RU2111215C1 - СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДА δ- СНА - Google Patents
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДА δ- СНА Download PDFInfo
- Publication number
- RU2111215C1 RU2111215C1 RU95105312A RU95105312A RU2111215C1 RU 2111215 C1 RU2111215 C1 RU 2111215C1 RU 95105312 A RU95105312 A RU 95105312A RU 95105312 A RU95105312 A RU 95105312A RU 2111215 C1 RU2111215 C1 RU 2111215C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- gly
- peptide
- ala
- boc
- sleep
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение касается усовершенствованного способа получения пептида δ- сна TrpAlaGlyGlyAspAlaSerGlyGlu (I), обладающего широким спектром физиологической активности. Способ включает конденсацию пентафторфенилового эфира Boc-защищенного тетрапептида BocTrpAlaGlyGlyOPfp (II) с пентапептидом AspAlaSerGlyGlu (III), в диметилформамиде в присутствии N-метилформолина, удаление Boc-группы муравьиной кислотой при температуре (-2) - (+8)oC и хроматографическую очистку целевого продукта. Гомогенный по данным ТСХ пептид δ- сна получают с выходом 70 - 80%. 2 табл., 1 ил.
Description
Изобретение относится к области природных физиологически активных пептидов, конкретно, к усовершенствованному способу получения пептида δ-сна формулы I:
TrpAlaGlyGlyAspAlaSerGlyGlu
Пептид δ-сна обладает антистрессорной [1], противоалкогольной [2], антиметастатической [3] и другими видами биологической активности.
TrpAlaGlyGlyAspAlaSerGlyGlu
Пептид δ-сна обладает антистрессорной [1], противоалкогольной [2], антиметастатической [3] и другими видами биологической активности.
В основе известных способов получения пептида δ-сна лежит конденсация Nα-защищенного тетрапептида TrpAlaGlyGly с пентапептидом последовательности AspAlaSerGlyGlu. Известен способ [4], согласно которому пептид δ-сна получают конденсацией NαZ-защищенного тетрапептида, активированного по C-концу методом смешанных ангидридов с изобутилхлорформиатом, с защищенным (бензильными группировками) пентапептидом структуры Asp(OBzl)AlaSer(Bzl)GlyGlu(OBzl)2 с последующим гидрированием полученного защищенного нонапептида над Pd-чернью для снятия защитных групп и очисткой целевого продукта на ДЕАЕ-сефадексе. Использование процесса гидрирования для снятия защитных групп приводит к частичному гидрированию индольного кольца триптофана и получению ряда других трудноотделимых примесей [5, 6]. Кроме того, процесс гидрирования в данном случае плохо воспроизводим и трудно доходит до конца из-за осаждения на катализаторе из раствора продуктов неполного гидрирования. Выход пептида δ-сна не превышает 56%.
Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности является способ получения пептида δ-сна, включающий конденсацию п-нитрофенилового эфира NαZ-защищенного тетрапептида с незащищенным пентапептидом в водно-диоксановой среде, снятие защитной Z-группы гидрированием над Pd-чернью и очистку целевого пептида ионообменной хроматографией [7]. Использование процесса гидрирования для снятия защитных групп, также как и в предыдущем способе, приводит к частичному гидрированию индольного кольца триптофана и получению ряда других трудноотделимых примесей [5 и 6]. Способ позволяет получать пептид δ-сна с выходом 52%.
Предлагаемый усовершенствованный способ получения пептида δ-сна основан на конденсации пентафторфенилового эфира Boc-защищенного тетрапептида формулы II:
BocTrpAlaGlyGlyOPfp
с пентапептидом формулы III:
AspAlaSerGlyGlu
в диметилформамиде в присутствии N-метилморфолина с последующим удалением Boc-группы с помощью муравьиной кислоты при температуре (-2) - (+8)oC и хроматографической очисткой целевого продукта.
BocTrpAlaGlyGlyOPfp
с пентапептидом формулы III:
AspAlaSerGlyGlu
в диметилформамиде в присутствии N-метилморфолина с последующим удалением Boc-группы с помощью муравьиной кислоты при температуре (-2) - (+8)oC и хроматографической очисткой целевого продукта.
Отличия предлагаемого способа от известного [7] заключаются в том, что исходный тетрапептид используется в виде пентафторфенилового эфира и имеет Boc-защиту по N-концу, а конденсацию осуществляют в присутствии N-метилморфолина в диметилформамиде (ДМФА). Кроме того, для снятия защитной группы не используется процесс гидрирования: Boc-группу отщепляют с помощью муравьиной кислоты при температуре (-2) - (+8)oC.
