CN1146723A - 血栓溶解酶及其制备方法 - Google Patents

血栓溶解酶及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN1146723A
CN1146723A CN95192684A CN95192684A CN1146723A CN 1146723 A CN1146723 A CN 1146723A CN 95192684 A CN95192684 A CN 95192684A CN 95192684 A CN95192684 A CN 95192684A CN 1146723 A CN1146723 A CN 1146723A
Authority
CN
China
Prior art keywords
enzyme
glu
lys
gly
cys
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN95192684A
Other languages
English (en)
Inventor
E·D·斯维尔德洛夫
I·P·巴斯科娃
L·L·萨瓦洛娃
S·A·卢基扬诺夫
E·V·巴尔索娃
E·A·波格丹诺娃
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institut Bloorganicheskoi Khimit Immm Shemyakina I Ju A Ovchinnikova Ran
Original Assignee
Institut Bloorganicheskoi Khimit Immm Shemyakina I Ju A Ovchinnikova Ran
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institut Bloorganicheskoi Khimit Immm Shemyakina I Ju A Ovchinnikova Ran filed Critical Institut Bloorganicheskoi Khimit Immm Shemyakina I Ju A Ovchinnikova Ran
Publication of CN1146723A publication Critical patent/CN1146723A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6402—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from non-mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

一种能水解在合成的底物中、稳定的纤维蛋白中和其D-D-片断中的外-和内-ε-(γ-Glu)-Lys-异肽键的血栓溶解酶，其部分氨基酸序列和与其相应的基因及两个来自同一家族的附加基因的结构，并且可藉在蛋白质基本结构中的15、21、24、28、33、46、49、50位上存在甘氨酸残基来辨认。一种从医用水蛭唾液腺分泌物或含这种分泌物的制剂中制备权利要求1的血栓溶解酶的方法，对固定在固体载体上的针对天然酶的抗体进行亲合色谱处理，随后用离子交换色谱法和凝胶过滤法对酶进行提纯。

