RU2108110C1 - Вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота - Google Patents

Вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота Download PDF

Info

Publication number
RU2108110C1
RU2108110C1 RU97118243A RU97118243A RU2108110C1 RU 2108110 C1 RU2108110 C1 RU 2108110C1 RU 97118243 A RU97118243 A RU 97118243A RU 97118243 A RU97118243 A RU 97118243A RU 2108110 C1 RU2108110 C1 RU 2108110C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
vaccine
strain
abortus
brucellosis
adjuvant
Prior art date
Application number
RU97118243A
Other languages
English (en)
Other versions
RU97118243A (ru
Inventor
В.В. Калмыков
К.В. Шумилов
Original Assignee
Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов filed Critical Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов
Priority to RU97118243A priority Critical patent/RU2108110C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2108110C1 publication Critical patent/RU2108110C1/ru
Publication of RU97118243A publication Critical patent/RU97118243A/ru

Links

Images

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Вакцина предназначена для профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота. Вакцина содержит в качестве антигена инактивированную с гидратом окиси алюминия бактериальную массу штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100. Вакцина содержит также неполный адьювант Фрейнда и физиологический раствор. Использование новой вакцины в ветеринарной практике позволяет в 1,5 - 2 раза повысить эффективность противобруцеллезных мероприятий за счет повышения иммуногености и снижения агглютиногенности вакцины. 2 табл.

