RU2111972C1 - СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДА δ СНА - Google Patents
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДА δ СНА Download PDFInfo
- Publication number
- RU2111972C1 RU2111972C1 RU95105313/04A RU95105313A RU2111972C1 RU 2111972 C1 RU2111972 C1 RU 2111972C1 RU 95105313/04 A RU95105313/04 A RU 95105313/04A RU 95105313 A RU95105313 A RU 95105313A RU 2111972 C1 RU2111972 C1 RU 2111972C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- gly
- ala
- peptide
- boc
- pentapeptide
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Использование: в медицинской химии при получении пептипов, обладающих широким спектром физиологической активности. Сущность изобретения: усовершенствованный способ получения пептида δ-сна: Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu (I), включающий конденсацию пентафторфенилового эфира Boc-защищенного тетрапептида BocTrpAlaGlyGlyOPfp (II) с пентапептидом AspAlaSer(X)GlyGlu (III), где X - ацетил или формил, в диметилформамиде в присутствии N-метилморфолина, удаление Boc-группы муравьиной кислотой при температуре от -2 до +8oC, снятие ацетильной или формильной группы в щелочных условиях и хроматографическую очистку целевого продукта; гомогенный по данным ТСХ пептид δ-сна получают с выходом 65 - 80%. 2 табл., 1 ил.
Description
Изобретение относится к области природных физиологически активных пептидов, конкретно к усовершенствованному способу получения пептида δ -сна формулы I:
TrpAlaGlyGlyAspAlaSerGlyGlu
Пептид δ-сна обладает антистрессорной [1], противоалкогольной [2], антиметастатической [3] и другими видами биологической активности.
TrpAlaGlyGlyAspAlaSerGlyGlu
Пептид δ-сна обладает антистрессорной [1], противоалкогольной [2], антиметастатической [3] и другими видами биологической активности.
В основе известных способов получения пептида δ-сна лежит конденсация Nα-защищенного тетрапептида TrpAlaGlyGly с пентапептидом последовательности AspAlaSerGlyGlu. Известен способ [4], согласно которому пептид δ-сна получают конденсацией NαZ-защищенного тетрапептида, активированного по C-концу методом смешанных ангидридов с изобутилхлорформиатом, с защищенным (бензильными группировками) пентапептидом структуры Asp(OBzl)AlaSer(Bzl)ClyGlu(OBzl)2 с последующим гидрированием полученного защищенного нонапептида над Pd-чернью для снятия защитных групп и очисткой целевого продукта на DEAE-сефадексе. Использование процесса гидрирования для снятия защитных групп приводит к частичному гидрированию индольного кольца триптофана и получению ряда других трудноотделимых примесей [5, 6]. Кроме того, процесс гидрирования в данном случае плохо воспроизводим и трудно доходит до конца из-за осаждения на катализаторе из раствора продуктов неполного гидрирования. Выход пептида δ-сна не превышает 56%.
Наиболее близким к заявляемому по технической сущности является способ получения пептида δ-сна, включающий конденсацию п-нитрофенилового эфира NαZ-защищенного тетрапептида с незащищенным пентапептидом в водно-диоксановой среде, снятие защитной Z-группы гидрированием над Pd-чернью и очистку целевого пептида ионообменной хроматографией [7]. Использование процесса гидрирования для снятия защитных групп, как и в предыдущем способе, приводит к частичному гидрированию индольного кольца триптофана и получению ряда других трудноотделимых примесей [5, 6]. Способ позволяет получать пептид δ-сна с выходом 52%.
Предлагаемый усовершенствованный способ получения пептида δ-сна основан на конденсации пентафторфенилового эфира Boc-защищенного тетрапептида формулы II
BocTrpAlaGlyGlyOPfp
с пентапептидом формулы III
где X - ацетил или формил,
в диметилформамиде в присутствии N-метилморфолина с последующим удалением Boc-группы с помощью муравьиной кислоты при температуре от -2 до +8oC, затем ацетильной или формильной группы - в щелочных условиях, и хроматографической очисткой целевого продукта.
BocTrpAlaGlyGlyOPfp
с пентапептидом формулы III
где X - ацетил или формил,
в диметилформамиде в присутствии N-метилморфолина с последующим удалением Boc-группы с помощью муравьиной кислоты при температуре от -2 до +8oC, затем ацетильной или формильной группы - в щелочных условиях, и хроматографической очисткой целевого продукта.
Отличия заявляемого способа от известного [7] заключаются в том, что исходный тетрапептид используется в виде пентафторфенилового эфира и имеет Boc-защиту по N-концу, а исходный пентапептид имеет ацильную защиту по гидроксильной группе серина и конденсацию осуществляют в присутствии N-метилморфолина в диметилформамиде (ДМФА). Кроме того, для снятия защитных групп не используется процесс гидрирования. Boc-группу отщепляют с помощью муравьиной кислоты при температуре от -2 до +8oC, а ацильную группу - в щелочных условиях.
