RU2112528C1 - СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТА ДЕСТАБИЛАЗЫ, ОБЛАДАЮЩЕГО ФИБРИНОЛИТИЧЕСКОЙ, ТРОМБОЛИТИЧЕСКОЙ, ЭНДО- И ЭКЗО- ε(γ GLY)-LYS-ИЗОПЕПТИДАЗНОЙ И АМИДОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ - Google Patents

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТА ДЕСТАБИЛАЗЫ, ОБЛАДАЮЩЕГО ФИБРИНОЛИТИЧЕСКОЙ, ТРОМБОЛИТИЧЕСКОЙ, ЭНДО- И ЭКЗО- ε(γ GLY)-LYS-ИЗОПЕПТИДАЗНОЙ И АМИДОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ Download PDF

Info

Publication number
RU2112528C1
RU2112528C1 RU94043698A RU94043698A RU2112528C1 RU 2112528 C1 RU2112528 C1 RU 2112528C1 RU 94043698 A RU94043698 A RU 94043698A RU 94043698 A RU94043698 A RU 94043698A RU 2112528 C1 RU2112528 C1 RU 2112528C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
enzyme
destabilase
gly
lys
isopeptidase
Prior art date
Application number
RU94043698A
Other languages
English (en)
Other versions
RU94043698A (ru
Inventor
Е.Д. Свердлов
И.П. Баскова
Л.Л. Завалова
С.А. Лукьянов
Е.В. Барсова
Е.А. Богданова
Original Assignee
Институт биоорганической химии им.М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Институт биоорганической химии им.М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН filed Critical Институт биоорганической химии им.М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН
Priority to RU94043698A priority Critical patent/RU2112528C1/ru
Priority to JP8520396A priority patent/JPH10501422A/ja
Priority to EP95920321A priority patent/EP0753304A1/en
Priority to CN95192684A priority patent/CN1146723A/zh
Priority to PCT/RU1995/000102 priority patent/WO1996019999A1/ru
Publication of RU94043698A publication Critical patent/RU94043698A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2112528C1 publication Critical patent/RU2112528C1/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6402—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from non-mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение относится к медицине, точнее к способам получения биологически активных веществ из животного сырья, и может найти применение в терапии тромбозов и в экспериментальных областях медицины. Изобретение позволяет повысить новый тромболитический фермент, дестабилазу, эндо-ε(γ-Glu)-Lys-изопептидазу, обладающую экзо-ε(γ-Glu)-Lys-изопептидазной и амидолитической активностью. Установлена частичная аминокислотная последовательность фермента. Для этого из пиявки семейства Hirudinidae получают экстракт, подвергают его аффинной хроматографии, дополнительно очищают на анионо- или катионообменнике, собирают целевой продукт, затем обессоливают гель-фильтрацией, собирают белок с мол.м. 126000±300 Дальтон. 2 ил.