Description

血栓溶解酶及其制备方法
本发明的领域
本发明涉及医学领域中的止血术、药理学，在临床和实验药物上用于作为血栓溶解生物活性制剂。
已有文献
目前对医用水蛭唾液腺分泌物的应用停留在一系列作为用于制备具有血栓溶解、纤维蛋白溶解活性的生物活性物质的各种源物质上，这些源物质仍在补充之中。对作为生物活性物质源物质的医用水蛭的天然分泌物的实际兴趣是由于在水蛭疗法的水蛭吸血法中使用医用水蛭的血栓溶解效应时，确定了由不同病因引起的血栓性静脉炎的治疗效应的依赖性(Zaitsev G.B.“血栓静脉炎”，1947，Medgiz，莫斯科，p.78)。
医用水蛭唾液腺分泌物的应用是由于发现了转变为新性质的新的机理。
当用酪蛋白和非稳定的纤维蛋白作为底物时，分析医用水蛭唾液腺分泌物的性能表明它几乎不具有蛋白水解活性。然而，当医用水蛭唾液腺分泌物在与交联着因子XIIIa的不溶性稳定纤维蛋白的温育过程中，纤维蛋白能转变成可溶性状态，并且纤维蛋白的稳定程度越高(即在稳定的纤维蛋白制备物中存在较多的ε-(γ-Glu)-Lys-异肽键)，转变的程度就越大。这个初看起来不合理的见解，我们解释为是由于在水蛭分泌物的组成中存在一种酶，该酶特别地水解稳定化纤维蛋白中的异肽键，而对不存在这些异肽键的非稳定化纤维蛋白不起作用。这种酶称为去稳定酶(destabilase)(Biokhimiya，50，1985，Nauka，莫斯科，pp.424-431)。
已知的溶解血栓和溶解纤维蛋白的酶对纤维蛋白中肽键的水解有催化作用，与具有ε-(γ-Glu)-Lys-异肽键的“交联”纤维蛋白的程度无关，所述的异肽键是由于转肽酶、因子XIIIa的作用形成的。通常，与非稳定的纤维蛋白相比，与异肽键“交联”的或稳定化的纤维蛋白更能耐受蛋白水解酶的影响。同时，非稳定纤维蛋白能变成可溶状态，这不仅是由于纤维蛋白溶解酶刺激的蛋白水解作用的结果，也是非特异性试剂作用的结果，这些非特异性试剂会削弱纤维蛋白单体之间的离子性的、疏水性和H-O-的相互作用。
本发明的描述
本发明揭示了一种物质、它的性能以及制备能溶解血栓，并与按分子量和氨基酸序列从医用水蛭获得的已知制剂不同的，具有酰胺分解作用的外切异肽酶和内切异肽酶活性的血栓溶解酶的方法。
所述制备去稳定酶的方法按下述方式进行。
将医用水蛭的提取液进行亲合色谱处理，所述色谱是在含有固定在琼脂糖凝胶(sepharose)4B上针对去稳定酶的抗体柱上进行的。柱由0.02M的tris-HCl缓冲液(pH＝7.4)平衡。未交联的蛋白质用缓冲液洗涤，而去稳定酶用含0.3MNaCl的同样缓冲液洗脱。所得的制剂再次在含CM-三丙烯酸类吸着剂、用0.02Mtris-HCl缓冲液(pH＝7.4)平衡的柱上进行色谱处理。所需产物用溶解在同样0.02Mtris-HCl缓冲液中的0.05M-0.20M NaCl洗脱。收集含最终产物的组分，在Superose-12上凝胶过滤进行脱盐，冷冻干燥。结果，所得的制剂含100％的活性物质。纯度用电泳法加以确定。
基本结构。为了鉴定基本结构，在含Aquapore RP-300(4.6×100)的反相柱上以0-60％的乙腈梯度，对酶进行色谱处理60分钟。确定了去稳定酶的N-末端序列。确定了苏氨酸为N-末端氨基酸。然后进行去稳定酶的溴化氰(CNBr)水解，所得的混合物再次在同样的柱上在同样的条件下进行色谱处理。结果获得了四个肽片断。确定了第一片断的氨基酸序列，它由25个氨基酸残基组成，且在NH2-末端含有苏氨酸残基：Thr Val Pro Ser Asp Cys Leu Arg Cye IleCys Gln Val Glu Gly Cys Asn Asn Glu Ile Gly Arg Cys Gly Met.
对第二片断，确定了来自N-末端的，在NH2-末端为天冬氨酸的28个氨基酸序列：Asp Ala Gly Ser Leu Ser Cys Gly Pro Tyr Gln Ile Lys Glu Pro Tyr X Ile AspX Gly Arg Pro Gly Gly X Tyr Gln。
对第三片断，确定了来自N-末端的，在NH2-末端为天冬氨酸的24个氨基酸残基的氨基酸序列：Asp Arg Tyr Ala Pro Pro Cys Thr Gly Gly Arg Gln Pro ThrCys Gln Asp Tyr Ala Lys Ile His Asn Met。
对第四片断，确定了来自N-末端的，10个氨基酸残基的部分序列：Gly ProAsn Gly Cys Gln Ser Leu Asn Asn。
甘氨酸是N-末端氨基酸。
使用标准方法将m-RNA从医用水蛭中分离出来。使用逆转录在其基础上合成第一条c-DNA链。利用前一步骤获得的第一条c-DNA链和根据去稳定酶氨基酸序列选择的引物进行聚合酶链反应进行了扩增编码去稳定酶的DNA片断。结果获得了预定长度为102核苷酸对的DNA片断。按标准方法(Maniatia等人，982；Tabor，Richardson，1987)，对所得的DNA片断进行克隆和测序。测序了10个独立的克隆，结果检测到两个不同的DNA序列-DS1和DS2。DS1和DS2的核苷酸序列不同可以得出这样的结论，即在水蛭基因组中存在有对同类蛋白质进行编码的基因族。