Description

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к вакцине для профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота.
Бруцеллез крупного рогатого скота - хроническое зооантропонозное заболевание, распространенное во многих странах мира, наносящее большой экономический ущерб скотоводству и представляющее серьезную опасность здоровью людей.
Основным средством борьбы с бруцеллезом крупного рогатого скота, особенно в зонах его широкого распространения, является вакцинация всего поголовья и своевременное удаление из стада больных животных.
Известна вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота, содержащая антиген из штамма Brucella abortus 19 и сахарозо-желатиновый стабилизатор [1].
Недостатками данной вакцины являются высокая агглютиногенность, так как в крови животных, иммунизированных данной вакциной в течение нескольких месяцев, а иногда и нескольких лет обнаруживают антитела в принятых для диагностики бруцеллеза серологических реакциях, что препятствует выявлению больных животных в вакцинированном стаде. Вакцину нельзя применять для иммунизации стельных коров, так как она вызывает аборты у отдельных животных.
Известна также вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных, преимущественно крупного рогатого скота, содержащая инактивированный антиген из штамма Brucella melitensis N "Невский-13", неполный адъювант Фрейнда и физиологический раствор [2].
Недостатком данной вакцины является то, что в крови иммунизированных животных до 90-120 дней сохраняются агглютинирующие и комплеменсвязывающие антитела, улавливаемые в принятых для диагностики бруцеллеза серологических реакциях, которые препятствуют своевременному выявлению и удалению из стада больных бруцеллезом коров.
Целью изобретения является разработка высокоиммуногенной вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота с низкой антигенной активностью.
Цель достигается тем, что вакцина в качестве антигена содержит инактивированную с гидратом окиси алюминия бактериальную массу штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 с концентрацией 300-400х109 бактерий в 1 см3, при следующем соотношении компонентов вакцины, об.%: инактивированная с гидратом окиси алюминия бактериальная масса штамма B.abortus N КВ 17/100 с концентрацией 300х109-400х109 микробных клеток в 1 см3 40-45,0; неполный адъювант Фрейда 50,0-55,0; физиологический раствор остальное.
Для изготовления вакцины используют штамм Brucella abortus ВГНКИ N КВ 17/100.
Штамм B. abortus N КВ 17/100 получен путем целенаправленной селекции по антигенности и иммуногенной активности.
Штамм B. abortus депонирован в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов, регистрационный номер КВ 17/100 ДЕП.
Штамм B. abortus N КВ 17/100 характеризуется следующими признаками и свойствами.
Морфологические признаки.
Бруцеллы штамма - короткие грамотрицательные палочки с закругленными концами, расположенные изолированно, попарно и реже в виде коротких цепочек. Без капсулы, спор не образуют. Размер 1,3-1,5 х 0,6-0,8 мкм.
Культуральные свойства.
Культура штамма хорошо растет в аэробных условиях на плотных и жидких питательных средах, предназначенных для культивирования бруцелл. На плотных питательных средах (4-5 сут инкубирования при 37-38oС) растет в виде круглых, плоских, с нечетко контурированным краем, матовых колоний с диаметром 2,5-3,0 мм. При окрашивании раствором кристаллического фиолетового 1/2000 (по Уайт-Вилсону) 100% колоний окрашиваются как R-форма: фиолетовый центр и светлофиолетовый широкий ободок.
На жидких питательных средах на 2-4 сут инкубирования: легкая опалесценция и узкое пристеночное голубоватое кольцо на границе среды.
Биохимические свойства.
Культура штамма растет на средах содержащих фуксин, тионин в концентрации 1: 50000, бис-трифенилангидрокарбинола оксалат в концентрации 1:100000 (маркер), пенициллин 5ЕД/см3 и не растет на среде, содержащей стрептомицина сульфат 5 мкг/см3. Продуцирует Н2S (6-8 мм). Лизируется фагом Тб.
Агглютинабельные свойства.
Культура штамма агглютинируется R-антибруцеллезной сывороткой и не агглютинируется S-антибруцеллезной сывороткой. Штамм не обладает типоспецифической агглютинабельностью и не агглютинируется А и М монорецепторными сыворотками.
Безвредность.
Штамм безвреден для человека и сельскохозяйственных животных.
Вирулентность.
Остаточная вирулентность: ИД для мышей линии С57 - Блек/6 - 5500 микробных клеток, что соответствует уровню аттенуированных вакцинных штаммов.
Иммуногенность.
Культура штамма защищает от заражения не менее 50% иммунизированных животных.
Пример 1. Штамм Brucella abortus ВГНКИ N КВ 17/100 культивируют на плотной питательной среде или в ферментере на жидкой питательной среде при 37-38oС в течение 72 ч.
Выращенную культуру с плотной питательной среды смывают физиологическим раствором, добавляют 0,3-0,5% формалина и 0,3-0,5% гидрата окиси алюминия, формалин и гидрат окиси алюминия вносят в ферментер сразу после окончания культивирования.
После инактивации бактериальную массу отстаивают, декантируют надосадочную жидкость и устанавливают концентрацию бактериальной массы, равную 300-400х109 микробных клеток в 1 см3. Инактивированную с гидратом окиси алюминия бактериальную массу штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 в количестве 40-45% от объема смешивают с неполным адъювантом Фрейнда в количестве 45-55% от объема с доведением до 100% физиологическим раствором.
Вакцину расфасовывают во флаконы при включенной мешалке. Флаконы закрывают резиновыми пробками, обкатывают металлическими колпачками и этикетируют.
Расфасованную вакцину проверяют на стерильность, безвредность и иммуногенность.
Готовая вакцина представляет собой однородную водно-масляную эмульсию белого цвета с коричневым или серым оттенком. При длительном хранении возможно незначительное отслоение адъюванта над эмульсией, что не влияет на качество вакцины.
Получают 3 серии вакцины, приведенные в табл. 1.
Пример 2. Определяют антигенную активность адъювант-вакцины.
Морских свинок (10-14 голов в группе) иммунизируют адъювант-вакциной из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 (серии N 1, 2, 3), полученной по примеру 1; адъювант-вакциной из штамма B.melitensis N Н-13, экспериментальной адъювант-вакциной из штамма B.abortus N 16/4 (штамм в R-форме) и живой противобруцеллезной вакциной из штамма B.abortus N 19.
Адъювант-вакцины вводят в дозе 0,2 см3, живую - 1 млрд. микробных клеток в объеме 1 см3 под кожу в область паха. Через 15, 30 и 60 дней после иммунизации у животных берут кровь и исследуют в РА с единым бруцеллезным антигеном (S-антиген). Результаты исследований приведены в табл. 2.
