RU2119668C1 - Способ дифференциальной диагностики фиброаденомы и рака молочной железы в гистологических срезах - Google Patents
Способ дифференциальной диагностики фиброаденомы и рака молочной железы в гистологических срезах Download PDFInfo
- Publication number
- RU2119668C1 RU2119668C1 RU94027312A RU94027312A RU2119668C1 RU 2119668 C1 RU2119668 C1 RU 2119668C1 RU 94027312 A RU94027312 A RU 94027312A RU 94027312 A RU94027312 A RU 94027312A RU 2119668 C1 RU2119668 C1 RU 2119668C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- detection
- alpha
- fibroadenoma
- macroglobulin
- minutes
- Prior art date
Links
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 17
- 208000007659 Fibroadenoma Diseases 0.000 title claims abstract description 17
- 201000003149 breast fibroadenoma Diseases 0.000 title claims abstract description 14
- 206010001233 Adenoma benign Diseases 0.000 title claims abstract description 13
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 title claims description 10
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 26
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 21
- 108010015078 Pregnancy-Associated alpha 2-Macroglobulins Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 102100033312 Alpha-2-macroglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000003086 colorant Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 14
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 238000004040 coloring Methods 0.000 claims description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 8
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 abstract description 8
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 abstract description 2
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 abstract description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 abstract description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 abstract description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 abstract description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 abstract 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 abstract 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical group CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 10
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 7
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 229940078552 o-xylene Drugs 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 238000013115 immunohistochemical detection Methods 0.000 description 2
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 2
- WTWSDDKGKIGSJE-UHFFFAOYSA-N 5-(4-aminophenyl)cyclohexa-2,4-diene-1,1,2-triamine;tetrahydrochloride Chemical compound Cl.Cl.Cl.Cl.C1C(N)(N)C(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C=C1 WTWSDDKGKIGSJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000021559 Dicerandra Species 0.000 description 1
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 1
- 235000010654 Melissa officinalis Nutrition 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229940019748 antifibrinolytic proteinase inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000029578 entry into host Effects 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012333 histopathological diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 239000000865 liniment Substances 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
- G01N1/31—Apparatus therefor
- G01N1/312—Apparatus therefor for samples mounted on planar substrates
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Способ может быть использован в медицине, а именно в патологической анатомии. У обследуемого берут фрагмент операционного материала. Проводят регидратацию гистологических срезов и удаляют из них остатки парафина. Блокируют эндогенную пероксидазу и неспецифическую сорбцию иммуноглобулинов. Обрабатывают гистологические срезы первичным антителами против альфа 2-макроглобулина (МГ) и альфа 2-гликопротеина (АБГ). Инкубируют гистологические срезы вторичными антителами, получают селективную окраску МГ или АБГ в желто-коричневые цвета, по интенсивности которой определяют степень их детекции. При высокой степени детекции МГ, имеющего коричневую окраску, и низкой степени детекции АБГ, имеющего бледно-желтую окраску, квалифицируют опухоль как фиброаденому. При низкой степени детекции МГ, имеющего бледно-желтую окраску, и высокой степени детекции АБГ, имеющего коричневую окраску, диагностируют рак молочной железы.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к патологической анатомии.
Известен способ дифференциальной диагностики фиброаденомы, являющейся доброкачественной опухолью, и рака молочной железы в гистологических срезах, окрашенных гематоксилином и эозином. Способ основан на микроскопических различиях расположения и количества опухолевых клеток и стромы в этих образованиях. К дифференциально-диагностическим критериям относят мономорфизм или полиморфизм формы и размеров клеток и их ядер, степень их митотической активности и другие характеристик. /Ласкина А.В. Опухоли молочной железы. - В кн.: Руководство по патологоанатомической диагностике опухолей человека. - Изд. 2-е /Под ред. Н.А.Краевского, А.В.Смольянникова.-М.: Медицина, 1976, - с. 191- 211/.
