 0.93 с, 1.00 с, 1.05 с, 1.17 с (21H, Me), 1.32-1.69 м (12H), 1.94 м (4H), 2.23 д (1H, H¹¹), 2.61 м (4H, OCOCH₂CH₂), 3.34 т (1H,H¹⁹), 4.54 м (1H,H³), 5.26 м (1H,H¹²).

Пример 2. Получение 3-O-сукциноил 11-кетоурсоловой кислоты (I). В круглодонную колбу емкостью 100 мл, снабженную мешалкой и термометром загружали 3,0 г (0,054 моль) кислого сукцината урсоловой кислоты (V), 40 мл ледяной уксусной кислоты и нагревали при перемешивании до растворения. К раствору по каплям добавляли 2,0 г (0,02 моль) хромового ангидрида в 15 мл уксусной кислоты. Смесь перемешивали при температуре 97+2^oC в течение 2 ч, затем реакционную массу вылили в 300 мл воды, образовавшийся осадок отфильтровали, промыли 1%-ным раствором соды и водой. Продукт сушили на воздухе и хроматографировали на колонке с силикагелем. Получили 1.9 г (62%) вещества (I), т.пл. 231-233^oC (из метанола). ИК спектр ν, см^-1):3440 (OH), 1720, 1670 (C=O). Спектр ПМР (CD₃OD, δ, м.д.): 0.93 с, 0.94 с, 1.03 с, 1.16 с, 1.19 с, 1.23 с, 1.40 с (21H, Me), 1.31-1.65 м (12H), 2.15 м (1H, H¹¹), 2.50 м (1H, H⁹), 2.61 м (4H, OCOCH₂CH₂), 2.80 м(1H,H¹⁸), 3.56 т (1H, H¹⁹), 4.55 м (1H,H³), 5.59 с (1H, H¹²). C₃₄H₅₂O₆.

Пример 3. Получение диаммонийной соли (I). Раствор 1.9 г кислоты (I) в 50 мл метил-трет.бутилового эфира насыщали аммиаком в течение 1 мин при 0^oC. Образовавшийся осадок отфильтровали, промыли эфиром и высушили на воздухе. Получили 1.8 г (90%) диаммонийной соли (I), т.пл.. Спектр ПМР (δ, м.д., J, Гц): 0.93 с, 0.94 с, 1.02 с, 1.06 с, 1.19 с, 1.21 с, 1.38 с (21H, Me), 1.31-1.65 м (17H), 2.10 м (2H,CH₂), 2.54 м (1H, H⁹ и 4H, OCOCH₂CH₂), 2.80 м (1H, H¹⁸), 4.50 м (1H, H³), 5.57 с (1H, H¹²). Уф спектр λ_макс., нм (ε): 253 (4200). C₃₄H₅₆N₂O₇.

Пример 4. Иммуностимулирующие свойства соединения (I) изучали на 144 животных. Беспородным мышам вводили подкожно 500 мкг бычьего альбумина в 0.5 мл стерильного физиологического раствора. Исследуемое соединение вводили на следующий день в дозах 5 мг/кг или 100 мг/кг внутрибрюшинно или подкожно. Контрольным животным вводили бычий альбумин без препарата (отрицательный контроль) или с полным адьювантом Фрейнда (положительный контроль). Повторное введение альбумина в дозе 100 мг/мышь проводили на 28 сутки. Сыворотки получали на 14 и 36 сутки и исследовали методом иммуноферментного анализа индивидуально от каждого животного. Эксперименты повторяли дважды, на каждую дозу и способ введения брали по 6 мышей.

Таким образом, новое соединение (I) обладает следующими преимуществами:
- оно доступно, так как получается из доступного сырья (урсоловой кислоты);
- способ получения его прост в технологическом оформлении и не требует дорогостоящих реагентов и оборудования:
- соединение (I) обладает высокой иммуностимулирующей активностью (на уровне адьюванта Фрейнда), не проявляя в то же время иммуносупрессорных свойств, присущих его ближайшему аналогу - глицирризиновой кислоте.

Claims

3-О-сукциноил-11-оксо-урсоловая кислота и ее диаммонийная соль формулы

где Х - Н, NH₄,
проявляющая иммуностимулирующую активность.