Из табл. 2 следует, что все серии предложенной адъювантвакцины из штамма B. abortus ВГНКИ N КВ 17/100 не индуцируют образования агглютининов в сыворотке крови животных и в отличие от адъювант-вакцин из штаммов B.melitensis N "Невский-13", В. abortus N 16/4 и живой вакцины из штамма В.abortus N 19 являются неагглютиногенными, что дает возможность быстро и своевременно выявлять больных вакцинированных животных в случае их заражения. В то же время среднее количество агглютининов в сыворотке крови морских свинок через 15 дней после иммунизации адъювант-вакцинами из штаммов B.melitensis N "Невский-13" - 83,0, B. abortus N 16/4 - 38,3 МЕ/см3, а живой вакциной из штамма B. abortus N 19 - 160,0 ME/cм3, и в случае заражения больные бруцеллезом животные не могут быть дифференцированы по крайней мере в течение 60 дней от иммунных - незаразившихся, создавая угрозу перезаражения.
Таким образом установлено, что адъювант-вакцина из штамма В.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 не индуцирует синтез S-антител в количестве, улавливаемом реакцией агглютинации с единым бруцеллезным антигеном.
Пример 3. Иммуногенную активность новой адъювант-вакцины, полученной по примеру 1 из штамма B.abortus ВГНКИ N 17/100, сравнивают с вакцинами из штаммов B.melitensis N "Невский-13", B.abortus N 16/4 и живой вакциной из штамма B. abortus N 19. Опыт проводят на морских свинках, привитых аналогично примеру 2.
Через 3 мес после прививки морских свинок заражают стандартной культурой контрольного вирулентного штамма В.abortus N 54М/ВГНКИ в дозе 80 микробных клеток (15 ИД50). Спустя 32-35 дней животных убивают и проводят бактериологическое исследование селезенки, печени, костного мозга и лимфатических узлов (всего 10 объектов). Определяют наличие бруцелл вирулентного штамма в лимфатических узлах и внутренних органах животных. Рассчитывают процент защиты (количество незаразившихся животных в процентах от общего их количества в группе) и индекс инфицированности (процентное отношение количества объектов, из которых выделена культура вирулентного штамма, к общему количеству исследованных объектов по группе животных). Результаты исследований приведены в табл. 3.
Таким образом установлено, что адъювант-вакцина из штамма B.abortus ВГНКИ N RD 17/100 всех серий превосходит по иммуногенной активности адъювант-вакцины из штаммов B. melitensis N "Невский-13", B.abortus N 16/4 и не уступает живой вакцине из штамма B.abortus N 19.
Пример 4. Определяют реактогенность адъювант-вакцины из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 (серия N 1) в опыте на телках трех-четырех месячного возраста в сравнении с адъювант-вакциной из штамма B.meliitensis N "Невский-13". Каждую вакцину вводят 10 телкам под кожу в область подгрудка в дозе 3 см3. У вакцинированных животных ежедневно в течение 10 дней измеряют температуру тела и площадь припухлости в месте введения вакцины.
У животных, иммунизированных адъювант-вакциной из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100, температура тела повышается на 0,8-1,0oС и нормализуется к 5-6 дню после вакцинации, отек в месте введения вакцины не превышает 80 см2 и начинает уменьшаться с 8-10 дня. В группе животных, иммунизированных адъювант-вакциной из штамма B.melitensis N "Невский-13", температура тела повышалась в среднем на 1,2-1,5oС и приходила в норму к 7-9 дню. Отек тканей в месте введения вакцины в среднем 100-120 см3. Заметное уменьшение величины отека отмечают через 15-20 дней после иммунизации.
Таким образом, испытанную вакцину из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 можно отнести к слабореактогенным масляным адъювантвакцинам.
Пример 5. Определяют антигенные свойства адъювант-вакцины из штамма B. abortus ВГНКИ N КВ 17/100 (серия 2) в опыте на телках трех-четырех месячного возраста. Вакцину вводят под кожу в область подгрудка в дозе 3 см3 42 телкам. Через 15 и 30 дней после иммунизации у животных берут кровь и исследуют в РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном (S-антиген).
Все животные иммунизированные адъювант-вакциной не реагируют на бруцеллез. Пример 6. Определяют антигенные свойства адъювант-вакцины из штамма B. abortus ВГНКИ N КВ 17/100 (серия 3) в опыте на телках 14-17-месячного возраста, ранее иммунизированных живой слабоагглютиногенной вакциной из штамма B.abortus N 82. Адъювант-вакцину в дозе 3 см3 вводят под кожу в область подгрудка 70 телкам. Через 15 и 30 дней после иммунизации у животных берут кровь и исследуют на бруцеллез в РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном.
Все животные ревакцинированные адъювант-вакциной не реагируют на бруцеллез.
Пример 7. Определяют эффективность адъювант-вакцины из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 для профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота в условиях контролируемого эпизоотологического опыта.
Телок трех-четырех месячного возраста (пример 5) и 14-17-месячного возраста (пример 6), иммунизированных адъювант-вакциной из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100, содержат в условиях хозяйства неблагополучного по бруцеллезу рогатого скота, обеспечивающих контакт с 21 коровой больной бруцеллезом.
Иммунизированные адъювант-вакциной животные не заболевают бруцеллезом в течение шести месяцев, что указывает на высокую эффективность препарата.
Пример 8. Определяют возможность использования адъювант-вакцины из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 для провокации синтеза специфических антител у больных бруцеллезом коров, не реагирующих в серологических реакциях, принятых для диагностики бруцеллеза. Коров, ранее реагировавших на бруцеллез (в РА и РСК) и утративших титры в серологических реакциях, принятых для диагностики бруцеллеза, иммунизируют адъювант-вакциной из штамма B.abortus КВ 17/100 в дозе 3 см3. Вакцину вводят под кожу в область подгрудка. Через 15 и 3 дней после иммунизации у животных берут кровь и исследую сыворотку в РА и РСК.
После иммунизации животные с хронической формой бруцеллеза положительно реагируют в серологических реакциях в диагностических титрах и идентифицируются как больные.
Таким образом, адъювант-вакцина из штамма B.abortus КВ 17/100 провоцирует появление положительных серологических реакций у нереагирующих на бруцеллез больных животных, что способствует скорейшему выздоровлению больных бруцеллезом животных.
Использование адъювант-вакцины на основе нового штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/00 в ветеринарной практике позволит повысить эффективность мероприятий по борьбе с бруцеллезом крупного рогатого скота.