Недостатком способа является отсутствие облигатных признаков, позволяющих различать переходные формы опухолей, то есть фиброаденом с признаками озлокачествления, от начальных форм рака. Учитывая, что малигнизация фиброаденом наблюдается в 5% от общего их числа (Ермолова В.Д. Опухоли молочной железы. - В. кн.: Руководство по патологоанатомической диагностике опухолей человека /Под ред. Н.А.Краевского, А.В.Смольянникова и Д.С.Саркисова.- 3-е изд. -М. : Медицина, 1982, с. 210 - 232/, число наблюдений фиброаденом, требующих дифференциальной диагностики от рака молочной железы, является значительным. Наиболее достоверным признаком в таких случаях является инвазивный рост /Головин Д.И. Ошибки и трудности гистологической диагностики опухолей: руководство для врачей. - Л.: Медицина, 1982, 304 с/, что знаменует собой уже распространенную форму заболевания.
Известен способ диагностики рака в гистологических срезах, выбранный в качестве прототипа, основанный на иммунологическом выявлении индивидуальных веществ в клетках /Франк Г.А., Пугачев К.К., Шабалова И.П., Шимбирева И.Б. //Арх. пат. - 1990, - т. 52, вып. 8 -с.70-74/, которые при этом окрашиваются в те или иные цвета. В настоящее время известно значительное число разнообразных типов биологических веществ, например онкофетальные антигены, изоэнзимы и другие, которые относят к опухолевым маркерам /Ромененко А.М.// Арх. пат. - 1989, т. 51, вып. 4-с. 58-62/. Недостатком способа является то, что опухолевые маркеры невозможно использовать для дифференциальной диагностики фиброаденомы и рака молочной железы, так как они не позволяют отличить доброкачественные клетки от злокачественных.
Задача предлагаемого способа заключается в разработке иммуногистохимической реакции, позволяющей на основе различий детекции белков семейства макроглобулинов /не являющихся специфической принадлежностью эпителиальных клеток молочной железы/ показать различия фиброаденомы и рака молочной железы, тем самым повысив точность их диагностики и дифференциальной диагностики.
Известно, что злокачественный рост сопровождается увеличением активности лизосомальных протеиназ /Веремеенко К.Н. Глобородько О.П., Кизим А.М. Протеолиз в норме и при патологии. Киев: Здоровья, 1988 200с/. Концентрация ингибиторов протеиназ, к которым относятся белки семейства макроглобулинов, хорошо коррелирует с массой злокачественной опухоли, что связывают с локальным биосинтезом белков опухолевыми клетками /Зорин Н.А., Зорина Р.М., Горин В.С.// Акушерство и гинекология, - 1986, N 6, с. 6-9/.
По результатам иммунологического исследования сыворотки крови можно видеть, что в организме здоровых людей доминирует альфа 2-макроглобулин /МГ/, а свойство ассоциированного с беременностью альфа 2-гликопротеина /АБГ/, являющихся основными представителями белков семейства макроглобулинов, имеет ограниченное значение. При раке происходит блокирование биосинтеза МГ, что восполняется биосинтезом АБГ, способным выполнять основную функцию МГ - удаление протеиназ из тканей, разрушающихся при росте опухоли /Зорин Н.А., Зорина Р.М., Горин В.С. и др.// Клиническая лабораторная диагностика. - 1993, N 1, с. 52 - 56/.
Поставленная задача достигается тем, что в способе дифференциальной диагностики фиброаденомы и рака молочной железы в гистологических срезах, основанной на окраске цитоплазмы опухолевых клеток, отличающемся тем, что учитывают различия степени детекции МГ и АБГ, путем иммунопероксидазной реакции с использованием первичных антител против МГ и АБГ в концентрациях 10 мкг/мл и при высокой детекции МГ и низкой АБГ судят о фиброаденоме, а при низкой детекции МГ и высокой АБГ диагностируют рак молочной железы. Высокая детекция белка сопровождается селективной окраской его в коричневый цвет, а низкая детекция - в бледно-желтый цвет.
Сущность предлагаемого способа дифференциальной диагностики фиброаденомы и рака молочной железы в гистологических срезах заключается в следующем. Проводимая иммуногистохимическая реакция включает ряд этапов.