Использование вышеизложенных отличий в заявляемом способе позволяет предотвратить ряд побочных процессов, что дает возможность получать пептид δ-сна с выходом не менее 70%.
Преимуществом заявляемого способа является отсутствие процесса гидрирования для снятия защитных групп на заключительной стадии, т.к. использование последнего может приводить к частичному гидрированию индольного кольца триптофана и получению ряда других трудноотделимых примесей [5, 6]. В отличие от известных в заявляемом способе удаление защитных групп осуществляется в более мягких, легко контролируемых и воспроизводимых условиях.
Преимущества заявляемому способу придает также и то обстоятельство, что исходный пентапептид вводится в синтез в виде N-метилморфолиновой соли (которая образуется после того, как в раствор пентапептида в диметилформамиде добавляется N-метилморфолин). Существенное значение для синтеза имеет высокая растворимость N-метилморфолиновой соли в ДМФА, обеспечивающая высокий выход при образовании пептидной связи.
Известно, что при использовании в синтезе пептидов со свободными карбоксильными группами (в нашем случае - пентапептид) могут протекать процессы переэтерификации [8] или образования смешанных ангидридов, приводящие к получению пептидов незаданной структуры. Однако в описываемом способе вышеуказанные реакции не протекают.
Обычным способом защиты гидроксильной группы серина является введение бензильной или трет-бутильной группы [5]. В заявляемом способе используется ацильная защитная группа, но это не приводит к протеканию побочных процессов, что, по-видимому, обусловлено структурой пентапептида.
Известно, что при наличии в структуре пептида последовательности AspAla могут протекать реакции транспептидации и образования имида [9]. Кроме того, наличие свободной карбоксильной группы может приводить в присутствии активированного эфира N-концевого компонента к переэтерификации по β-карбоксильной группе аспарагиновой кислоты [10]. Однако в заявляемых условиях синтеза вышеупомянутые побочные процессы идут крайне незначительно, что подтверждается данными ТСХ и высоким выходом конечного продукта.
Также неочевидным является использование Boc-группы для защиты остатка триптофана. Известно, что при деблокировании Boc-защищенных пептидов могут получаться трудноотделимые продукты трет-бутилирования триптофана [6, 8]. В заявляемом способе благодаря структуре промежуточного пептида и подобранным условиям деблокирования удается избежать побочного процесса трет-бутилирования.
Необходимо также отметить, что при синтезе триптофансодержащих пептидов остаток триптофана часто защищают по индольному азоту для предотвращения протекания побочных реакций с участием гетероцикла [9]. В заявляемом способе используется пентафторфениловый эфир триптофансодержащего тетрапептида, при этом при его получении и использовании не требуется защита индольного атома азота.
Заявляемый способ осуществляют следующим образом (см. чертеж). Сначала получают тетрапептид и пентапептид методом ступенчатого наращивания пептидной цепи, с использованием активированных эфиров аналогично [4]. Пентафторфениловый эфир Boc-защищенного тетрапептида (II) получают реакцией с дипентафторфенилкарбонатом в ДМФА в присутствии N-метилморфолина. Пентапептид, ацетилированный по серину (III), получают гидрированием над Pd-чернью защищенного пентапептида BocAsp(OBzl)AlaSer(Bzl)GlyGlu(OBzl)2 в присутствии уксусной и/или муравьиной кислоты. Структура пентапетида подтверждена данными масс- и ЯМР-спектроскопии.
Пентапептид III растворяют в ДМФА, добавляют N-метилморфолин и образовавшуюся N-метилморофолиновую соль пентапептида конденсируют с пентафторфениловым эфиром Boc-защищенного тетрапетида в течение 16-47 ч, после чего растворитель упаривают. Полученный защищенный нонапептид деблокируют в муравьиной кислоте, а затем снимают ацетильную или формильную группу в щелочных условиях с использованием 0,1 - 2 М раствора NH4OH, NaOH или любого другого подходящего щелочного агента. Очистку пептида δ-сна проводят хроматографией на ДЕАЕ-сефадексе.
Чистота полученного по заявляемой схеме пептида δ-сна подтверждена данными ЯМР-1H-спектроскопии и ВЖХ на обращенной фазе.
Для ТСХ используют пластинки с силикагелем фирмы Merck N 5724 и хроматографические системы, указанные в табл. 1.
Обнаружение веществ проводят путем последовательной обработки пластинок хлором, а затем 2% водным раствором крахмала, содержащим 1% NaI и 0,1% NaN3. Упаривание растворов проводят на роторном испарителе при 30-40oC.
В табл. 2 приведены физико-химические характеристики целевого продукта и промежуточных пептидов, т.к. все промежуточные соединения являются новыми.
