RU2080905C1 - Способ получения модифицированного макропористого кремнезема для хроматографии биополимеров - Google Patents
Способ получения модифицированного макропористого кремнезема для хроматографии биополимеров Download PDFInfo
- Publication number
- RU2080905C1 RU2080905C1 SU4495987A RU2080905C1 RU 2080905 C1 RU2080905 C1 RU 2080905C1 SU 4495987 A SU4495987 A SU 4495987A RU 2080905 C1 RU2080905 C1 RU 2080905C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sorbent
- silica
- chromatography
- biopolymers
- treated
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Abstract
Изобретение относится к получению микропористого кремнезема для хроматографии биополимеров. Кремнезем с диаметром пор 6 - 400 нм, обработанный винилметилхлорсиланом в среде органического растворителя, вакуумируют, активируют источником γ - облучения и обрабатывают парами трифторстирола. Полученный сорбент позволяет снизить неспецифическую сорбцию РНК из водных растворов. 2 табл.
Description
Изобретение относится к твердым сорбентам для жидкостной хроматографии и может быть использовано в обращенно-фазовой хроматографии нуклеиновых кислот и пептидов.
Цель изобретения снижение неспецифической сорбции тРНК из водных растворов на модифицированном кремнеземе.
Пример 1. 10 г высушенного при 573 к макропористого стекла (МПС-2000ГХ) кипятят в 5% растворе метилвинилдихлорсилана в абсолютном толуоле в течение 10 часов. После этого МПС промывают абсолютным бензолом, ацетоном и сушат вначале в вакуумном шкафу, а затем на вакуумной установке при 10-3 Торр до постоянного веса. Перед облучением МПС вакуумируют при 413 К до остаточного давления 10-3 Торр и облучают с помощью источника γ облучения дозой 5 Мрад при 77 К. Ампулу размораживают до комнатной температуры, напускают пары трифторстирола и выдерживают в течение 8 часов. После этого образец откачивают до 10-3 Торр, напускают воздух и отсоединяют от установки. Модифицированный кремнезем помещают в аппарат Сокслетта и в течение 3 часов проводят экстракцию образовавшегося гомополимера бензолом.
Полученный продукт общей формулы
при гравиметрическом анализе дает значение X 95 масс. Y 5 мас. при анализе на углерод 3,2% на фтор 1,5% что соответствует значениям X 95 мас. Y 5 мас. Молекулярный вес политрифторстирола определяли методом эксклюзионной ВЭЖХ после растворения модифицированного кремнезема в 30% плавиковой кислоте и экстракции полимера тетрагидрофураном.
при гравиметрическом анализе дает значение X 95 масс. Y 5 мас. при анализе на углерод 3,2% на фтор 1,5% что соответствует значениям X 95 мас. Y 5 мас. Молекулярный вес политрифторстирола определяли методом эксклюзионной ВЭЖХ после растворения модифицированного кремнезема в 30% плавиковой кислоте и экстракции полимера тетрагидрофураном.
Значения N составили 550 600.
Пример 2. Синтез проводят аналогично примеру 1, только вместо МПС-2000 берут МПС-250, а облучают дозой 8 Мрад. Полученный продукт при гравиметрическом анализе дает значения X 85 мас. Y 15 мас. при анализе на углерод 9,7% на фтор 4,5% что соответствует значениям X 85 мас. Y 15 мас. Значения N составили 450 550.
Пример 3. Получение сорбента для высокоэффективной хроматографии. 10 г высушенного при 573 К силикагеля с диаметром пор 50 нм (фракция 10 мкм) кипятят в 5% растворе метилвинилдихлорсилана в абсолютном толуоле в течение 10 часов. После этого силикагель промывают абсолютным бензолом, ацетоном и сушат вначале в вакуумном шкафу, а затем на вакуумной установке при 10-3 Торр до постоянного веса. Перед облучением силикагель вакуумируют при 413 К до остаточного давления 10-3 Торр и облучают с помощью источника γ - облучения дозой 1 Мрад при 77 К. Ампулу размораживают до комнатной температуры, напускают пары трифторстирола и выдерживают в течение суток. После этого образец откачивают до 10-3 Торр, напускают воздух и отсоединяют от установки. Модифицированный кремнезем помещают в аппарат Сокслетта и в течение 8 часов проводят экстракцию образовавшегося гомополимера бензолом.
Полученный продукт общей формулы
при гравиметрическом анализе дает значения X 85 мас. Y 15 мас. при анализе на углерод 9,0% на фтор 4,3% что соответствует значениям X 86 мас, Y 14 мас. Значения N составили 300 450.
при гравиметрическом анализе дает значения X 85 мас. Y 15 мас. при анализе на углерод 9,0% на фтор 4,3% что соответствует значениям X 86 мас, Y 14 мас. Значения N составили 300 450.