1. Регидратация срезов и удаление из них остатков парафина. Для этого срезы проводят через три порции о-ксилола, абсолютный этанол, спирт 70% и 56%, а также забуференный физиологический раствор /ЭФР/ - по три минуты в каждой порции жидкости.
2. Блокирование эндогенной пероксидазы осуществляют путем внесения на срез нескольких капель 3%-ной перекиси водорода на 10 минут.
3. Блокирование неспецифической сорбции иммуноглобулинов достигают путем нанесения на срез лошадиной сыворотки в разведении 1:20 на 30 минут.
4. Этап обработки гистологических срезов первичными антителами против МГ и АБГ в концентрации 10 мкг/мл, разведенными в ЭФР с добавлением 3%-ного альбумина и 0,01%-ного азида натрия. Инкубирование срезов осуществляют в течение 30 минут при температуре 37oC.
5. Инкубация гистологических срезов вторичными антигенами в разведении 10 мкг/мл ЭФР на 30 минут.
6. Обработка срезов комплексом авидин-пероксидаза в концентрации 25 мкг/мл в течение 30 минут.
7. Проявление пероксидазной активности 3,3-диаминобензидина тетрахлоридом /ДАБ/ в ЭФР в соотношении 500 мкг ДАБ на 1 мл ЭФР. К свежеприготовленному раствору прибавляют 0,03%-ную перекись водорода и срезы инкубируют с субстратом в течение 10 минут. Реакцию останавливают погружением срезов в дистиллированную воду. В дальнейшем срезы проводят по спиртам восходящей концентрации и трем порциям о-ксилола, заключают в бальзам.
Следует отметить, что при проведении всякой иммуногистохимической реакции используют "положительный" контроль, то есть срезы аналогичного исследуемому материала с заведомо позитивной реакцией. Другими словами "положительный" контроль является эталоном качества окраски срезов. В каждом случае применяют и "отрицательный" контроль, то есть срезы аналогичной исследуемой ткани, в которых при проведении реакции опущены 4 или 5 этапы ее с целью обнаружения возможного фонового окрашивания. Другими слова, применяют тест на качество набивки эндогенной пероксидазы, которая при недостаточном устранении на втором этапе реакции может быть проявлена иммунопероксидазным методом и вызовет ложные представления о степени детекции искомого белка.
В результате реакций на МГ и АБГ получают селективную окраску МГ или АБГ в желто-коричневые цвета. При раке молочной железы определяется яркая окраска цитоплазмы опухолевых клеток, достигающая коричневого цвета /детекция АБГ/ и бледно-желтого цвета /детекция МГ/. Паренхима фиброаденомы молочной железы обнаруживает прямо противоположную раку детекцию белков: АБГ имеет бледно-желтую окраску, а МГ - коричневую. Таким образом, предлагаемый способ позволяет определить количество МГ и АБГ в гистологическом срезе ткани опухоли молочной железы. По высокой детекции МГ и низкой АБГ судят о принадлежности опухоли к фиброаденоме, а по низкой детекции МГ и высокой АБГ - диагностируют рак молочной железы. Способ повышает точность диагностики фиброаденомы и рака молочной железы и позволяет облегчить дифференциальную диагностику данных опухолей молочной железы.
Пример 1.
Иммуногистохимическая детекция МГ и АБГ в ткани опухоли молочной железы.