Description

Изобретение относится к медицине, точнее к гемостазиологии и фармакологии, а именно к способам получения биологически активных препаратов, способных найти применение в клинической и экспериментальной областях медицины в качестве тромболитического препарата.
В настоящее время известно значительное число биологически активных веществ, обладающих фибринолитической, тромболитической активностью, полученных из различных природных источников (US, N 4873222, 1989; PCT N 870050, 1987; US, N 3743722; US, N 3819605, 1974) или синтетическим путем (US, N 4861865). Действие одних из них направлено на активацию плазминогена в плазмин, другие обладают собственной фибринолитической активностью. К последним принадлежит препарат гементин, выделяемый из слюнных желез пиявки Haementeria ghilianii (US, N 4390630, 1983; ЕП N 0346894, 1989).
В последние годы обнаружен принципиально новый механизм фибринолиза и тромболизиса, который обеспечивает растворение твердого стабилизированного фибрина. Этот механизм предполагает гидролиз ε-(γ-Glu)-Lys-изопептидных связей, образующих поперечные сшивки или cross-links между отдельными полипептидными цепями в стабилизированном фибрине. Этот механизм стимулируется ферментом дестабилазой - эндо-ε-(γ-Glu)-Lys-изопептидазой из медицинской пиявки Hirudo medicinalis (Baskova I. P., Nikonov G.I. Biokchimyia, 1985, p. 424).
На сегодняшний день известны еще два препарата из пиявки Hirudo medicinalis, обладающие изопептидазной функцией:
а). Фибрин-изопептидаза с мол.м. 15000 ± 1000 Дальтон (решение о выдаче патента по заявке 5000191/13 от 5.07.93). Выделение фермента из медицинской пиявки включает фракционирование сульфатом аммония, очистку методами анионообменной (носитель DEAE-Toyopearl) и катионообменной (носитель - CM-Toyopearl) хроматографии и гель-фильтрации.
б). Фермент, растворяющий кровяные сгустки с мол. м. 57000 Дальтон (патент PCT 091/08233, 1991, DE, 3939801, 1991).
Выделение фермента из секрета слюнных желез медицинской пиявки Hirudo medicinalis включает поэтапную хроматографическую очистку с использованием катионообменника в присутствии детергента твин 80, аффинную хроматографию на конканавалине-A, очистку с помощью хелата меди и HPLC-катионообменную хроматографию на моно-S.
Однако ни для одного из этих препаратов не описана тромболитическая активность, хотя один из известных препаратов называется "ферментом, растворяющим кровяные сгустки" (патент PCT 091/08233, 1991).
Задачей предлагаемого изобретения является разработка эффективного способа получения фермента дестабилазы, обладающего не только амидолитической, экзо- и эндоизопептидазной активностями, но также выраженными тромболитическими свойствами и отличающегося по молекулярной массе и аминокислотной последовательности.
Поставленная задача получения фермента дестабилазы осуществляется следующим образом.
Экстракт из пиявки семейства Hirudinidae подвергают аффинной хроматографии, которую проводят на колонке с иммобилизованными на сефарозе-4B антителами к дестабилазе. Колонку уравновешивают 0,02 М трис-HCl буферным раствором, pH 7,4; буферным раствором отмывают несвязавшийся белок и элюируют дестабилазу тем же буферным раствором, содержащим 0,3 M NaCl. Полученный препарат вновь хроматографируют на колонке с KM-трисакриловом сорбентом, уравновешенной 0,02 M трис-HCl буферным раствором, pH 7,4. Элюируют целевой продукт 0,05 - 0,20 M NaCl, растворенном в том же 0,02 M трис-HCl буферном растворе. Фракции, содержащие конечный продукт, собирают, обессоливают гель-фильтрацией на суперозе-12 и лиофилизируют. В результате полученный препарат содержит 100% активного вещества. Степень чистоты подтверждена электрофоретически.
Способ получения фермента дестабилазы иллюстрируется следующими конкретными примерами его выполнения.
Пример 1. Медицинскую пиявку, голодавшую не менее трех месяцев, пропускают через мясорубку и экстрагируют физиологическим раствором. Экстракт наносят на колонку с сефарозой-4B с иммобилизованными на ней антителами к дестабилазе, уравновешенную 0,02 M трис-HCl буферным раствором pH 7,4. Фермент элюируют 0,3 M NaCl, растворенным в 0,02 M трис-HCl буферном растворе pH 7,4, фракции объединяют; полученный раствор (8 мл, концентрация белка 0,5 мг/мл) наносят на колонку с KM-трис-акриловым сорбентом, уравновешенную 0,02 М трис-HCl буферным раствором, pH 7,4. Фермент дестабилаза элюировалась при градиенте NaCl 0,05 - 0,20 М (фиг. 1). Обессоливание проводят гель-фильтрацией на суперозе-12. О месте расположения пика, соответствующего дестабилазе, судят по амидолитической активности фракций (субстрат L-γ-Glu-pNA), которая соответствует 3•10 kat/mg (фиг. 2). На фиг. 1, 2 штриховка - активность дестабилазы.
Способ позволяет очистить фермент в 2400 раз. Выход белка составляет 0,1% от исходно взятой белковой смеси. Гомогенность препарата подтверждена методом электрофореза в геле полиакриламида.