将DSl部分序列和DS2全长核苷酸序列显示如下。DSl核苷酸序列：引导序列：ATG AAT TAC GTT ATC TTT GTG GTC TTA GTG GCA CTT TAC GTC              14Met Asn Tyr Val Ile Phe Val Val Leu Val Ala Leu Tyr ValATC GAC GTA GCG AAG TGC                                              20Ile Asp Val Ala Lys Cys结构部分：ACC GTT CCA TCC GAC TGC TTG AGT TGC ATT TGC GAG GTA GAG              34Thr Val Pro Ser Asp Cys Leu Ser Cys Ile Cys Glu Val GluGGA TGT GAC AAA GAG ATT GGA AGG TGC GGC GAT GAC GCA GGA              48Gly Cys Asp Lys Glu Ile Gly Arg Cys Gly Asp Asp Ala GlyAGT CTG AGC TGT GGT CCT...                                           62Ser Leu Ser Cys Gly Pro...DS2核苷酸序列：引导序列：ATG ATC ATT GCA ATT TAT GTT TCC CTA GCT CTT CTA ATC GCC              14Met Ile Ile Ala Ile Tyr Val Ser Leu Ala Leu Leu Ile AlaTCT GTC GAG GTG AAT AGC                                              20Ser Val Glu Val Asn Ser结构部分：CAA TTC ACT GAT TCT TGC CTT CGG TGT ATT TGC AAG GTG GAA              34Gln Phe Thr Asp Ser Cys Leu Arg Cys Ile Cys Lys Val GluGGA TGT GAC AGT CAA ATT GGA AAA TGT GGA ATG GAT GTT GGA              48Gly Cys Asp Ser Gln Ile Gly Lys Cys Gly Met Asp Val GlyAGC TTG AGT TGC GGA CCA TAC CAG ATT AAG AAA CCG TAG TGG                62Set Leu Ser Cys Gly Pro Tyr Gln Ile Lys Lys Pro Tyr TrpATT GAT TGT GGA AAA CCA GGG GGA GGT TAC GAA TCA TGC ACA                76Ile Asp Cys Gly Lys Pro Gly Gly Gly Tyr Glu Ser Cys ThrAAA AAT AAA GCC TGT TGA GAG ACT TGT GTG AGA GCT TAC ATG                90Lys Asn Lys Ala Cys Ser Glu Thr Cys Val Arg Ala Tyr MetAAG AGG TAT GGA ACC TTC TGC ACA GGT GGA CGA ACC CCA ACC               104Lys Arg Tyr Gly Thr Phe Cys Thr Gly Gly Arg Thr Pro ThrTGC CAG GAT TAT GCT AGG ATT CAT AAC GGT GGA CCA CGC GGT               118Cys Gln Asp Tyr Ala Arg Ile His Asn Gly Gly Pro Arg GlyTGC AAG AGT TCT GCT ACT GTT GGT TAC TGG AAC AAG GTA CAG               130Cys Lys Ser Ser Ala Thr Val Gly Tyr Trp Ash Lys Val GlnAAA TGT TTG AGA                                                       136Lys Cys Leu Arg
实施本发明的最佳方法
用下述的具体实施例说明制备去稳定酶的方法。实施例1
将饥饿至少三个月的医用水蛭通过绞肉机，用生理盐水进行提取。将提取液施加到含有固定在琼脂糖凝胶(sepharose)4B上的针对去稳定酶抗体的柱上，所述的柱用0.02M tris-HCl缓冲液(pH＝7.4)平衡。酶用溶于0.02M tris-HCl缓冲液(pH＝7.4)的0.3M NaCl洗脱。收集组分。将所得的溶液(8ml，蛋白质浓度为0.5mg/ml)施加到含CM-三丙烯酸类吸着剂，用0.02M tris-HCl缓冲液(pH＝7.4)平衡的柱上。去稳定酶在NaCl梯度为0.05-0.20M(图1)下进行洗脱。用Superose-12进行凝胶过滤脱盐。由组分(底物L-γ-Glu-pNA)的酰胺分解活性确定对应于去稳定酶的峰位置，它为3.10cat/mg(图2)。
该方法可以使酶纯度提高为最初提取液中的2400倍。蛋白质的产量为最初蛋白质混合物的0.1％。制剂的均一性由聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定。实施例2