Фрагменты операционного материала фиксируют 15%-ным водным нейтральным раствором формалина в течение суток при комнатной температуре. В последующем материал подвергают парафиновой проводке, заключающийся в проведении его по батарее, включающей ряд жидкостей: о-ксилол 30 минут, две порции 70%- и 80%-ного этанола по 6 часов в каждой, три порции 96%-ного этанола по 6 часов в каждой, абсолютный спирт 30 минут, абсолютный спирт-ксилол в равных соотношениях в течение 2 часов, ксилол-парафин в равных соотношениях при температуре 37oC 2 часа, три порции парафина при температуре 58oC по одному часу в каждой. Пропитанные парафином кусочки охлаждают на воздухе и наклеивают на деревянные блоки. Гистологические срезы толщиной 5-8 мкм готовят с помощью микротома. Депарафинирование гистологических срезов проводят обработкой их в трех порциях о-ксилола по 5 минут в каждой и последующим прогреванием срезов в термостате при 37oC в течение трех часов. Обезвоживание гистологических срезов достигают обработкой их в четырех порциях этанола /абсолютный, 96%, 70% и 56%-ный/ по три минуты в каждой. Далее срезы переводят на 5 минут в 0,05 М раствор ЭФР pH 7,6. Блокирование эндогенной пероксидазы /этот и последующие этапы реакции проводят в чашках Петри/ осуществляют свежим 3%-ным раствором перекиси водорода. Длительность этапа 10 минут. ЭФР 5 минут. Далее срезы выдерживают под каплей 5%-ного раствора лошадиного сывороточного альбумина /50 мг альбумина в 1 мл ЭФР/. После этого избыток альбумина стряхивают и аккуратно обтирают предметные стекла вокруг среза. На последний наносят каплю афинно очищенных кроличьих антител против МГ /один микропрепарат/ и АБГ /второй микропрепарат/ в концентрации 10 мкг/мл ЭФР. Растворы антител включают в себя 3% альбумина и 0,01% азида натрия. Инкубацию срезов проводят в течение 30 минут при 37oC в чашках Петри с созданием условий влажной камеры /для этого на дно чашки укладывают фильтровальную бумагу, смоченную ЭФР/. Две порции ЭФР по 5 минут в каждой, после чего раствор ЭФР меняют на новый. Инкубируют гистологические срезы во вторичных антителах в разведении 10 мкг на 1 мл ЭФР в течение 30 минут. ЭФР 5 минут. Обрабатывают срезы комплексом авидин-пероксидаза в течение 30 минут. Непосредственно перед применением комплекс разводят в 200 раз в ЭФР. ЭФР 5 минут. Иммунологическое проявление осуществляют в 0,03%-ном растворе субстрата в течение 10 минут. Раствор получают, смешивая непосредственно перед применением 1 мг ДАБ с 2 мл ЭФР и 0,2 мл 0,3%-ной перекиси водорода. Реакцию останавливают с ополаскиванием срезов в двух порциях дистиллированной воды.
Результат читают под разными увеличениями светового микроскопа по наличию окраски цитоплазмы клеток в опытных микропрепаратах и "положительном" контроле. Использование способа показало, что цитоплазма паренхиматозных клеток опухоли имеет коричневую окраску в срезах, где в качестве первичных антител были использованы кроличьи антитела против МГ; в микропрепаратах, где первичные антитела были против АБГ, цитоплазма имеет бледно-желтую, неравномерную в разных клетках окраску. Эти данные позволяют считать опухолевый процесс доброкачественным. Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить токсичность патогистологической диагностики опухолей молочной железы.
Пример 2.
Иммуногистохимическая детекция МГ и АБГ в ткани опухоли молочной железы.