Использование вышеизложенных отличий в предлагаемом способе позволяет предотвратить целый ряд побочных процессов, что дает возможностью получать пептид δ-сна с выходом не менее 70%.
Преимуществом предлагаемого способа является отсутствие процесса гидрирования для снятия защитных групп на заключительной стадии, т.к. использование последнего может приводить к частичному гидрированию индольного кольца триптофана и получению ряда других трудноотделимых примесей [5 и 6]. В отличие от известных в предлагаемом способе удаление защитной группы осуществляется в более мягких, легко контролируемых и воспроизводимых условиях.
Преимущества предлагаемому способу сообщает также и то, что исходный пентапептид вводится в синтез в виде N-метилморфолиновой соли (которая образуется после того как в раствор пентапептида в диметилформамиде добавляется N-метилморфолин). Существенное значение для синтеза имеет то, что N-метилморфолиновая соль пентапептида хорошо растворяется в диметилформамиде. Это обеспечивает высокий выход при образовании пептидной связи. В то же время известно, что соли карбоновых кислот с органическими аминами (циклогексиламином, дициклогексиламином, N-метилморфолином и др.) обладают пониженной растворимостью в органических растворителях, в том числе и в ДМФА.
Известно, что при использовании в синтезе пептидов со свободными карбоксильными группами (в нашем случае - пентапептид) могут протекать процессы переэтерификации [8] или образования смешанных ангидридов, приводящие к образованию пептидов незаданной структуры. Однако, в описываемом способе вышеуказанные реакции не протекают. Кроме того, к существенному снижению выхода целевого продукта и получению сложной смеси пептидов может приводить О-ацилирование гидроксильной группы серина пентафторфениловым эфиром [11]. Однако, условия конденсации, структура исходных пептидов и их хорошая растворимость обеспечивают отсутствие О-ацилирования.
Кроме того, известно, что при наличии в структуре пептида последовательности AspAla могут протекать реакции транспептидации и образования имида [9] . А наличие свободной карбоксильной группы может приводить к переэтерификации по β-карбоксильной группе аспарагиновой кислоты [10]. Однако, в предлагаемых условиях синтеза вышеупомянутые побочные процессы идут крайне незначительно, что подтверждается данными ТСХ и высоким выходом конечного продукта.
Также неочевидным является использование Boc-группы для защиты остатка триптофана. Известно, что при деблокировании Boc-защищенных пептидов могут получаться трудноотделимые продукты трет-бутилирования триптофана [6 и 8]. В предлагаемом способе благодаря структуре промежуточного пептида и подобранным условиям деблокирования удается избежать побочного процесса трет-бутилирования.
Необходимо также отметить, что при синтезе триптофансодержащих пептидов остаток триптофана часто защищают по индольному азоту для предотвращения протекания побочных реакций с участием гетероцикла [9]. В предлагаемом способе используется пентафторфениловый эфир триптофансодержащего тетрапептида, при этом при его получении и использовании не требуется защита индольного атома азота.
Предлагаемый способ осуществляют следующим образом (чертеж). Сначала получают тетрапептид и пентапептид методом ступенчатого наращивания пептидной цепи, с использованием активированных эфиров аналогично [4]. Пентафторфениловый эфир Boc-защищенного тетрапептида (II) получают реакцией с дипентафторфенилкарбонатом в ДМФА в присутствии N-метилморфолина. Пентапептид (III), получают гидрированием над Pd-чернью защищенного пентапептида BocAsp(OBzl)AlaSer(Bzl)GlyGlu(OBzl)2 в присутствии уксусной кислоты. Структура пентапептида III подтверждена данными масс- и ЯМР-спектроскопии.
Пентапептид III растворяют в ДМФА, добавляют N-метилморфолин и образовавшуюся N-метилморфолиновую соль пентапептида конденсируют с пентафторфениловым эфиром Boc-защищенного тетрапептида в течение 16-47 ч, после чего растворитель упаривают. Полученный защищенный нонапептид деблокируют в муравьиной кислоте. Очистку пептида δ -сна проводят хроматографией на ДЕАЕ-сефадексе.
Для ТСХ используют пластинки с силикагелем фирмы Merck N 5724 и хроматографические системы, указанные в табл. 1.
Обнаружение веществ проводят путем последовательной обработки пластинок хлором, а затем 2%-ным водным раствором крахмала, содержащим 1% NaI и 0,1% NaN3. Упаривание растворов проводят на роторном испарителе при 30-40oC.
В табл. 2 приведены физико-химические характеристики целевого продукта и промежуточных пептидов, т.к. промежуточные соединения являются новыми.
Пример 1. BocTrpAlaGlyGly (IV). 14,2 г (0,05 моль) HBr•AlaGlyGly растворяют в 140 мл воды, добавляют 4,2 (0,05 моль) NaHCO3, а затем - 28,2 г (0,06 моль) BocTrpOPfp в 200 мл ДМФА. Смесь перемешивают в течение 12 ч. Растворители упаривают досуха, полученное масло растворяют в 100 мл этилацетата, промывают 2x100 мл 10% раствора лимонной кислоты, затем - 2x100 мл 10% раствора NaCl, этилацетатный слой высушивают над Na2SO4 и упаривают. Получают 22,8 г (93%) пептида IV.
Пример 2. BocTrpAlaGlyGlyOPfp (II). К 20 г (0,041 моль) пептида IV в 100 мл ДМФА добавляют 17,7 г (0,045 моль) дипентафторфенилкарбоната и 4,5 мл (0,041 моль) N-метилморфолина. Смесь перемешивают 12 ч, упаривают досуха и перекристаллизовывают из этилацетата. Получают 26,4 г (98%) пептида II.
Пример 3. CF3COOH•AspAlaSerGlyGlu. 46,9 г (0,05 моль) пентапептида BocAsp(OBzl)AlaSer(Bzl)GlyGlu(OBzl)2 растворяют в 1 л 85%-ной уксусной кислоты, добавляют 5 г Pd-черни и гидрируют 80 ч. По завершении гидрирования катализатор отфильтровывают, к фильтрату добавляют 50 мл трифторуксусной кислоты, выдерживают 30 мин при комнатной температуре и упаривают досуха. Полученное масло обрабатывают этилацетатом и получают 26,5 г (98%) трифторацетата пентапептида III.
Пример 4. BocTrpAlaGlyGlyAspAlaSerGlyGlu (V). 2,37 г (3,6 ммоль) пептида II растворяют в 40 мл абс. ДМФА, добавляют 1,66 г (3 ммоль) пентапептида III и 1,32 мл (12 ммоль) N-метилморфолина в 50 мл ДМФА. Реакционную смесь перемешивают 18 ч, упаривают досуха и полученное масло обрабатывают 100 мл смеси этилацетат : уксусная кислота 10 : 1. Образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают на фильтре 100 мл этилацетата, затем - 50 мл диэтилового эфира и высушивают в вакууме. Получают 3,69 (95%) нонапептида V, гомогенного по ТСХ.
Пример 5. TrpAlaGlyGlyAspAlaSerGlyGlu (I). К 2,59 г (2 ммоль) пептида V добавляют 40 мл муравьиной кислоты, и оставляют на 24 ч при 0 - +4oC. Затем пептид лиофилизуют и хроматографируют на ДЕАЕ-сефадексе А-25 в ацетатной форме в 0,3 М ацетата аммония. Фракции, содержащие пептид δ -сна, лиофилизуют и получают 1,60 г (1,84 ммоль, 90%) пептида I.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет получать с высоким выходом пептид δ -сна высокой степени чистоты.
Claims (1)
- Способ получения пептида δ-сна формулы I
Trp-Ala-Gly-Gly -Asp-Ala-Ser-Gly-Glu,
включающий конденсацию Nα- защищенного C-активированного тетрапептида Trp-Ala-Gly-Gly с пентапептидом Asp-Ala-Ser-Gly-Glu с последующим снятием защитной группы и хроматографической очисткой целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве Nα- защищенного C-активированного тетрапептида используют пентафторфениловый эфир Boc-защищенного тетрапептида формулы II
Boc-Trp-Ala-Gly-Gly OPfp,
конденсацию осуществляют в диметилформамиде в присутствии N-метилморфолина, а удаление Boc-группы - с помощью муравьиной кислоты при (-2) - (+8)oС.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU95105312A RU2111215C1 (ru) | 1995-04-07 | 1995-04-07 | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДА δ- СНА |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU95105312A RU2111215C1 (ru) | 1995-04-07 | 1995-04-07 | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДА δ- СНА |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU95105312A RU95105312A (ru) | 1997-01-10 |
| RU2111215C1 true RU2111215C1 (ru) | 1998-05-20 |
Family
ID=20166532
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU95105312A RU2111215C1 (ru) | 1995-04-07 | 1995-04-07 | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДА δ- СНА |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2111215C1 (ru) |
-
1995
- 1995-04-07 RU RU95105312A patent/RU2111215C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 1. Ulyanins Ky L.S.et.al., Kosm. Biol AviaKosm. Med, v. 3, p. 23 - 28. 2. Burov Y.V. et.al., Bull. Exp. Biol. Med., 1983, v. 94, p. 1240 - 1243. 3. Sukhikh G.T.et.al. Dokl. Biol. Sci. SSSR, 1985, v. 278, p. 595 - 597. 4. Саргсян А.С. и др. Биоорганическая химия, 1981, т. 7, с. 1125 - 1128. 5. Шредер Э., Любке К. Пептиды, М.: Мир, 1967, с. 200 - 280. 6. Bodanszky M. Principles of peptide synthesis, 1984, Springer Verlay, p. 220. 7. Калихевич В.Н. и др., ЖОХ, 1981, т. 51, с. 1964 - 1971. 8. Bodanszky M.et.al., J.Org.Chem, 1975, v. 40, p. 2495 - 2499. 9. Stewart J.M.et.al., Solid Phase Peptide Synthesis, 1989, Pierce Chemical Company, с. 18 - 27. 10. Пептиды. Основные методы образования пептидных связей/ Под ред. Э.Гросс, И.Майенхофер - М., 1983, с. 159 - 160. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU95105312A (ru) | 1997-01-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Waley et al. | Trypsin-catalysed transpeptidations | |
| US4713369A (en) | Oligopeptidylargininol derivatives and their homologs, a process for their preparation, their use and agents containing them | |
| US4330466A (en) | Process for the production of cholecystokinin-pancreozymin C-terminal peptide amide sulfate esters | |
| NO171788B (no) | Analogifremgangsmaate ved fremstilling av terapeutisk aktive fosfinsyrederivater | |
| US4242329A (en) | Bradykinin-inhibiting tripeptide derivatives | |
| US4593018A (en) | Oligopeptide aldehydes useful as specific inhibitors of enterokinase | |
| Rodionov et al. | Cyclic dipeptides as building blocks for combinatorial libraries. Part 2: Synthesis of bifunctional diketopiperazines | |
| Li et al. | The synthesis of L-histidyl-L-phenylalanyl-L-ornithyl-L-tryptophyl-glycine and L-histidyl-D-phenylalanyl-L-ornithyl-L-tryptophyl-glycine and their melanocyte-stimulating activity | |
| US4797471A (en) | Peptide derivatives having an inhibitory action on hydroxylating enzymes, a process for their preparation, agents containing them, and their use | |
| RU2111215C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДА δ- СНА | |
| Waki et al. | Studies of peptide antibiotics. X. Syntheses of cyclosemigramicidin S and gramicidin S | |
| RU2111972C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДА δ СНА | |
| JP2659990B2 (ja) | 結晶性キナプリルおよびその製法 | |
| Hardy et al. | Use of NN′-isopropylidene dipeptides in peptide synthesis | |
| US6448031B1 (en) | Process for producing LH-RH derivatives | |
| JPH049800B2 (ru) | ||
| Galpin et al. | Solution synthesis of n-methylated peptides by the diphenyl phosphinic mixed anhydride procedure. | |
| Maude et al. | Design and preparation of serine–threonine protein phosphatase inhibitors based upon the nodularin and microcystin toxin structures: Part 2.1 Synthesis of a functionalised nodularin macrocycle and a stripped-down microcystin macrocycle | |
| Ohno et al. | Partial enzymic deprotection in the synthesis of a protected octapeptide bearing a free terminal carboxyl group | |
| KR20010041888A (ko) | 테트라펩티드의 제조 방법 | |
| US4784988A (en) | Peptides correlated to lysozyme | |
| EP0001174A1 (en) | A peptide and the salts thereof, processes for their preparation and compositions containing them | |
| US3790555A (en) | Octapeptide derivative of gonadotropinreleasing hormone | |
| SU664560A3 (ru) | Способ получени пептидов или их солей | |
| SU511852A3 (ru) | Способ получени пептидов |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20070408 |