Пример 4. Синтез сорбента ведут как в примере 3, но в качестве исходного кремнезема берут силикагель Армсфер Сил30 (диаметр пор 30 нм), а облучают дозой 5 Мрад. Анализ продукта на углерод дает значение 12,9% на фтор 6,1% что соответствует значениям X 80 мас. Y 20 мас.
Пример 5. Синтез сорбента ведут как в примере 3, но в качестве исходного кремнезема берут силикагель Армсфер Сил=10 (диаметр пор 10 нм), а облучают дозой 8 Мрад. Анализ продукта на углерод дает значение 19,3% на фтор 9,2% что соответствует значениям X 70 мас. Y 30 мас.
Пример 6. Адсорбционную емкость сорбентов, синтезированных по примерам 3 6, определяют по толуолу. Полученные данные приведены в табл.1. Как видно из таблицы, емкость всех сорбентов высокая, что позволяет их использовать в обращенно-фазовой хроматографии.
Пример 7. Стальную колонку размером 4,6х250 мм заполняют сорбентом, приготовленным по примерам 3 5 и определяют ее эффективность по бифенилу, используя элюэнт метанол-вода (85-15). Результаты представлены в табл.1. Эффективность составляет 30 45 тыс. т.т. на метр длины.
Сорбент применяют либо для избирательной фиксации биологических макромолекул, которые желательно выделить или очистить, либо для избирательного задерживания примесей (обычно высокомолекулярных нуклеиновых кислот и белков), присутствие которых является нежелательным. Избирательная фиксация биополимеров легко может быть достигнута путем регулирования величины полярности и гидрофобности элюента в соответствии с хорошо известными методами, применяемыми в обращенно-фазовой и гидрофобной хроматографии. В том случае, когда сорбируются макромолекулы, которые необходимо очистить, их элюируют раствором, содержащим определенное количество органической добавки. В том случае, если материал задерживает примеси, биополимеры собирают непосредственно в растворе, после чего проводят регенерацию сорбента для последующего использования. Нижеследующий пример подтверждает эффективность применения сорбента для очистки нуклеиновых кислот.
Пример 8. Проводят высокоэффективную очистку нуклеиновых кислот от белков, используя 500 мг сорбента, приготовленного по примерам 1 2, по следующей схеме: сначала приводят колонку в состояние равновесия с 0,01М ТЕ-буфером (pH= 8,1). Затем в шприц объемом 5 мл набирают порцию плазмиды (или любой другой нуклеиновой кислоты) и медленно продавливают через колонку. Элюат повторно набирают в шприц и продавливают через колонку. Так повторяют 5 9 раз. За один цикл можно почистить от 20 до 30 мг нуклеиновой кислоты. Колонку регенерируют промывкой метанолом с этиленгликолем (5:1).
Сорбенты, полученные по примерам 3 5, используют для обращенно-фазовой ВЭЖК пептидов. Это применение поясняется следующим примером.
Пример 9. Проводят разделение пептидов на колонке (2 х 65 мм) заполненной сорбентом, полученным по примеру 3. Элюцию ведут градиентом концентрации (0 50%) ацетонитрила в 0,1% трифторуксусной кислоте общим объемом 2400 мкл со скоростью 100 мкл/мин. Порядок выхода пептидов: А-цепь инсулина, брадикинин, Б-цепь инсулина, лизоцим. Эффективность колонки по лизоциму, определенная в изократическом режиме при постоянной концентрации ацетонитрила, равной 50% составила 30 тыс. т.т/м.
Пример 10. Для определения неспецифической сорбции тРНК 1 г сорбента, полученного по примерам 1 2, прибавляют в 5 мл пропилового спирта, дегазируют под вакуумом. Затем спирт декантируют, сорбент промывают 0,01 М трис-HC1 буфером (pH=7,5) и помещают в колонку размером 1 х 6 см. На колонку наносят 1 мг тРНК E.coli в 0,5 мл указанного буферного раствора и элюируют со скоростью 0,5 мл/мин общим объемом 10 мл. Собирают 10 мл элюата и спектрофотометрически определяют концентрацию тРНК. Умножая концентрацию на объем элюата (10 мл), получают содержание тРНК в элюате. Разность между исходным количеством тРНК и содержанием ее в элюате представляет собой величину неспецифической сорбции тРНК на сорбенте, синтезированном по предлагаемому способу. Полученные результаты представлены в табл.2.