Фрагменты операционного материала фиксируют 15%-ным водным нейтральным раствором формалина в течение суток при комнатной температуре. В последующем материал подвергают парафиновой проводке, заключающейся в проведении его по батарее, включающей ряд жидкостей: о-ксилол 30 минут, две порции 70%- и 80%-ного этанола по 6 часов в каждой, три порции 96-ного этанола по 6 часов в каждой, абсолютный спирт 30 минут, абсолютный спирт-ксилол в равных соотношениях в течение 2 часов, ксилол-парафин в равных соотношениях при температуре 37oC 2 часа, три порции парафина при температуре 58oC по одному часу в каждой. Пропитанные парафином кусочки охлаждают на воздухе и наклеивают на деревянные блоки. Гистологические срезы толщиной 5-8 мкм готовят с помощью микротома. Депарафинирование гистологических срезов проводят обработкой их в трех порциях о-ксилола по 5 минут в каждой и последующим прогреванием срезов в термостате при температуре 37oC в течение трех часов. Обезвоживание гистологических срезов достигают обработкой их в четырех порциях этанола /абсолютный, 96%, 70% и 56%-ный/ по три минуты в каждой. Далее срезы переводят на 5 минут в 0,05 М раствор ЭФР pH 7,6. Блокирование эндогенной пероксидазы /этот и последующие этапы реакции проводят в чашках Петри/ осуществляют свежим 3%-ным раствором перекиси водорода. Длительность этапа 10 минут, ЭФР 5 минут. Далее срезы выдерживают под каплей 5%-ного раствора лошадиного сывороточного альбумина /50 мг альбумина в 1 мл ЭФР/. После этого избыток альбумина стряхивают и аккуратно обтирают предметные стекла вокруг срезов. На последние наносят каплю афинно очищенных кроличьих антител против МГ /один микропрепарат/ и АБГ /второй микропрепарат/ в концентрации 10 мкг/мл ЭФР. Растворы антител содержат в себе 3% альбумина и 0,01% азида натрия. Инкубацию срезов проводят в течение 30 минут при температуре 37oC в чашках Петри с созданием условий влажной камеры, для чего на дно чашки Петри укладывают фильтровальную бумагу, смоченную ЭФР. Две порции ЭФР по 5 минут в каждой, после чего раствор ЭФР меняют на новый. Инкубируют гистологические срезы во вторичных антителах в разведении 10 мкг на 1 мл ЭФР в течение 30 минут. Непосредственно перед применением комплекс разводят в 200 раз в ЭФР. ЭФР 5 минут. Иммунологическое проявление осуществляют в 0,03%-ном растворе субстрата в течение 10 минут. Раствор получают, смешивая непосредственно перед применением 1 мг ДАБ с 2 мл ЭФР и 0,2 мл 0,3%-ной перекиси водорода. Реакцию останавливают ополаскиванием срезов в двух порциях дистиллированной воды.
Использование способа показало, что цитоплазма перенхиматозных клеток окрашена в разные цвета и имеет разную степень интенсивности окраски. В одних участках, соответствующих фиброаденоме, детакция МГ высокая, а АБГ - низкая. В участках опухоли, где имеются признаки повышения митотической активности опухолевых клеток, их мономорфизм, ядерная гиперхромия, признаки атипии клеток, выполнение просветов расширенных протоков пролифератами клеток, детекция в цитоплазме опухолевых клеток МГ низкая, а АБГ, напротив, высокая. Таким образом, применение способа позволило по высокой детекции МГ и низкой АБГ диагностировать в ткани молочной железы узлов фиброаденомы. Кроме того, на этом фоне, по низкой детекции МГ и высокой АБГ, можно судить о наличии участков малигнизации фиброаденоматоза. Применение способа повысило точность диагностики патологического процесса и облегчило дифференциальную диагностику рака и фонового состояния - фиброаденоматоза молочной железы.
Claims (1)
- Способ дифференциальной диагностики фиброаденомы и рака молочной железы в гистологических срезах, включающий окраску цитоплазмы опухолевых клеток, отличающийся тем, что проводят иммунопероксидазную реакцию, которую осуществляют с использованием антител против альфа 2-макроглобулина (МГ) и ассоциированного с беременностью альфа 2-гликопротеина (АБГ), получают селективную окраску МГ или АБГ в желто-коричневые цвета, по интенсивности которой определяют степень их детекции, и при высокой степени детекции МГ, имеющего коричневую окраску, и низкой степени детекции АБГ, имеющего бледно-желтую окраску, квалифицируют опухоль как фиброаденому, а при низкой степени детекции МГ, имеющего бледно-желтую окраску, и высокой степени детекции АБГ, имеющего коричневую окраску, диагностируют рак молочной железы.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU94027312A RU2119668C1 (ru) | 1994-07-18 | 1994-07-18 | Способ дифференциальной диагностики фиброаденомы и рака молочной железы в гистологических срезах |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU94027312A RU2119668C1 (ru) | 1994-07-18 | 1994-07-18 | Способ дифференциальной диагностики фиброаденомы и рака молочной железы в гистологических срезах |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU94027312A RU94027312A (ru) | 1996-09-27 |