Claims (1)

  1. Вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота, содержащая инактивированный антиген бруцелл, неполный адъювант Фрейнда и физиологический раствор, отличающаяся тем, что она в качестве инактивированного антигена бруцелл содержит инактивированную с гидратом окиси алюминия бактериальную массу штамма Brucella abortus ВГНКИ N КВ 17/100 с концентрацией 300 - 400 • 109 микробных клеток в 1 см3 при следующем соотношении компонентов, об.%:
    Инактивированная с гидратом окиси алюминия бактериальная масса штамма Вrucella abortus ВГНКИ N КВ 17/100 с концентрацией 300 - 400 • 109 микробных клеток в 1 см3 - 40 - 50
    Неполный адъювант Фрейнда - 45 - 55
    Физиологический раствор - Остальноел
RU97118243A 1997-11-12 1997-11-12 Вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота RU2108110C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU97118243A RU2108110C1 (ru) 1997-11-12 1997-11-12 Вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU97118243A RU2108110C1 (ru) 1997-11-12 1997-11-12 Вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2108110C1 true RU2108110C1 (ru) 1998-04-10
RU97118243A RU97118243A (ru) 1998-12-10

Family

ID=20198687

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU97118243A RU2108110C1 (ru) 1997-11-12 1997-11-12 Вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2108110C1 (ru)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2285539C2 (ru) * 2004-02-13 2006-10-20 Общество с ограниченной ответственностью "БИОМЕДИЦИНСКИЙ ЦЕНТР" Молекулярная бивалентная вакцина для профилактики бруцеллеза и диарей, вызванных энтеропатогенными бактериями
RU2285538C2 (ru) * 2003-12-25 2006-10-20 Общество с ограниченной ответственностью "БИОМЕДИЦИНСКИЙ ЦЕНТР" Молекулярная вакцина для профилактики бруцеллеза
RU2771484C1 (ru) * 2019-11-28 2022-05-04 Норсуэст А&Ф Юнивёрсити Brucella suis bi-1-дефицитный штамм, способ его конструирования и применение
RU2811948C1 (ru) * 2023-03-07 2024-01-19 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Саратовский государственный университет генетики, биотехнологии и инженерии имени Н.И. Вавилова Инактивированная вакцина против бруцеллеза из штамма brucella abortus 82 на основе адъюванта биогидроксиапатита кальция для крупного рогатого скота