Пример 2. Пиявок из семейства Hirudinidae, голодавших не менее четырех месяцев, измельчают и экстрагируют физиологическим раствором. Экстракт наносят на колонку с агарозой-6B иммобилизованными на ней антителами к дестабилазе, уравновешенной 0,02 М трис-HCl буферным раствором pH 7,2. Дестабилазу элюируют 0,2 М NaCl, растворенном в 0,02 М трис-HCl буферном растворе pH 7,2. Фракции, обладающие ферментативной активностью, объединяют и пропускают через колонку с DEAE-сефадексом A-50, уравновешенную 0,02 М трис-HCl буферным раствором pH 7,2. Полученные фракции наносят на колонку с KM-целлюлозой и элюируют буферным раствором 0,02 М трис-HCl pH 6,5 в градиент NaCl от 0,1 до 0,3 М.
Фракции, обладающие ферментативной активностью, объединяют, обессоливают гель-фильтрацией через сефадекс Г-25.
В результате очистка достигается в 2500 раз. Конечная амидолитическая активность дестабилазы (субстрат L-γ-Glu-pNA) составляет 7 • 10 - 9 kat/mg.
Выход белка - 0,12% от исходного содержания белковой смеси. Гомогенность фермента подтверждена методом электрофореза в геле полиакриламида.
В результате изучения первичной структуры, физико-химических, кинетических свойств нового фермента-дестабилазы получены следующие характеристики, позволяющие его идентифицировать.
УФ-спектр - характерный максимум поглощения при λ = 278 нм.
Молекулярная масса - мол.м. мономера - дестабилазы 12600 ± 300 Дальтон. Определена методом высокоэффективной гель-фильтрации на колонке супероза-12 (0,02 М трис-HCl, pH 7,0) и градиентного электрофореза в 4 - 16% ПААГ с 1% SDS.
Изопептидазная активность. Изопептидазную активность определяют по способности фермента гидролизовать изопептидные связи в природном субстрате - продукте ограниченного протеолиза стабилизированного фибрина, димере его D-фрагмента (D-димер), в котором сохранены изопептидные связи между γ-γ-цепями фибрина (Завалова Л.Л. и др. Биохимия. т. 56, 1991, с. 115-124). С этой целью 0,1 - 2,0 мкг фермента инкубируют с 50 мкг D-димера в 0,02 М трис-HCl буферном растворе, pH 8,0 в течение 10-70 ч. Общий объем инкубационной смеси - 100 мкл. В результате реакции наблюдают гидролиз изопептидной связи в D-димере и образование D--мономеров, за накоплением которых следят с помощью метода электрофореза в ПААГ. Установлено, что новый белок вызывает растворение сгустков стабилизированного фибрина, гидролизует γ-Glu-ε-Lys-изопептидные связи в димере фрагмента D и в диизопептиде γ-Glu-ε-Lys.
Амидолитическая активность. Амидолитическую активность фермента определяют по его способности гидролизовать амидную связь в γ-Glu-pNA с образованием p-нитроанилина по методу Басковой И.П. и др. (Биохимия, 1990, т. 55, с. 674 - 679). Для этого 10-100 мкл раствора фермента прибавляют к пробе, содержащей 0,02 М трис-HCl буферного раствора, pH 8,0 и 0,05 мг/мл γ-Glu-pNA в общем объеме 0,5 мл и инкубируют 5-30 мин при 25oC. За развитием реакции следят спектрофотометрически при длине волны 405 нм.
Установлено, что новый фермент гидролизует амидные связи в γ-Glu-данзилкадаверине и в низкомолекулярных субстратах трипсина и химотрипсина, содержащих в положении P1 основную или гидрофобную аминокислоту.
Термостабильность. Фермент сохраняет активность при 22 - 37oC в течение 80 ч, при 7oC - в течение 15 дней, при 75oC - в течение 15 мин.
Диапазон pH-стабильности. Сохраняет активность в диапазоне pH 4,5 - 8,5 (при 37oC в течение 7 дней, субстрат γ-Glu-pNA).
Первичная структура. Для идентификации первичной структуры фермент хроматографируют на обращенно-фазовой колонке с Agmapoke RP-300 (4,6 • 100) в градиенте ацетонитрила от 0 до 60% за 1 мин. Определяют N-концевую аминокислотную последовательность дестабилазы. Идентифицирован 41 аминокислотный остаток. В качестве N-концевой аминокислоты определен треонин. Затем проводят CNBr-гидролиз дестабилазы и полученную смесь вновь хроматографируют на той же колонке в тех же условиях. В результате получены четыре пептидных фрагмента со следующими частичными аминокислотными кислотными последовательностями:
1. Thr Val-Ser-XLeu--Ile--Val-GluX---Ile Gly--Gly-.
2. -Ala Gly Ser Leu--Gly---Ile----Ile-Gly--Gly Gly-Gln.
3. ---Ala--X-Gly Gly--Pro Thr X---Ala-Ile---.
4. Gly Pro-Gly X-Ser Leu--.
В результате гидролиза фермента глутаминовой протеазой выделен фрагмент: Ile Gly--Gly--Ala Gly Ser-.
Тромболитическая активность. Тромболитическую активность фермента дестабилазы анализируют в экспериментах на животных (крысы с массой тела 200 г). У животных стимулируют тромбообразование в яремной вене посредством введения активированной стеклом сыворотки крови с последующим стазированием участка яремной вены (метод Wessller, 1975). Образовавшийся тромб фиксируют наложением лигатуры на соответствующий участок вены. Контрольные животные получают внутривенные инъекции 0,2 мл физиологического раствора, а экспериментальные - такой же объем раствора дестабилазы, содержащего 0,72 мг белка. Тромболизис наблюдается на 85% спустя 67 ч после введения препарата, и на 100% - через 137 ч после введения. У группы контрольных животных наблюдают спонтанный тромболизис на 17% спустя 67 ч после введения физиологического раствора и на 23% спустя 137 ч после введения.
Полученное вещество отличается от известных эндо- и экзо-ε-(γ-Glu)-Lys-изопептидаз по удельной активности, наличием тромболитической активности, по молекулярной массе и аминокислотной последовательности.