| RU2119668C1 true RU2119668C1 (ru) | 1998-09-27 |
Family
ID=20158717
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU94027312A RU2119668C1 (ru) | 1994-07-18 | 1994-07-18 | Способ дифференциальной диагностики фиброаденомы и рака молочной железы в гистологических срезах |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2119668C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2730993C2 (ru) * | 2020-03-03 | 2020-08-26 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр радиологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ радиологии" Минздрава России) | Способ дифференциальной диагностики фиброаденомы и рака молочной железы |
-
1994
- 1994-07-18 RU RU94027312A patent/RU2119668C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 1. Франк Г.А., Пугачев К.К., Шабалов И.П., Шимбирев И.Б. Арх.пат.1990, т. 55, вып. 8, с. 70 - 74. 2. SU 1783426 A1, (Алтайский государственный медицинский институт им.Ленинского комсомола), 23.12.92, G 01 N 33/48. 3. SU 1821740 A1, (Ростовский НИИ онкологии), 15.06.93, G 01 N 33/48. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2730993C2 (ru) * | 2020-03-03 | 2020-08-26 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр радиологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ радиологии" Минздрава России) | Способ дифференциальной диагностики фиброаденомы и рака молочной железы |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU94027312A (ru) | 1996-09-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fellinger et al. | Comparison of cell surface antigen HBA71 (p30/32MIC2), neuron-specific enolase, and vimentin in the immunohistochemical analysis of Ewing's sarcoma of bone | |
| Seibert | The purification and properties of the purified protein derivative of tuberculin | |
| Farnebo et al. | Evaluation of retinoblastoma and Ki-67 immunostaining as diagnostic markers of benign and malignant parathyroid disease | |
| Daoust | Localization of deoxyribonuclease in tissue sections: A new approach to the histochemistry of enzymes | |
| Haagensen Jr | Is cystic disease related to breast cancer? | |
| JPH09509829A (ja) | イン・ビトロ脈管形成アッセイ | |
| BELL et al. | Factors affecting the binding of lectins to normal human skin | |
| CN102707058B (zh) | 一种用于诊断肺癌的Tipe3免疫组织化学检测试剂盒 | |
| Limas et al. | T‐antigen in normal and neoplastic urothelium | |
| CN113281516A (zh) | Cul9作为标志物在结直肠癌预后评价上的应用 | |
| Somers et al. | Localization and developmental fate of ovoperoxidase and proteoliaisin, two proteins involved in fertilization envelope assembly | |
| CN116593262B (zh) | 基于pdx/pdtx肿瘤活组织生物样本和数据库的分子标志物检测产品及其制备方法 | |
| CN113466458A (zh) | Gpx4、nox1和acsl4在结直肠癌预后评价上的应用 | |
| RU2119668C1 (ru) | Способ дифференциальной диагностики фиброаденомы и рака молочной железы в гистологических срезах | |
| Khoshyomn et al. | Four-dimensional analysis of human brain tumor spheroid invasion into fetal rat brain aggregates using confocal scanning laser microscopy | |
| Cherry et al. | Detection in clinical specimens by direct immunofluorescence | |
| RU2107911C1 (ru) | Способ дифференциальной диагностики гиперпластических процессов и рака молочной железы в гистологических срезах | |
| JP2008239487A (ja) | 難浸透性組織迅速固定液 | |
| KAMEYA et al. | Enzyme-and immuno-histochemical localization of human placental alkaline phosphatase | |
| Taylor et al. | Tissue printing as a tool for observing immunological and protein profiles in young and mature celery petioles | |
| RU2094806C1 (ru) | Способ диагностики некроза в гистологических срезах | |
| CN105785004A (zh) | 细胞周期分裂相关蛋白2在胰腺癌诊断或预后中的用途 | |
| CN116773790B (zh) | 一种肿瘤组织her2梯度检测产品的制备方法和应用 | |
| Yoneda et al. | The distribution of keratin type intermediate‐sized filaments in so‐called mixed tumour of the skin | |
| RU2709608C1 (ru) | Способ определения белка свертываемости крови у животных |