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2026343C1 (ru) * 1992-06-30 1995-01-09 Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов Вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2026343C1 (ru) * 1992-06-30 1995-01-09 Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов Вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
1. Cyung Y.S., Hall W.T.K. and Simmons GC. Jmmunoglobulin classes in serum antibldy reactions in cattle following vaccination with Brucella abortus strain 19 and rilled 45/20 vaccines//Australian Veterinary. Journal, Vol. 56, September, р.413 - 416. 2. *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2285538C2 (ru) * 2003-12-25 2006-10-20 Общество с ограниченной ответственностью "БИОМЕДИЦИНСКИЙ ЦЕНТР" Молекулярная вакцина для профилактики бруцеллеза
RU2285539C2 (ru) * 2004-02-13 2006-10-20 Общество с ограниченной ответственностью "БИОМЕДИЦИНСКИЙ ЦЕНТР" Молекулярная бивалентная вакцина для профилактики бруцеллеза и диарей, вызванных энтеропатогенными бактериями
RU2771484C1 (ru) * 2019-11-28 2022-05-04 Норсуэст А&Ф Юнивёрсити Brucella suis bi-1-дефицитный штамм, способ его конструирования и применение
RU2811948C1 (ru) * 2023-03-07 2024-01-19 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Саратовский государственный университет генетики, биотехнологии и инженерии имени Н.И. Вавилова Инактивированная вакцина против бруцеллеза из штамма brucella abortus 82 на основе адъюванта биогидроксиапатита кальция для крупного рогатого скота

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Davies Characteristics of a virus causing a pox disease in sheep and goats in Kenya, with observations on the epidemiology and control
CN101524532B (zh) 单剂量猪肺炎支原体疫苗
Verger et al. Comparison of the efficacy of Brucella suis strain 2 and Brucella melitensis Rev. 1 live vaccines against a Brucella melitensis experimental infection in pregnant ewes
CN104981252B (zh) 包含支原体抗原的免疫原性组合物
Adlam et al. Natural and experimental staphylococcal mastitis in rabbits
RU2108110C1 (ru) Вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота
RU2159127C1 (ru) Вакцина против псевдомоноза пушных зверей
JPH07502174A (ja) 家禽病を発症させる新規バクテリアとそれから誘導されたワクチン
NZ199561A (en) Vaccine against enzootic abortion in ewes
CN111097044A (zh) 犬型钩端螺旋体、黄疸出血型钩端螺旋体、犬冠状病毒三联灭活疫苗
RU2065749C1 (ru) Способ профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота
RU2425148C2 (ru) Штамм brucella abortus уф-1 для приготовления биологических препаратов для диагностики и специфической профилактики бруцеллеза сельскохозяйственных животных
RU2026343C1 (ru) Вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных
KR101210082B1 (ko) 돼지 다발성 장막염 예방용 백신 조성물 및 그 제조방법
RU2217163C2 (ru) Вакцина против кандидоза сельскохозяйственных животных
RU2798283C1 (ru) Штамм Chlamydia abortus "Chlamydia VNITIBP-21" для производства иммунобиологических лекарственных препаратов
RU2802251C1 (ru) Вакцинная композиция для профилактики энзоотического аборта у овец
RU2130068C1 (ru) Штамм brucella abortus, используемый для изготовления диагностических и профилактических биопрепаратов против бруцеллеза животных
RU2099081C1 (ru) Способ получения вакцины для профилактики стрептококкоза нутрий
RU2026081C1 (ru) Вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных
RU2544951C1 (ru) АТТЕНУИРОВАННЫЙ ШТАММ Bacillus anthracis ДЛЯ РАЗРАБОТКИ СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
CN103721254A (zh) 猪a型产气荚膜梭菌氢氧化铝灭活疫苗的制备方法
RU2831198C1 (ru) Средство специфической профилактики против клинических и субклинических маститов коров
RU2099083C1 (ru) Способ получения вакцины против стрептококкоза и пастереллеза нутрий
Hanna et al. Evaluation of a live Salmonella choleraesuis vaccine by intranasal challenge

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20091113