Изобретение иллюстрируется нижеследующими примерами.
Пример 1. BocTrpAlaGlyGly (IV).
14,2 г (0,05 моль) HBr•AlaGlyGly растворяют в 140 мл воды, добавляют 4,2 г (0,05 моль) NaHCO3, а затем - 28,2 г (0,06 моль) BocTrpOPfp в 200 мл ДМФА. Смесь перемешивают в течение 12 ч. Растворители упаривают досуха, полученное масло растворяют в 100 мл этилацетата, промывают 2 • 100 мл 10% раствора лимонной кислоты, затем - 2 • 100 мл 10% раствора NaCl, этилацетатный слой высушивают над Na2SO4 и упаривают. Получают 22,8 г (93%) пептида IV.
Пример 2. BocTrpAlaGlyGlyOPfp (II).
К 20 г (0,041 моль) пептида IV в 100 мл ДМФА добавляют 17,7 г (0,045 моль) дипентафторфенилкарбоната и 4,5 мл (0,041 моль) N-метилморфолина. Смесь перемешивают 12 ч, упаривают досуха и перекристаллизовывают из этилацетата. Получают 26,4 г (98%) пептида II.
Пример 3. AspAlaSer(Ac)GlyGlu (IIIa).
46,9 г (0,05 моль) пентапептида BocAsp(OBzl)AlaSer(Bzl)GlyGlu(OBzl)2 растворяют в смеси 500 мл уксусной и 50 мл муравьиной кислот. Добавляют 5 г 10% Pd-черни и гидрируют 80 ч. Смесь упаривают досуха, полученное масло обрабатывают этилацетатом. Получают 30,7 г (97%) пептида IIIa с небольшой примесью пептида IIIb.
Пример 4. AspAlaSer(Form)GlyGlu (IIIb).
К 46,9 г (0,05 моль) пентапептида BocAsp(OBzl)AlaSer(Bzl)GlyGlu(OBzl)2 добавляют 500 мл муравьиной кислоты и гидрируют в течение 60 ч над 5 г Pd-черни. По завершении гидрирования катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают досуха, полученное масло обрабатывают этилацетатом и получают 26,5 г (98%) пептида IIIb.
Пример 5. CF3COOH • AspAlaSer(Form) GlyGlu.
К 46,9 г (0,05 моль) пентапептида BocAsp(OBzl)AlaSer(Bzl)GlyGlu(OBzl)2 добавляют 500 мл муравьиной кислоты и гидрируют в течение 80 ч над 5 г Pd-черни. По завершении гидрирования катализатор отфильтровывают, к фильтрату добавляют 50 мл трифторуксусной кислоты и упаривают досуха. Полученное масло обрабатывают этилацетатом и получают 26,5 г (98%) трифторацетата пентапептида IIIb.
Пример 6. BocTrpAlaGlyGlyAspAlaSer(Form) GlyGlu (Vb).
2,37 г (3,6 ммоль) пептида II растворяют в 40 мл абс. ДМФА, добавляют 1,66 г (3 ммоль) пептапептида IIIb и 1,32 мл (12 ммоль) N-метилморфолина. Реакционную смесь перемешивают 18 ч, упаривают досуха и полученное масло обрабатывают 100 мл смеси этилацетат : уксусная кислота 10 : 1. Образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают на фильтре 100 мл этилацетата, затем - 50 мл диэтилового эфира и высушивают в вакууме. Получают 3,69 (95%) нонапептида Vb, гомогенного по ТСХ. Аналогично получают соединение Va с выходом 92%.
Пример 7. TrpAlaGlyGlyAspAlaSerGlyGlu (I).
К 2,59 г (2 ммоль) пептида Vb добавляют 40 мл муравьиной кислоты и оставляют на 24 ч при 0 - 4oC. Реакционную смесь упаривают досуха, к образовавшемуся пептиду добавляют 20 мл 5% аммиака и оставляют при 4oC на 10 ч. Затем пептид лиофилизуют и хроматографируют на ДЕАЕ-сефадексе А-25 в ацетатной форме в 0,3 М ацетате аммония. Фракции, содержащие пептид δ-сна, лиофилизиуют и получают 1,60 г (1,84 ммоль, 90%) пептида I.
Аналогично получают пептид I, исходя из нонапептида Va, с выходом 90%.
Таким образом, заявляемый способ позволяет получать с большим выходом пептид δ-сна высокой степени чистоты.