将饥饿不少于4个月的医用水蛭捣碎，用生理盐水提取。将提取液施加到含有固定在琼脂糖6B上的针对去稳定酶的抗体柱上，所述的柱用0.02M tris-HCl缓冲液(pH＝7.2)平衡。用溶于0.02M tris-HCl缓冲液(pH＝7.2)的0.2M NaCl洗脱去稳定酶。合并具有酰胺分解活性的组分(底物ε-γ-Glu-pNa)，然后通过用0.02M tris-HCl缓冲液(pH＝7.2)平衡的含DEAE-交联葡聚糖凝胶(Sephadex)A-L50的柱。将所得的组分施加到含CM-纤维素的柱上，用0.02M tris-HCl缓冲液(pH＝6.5)以0.1-0.3M的NaCl梯度进行洗脱。
合并具有酰胺分解活性的组分，通过交联葡聚糖凝胶(Sephadex)G-25进行凝胶过滤脱盐。
结果可达2500倍的纯度。去稳定酶(底物L-γ-Glu-pNA)的最终酰胺分解活性为7.10-9cat/mg。
蛋白质的产量为最初蛋白质混合物含量的0.12％。酶的均一性用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定。
通过对特征为高含量半胱氨酸残基的基本结构的研究，已获得了新血栓溶解酶即去稳定酶的物理化学、动力学性能，下述的这些性能可以用来鉴定它的特征。
UV-光谱。在λ＝278nm处有最大吸收的特征。
分子质量。单体去稳定酶的分子质量为12600±300道尔顿(Da)。它是用Superose-12(0.02M tris-HCl，pH＝7.0)柱上的高效凝胶过滤法和含1％SDS的4-16％PAAG的梯度电泳法测定的。
异肽酶活性。异肽酶活性是由酶水解天然底物即稳定化纤维蛋白的有限蛋白水解产物(以它的D-片断(D-D-二聚体)二聚体形式，其中纤维蛋白的γ-γ-键之间存在异肽键)中的异肽键的能力加以测定的(Thromb.Res.，71，1993，Elsevier Science Ltd.，US，pp.241-244)。为此，在10-70小时内用在0.02M tri-HCl缓冲液(pH＝8.0)中的50μg  D-D-二聚体与0.1-2.0μg的酶进行温育。温育混合物的总体积为100μl。反应结果，观察到在D-D-二聚体中的异肽键的水解和D-单体的形成，并可使用PAAG电泳法监视其累积过程。业已确定，新的蛋白质引起了稳定化纤维蛋白凝块的溶解，使片断D二聚体和二异肽γ-Glu-ε-Lys中的γ-Glu-ε-Lys-异肽键发生水解。
酰胺分解活性。酶的酰胺分解活性是根据Baskova I.P.等人的方法(Biokhimiya，55，1990，Nauka，莫斯科，pp.674-679)通过形成硝基苯胺而水解γ-Glu-pNA中酰胺键的能力加以测定的。为此，将10-100μl的酶溶液加入含0.02M tris-HCl缓冲液(pH＝8.0)和0.05mg/ml γ-Glu-pNA、总体积为0.5ml的样品中，然后在25℃下温育5-30分钟。在405nm的波长下用分光光度法对反应进行监测。
业已确定，新的酶对在γ-Glu-丹酰尸胺(dansylcadaverine)中的和在P1位置上含碱性或疏水性氨基酸的胰蛋白酶和糜蛋白酶的低分子量底物中的酰胺键有水解作用(Blood Coagulation and Fibrinolysis，2，1990，RapidCommunications of Oxford Ltd.，GB，pp.167-172)。
热稳定性。在22-37℃下80小时、在7℃下15天和在75℃下15分钟，酶都能保持活性。
pH稳定范围。pH为1.5-8.5(在37℃下7天，底物γ-Glu-pNA)时，酶能保持活性。
基本结构。为了鉴定基本结构，在含Agmapoke RP-300(4.5×100)的反相柱上以0-60％的乙腈梯度，在1分钟内对酶进行色谱处理。确定了去稳定酶的N-末端序列。鉴定了41个氨基酸残基。确定了苏氨酸为N-末端氨基酸。然后去稳定酶发生CNBr水解，所得的混合物再次在同样的柱上在同样的条件下进行色谱处理。结果获得了四个肽片断。完整地确定了第一片断的氨基酸序列，它由25个氨基酸残基组成，在N-末端有一苏氨酸残基。
对于第二片断，确定了来自N-末端的28个氨基酸的氨基酸序列，NH2-末端有天冬氨酸。
对于第三片断，确定了来自N-末端的24个氨基酸残基的氨基酸序列，NH2-末端有天冬氨酸。
对于第四片断，确定了来自N-末端的10个氨基酸残基和来自C-末端的5个氨基酸残基。甘氨酸是N-末端氨基酸。
血栓溶解活性。去稳定酶的血栓溶解活性是在动物(体重为200g的鼠)实验中加以分析的。在动物的颈静脉中注射玻璃激活(glass-activated)的血清，随后在颈静脉的切面上进行(静脉)停滞处理，从而刺激血栓形成(Circulation，20，1959，American Heart Association，US，pp.864-867)。在静脉的相应切面上施加结扎线来固定形成的血栓。参照动物接受0.2ml生理盐水的静脉内注射，而实验动物接受含0.72mg蛋白质同样体积的去稳定酶溶液的注射。注射制剂67小时后观察到血栓溶解达85％，注射137小时后达100％。在动物参照组中，注射生理盐水67小时后观察到自发的血栓溶解达17％，注射137小时后达23％(Blood coagulation and Fibrinolysis，2，1990，Rapid Communications of Oxford Ltd.，GB，pp.167-172)。
工业应用
本发明可作为临床和实验药物的血栓溶解生物活性制剂。