Claims (1)
- Способ получения модифицированного макропористого кремнезема для хроматографии биополимеров, включающий обработку кремнеземного сорбента с диаметром пор 6 400 нм фторсодержащим мономером под действием гамма-облучения, отличающийся тем, что, с целью снижения неспецифической сорбции тRHK из водных растворов, в качестве кремнеземного сорбента используют кремнезем, обработанный винилметилдихлорсиланом в среде органического растворителя при нагревании, вакуумированный сорбент активируют источником J-облучения, а обработку ведут трифторстиролом из газовой фазы.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU4495987 RU2080905C1 (ru) | 1988-10-19 | 1988-10-19 | Способ получения модифицированного макропористого кремнезема для хроматографии биополимеров |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU4495987 RU2080905C1 (ru) | 1988-10-19 | 1988-10-19 | Способ получения модифицированного макропористого кремнезема для хроматографии биополимеров |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2080905C1 true RU2080905C1 (ru) | 1997-06-10 |
Family
ID=21404973
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU4495987 RU2080905C1 (ru) | 1988-10-19 | 1988-10-19 | Способ получения модифицированного макропористого кремнезема для хроматографии биополимеров |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2080905C1 (ru) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1020220A1 (en) * | 1999-01-11 | 2000-07-19 | Mira Diagnostica GmbH | New hydrophobic polymer comprising fluorine moieties |
WO2004041428A3 (en) * | 2002-11-08 | 2004-07-15 | Nexttec Gmbh | Sorbent material having a covalently attached perfluorinated surface with functional groups |
US11628381B2 (en) | 2012-09-17 | 2023-04-18 | W.R. Grace & Co. Conn. | Chromatography media and devices |
-
1988
- 1988-10-19 RU SU4495987 patent/RU2080905C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Авторское свидетельство СССР N 687081, кл. C 08 F 8/32, 1977. * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1020220A1 (en) * | 1999-01-11 | 2000-07-19 | Mira Diagnostica GmbH | New hydrophobic polymer comprising fluorine moieties |
WO2000041807A1 (en) * | 1999-01-11 | 2000-07-20 | Mira Diagnostica Gmbh | New hydrophobic polymer comprising fluorine moieties |
WO2004041428A3 (en) * | 2002-11-08 | 2004-07-15 | Nexttec Gmbh | Sorbent material having a covalently attached perfluorinated surface with functional groups |
US11628381B2 (en) | 2012-09-17 | 2023-04-18 | W.R. Grace & Co. Conn. | Chromatography media and devices |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Tsyurupa et al. | Sorption of organic compounds from aqueous media by hypercrosslinked polystyrene sorbents ‘Styrosorbrs | |
Cai et al. | Molecularly-imprinted polymers selective for tetracycline binding | |
US4138287A (en) | Purifying and isolating method for hepatitis virus to use in preparing vaccine | |
WO2012081727A1 (ja) | 強カチオン交換基を有する温度応答性吸着剤、及びその製造方法 | |
JP2010515047A (ja) | 有機または複合ポリマーモノリシック担体を含む高速クロマトグラフィーカラム及びその製造法 | |
JPWO2002030903A1 (ja) | 光学活性な(3r,5s,6e)−7−[2−シクロプロピル−4−(4−フルオロフェニル)キノリン−3−イル]−3,5−ジヒドロキシ−6−ヘプテン酸エチルの製造方法 | |
RU2080905C1 (ru) | Способ получения модифицированного макропористого кремнезема для хроматографии биополимеров | |
WO2002030853A1 (fr) | Matiere de remplissage pour separation d'isomeres optiques et procede permettant la separation d'isomeres optiques au moyen de cette matiere de remplissage | |
Kapustin et al. | New composite materials modified with nano-layers of functionalized polymers for bioanalysis and medical diagnostics | |
US20080015341A1 (en) | New hydrophobic polymer comprising fluorine moieties | |
Andersson et al. | Analysis of gaseous diisocyanates in air using chemosorption sampling | |
Jewett et al. | A captive solvent method for rapid radiosynthesis: application to the synthesis of [1-11C] palmitic acid | |
Churilina et al. | Adsorption preconcentration of 4-nitrophenol from aqueous solutions using polymers based on cyclic N-vinylamides | |
CN104772127B (zh) | 一种针对水环境中有机污染物的碳纤维布表面分子印迹被动采样膜的制备方法 | |
WO2015108020A1 (ja) | 組成物、糖鎖試料の調製方法及び糖鎖の分析方法 | |
Kapustin et al. | A composite polyaniline-containing silica sorbent for DNA isolation | |
Hjertén et al. | High-performance chromatofocusing of proteins on agarose columns: II. Deformed non-porous 12-15 μm beads | |
Khalaf et al. | Bovine Serum Albumin Pre-concentration Using Glycidyl Methacrylate-co-ethylene Glycol Dimethacrylate-co-(2-diethylamino) ethyl Methacrylate Monolith | |
Todorović et al. | Reversibility of solvent-induced surface modification of alumina adsorbents | |
JPH04120460A (ja) | ビタミンb↓6の分析方法 | |
Seiller et al. | Separation of 1-dimethylamino-naphthalene-5-sulphonylamides by gel chromatography | |
JP2664973B2 (ja) | 光学分割方法 | |
SU1068805A1 (ru) | Способ определени полигидроксисоединений | |
US20040109996A1 (en) | New hydrophobic polymer comprising fluorine moieties | |
JP2017025177A (ja) | 組成物、組成物の製造方法、糖鎖試料の調製方法及び糖鎖の分析方法 |