Claims (1)
- Способ получения пептида δ-сна формулы
Trp-Ala-Gly-Gly-Asp-Ala-Ser-Gly-Glu,
включающий конденсацию Nα-защищенного C-активированного тетрапептида Trp-Ala-Gly-Gly с пентапептидом Asp-Ala-Ser-Gly-Glu с последующим снятием защитных групп и хроматографической очисткой целевого продукта, отличающийся тем, что пентафторфениловый эфир Вос-защищенного тетрапептида формулы
Boc-Trp-Ala-Gly-Gly OPfp
конденсируют с пентапептидом формулы
где X - ацетил или формил,
в диметилформамиде в присутствии N-метилморфолина, удаление Вос-группы осуществляют с помощью муравьиной кислоты при температуре -2 ... +8oC, а снятие ацетильной или формильной группы - в щелочных условиях.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU95105313/04A RU2111972C1 (ru) | 1995-04-07 | 1995-04-07 | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДА δ СНА |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU95105313/04A RU2111972C1 (ru) | 1995-04-07 | 1995-04-07 | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДА δ СНА |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU95105313A RU95105313A (ru) | 1997-01-10 |
| RU2111972C1 true RU2111972C1 (ru) | 1998-05-27 |
Family
ID=20166533
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU95105313/04A RU2111972C1 (ru) | 1995-04-07 | 1995-04-07 | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДА δ СНА |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2111972C1 (ru) |
-
1995
- 1995-04-07 RU RU95105313/04A patent/RU2111972C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 1. Ulyaninsky L.S. et.al. Kosm Biol. Aviakosm.Med. 1990, v.3, p. 23 - 28. 2. Burov Y.V. et.al., Bull. Exp. Biol. Med. 1983, v.94,p. 1240-43. 3. Sukmkh G.T. et.al, Dokl. Biol. SSSR, 1985, v.278, p. 595-597. 4. Саргоян А.С. и др. Биоорганическая химия, 1981, т.7, с.1125-48. 5. Шредер З., Любке К. Пептиды, М.: Мир, 1967, с.200 - 280. 6. Bodanszky M., Principles of peptide sunthesis 1984, Springer Verlag, p.220. 7. Калихевич В.Н. и др. ЖОХ, 1981, т. 51, с. 1964-71. 8. Bodansky M. et.al., J. Org. cheu. 1975, v.40, p.2495-99. 9. Stewart J.M. et.al., Solig Phase Peptide Synthesis, 1989, Pierce cheuical Company, P. 18 - 23. 10. Пептиды. Основные методы образования пептидных связей. /Под ред. Гросс Э., Майенхофер И. - М.: Мир, 1983, с. 159 - 160. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU95105313A (ru) | 1997-01-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4713369A (en) | Oligopeptidylargininol derivatives and their homologs, a process for their preparation, their use and agents containing them | |
| US6235876B1 (en) | Liquid phase process for the preparation of GNRH peptides | |
| WO2001019849A1 (en) | A process for the preparation of h-tyr-d-ala-phe(f)-phe-nh¿2? | |
| US4638046A (en) | Retro-inverso C-terminal hexapeptide analogues of substance P | |
| JPS5973574A (ja) | 環状ジペプチド類 | |
| Katakai | Peptide synthesis using o-nitrophenylsulfenyl N-carboxy. alpha.-amino acid anhydrides | |
| Rodionov et al. | Cyclic dipeptides as building blocks for combinatorial libraries. Part 2: Synthesis of bifunctional diketopiperazines | |
| Li et al. | The synthesis of L-histidyl-L-phenylalanyl-L-ornithyl-L-tryptophyl-glycine and L-histidyl-D-phenylalanyl-L-ornithyl-L-tryptophyl-glycine and their melanocyte-stimulating activity | |
| US4797471A (en) | Peptide derivatives having an inhibitory action on hydroxylating enzymes, a process for their preparation, agents containing them, and their use | |
| RU2111972C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДА δ СНА | |
| LU85710A1 (fr) | Nouveaux derives de la gonadoliberine et procede pour leur preparation | |
| Hardy et al. | Use of NN′-isopropylidene dipeptides in peptide synthesis | |
| Stewart | Peptide synthesis with 1-Aminocyclopropane-1-carboxylic acid | |
| RU2111215C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДА δ- СНА | |
| EP0001174B1 (en) | A peptide and the salts thereof, processes for their preparation and compositions containing them | |
| HU197928B (en) | Process for the production poor in racemate of peptide intermediary of hormon synthesis of gonadorelin and gonadorelin analog | |
| JPH049800B2 (ru) | ||
| US3247180A (en) | Nonadecapeptides and intermediates for the preparation thereof | |
| US3790555A (en) | Octapeptide derivative of gonadotropinreleasing hormone | |
| KR20010041888A (ko) | 테트라펩티드의 제조 방법 | |
| US3812092A (en) | Intermediates in the preparation of secretin | |
| USRE29732E (en) | Tripeptide | |
| US3400118A (en) | Intermediates in the preparation of secretin | |
| US3767639A (en) | Process for the preparation of secretin | |
| SU664560A3 (ru) | Способ получени пептидов или их солей |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20060408 |