Claims (2)

1.一种能水解在合成的底物中、稳定的纤维蛋白中和其D-D-片断中的外-和内-ε-(γ-Glu)-Lys-异肽键的血栓溶解酶，其特征在于其部分氨基酸序列和与其相应的基因及两个来自同一家族的附加基因的结构，并且可藉在蛋白质基本结构中的15、21、24、28、33、46、49、50位上存在甘氨酸残基来辨认。
2.一种从医用水蛭唾液腺分泌物或含这种分泌物的制剂中制备权利要求1的血栓溶解酶的方法，其特征在于，对固定在固体载体上的针对天然酶的抗体进行亲合色谱处理，随后用离子交换色谱法和凝胶过滤法对酶进行提纯。
CN95192684A 1994-12-23 1995-05-25 血栓溶解酶及其制备方法 Pending CN1146723A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU94043698 1994-12-23
RU94043698A RU2112528C1 (ru) 1994-12-23 1994-12-23 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТА ДЕСТАБИЛАЗЫ, ОБЛАДАЮЩЕГО ФИБРИНОЛИТИЧЕСКОЙ, ТРОМБОЛИТИЧЕСКОЙ, ЭНДО- И ЭКЗО- ε(γ GLY)-LYS-ИЗОПЕПТИДАЗНОЙ И АМИДОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN1146723A true CN1146723A (zh) 1997-04-02

Family

ID=20163104

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN95192684A Pending CN1146723A (zh) 1994-12-23 1995-05-25 血栓溶解酶及其制备方法

Country Status (5)

Country Link
EP (1) EP0753304A1 (zh)
JP (1) JPH10501422A (zh)
CN (1) CN1146723A (zh)
RU (1) RU2112528C1 (zh)
WO (1) WO1996019999A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101857634A (zh) * 2010-05-17 2010-10-13 成都瑞盛高科技有限责任公司 纤维蛋白溶解系统激活蛋白

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2268009A1 (en) * 1996-10-15 1998-04-23 The Procter & Gamble Company Detergent compositions containing isopeptidase
US6133010A (en) * 1999-07-08 2000-10-17 Biotec Asa Chlamysin B antibacterial protein, a protein gene for and an expression system for same
FR2843304B1 (fr) * 2002-08-07 2005-12-16 Ricarimpex Extraits de sangsues pour stents
FR2843883B1 (fr) * 2002-08-30 2004-11-26 Ricarimpex Extraits de sangsues pour psoriasis