Claims (1)

  1. Способ получения фермента дестабилазы, обладающего фибринолитической, тромболитической, эндо- и экзо-ε-(γ-Gly)-Lys-изопептидазной и амидолитической активностью и характеризующегося следующими частичными аминокислотными последовательностями:
    1. Thr Val-Ser-X Leu--Ile--Val-Gly X---IleGly--Gly-,
    2. -AlaGlySerLeu--Gly---Ile----Ile---Gly--GlyGly---Gln,
    3. ---Ala--X- GlyGly--ProThr X---Ala-Ile---,
    4. GlyPro-Gly X-SerLeu--,
    заключающийся в том, что экстракт из пиявок семейства Hirudinidae хроматографируют на сорбенте с иммобилизованными антителами к ферменту дестабилазе, фракции, обладающие ферментативной активностью, объединяют, вновь хроматографируют на анионо- или катионообменнике, собирают целевой продукт, дополнительно очищают гель-фильтрацией и лиофилизуют.
RU94043698A 1994-12-23 1994-12-23 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТА ДЕСТАБИЛАЗЫ, ОБЛАДАЮЩЕГО ФИБРИНОЛИТИЧЕСКОЙ, ТРОМБОЛИТИЧЕСКОЙ, ЭНДО- И ЭКЗО- ε(γ GLY)-LYS-ИЗОПЕПТИДАЗНОЙ И АМИДОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ RU2112528C1 (ru)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU94043698A RU2112528C1 (ru) 1994-12-23 1994-12-23 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТА ДЕСТАБИЛАЗЫ, ОБЛАДАЮЩЕГО ФИБРИНОЛИТИЧЕСКОЙ, ТРОМБОЛИТИЧЕСКОЙ, ЭНДО- И ЭКЗО- ε(γ GLY)-LYS-ИЗОПЕПТИДАЗНОЙ И АМИДОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ
JP8520396A JPH10501422A (ja) 1994-12-23 1995-05-25 血栓溶解酵素及びその製造方法
EP95920321A EP0753304A1 (en) 1994-12-23 1995-05-25 Thrombolytic enzyme and method of obtaining same
CN95192684A CN1146723A (zh) 1994-12-23 1995-05-25 血栓溶解酶及其制备方法
PCT/RU1995/000102 WO1996019999A1 (fr) 1994-12-23 1995-05-25 Enzyme thrombolytique et son procede d'obtention

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU94043698A RU2112528C1 (ru) 1994-12-23 1994-12-23 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТА ДЕСТАБИЛАЗЫ, ОБЛАДАЮЩЕГО ФИБРИНОЛИТИЧЕСКОЙ, ТРОМБОЛИТИЧЕСКОЙ, ЭНДО- И ЭКЗО- ε(γ GLY)-LYS-ИЗОПЕПТИДАЗНОЙ И АМИДОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU94043698A RU94043698A (ru) 1996-10-20
RU2112528C1 true RU2112528C1 (ru) 1998-06-10

Family

ID=20163104

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU94043698A RU2112528C1 (ru) 1994-12-23 1994-12-23 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТА ДЕСТАБИЛАЗЫ, ОБЛАДАЮЩЕГО ФИБРИНОЛИТИЧЕСКОЙ, ТРОМБОЛИТИЧЕСКОЙ, ЭНДО- И ЭКЗО- ε(γ GLY)-LYS-ИЗОПЕПТИДАЗНОЙ И АМИДОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ

Country Status (5)

Country Link
EP (1) EP0753304A1 (ru)
JP (1) JPH10501422A (ru)
CN (1) CN1146723A (ru)
RU (1) RU2112528C1 (ru)
WO (1) WO1996019999A1 (ru)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000510903A (ja) * 1996-10-15 2000-08-22 ザ、プロクター、エンド、ギャンブル、カンパニー イソペプチダーゼを含有した洗剤組成物
US6133010A (en) * 1999-07-08 2000-10-17 Biotec Asa Chlamysin B antibacterial protein, a protein gene for and an expression system for same
FR2843304B1 (fr) * 2002-08-07 2005-12-16 Ricarimpex Extraits de sangsues pour stents
FR2843883B1 (fr) * 2002-08-30 2004-11-26 Ricarimpex Extraits de sangsues pour psoriasis
CN101857634B (zh) * 2010-05-17 2012-10-03 成都瑞益科技有限责任公司 纤维蛋白溶解系统激活蛋白

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2052062T3 (es) * 1988-06-11 1994-07-01 Ciba Geigy Ag Nuevos polipeptidos con actividad anticoagulante.
DE3939801A1 (de) * 1989-12-01 1991-06-06 Basf Ag Neue proteine und ihre herstellung

Also Published As

Publication number Publication date
WO1996019999A1 (fr) 1996-07-04
CN1146723A (zh) 1997-04-02
EP0753304A1 (en) 1997-01-15
JPH10501422A (ja) 1998-02-10
RU94043698A (ru) 1996-10-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Tu Overview of snake venom chemistry
AU621124B2 (en) Extraction and purification of an anticoagulant principle from the south american leech, haementeria ghilanii
Shinohara et al. Pro-carboxypeptidase R cleaves bradykinin following activation
US5932706A (en) Antibodies specific for a haemostatic protein their use for isolating protein, haemostatic compositions devoid of proteolytic cleavage products of the protein
WO1996013274A1 (en) Process for production of inhibited forms of activated blood factors
EP0263608A2 (en) Protein having anticoagulant and antimetastatic properties
US4996050A (en) Fibrinolytic activity enhancer
KR100335536B1 (ko) 트롬빈억제제
RU2112528C1 (ru) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТА ДЕСТАБИЛАЗЫ, ОБЛАДАЮЩЕГО ФИБРИНОЛИТИЧЕСКОЙ, ТРОМБОЛИТИЧЕСКОЙ, ЭНДО- И ЭКЗО- ε(γ GLY)-LYS-ИЗОПЕПТИДАЗНОЙ И АМИДОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ
US5977056A (en) Treatment of thrombotic events
Owen et al. Evidence for an ester bond between thrombin and heparin cofactor
Sanchez et al. Proteolytic specificity of two hemorrhagic factors, LHF-I and LHF-II, isolated from the venom of the bushmaster snake (Lachesis muta muta)
Samel et al. Metalloproteinase with factor X activating and fibrinogenolytic activities from Vipera berus berus venom
Pirkle et al. Catroxobin, a weakly thrombin-like enzyme from the venom of Crotalus atrox. NH2-terminal and active site amino acid sequences
US5447911A (en) Ghilanten antimetastatic principle from the south american leech, Haementeria ghilianii
US5260060A (en) Fibrinolytic enzymes
EP0208785A1 (en) Fibrinophilic urokinase complex and process for its preparation
Chiou et al. Characterization of a protease with α-and β-fibrinogenase activity from the western diamondback rattlesnake, Crotalus atrox
EP0487660B1 (en) Treatment of thrombotic events
WO1998024917A1 (en) Thrombolytic agents with antithrombotic activity
Ohtani et al. Purification of a kininogenase from the venom of Agkistrodon caliginosus (Kankoku-Mamushi)
US6803038B1 (en) Use of bromelaine proteases for inhibiting blood coagulation
JPH0813271B2 (ja) 線溶活性蛋白質およびその製造法
Asghar et al. Human plasma kallikreins and their inhibition by amidino compounds
Miyagi et al. Purification of haemorrhagic proteinase from the venom of Agkistrodon caliginosus (Kankoku-Mamushi)