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0347376B1 (en) * 1988-06-11 1994-03-23 Ciba-Geigy Ag Novel polypeptides with an anticoagulant activity
DE3939801A1 (de) * 1989-12-01 1991-06-06 Basf Ag Neue proteine und ihre herstellung

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101857634A (zh) * 2010-05-17 2010-10-13 成都瑞盛高科技有限责任公司 纤维蛋白溶解系统激活蛋白
CN101857634B (zh) * 2010-05-17 2012-10-03 成都瑞益科技有限责任公司 纤维蛋白溶解系统激活蛋白

Also Published As

Publication number Publication date
EP0753304A1 (en) 1997-01-15
JPH10501422A (ja) 1998-02-10
WO1996019999A1 (fr) 1996-07-04
RU94043698A (ru) 1996-10-20
RU2112528C1 (ru) 1998-06-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Moore Jr et al. Proteolytic modification of the. beta. nerve growth factor protein
FI94487C (fi) Menetelmä oleellisesti puhtaan, tekijä Xa:ta inhiboivan proteiinimaisen aineen eristämiseksi Haementeria ghilianii -iilimadon syljestä
Hill et al. High level expression and characterisation of Plasmepsin II, an aspartic proteinase from Plasmodium falciparum
Križaj et al. The primary structure of ammodytin L, a myotoxic phospholipase A2 homologue from Vipera ammodytes venom
Gray et al. Conotoxin MI. Disulfide bonding and conformational states.
Takahashi et al. Purification and characterization of a proteinase in the venom of Trimeresurus flavoviridis: Complete separation of the enzyme from hemorrhagic activity
Odani et al. Purification and complete amino acid sequence of novel β2-microglobulin
Hall et al. Amino acid sequence around the thiolester of α2-macroglobulin from plasma of the crayfish, Pacifastacus leniusculus
Uchikoba et al. Cleavage specificity of cucumisin, a plant serine protease
Miyata et al. Coagulation factor XII (Hageman factor) Washington DC: inactive factor XIIa results from Cys-571----Ser substitution.
Yokosawa et al. Affinity chromatography of trypsin and related enzymes III. Purification of Streptomyces griseus trypsin using an affinity adsorbent containing a tryptic digest of protamine as a ligand
Chen et al. Isolation of an acidic phospholipase A2 from the venom of Agkistrodon acutus (five pace snake) and its effect on platelet aggregation
Rosso et al. Characterization of ten proteins from the venom of the Moroccan scorpion Androctonus mauretanicus mauretanicus, six of which are toxic to the mouse
PAN et al. Structural characterization of human interferon γ Heterogeneity of the carboxyl terminus
CN1146723A (zh) 血栓溶解酶及其制备方法
Bedi et al. A new vasopeptide formed by the action of a Murphy-Sturm lymphosarcoma acid protease on rat plasma kininogen
Brankamp et al. Studies on the anticoagulant, antimetastatic and heparin-binding properties of ghilanten-related inhibitors
Owen et al. Evidence for an ester bond between thrombin and heparin cofactor
JPH02147954A (ja) ヒトの血清または血漿におけるオステオカルシンの決定法
Tan et al. Enzymatic and toxic properties of Ophiophagus hannah (king cobra) venom and venom fractions
Kini et al. Non-enzymatic inhibitors of coagulation and platelet aggregation from Najanigricollis venom are cardiotoxins
Trikha et al. Purification and characterization of fibrolase isoforms from venom of individual southern copperhead (Agkistrodon contortrix contortrix) snakes
Chiou et al. Characterization of a protease with α-and β-fibrinogenase activity from the western diamondback rattlesnake, Crotalus atrox
Chapus et al. Further studies on the activation of bovine pancreatic procarboxypeptidase A by trypsin
Stein Isolation of natural proteins

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C01 Deemed withdrawal of patent application (patent law 1993)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication